水产品孔雀石绿快速检测试剂盒

简介】孔雀石绿是有毒的化学物，既是染料，也是杀菌剂，可致癌。

【检测范围】用于检测鱼类、虾类等孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿、隐色结晶紫成分。

【适用范围】适用于市场监督部门、水产监督部门、水产养殖部门对水产品的现场及化验室检测监控。

【检测原理】水产品中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物无色孔雀石绿、无色结晶经过前处理后，

样液经过孔雀石绿专用SPE小柱富集形成有色环带，可初步判断样品中是否含有有色

孔雀石绿、结晶紫。用洗脱剂将柱上待检物洗脱下来，经柱衍生化后，加萃取剂，若

萃取剂有明显的绿色或紫色说明样品中含有待检物质。将萃取剂取出滴于白色点滴板

上，可在板上形成绿色或紫色环斑，从而可准确定性样品中是否含有孔雀石绿或结晶

紫。

【特点】

1、可现场操作, 用于快速筛选法；

2、检测速度快，检测一个样品30分钟左右；

3、不需用任何设备，可完成整个检测过程；

4、不需用其它试剂, 检测成本低；

5、不需要做对照实验，特异性高, 可准确定性；

6、操作简便，不需专业技术人员；

7、可进行多残留分析。

高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿和结晶紫

第29卷第1期广东海洋大学学报 V ol.29 No.1 2009年2月 Journal of Guangdong Ocean University Feb. 2009 收稿日期：2008-10-10 基金项目：广东省重大科技兴海项目（B200701A06）第一作者：吴仕辉（1980－），女，硕士，研究实习员，从事水产品质量安全研究。E-mail ：wshxjw@https://www.360docs.net/doc/814371830.html, 高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿和结晶紫吴仕辉，朱新平，郑光明，陈昆慈，戴晓欣，潘德博（中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州，510380) 摘要：样品中的孔雀石绿、结晶紫经试剂盒提取，浓缩后用经固相萃取柱净化、硼氢化钾还原、反向色谱柱分离，使用荧光检测器检测，孔雀石绿、结晶紫的加标回收率在76.1 %～92.5 %之间，相对标准偏差1.9 %～5.8 %，检出限均为0.5 μg/kg 。结果表明：该方法检测孔雀石绿（MG ）、结晶紫（GV ）处理简单，灵敏度高，节省时间，可用于大量样品的快速分析。关键词：水产品；孔雀石绿；结晶紫；检测；高效液相色谱法（HPLC ）中图分类号：S948 文献标志码：A 文章编号：1673-9159(2009)01-0054-04 Determination of Malachite Green and Gentian Violet Residues in Fishery Products by High Performance Liquid Chromatography(HPLC) with Fluorescence Detector WU Shi-hui, ZHU Xin-ping, ZHENG Guang-ming, CHEN Kun-ci, DAI Xiao-xin, PAN De-bo (Pearl River Fishery Research Institute , Chinese Academic of Fishery Science , Guangzhou , 510380 Chin a ) Abstract: M alachite green and gentian violet residues in fishery products were determined by high performance liquid chromatography method coupled with fl uorescence detector. Samples were extracted by pre-treatment kit for extraction of MG, LMG, GV, LGV and purified by solid-phase extraction cartridges. After concentrated, samples were deoxidized by potassium borohydride. The MG and GV were detected with FLD detector after C18 column separation. The recoveries for fortified fish tissue were 76.1 %～92.5 %, The relative standard deviation(RSD) values for repeatability were 1.9 %～5.8 %．The detection limit for MG and CV was 0.5 μg/kg, respectively. Key words: fisher product ；malachite green ；gentian violet ; detection ; HPLC 孔雀石绿、结晶紫属于三苯甲烷类染料，这两种化合物对鱼类的水霉病、寄生虫病等有很好的疗效，长期以来许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂。它们在鱼体内可分别代谢为无色孔雀石绿和无色结晶紫，由于其母体化合物和代谢物均具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用，20世纪90年代以来许多国家都将其列为水产养殖的禁用药物。但是由于其抗菌效果好、价格便宜，不少业户仍在违规使用，因此孔雀石绿残留监控就显得格外重要。目前孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的检测方法主要有高效液相色谱法[1-3]和液质联用法[4-5]。我国于2006年发布有关的水产行业标准（SN/T1768- 2006）[6]及国家标准（GB/T20361-2006）[7]。行业标准SN/T1768-2006前处理简单，但是满足不了检测限0.5 μg/kg 的要求。其他方法的前处理均需多次萃取，多次离心，操作烦琐，前处理时间长，有机溶剂用量大，实际检测工作中存在困难。本文综合各个方法标准中快速和灵敏的优点，建立了同时检测孔雀石绿及代谢物无色孔雀石绿总量，结晶紫以及代谢物无色结晶紫总量的液相色谱方法。

复混肥料中钙镁硫含量的测定

GB/T19203-2003 复混肥料中钙、镁、硫含量的测定 1、范围本标准规定了复混肥料（复合肥料）中总钙、总镁、总硫含量的测定方法。本标准适用于各种复混肥料（复合肥料）中总钙、总镁、总硫含量的测定。 2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 8571 复混肥料实验室样品制备 HG/T 2843-1997 化肥产品化学分析中常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 3、试验方法 3.1一般规定本标准中所用试剂、水和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，均应按HG/T 2843-1997之规定。 3.2实验室样品制备按GB/T 8571规定制备实验室样品。 3.3试样溶液的制备 3.3.1试剂和材料 3.3.1.1硝酸； 3.3.1.2高氯酸。 3.3.2试样溶液的制备称取4 g～5 g的试样（精确至0. 000 2 g）（若硫含量的质量分数低于2%，则称样量为10 g）置于400 mL高型烧杯中，加入20 mL～30 mL硝酸，不盖表面皿，小心摇匀，在通风橱内用电热板慢慢煮沸消化至近干涸以分解试样和赶尽硝酸。稍冷加入10 mL高氯酸，盖上表面皿，缓慢加热至冒高氯酸的白烟，继续加热直至溶液呈无色或淡色清液（注意：不要蒸

干！）（必要时，短时间放置冷却后，补加硝酸数毫升再加热）。冷却至室温，定量转移至250 mL量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。干过滤，弃去最初几毫升滤液，待用。 3.4 总钙、总镁含量的测定乙二胺四乙酸二钠容量法 3.4.1原理用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在pH值12～13条件下，镁以氢氧化镁形式沉淀，以钙黄绿素为指示荆，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液配位滴定总钙；在pH值10条件下，以K-B为指示荆，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液配位滴定钙镁总量。从钙镁总量中扣除钙的量即为镁的量。 3.4.2试剂和材料 3.4.2.1盐酸羟胺； 3.4.2.2乙二胺； 3.4.2.3三乙醇胺溶液：1+3； 3.4.2.4氢氧化钾溶液：200 g/L； 3.4.2.5淀粉溶液：10 g/L，称取lg可溶性淀粉于200 mL烧杯中，加5 mL水润湿，加95 mL 沸水，搅拌，煮沸，冷却备用； 3.4.2.6氨-氯化饺缓冲溶液：pH≈l0。按HG/T 2843-1997中9.5.1的方法进行配制； 3.4.2.7 乙二胺四乙酸二钠( EDTA)标准滴定溶液：c(EDTA) =0.02 mol/L； 3.4.2.8孔雀石绿指示液：1 g/L； 3.4.2.9钙黄绿素一甲基百里香草酚蓝指示荆(简称钙黄绿素指示剂)：0.10 g钙黄绿京与0.10 g甲基麝香草酚蓝（或甲基百里香酚蓝）与0.03 g百里香酚酞、5g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用； 3.4.2.10 酸性铬蓝K-萘酚绿B混合指示捌（简称K-B指示剂）。 3.4.3仪器通常实验室用仪器。 3.4.4分析步骤 3.4. 4.1 总钙含量测定 3.4.4.1.1含量测定准确吸取一定量的试样溶液（以Ca计15 mg以下）于三角烧瓶中，加水50 mL，加淀粉溶液10 mL、三乙醇胺溶液8 mL、乙二胺1 mL、l滴孔雀石绿指示液，滴加氢氧化钾溶液至

DB13T1358-2011养殖用水中孔雀石绿快速测定方法激光拉曼光谱法

ICS65.150 B 50 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 1358—2011 养殖用水中孔雀石绿快速测定方法激光拉曼光谱法The qualitative determination of malachite green in aquiculture water by surface-enhanced laser raman spectrometry 2011-01-28发布2011-02-28实施

前言本标准由GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、欧普图斯光学纳米科技有限公司、国家果类及农副加工产品质量监督检验中心本标准主要起草人：李挥、张敬轩、张会军、张岩、刘春伟、贾茜、范斌、李强、庞坤

养殖用水中孔雀石绿快速测定方法激光拉曼光谱法 1 范围本标准规定了利用激光拉曼光谱法快速检测水产品养殖、销售用水或其他水体中微痕量孔雀石绿的定性定量检测方法。本标准适用于水产品养殖、销售用水或其他水体中孔雀石绿的激光拉曼光谱法的现场快速筛查检测。本方法在水中孔雀石绿的定量限为5.0μg/L。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T 6682—2008，ISO 3696:1987，MOD）。 3 原理试样经高速离心后直接测定。样品中的孔雀石绿分子与表面增强试剂混合后，分子吸附在表面增强纳米颗粒上，其拉曼散射信号可增强106倍以上，使用便携式激光拉曼检测仪通过自动判别其特征峰即可定性检测出孔雀石绿。通过对测定的拉曼谱图进行基线调整和归一化处理，应用外标法可进行定量分析。 4 试剂与材料除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1 孔雀石绿标准品：CAS 2437-29-8，纯度大于99％。 4.2 表面增强试剂：OTR201，银纳米溶胶，或相当者。 4.3 无机盐凝聚剂：1％氯化钠水溶液。 4.4 无机盐离子促进剂：2％溴化钾水溶液。 4.5 孔雀石绿标准溶液（1 000 μg/mL）：准确称取0.1 000 g孔雀石绿标准品，用乙腈溶解后，定容到100 mL，4℃避光保存。 5 仪器与设备 5.1 激光拉曼光谱仪。 5.2 高速离心机：转速不低于14 000 r/min（转/分钟）。 6 分析步骤

孔雀石绿检测卡说明书——组织

孔雀石绿免疫胶体金快速检测卡使用说明本产品用于快速检测水产品组织样品中的孔雀石绿残留，整个检测过程只需要40分钟左右，适用于各类企业及检测机构,本产品检测限如下表所示 1、检测原理：孔雀石绿快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的孔雀石绿在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T）上孔雀石绿－蛋白偶联物的结合。如果样品中孔雀石绿含量大于1ppb，检测线（T）不显颜色或者检测线（T）比质控线（C）浅两个色差以上（含两个），结果为阳性；反之，检测线（T）显红色，结果为阴性。需自备设备：均质器；电子天平；称量勺；离心机；氮（空）气吹干仪；微量移液器。 3、样品处理：组织样（虾要去掉头和壳后彻底清洗干净，鱼要去鳞后洗净）应当避光冷藏保存。 1.取切碎的一定量的组织样本，用均质器均质； 2.称取2ｇ均质于1５ｍｌ离心管中； 3.用微量移液器加入1.5ｍｌＭＧ提取剂１，然后加入4ml ＭＧ提取剂２和１管ＭＧ提取剂３于1５ｍｌ离心管中。 4.剧烈振荡3min后，加入一管MG提取剂4，剧烈振荡1分钟后，室温下4000r/min离心5min; 5.用微量移液器移取3ml上清于15ml离心管中，用微量移液器加入1ml正己烷，上下颠倒6次，室温4000r/min离心1min, 用微量移液器移取离心管刻度1ml到3ml之间的液体（大约2ml）到新的5ml离心管中，再加入MG氧化剂瓶内的下层黄色液体0.1ml,混合均匀1分钟后，65℃加热条件下，用空气吹干； 6.用微量移液器向吹干的离心管中加入300ulMG复溶液，用微量移液器冲洗溶解试管内壁上残留物；静置2分钟； 7.吸取待检样品溶液100微升于金标微孔中，用小滴管吹打完全溶解孔内红色物质，等待反应5分钟。 4、使用步骤： 1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃~25℃）； 2. 从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图右侧所示（打开后请立即使用）； 3. 吸取待检样品溶液60～80微升于加样孔中（滴管滴3滴），加样后开始计时； 4. 结果应在8～10分钟读取，其他时间判读无效。

孔雀石绿

孔雀石绿前言孔雀石绿的基本性质毒理作用代谢途径限量检测方式近年来，由于水产养殖的规模的扩大，养殖渔药泛滥的现象较严重。孔雀石绿(malachite green, MG)是一种带有金属光泽绿色的结晶体，化学名为四甲基代二氨基三苯甲烷，分子式为C23H25ClN2。孔雀石绿一种合成的工业染料，自1936年以来，许多国家就将其广泛用作水产养殖业中，作为杀虫剂和杀菌剂，用来杀灭体外寄生虫和鱼卵中的霉菌。以前在我国被用于欧洲鳗anguilla、甲鱼Trioyxsinesis、河蟹Eriocheirsinensis、罗非鱼Orechromisspp、鳜鱼Sinipercachuatsi鲢鱼Hypophthalmichehysmolitrix等水霉病、小瓜虫病、聚索虫Zoothanminium 病的防治、从1990年开始，国内外学者陆续研究发现，孔雀石绿及代谢产物无色孔雀石绿(leucomalachite green, LMG)在鱼体内和环境中残留时间长，其化学官能团-三苯甲烷（triphenylmethane）被确证具有高毒、高残留、“三致”等毒副作用。鉴于此，美国、加拿大、日本、欧盟等许多国家都将其列为水产养殖禁用药物。我国从2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及化合物清单》中。但是，由于孔雀石绿的抗菌效果非常好，并且价格低廉、对其毒副作用的宣传力度不够等原因，在水产养殖中仍有违规的情况。2005年6月5日在英国超市出售的鲑鱼体内检出孔雀石绿后，许多国家和地区也相继在水生动物中发现其残留，并迅速做出反应。孔雀石绿继“苏丹红1号”之后成为食品安全中又一热点问题。孔雀石绿及其化学性质孔雀石绿，又名碱性绿、盐基块绿、孔雀绿，分子式为C23H25ClN2。分子量为346.4，为暗绿色结晶固体，溶于水、乙醇和甲醇，水溶液的颜色为蓝绿色，最大吸收波长618nm。遇浓硫酸呈黄色，稀释后呈暗橙色；其水溶液加氢氧化钠形成微带绿光的白色沉淀。孔雀石绿可以以多种形式存在，但主要以草酸盐或盐酸盐的形式存在与醋酸盐和盐酸盐的混合液中，其中孔雀石绿草酸盐或孔雀石绿盐酸盐在该混合液中浓度均大于等于50%。与其他三苯甲烷一样，孔雀石绿以盐、醇类化合物或醇碱化合物形式存在时呈二价阴离子形式。在水溶液中，孔雀石绿阳离子（有色形式）和活性氢氧根离子结合，生成非离子化合物的无色醇碱，由于孔雀石绿醇碱的脂溶性较大，因而认为孔雀石绿进入细胞可能是以醇碱的形式完成。图1列出了孔雀石绿、无色孔雀石绿及一系列脱甲基衍生物的结构。【3】

水产品中孔雀石绿检测方法研究进展

福建水产,2007年3月第1期NO.1 JOURNAL OF FUJI AN F IS HER IES M ar .26.2007 水产品中孔雀石绿检测方法研究进展刘海新,张农,钱卓真 (福建省水产研究所,福建厦门361012) 摘要:水产品的安全问题日益成为社会关注的焦点,近年来,我国出口的鳗鲡以及国内市场上的水产品都发现了孔雀石绿残留。国内各有关检测机构相继开展了水产品中孔雀石绿残留量的检测。本文对现有的各种检测方法的优点和局限性作一概述,以便研究者能在此基础上进一步改进和发展。关键词:水产品;孔雀石绿;检测 1 孔雀石绿的特性与危害孔雀石绿(M alachite green ,MG )属三苯甲烷类染料,化学名称为:四甲基代二氨基三苯甲烷,结构见图1。在水产养殖中 ,孔雀石绿主要用来抗真菌感染和杀灭寄生虫,鱼类一般用于防治水霉病、烂鳃病以及寄生虫等。其价格低廉, 疗效显著,当前还找不到一种特效药完全取代孔雀石绿,因此曾经在水产养殖业中广泛应用 [1] 。孔雀石绿进入水生动物体内后,会快速代谢成脂溶性的无色孔雀石绿(Leuco m a lach ite green ,L MG ),结构见图1。据Berg w erff [2] 等的研究,对欧鳗(Anguilla anguilla )采用孔雀石绿0 1mg L -1 药浴处理24h 。药浴开始6h 后,鳗鱼体内孔雀石绿残留到达峰值,药浴处理后72h ,体内90%孔雀石绿被代谢,720h 后有些鱼体中已检测不出孔雀石绿残留,1920h 后所有鱼体中都检测不出孔雀石绿残留。而无色孔雀石绿在药浴处理后72h 达到峰值,然后缓慢代谢,720h 后只代谢了50%,2400h 后仍然可检测出鱼体肌肉中有15 12 g kg -1 的无色孔雀石绿残留。孔雀石绿具有潜在的致癌、致畸、致突变的作用,其在养殖业中的使用未得到美国食品与药物管理局(FDA )的认可[3] ;根据欧盟法案 2002/675/EC 规定 [4] ,动物源性食品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留总量限制为2 g kg -1 ;日本的肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留;我国在农业行业标准《NY5071-2002无公害食品鱼药使用准则》中也将孔雀石绿列为禁用药物。 2005年,福建、江西、安徽等省出口欧盟、日本、韩国的鳗鱼产品先后被检出孔雀石绿残留,我国水产品出口因此受严重影响;2006年,上海市场上的多宝鱼和香港市场上的桂花鱼,也

兽药残留

已批准的动物性食品中最高残留限量规定

附录4：禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出

名词定义： 1．兽药残留[Residues of Veterinary Drugs]：指食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中与所有药物有关的物质的残留，包括原型药物或/和其代谢产物。 2．总残留[Total Residue]：指对食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中药物原型或/和其所有代谢产物的总和。 3．日允许摄入量[ADI：Acceptable Daily Intake]：是指人一生中每日从食物或饮水中摄取某种物质而对健康没有明显危害的量，以人体重为基础计算，单位：μg/kg体重/天。 4．最高残留限量[MRL：Maximum Residue Limit]：对食品动物用药后产生的允许存在于食物表面或内部的该兽药残留的最高量/浓度（以鲜重计，表示为μg/kg）。 5．食品动物[Food-Producing Animal]：指各种供人食用或其产品供人食用的动物。 6．鱼[Fish]：指众所周知的任一种水生冷血动物。包括鱼纲（Pisces），软骨鱼（Elasmobranchs）和圆口鱼（Cyclostomes），不包括水生哺乳动物，无脊椎动物和两栖动物。但应注意，此定义可适用于某些无脊椎动物，特别是头足动物（Cephalopods）。 7．家禽[Poultry]：指包括鸡、火鸡、鸭、鹅、珍珠鸡和鸽在内的家养的禽。 8．动物性食品[Animal Derived Food]：全部可食用的动物组织以及蛋和奶。 9.可食组织[Edible Tissues]：全部可食用的动物组织，包括肌肉和脏器。 10.皮+脂[Skin with fat]：是指带脂肪的可食皮肤。 11.皮+肉[Muscle with skin]：一般是特指鱼的带皮肌肉组织。 12.副产品[Byproducts]：除肌肉、脂肪以外的所有可食组织，包括肝、肾等。 13.肌肉[Muscle]：仅指肌肉组织。 14.蛋[Egg]：指家养母鸡的带壳蛋。 15.奶[Milk]：指由正常乳房分泌而得，经一次或多次挤奶，既无加入也未经提取的奶。此术语也可用于处理过但未改变其组份的奶，或根据国家立法已将脂肪含量标准化处理过的奶。

浅淡食品安全论文

高等教育自学考试毕业设汁（论文）食品科学与工程（本科）

I?着科技的发展和人类文明的进步，经济社会的不Bfi进步，经济全球化不Bfi 深人发展，人们仗食文化日益多样化，食品JDlil程中化学晶和新技术的广泛使用，新的您品安全问題不斷涌现。尽管现代科技己发展到了相当水平，但fill! 疾病不论在发达国家还是发展中国家,部股有得到有效的控制,仍然严重地危害着人民的Hl康，成为当今世界各国最关注的卫生问題之一。中国的食品安全问题层出不穷，毎年频频出现的重大食品安全事件，不仅严重影晌到了人们的身体健康，造成了巨额的购产损失，而且也影晌到了中国的经济发展、食品岀口、社会稳定等一系列间题。食晶卫生与安全已成为备受关注的热门iSSo因此，就食品安全问题本身的严竣性而言，重视并大力解决好迪一问题依黙迫在眉睦。关建词：食品安全，安全事故，当前现状

Abstract With the development of science and technology and the progress of human civilization, economic and social progress, economic globalization, people's diet culture increasingly diversification, the process of food chemicals and new technology is widely used, new food safety problems emerge. Although modern science and technology has developed to a considerable level of foodborne illness, but whether in developed countries or developing

市售淡水鱼中孔雀石绿及其代谢物残留量的调查研究

［J ］．中国食品卫生杂志，2009，21（3）：285-287. ［4］卫生部办公厅关于2009年全国食物中毒事件的通报［J ］．中国食品卫生杂志， 2010，22（2）：190-193.［5］卫生部办公厅关于2010年全国食物中毒报告情况的通报［EB /OL ］．［2011-03-02］．http ：//www．moh．gov．cn /publicfiles /business /htmlfiles /mohwsyjbgs /s8354/201103/50797.htm．［6］Surveillance for foodborne disease outbreaks-United States ，2006 ［J ］.MMWR ，2009，58（22）：609-615. ［7］Surveillance for foodborne disease outbreaks-United States ，2007 ［J ］．MMWR ，2010，59（31）：973-979. ［8］Outbreaknet foodborne outbreak online database ［EB /OL ］．［2011-07-05］．http ：//wwwn．cdc．gov /foodborneoutbreaks /default．aspx．调查研究市售淡水鱼中孔雀石绿及其代谢物残留量的调查研究华永有，邱文倩，周亮，吕华东，郑奎城，黄宏南，林宏琳，傅武胜（福建省疾病预防控制中心，福建福州 350001）摘要：目的了解福建省餐饮环节淡水鱼孔雀石绿（MG ）及其代谢物无色孔雀石绿（LMG ）的残留情况。方法 207份样品来自福建省6个市有关餐饮场所，共28个品种，制作为鱼肉浆，经前处理后，采用高效液相色谱/荧光法对鱼肉浆中孔雀石绿及其代谢物的残留总量进行检测，阳性样品再用高效液相色谱/质谱法确证。结果15个品种的48份样品检出孔雀石绿及其代谢物，检出率为23.2%，总MG 含量在0.54 8099μg /kg 之间。桂花鱼检出率最高，达到92.9%（26/28），草鱼检出率较低，为2.38%（2/84）。结论餐饮环节销售的淡水鱼孔雀石绿及其代谢物的检出率相对较高，在某些品种淡水鱼供应链中滥用MG 的现象较为突出，需要有关监管部门加大打击滥用MG 的力度，确保淡水鱼的消费安全。关键词：淡水鱼；孔雀石绿；兽药残留；食品安全中图分类号：S948 文献标识码：C 文章编号：1004-8456（2011）06-0563-04 Monitoring malachite green and its metabolites leumalachite green in retailed freshwater fish Hua Yongyou ，Qiu Wenqian ，Zhou Liang ，Lu Huadong ，Zheng Kuicheng ，Huang Hongnan ， Lin Honglin ，Fu Wusheng （Fujian Center for Disease Control and Prevention ，Fujian Fuzhou 350001，China ）收稿日期：2011-01-26基金项目：国家卫生公益性行业专项课题（200902009）作者简介：华永有男主管技师研究方向为食品卫生检验 E-mail ：huayyfj@qq．com 通信作者：傅武胜男副主任技师研究方向为污染物化学与风险评估 Abstract ：Objective To monitor and assess the residues of malachite green （MG ）and its metabolites leucomalachite green （LMG ）in freshwater fish．Methods Twenty eight kinds of 207fish samples were collected from retailers in six cities of Fujian Province．After samples being homogenized and pre-treated ，the concentration of total MG in samples was quantified by high performance liquid chromatography （HPLC ）coupled with fluorescence detector．The positive samples analyzed by HPLC were confirmed by HPLC-mass spectrometer （LC /MS /MS ）．Results The detection rate of MG was 23.2%（48/207）with levels ranged from 0.54to 8099μg /kg in samples．MG was detected in 92.9%（26/28）of Chinese perch and in 2.38%of grass carp．Conclusion The detection rate of MG in freshwater fish sold in Fujian markets was relatively high ，especially in Chinese perch．It is indicated that the illegal application of MG in supply chains for freshwater fish may be relatively serious．Strengthening surveillance and regulation for attacking illegal application of MG should be promoted to ensure the safety of consuming freshwater fish． Key words ：Freshwater fish ；malachite green ；residues of veterinary drugs ；food safety

孔雀石绿、亮绿检测方法-液质联用

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测水产品中孔雀石绿（隐）、结晶紫（隐）和亮绿陈军（龙大食品检测中心）摘要：采用乙腈提取水产品组织中的目标物，液液分配到二氯甲烷层，10%氯化钠水溶液去除水溶性杂质，无水硫酸钠脱水及过滤固体杂质。浓缩定容后，过中性氧化铝柱净化，采用UPLC/MS/MS 进行检测，方法简便、快捷、稳定、灵敏度高，定量下限为0.0005mg/kg，可满足水产品亮绿药物的检测的要求。检测项目：亮绿（brilliant green ，BG ）属于碱性三苯甲烷类染料，具有类似的结构，在水产养殖过程中，常作为杀菌剂和抗寄生虫药，用于防治各种鱼病。由于三苯甲烷具有致突变、致畸和致癌作用，欧美、中国和日本等宣布严禁在水产养殖中使用孔雀石绿和结晶紫，并规定孔雀石绿（含隐色孔雀石绿）和结晶紫（含隐色结晶紫）不得检出。【药代动力学】。适用范围：本方法适用于虾、鱼、蟹等水产样品以上五种药物残留量的检测。实验部分：一、试剂与材料 1.1试剂 1.1.1 乙腈（色谱纯） 1.1.2 超纯水 1.1.3 无水硫酸钠（分析纯） 1.1.4 氯化钠（分析纯） 1.1.5 异丙醇（分析纯） 1.1.6 甲酸（色谱纯） 1.1.7 冰乙酸（色谱纯） 1.1.8 乙酸铵（色谱纯） 1.1.9 甲醇（色谱纯） 1.2仪器材料 1.2.1 飞利浦食品加工机 U n R e g i s t e r e d

1.2.2 50ml 带盖离心管 1.2.2 离心机 1.2.3 250mL 分液漏斗 1.2.4 中性氧化铝小柱(LC-Alumina-N)：100mg,3mL 1.2.5 旋涡混合仪 1.2.6 150mL 茄形瓶 1.2.7 氮吹仪 1.2.8 移液管 1.2.9 滤纸 1.2.10 UPLC/MS/MS 1.3 溶液 1.3.1 0.1甲酸乙腈：取0.5mL 甲酸加入到500mL 的乙腈中，摇匀。 1.3.2 5mmol/L 乙酸铵0.1%甲酸水溶液：称取0.19g 乙酸铵溶于500mL 水，然后向其中加入0.5mL 甲酸，摇匀。 1.3.3 定溶液：乙腈：5mmol/L 乙酸铵（PH4.5）=8：2，用冰乙酸调节pH=4.5. 二、实验方法 2.1 取500g以上的可食用部分组织充分绞碎混匀后，称取5.00g至50ml离心管中。 2.2 向离心管中加入15mL乙腈，充分振荡提取，旋涡混合3min，以5000r/min离心分离，重复提取一次，合并两次上清液，并转入250ml分液漏斗中 2.3 向分液漏斗中加入20mL 10%氯化钠水溶液，20mL二氯甲烷，振荡3min（注意放气），静置分层后，去除下层水相；上层乙腈和二氯甲烷层过预先用乙腈淋洗的无水硫酸钠脱水净化，并收集到茄形瓶中，然后用20mL乙腈分数次洗涤硫酸钠，滤液一并转入茄形瓶中 2.4 向茄形瓶中加入10mL异丙醇, 40℃以下浓缩至干，用2ml定溶液溶解残渣， 2.5 残渣溶解液过中性氧化铝，前面3-5滴滤液弃去，随后的滤液全部收集过0.2um滤膜， UPLC-MS-MS分析三、仪器条件 3.1 液相条件使用含0.1%甲酸的5mmol/L 乙酸铵水溶液和含0.1%甲酸的乙腈做流动相， A : 5mmol/L 乙酸铵0.1%甲酸水溶液 B：0.1%甲酸乙腈 U n R e g i s t e r e d

孔雀石绿危险评估报告

水产品中孔雀石绿危险评估报告孔雀石绿是人工合成的有机化合物，可用于鱼类寄生虫病、细菌性疾病和其他疾病的治疗,因此早在20世纪30年代,世界各地在水产养殖中已广泛使用孔雀石绿,食品工业界亦有不少人视之为有效的抗真菌剂。但后来研究发现孔雀石绿中的化学功能团三苯甲烷可致癌，很多国家已经禁用，我国也出台相关的规定孔雀石绿的使用范围以及残留量，但由于其在在水产品中的杀菌应用，还是有一些不法商家过量使用，导致其在食品中的残留量超出，严重威胁到人体健康，因此，孔雀石绿的使用以及检测都受到国家的极度重视。 1.危害识别 1.1.孔雀石绿的理化性质及其代谢机理孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，其既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色；溶于甲醇、乙醇和戊醇。其可用作治理鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染，对付真菌Saprolegnia特别有效，渔场的鱼卵会感染这种真菌。当孔雀石绿进入人类或动物机体后,在还原酶的催化下,降解成脂溶性的无色孔雀石绿而长期滞留在组织中。在甲状腺过氧化物酶(TPO)催化下,无色孔雀石绿脱甲基生成初级和次级代谢产物芳香胺,这些代谢产物与具有致癌作用的芳香胺结构类似,可直接或酯化后与DNA反应,生成DNA加合物结构物质。 1.2.孔雀石绿的毒性 1.2.1.急性毒性孔雀石绿盐酸盐对小鼠经口急性毒性LD 为80mg/g，孔雀石绿草酸盐对大鼠经口急性毒性LD 为275 mg/g，急性毒性属中等毒物质[1]。急性毒性试验表明: 孔雀石绿致大鼠的运动活力减少，发生腹泻和立毛，但仅限于给药后第1 天，肠壁充血和肌张力缺失，并且发现动物在死亡之前往往伴随胃肠道扩张，幸存者2 d 后症状消失[2]。急性试验结果如表1[2]。

KJ201701 水产品孔雀石绿胶体金

附件1 水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201701） 1范围本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。 2原理样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。 3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1正己烷。 3.1.2乙腈。 3.1.3冰乙酸。 3.1.4盐酸。 3.1.5吐温-20。 3.1.6氯化钠。 3.1.7对-甲苯磺酸。 3.1.8无水乙酸钠。 3.1.9盐酸羟胺。 3.1.10无水硫酸钠。 3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。 3.1.12二氯二氰基苯醌。 3.1.13氯化钾。 3.1.14磷酸二氢钾。 3.1.15十二水合磷酸氢二钠。 3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200g，加水500mL，超声使其充分溶解。 3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25g/mL）：称取2.5g盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10mL，混匀。

3.1.18乙酸盐缓冲液：称取 4.95g无水乙酸钠（3.1.8）及0.95g对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH为4.5，用水稀释至1L，混匀。 3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001mol/L）：称取0.0227g二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。4℃避光保存。 3.1.20复溶液：称取8.00g氯化钠（3.1.6），0.20g氯化钾（3.1.13），0.27g磷酸二氢钾（3.1.14）及2.87g十二水合磷酸氢二钠（3.1.15）溶解于900mL水中，加入0.5mL吐温-20（3.1.5），混匀，用盐酸（3.1.4）调节pH为7.4，用水稀释至1L，混匀。 3.2 参考物质孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。表1 孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液配制 3.3.1孔雀石绿、隐色孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）：精密称取适量孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质（3.2.1），分别置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为1mg/mL的孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准储备液。-20℃避光保存，有效期1个月。 3.3.2孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）：精密量取孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的孔雀石绿标准中间液A。临用新制。 3.3.3孔雀石绿标准中间液B（100ng/mL）：精密量取孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100ng/mL的孔雀石绿标准中间液B。临用新制。 3.3.4隐色孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）：精密量取隐色孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL 的隐色孔雀石绿标准中间液A。临用新制。 3.3.5隐色孔雀石绿标准中间液B（100ng/mL）：精密量取隐色孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）（3.3.4）1mL，置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100ng/mL 的隐色孔雀石绿标准中间液B。临用新制。 3.4 材料 3.4.1免疫胶体金试剂盒，适用基质为水产品或水。 3.4.1.1金标微孔。 3.4.1.2试纸条或检测卡。 4仪器和设备 4.1 移液器：200μL、1mL和10mL。

孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂卡

武汉欣泰扬生物科技有限公司名称灵敏度（ppb ）孔雀石绿（显性） 2 孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂内含：试剂板，滴管提取剂 1 提取剂 2 氧化剂复溶液说明书金标微孔孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂卡使用说明书（Ⅱ）【产品简介】本产品用于快速检测水产品组织样品中的孔雀石绿残留，整个检测过程只需要 40 分钟左右，适用于各类企业及检测机构。表一产品灵敏度表二产品的组成【样品处理】组织样品（虾要去掉头和壳后彻底清洗干净，鱼要去鳞后洗干净）应当避光冷藏保存。样品的处理方法如下： 1. 取切碎的一定量的去脂肪组织样本，用均质机均质； 2. 称取 3 g 均质物于 50 ml 离心管中； 3. 向上述50ml 管中加入提取剂1 溶液 3 ml ，提取剂2溶液3ml,再加入 8 ml 乙腈，盖上盖子剧烈振荡2 min 后，室温下 4000 rpm 离心 5 min ； 4. 移取4 ml 上清液于5 ml 离心管中，加入100μl 氧化剂，颠倒混匀 1 0 秒，于 6 0 ℃ 环境下，利用氮气或空气吹干。（若管底剩余少于10 0 微升吹不干液体为正常现象，可直接复溶使用，不影响检测结果） 5.向吹干的离心管中加入 0.3 ml MG 复溶液，和正己 6.烷 500μl ,于室温下 4000 rpm 离心 1 min ，用移液器移取下层 150 μl 溶液，待检。(移液器枪头一定要抵着管底，取底层溶液，以免取到油脂，导致结果异常) 【使用步骤】测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃~30℃）。从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图所示（打开后请立即使用）；吸取待检样品 150 微升加入到金标微孔中，等待反应2分钟后，用滴管吹打至完全溶解孔内红色物质；吸取孔内所有溶液滴加到加样孔中，加样后开始计时；结果应在:8～10 分钟读取，其他时间判读无效。 T 线明显显为绿色的，可判为阳性结果【结果判断】阴性（-）： T 线显色（测试线，靠近加样孔一端）比 C 线（对照线）深或一样深，表示样品中待检药物浓度低于2 ppb 或不含待检药物。阳性（+）： T 线显色明显比C 线浅，或T 线呈绿色，表示样品中待检药物浓度高于2 ppb ，T 线相比C 线越浅，表示样品中待检药物浓度越高。无效：未出现C 线，表明不正确的操作过程或试剂板已失效。应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。【注意事项】尽量不要触摸试剂板中央的白色膜面；请勿使用过期的试剂板；若需直接检测标准品，请用我方提供的 PBST 缓冲液进行配制。切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染；切勿食用配备的试剂；试验中务必戴上配备一次性手套；试验场地要求常温 20℃-30℃的通风条件【特异性】本产品与其他种类药物无交叉反应。【精密度】同时使用本产品和孔雀石绿液相质谱串联质谱法对 150 份样品包括 94 份阴性样本和 56 份阳性样本进行检测，检测结果表明本产品与质谱法的结果符合率为98.0％。【贮存条件】 4℃～30℃避光保存，切勿冷冻。【有效期】 12 个月。【生产日期及批号】详见包装袋。

食品农产品检测常见检测项目及检测指标

食品农产品检测常见检测项目及检测指标广电计量杜亚俊微生物及生物毒素检测能力菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、金色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、蜡样芽胞杆菌、双歧杆菌、克雷伯氏菌、变形杆菌、霍乱弧菌、黄曲霉毒素(M1、B1、B2、G1、G2)、赭曲霉毒素、展青霉素、T-2 毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）等。营养成份及常规理化营养成分检测能力中国营养标签（1+4）、美国营养标签（1+14）、香港营养标签（1+7）、台湾营养标签（1+6）等。常规理化检测能力能量、碳水化合物、蛋白质、脂肪、钠、膳食纤维、营养强化剂、水分、灰分、总灰分、总糖、粗纤维、非脂乳固体、折光指数、旋光度、淀粉、酸碱度、硝酸盐、亚硝酸盐、硫酸盐、氯化物、挥发性盐基氮、氨氮、全氮、固形物、过氧化值、pH 值、酸价、粘性胆固醇、二氧化硫、葡萄糖、果糖、蔗糖、脂肪酸、相对密度、净含量、二氧化碳、碘值、游离碱度、游离脂肪酸、咖啡碱、咖啡因、脲酶、电导率、牛磺酸、皂化值、不皂化物、不溶性杂质、总酯、羰基价、感官、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、维生素E、维生素D 等。重金属及微量元素检测能力钾、钙、钠、镁、铝、铜、锌、铁、锰、硒、锡、锑、碘、铅、总砷、无机砷、汞、镉、铬、硒、氟、磷、锗、锂、锶、镍、银、钴等。食品添加剂、非法添加物及接触材料食品添加剂检测能力糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钙、栀子黄、柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、诱惑红、酸性红、新红、碱性橙、叔丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6- 二叔丁基对甲酚(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ) 、脱氢乙酸、没食子酸丙酯、氨基乙酸、二氧化钛、咖啡因、抗坏血酸、滑石粉、纳他霉素、亚硝酸盐等。非法添加检测能力硼砂、罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因、瘦肉精、苏丹红Ⅰ - Ⅳ、孔雀石绿、皮革水解物、三聚氰胺、罗丹明B 等。食品接触材料检测