人类激肽释放酶2研究进展及其与前列腺癌的关系
人激肽释放酶1(KLK-1)说明书
人激肽释放酶1(KLK-1)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中激肽释放酶1(KLK-1)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人激肽释放酶1(KLK-1)水平。用纯化的人激肽释放酶1(KLK-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入激肽释放酶1(KLK-1)，再与HRP标记的激肽释放酶1(KLK-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的激肽释放酶1(KLK-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人激肽释放酶1(KLK-1)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：27ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
激肽释放酶原激活剂测定法
附录ⅨF激肽释放酶原激活剂测定法本法系采用显色底物法（或显色基质法）测定供试品中激肽释放酶原激活剂(PKA)含量。 试剂（1）0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷 0.15mol/L氯化钠溶液（TNB）用1mol/L盐酸调节pH值至8.0。 （2）2mmol/L激肽释放酶显色底物(S-2302)溶液称取S-2302 12.5mg，加10ml水溶解。 （3）前激肽释放酶（PK）采用适宜方法提纯PK，小体积分装，-30℃以下保存备用。PKA标准溶液的制备取PKA标准品适量，用0.85%氯化钠溶液稀释成每1ml中含10.0IU、20.0IU、30.0IU、40.0IU、50.0 IU的溶液。按每次用量，小体积分装，-30℃保存备用，用前融化(仅允许冻融1次)，并用TNB稀释10倍。 供试品溶液的制备取供试品适量，用TNB稀释10倍。 测定法 取供试品溶液20μl加至96孔微量滴定板孔内，加PK 20μl-50μl，振荡1分钟，加盖置25～30℃放置30分钟（或37℃10分钟）后，加2mmol/L S-2302溶液20μl，振荡1分钟，加盖置25～30℃放置15分钟（或37℃10分钟），加50%醋酸溶液20μl，振荡1分钟后，照紫外-可见分光光度法（附录ⅡA），在波长405nm处测定吸光度。同时以TNB 20μl~50μl代替PK 20μl~50μl，同法操作，作为空白对照。用PKA标准溶液20μl替代供试品溶液，同法操作。将标准品溶液PKA活性的对数对其相应的吸光度对数进行线性回归，求出回归方程，计算出供试品PKA活性。 【附注】（1）每个标准溶液和供试品做3孔，其中2个测定孔、1个对照孔，两个测定孔吸光度差值应小于0.020。 （2）每次测定可根据供试品PKA含量，适当调整PKA标准溶液的范围。 （3）线性回归的相关系数应不低于0.99。 （4）加PK、S-2302及50%醋酸溶液时，各孔的间隔时间应相同，加液的顺序要一致，尽可能使各孔处于同一反应条件下。
人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达
ISSN 1007 7626CN 11 3870 Q 中国生物化学与分子生物学报 Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 2003年6月19(3):312~316 人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达 李体远, 杜 珙* , 蔡筱彦, 石之磷, 黄瑞芳, 陈德珩, 戴 勇, 肖德明 (暨南大学医学院第二附属医院,深圳市人民医院临床医学研究中心,深圳 518020) 摘要 将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pE T28(b)及分泌型表达载体pE T20(b)中,使其C 端融合6 His Tag 序列.转化不同受体菌,IPTG 诱导表达后利用SDS PAGE 、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析.在6株基因工程菌株中,均表达出分子量约30kD 的激肽释放酶融合蛋白,其中激肽释放酶在pET28载体中的表达水平高于pET20载体.pE T28和pE T20载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约26%和10%.Western 印迹分析表明,目的蛋白可与抗人血清KK 单克隆抗体发生特异性反应.未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯(B AEE)的能力.在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达,表达产物具有免疫原性和生物活力,这为研究其生物功能和开发基因工程药物奠定基础.关键词 人组织激肽释放酶,大肠杆菌,高效表达中图分类号 Q78 Overexpression of Mature Human Tissue Kallikrein Fusion Protein in E .coli LI Ti yuan,DU Gong * ,C AI Xiao yan,SHI Zhi lin,HUANG Rui fang, C HE N De heng,DAI Yong,XI AO De ming (Me dical Researc h Cente r ,Shenzhe n People s Hospital ,Medic al Colle ge ,Jinan U nive rsity ,Shenzhe n 518020,China ) Abstract Human tissue kallikrein gene fragment encoding mature kallikrein was amplified and cloned into pE T 28(b)and pET 20(b)plasmid with C terminal 6 His Tag.The recombinant fusion protein was overe xpressed in B L21(DE3),B L21(DE3)plysS and HMS174(DE3)under the induction of IPTG.SDS PAGE showed tha t the kallikrein fusion protein were produced at a level of approximately 26%and 10%of the total cellular protein in E .coli BL21(DE3)plysS by pET 28(b)and pET 20(b),respectively.The relative molecular weight of the expressed protein was 30kD.Western blot analysis indicated that the expressed kallikrein had the antigenicity to human serum kallikrein.The kallikrein fusion protein in the un purified solution sho wed low activity to hydrolysis B AEE by using potentiometric method.The overe xpressed human tissue mature kallikrein could be used for the development of gene tic engineering products and further study of its biological property. Key words kallikrein,overexpression,E .coli 收稿日期:2002 05 28,接受日期:2002 10 28 基金项目:深圳市科技局资助课题(No.199906014),广东省十五攻关课题(No.C11801) 李体远,男,1964年1月生,博士,副研究员,现在美国Ohi o 州立大学做博士后研究工作* 联系人:Tel:0755 ******** 2599,Fa x:0755 ********E mail:tiyuanl@https://www.360docs.net/doc/817550078.html, Supported by Shenzhen Bureau of Science and Technology (No.199906014)and the 10th Fi ve Year Plan Special Research Programs of Guangdong Province (No.C11801) Recei ved:May 28,2002;Accepted:October 28,2002*Corres pondi ng author Tel:0755 ******** 2599,Fax:0755 ********E mail:tiyuanl@https://www.360docs.net/doc/817550078.html, 高血压为最常见的心血管疾病,同发达国家一样,我国的发病率呈逐年升高趋势.据全国统计资料显示,我国现有高血压患者已达一亿,每年新增300万以上.肾脏等疾患同样威胁着广大人民的健康.研制开发新的抗高血压、改善肾脏功能等药物具有广阔的经济价值及深远的社会效益. 激肽释放酶(kallikrein,KK)具有广泛的药用价值,除降血压之外,还可以用于治疗糖尿病肾病、改善肾脏功能,治疗心、脑血管疾病等 [1~5] .猪源激肽
人尿激肽原酶治疗急性期脑梗死临床疗效观察
人尿激肽原酶治疗急性期脑梗死临床疗效观察 马晓红 【期刊名称】《医药前沿》 【年(卷),期】2013(000)021 【摘要】目的观察人尿激肽原酶(尤瑞克林)对急性脑梗死的临床疗效。方法随机将84例分为两组,每组各42例。两组均常规应用奥扎格雷、血塞通等分别加入0.9%氯化钠注射液250ml中,静脉滴注,每天1次。治疗组在以上治疗的同时加用尤瑞克林0.15(PNA)单位,溶于0.9%氯化钠注射液100ml中,静脉滴注30分钟,1次/d。结果两组NIHSS评分及有效率比较在治疗10 d 和21d 均有统计学差异。结论尤瑞克林能有效地改善急性脑梗死的神经功能缺损。%Objective Observation of human kininogen in urine enzyme (youruikelin) on acute cerebral infarction clinical curative effect.Methods 84 cases at random into two groups, each group of 42 cases. Two groups such as routine use of ozagrel and xuesaitong respectively 0. 9% in 250 ml of sodium chloride injection, infusion, 1 time a day. Treatment group in the treatment of more than youruikelin added 0. 15 (PNA) unit, dissolved in 0. 9% in 100ml sodium chloride injection, intravenous drip for 30 minutes, 1/d.Results Two NIHSS score and efficiently compare the treatment 10 d and 21d has significant differences.Conclusion Youruikelin effective in improving nerve function of acute cerebral infarction defect. 【总页数】2页(43-44)
【药品名】胰激肽原酶
【药品名】胰激肽原酶 【英文名】Pancreatic Kininogenase 【别名】舒血管素；保妥汀；胰激肽释放酶；血管舒缓素；激肽释放酶；TPK；Kallidinogenase；Pancreate Kallikrein；Padutin；Kallikrein 【剂型】肠溶片：56U。 【药理作用】存在于哺乳动物胰腺等器官及尿液分泌物中，是激肽体系中的一个组成部分，属蛋白水解酶类。有扩张血管、改善血液循环和微循环以及防止血栓形成的作用。其作用机制是由于本品能降解激肽原，生成激肽，直接作用于小血管和毛细血管，使其扩张，在扩张血管的同时，改善血管的通透性和血液流量。另外，还可能通过缓激肽和组胺多肽对血栓烷B(TXB)的负反馈，抑制钙离子的凝血时间，促使血管内皮细胞产生PGIa，抑制血小板效应，以防止凝血。通过激活纤溶酶原变为纤溶酶，以提高纤溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，有利于防止血栓形成。此外，本品对降低血压、肾血管阻力、心肌耗氧量有较好作用；对心肌细胞缺氧缺糖性损伤有保护作用，对增强心肌收缩力、改善心功能、改善微循环、增加血液流量等也有一定作用。 【药动学】健康成年人口服3片(56U)后，用酶免疫法测定其达峰时间为4h，t为7h左右。用Ⅰ标记的胰激肽释放酶经小白鼠十二指肠给药，测定其在动物体内的吸收、分布、代谢情况，结果表明：药物在肠管壁吸收，给药24h 后，肝、肾脏器的分布浓度达最高峰，测得尿中的浓度比血浆高出2倍，提示本品通过肾脏排泄。 【适应症】可用于多种心、脑血管病变，如原发性高血压、动脉硬化、冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑动脉硬化、脑血栓、视网膜供血障碍以及周围血管病变等。近来研究发现，本品可用于防止糖尿病微血管病变及早期糖尿病性肾病(有较好的治疗效果，可减少尿清蛋白的排出量)。国外有临床资料提示，本品可增加精子的活性及生成数量，对治疗某些男性不育症有一定的疗效。 【禁忌症】有脑出血或其他出血倾向者禁用。 【注意事项】注意本品过敏反应。 【不良反应】是从猪胰腺中提取的蛋白水解酶，为一种内源性药物，不良反应甚少。用药期间偶见头昏、乏力等反应。极个别患者可出现皮疹，对症处理后消失。
胰激肽原酶肠溶片简介
胰激肽原酶肠溶片（怡开）的学习与讨论 胰激肽原酶(Pancreatic Kininogenase)又称胰激肽释放酶（Pancreatic Kallik- rein）、血管舒缓素，其普遍存在于人体的胰脏、颌下腺与唾液中，其中以胰脏中含量最高。本品所采用的原料——胰激肽原酶是从猪胰腺中提取的蛋白水解酶类，由18种氨基酸和4种糖所组成，为一种内切蛋白水解酶类，分子量26800。在生物体内，该酶是以酶原，即激肽释放酶原形式存在的。 胰激肽原酶在体内作用于激肽原释放出激肽，直接作用于小血管和毛细血管，从而产生一系列的药理效应，如舒张毛细血管、扩张小动脉等，在扩张血管的同时改善血管的通透性和血液流量；有调节血压作用，降低心肌耗氧量；还可促进前列腺素的分泌，改善各器官血流；胰激肽原酶也是一种活化因子，可通过激活纤溶酶原变为纤溶酶，以提高血溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，降低血粘度；抑制磷脂酶A2，防止血小板聚集，阻止白细胞粘附，防止微血栓形成等。另外，本品还可能通过缓激肽和组氨多肽对TXB2的负反馈，抑制钙离子的凝血时间，促使血管内皮细胞产生PGIα，抑制血小板效应，以防止凝血。 药代动力学 健康成人早晨空腹给予本品168单位，以200ml冷开水送服，酶联免疫法测得：给药4小时后血药浓度达峰值，t1/2 在7小时左右。用I131标记的胰激肽原酶经小白鼠十二指肠给药，测定其在动物体内的吸收分布代谢情况。结果证明：本品由肠管壁吸收，给药24小时后，肝、肾脏的分布浓度至最高峰，测得尿中的浓度比血浆中高出2倍，本品通过肾脏排泄。 主要临床适应症 本品临床上适用于各种因微血管循环障碍所致疾病的治疗。 ●显著增加脑部供血供氧 ●防治白细胞粘附及血栓形成 ●防治脑梗塞 ●糖尿病并发血管性病变，如糖尿病肾病变、眼底病变、神经病变等； ●脑动脉硬化、脑血栓、脑意外康复期、血管性痴呆等； ●眼底缺血、视乳头病变、视网膜供血障碍、糖尿病性视网膜病变等； ●冠心病、心肌梗塞、轻中度原发性和继发性高血压； ●血栓闭塞性脉管炎、肢端动脉痉挛、间歇性跛行、老年性四肢冷感、知觉异常以及美尼尔氏综合征、祖德克综合征、闭塞性动脉硬化、结节性血管炎、多发性大动脉炎、慢性下肢溃疡等； ●降低血糖，改善胰岛素敏感性； 用于糖尿病性肾病的临床研究 糖尿病肾病是Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病的主要慢性并发症之一，也是糖尿病致死致残的主要原因之一。据报道，糖尿病肾病的发生率约占糖尿病患者的35％～40％，现今在美国35％的肾移植患者是糖尿病患者，已成为肾移植的首位原因。国内糖尿病肾病的发病率也呈逐年上升趋势。但由于糖尿病肾病的病因及发病机制尚未完全阐明，研究显示可能与长期高血糖、蛋白激酶糖化、氧化应激反应造成的微循环障碍、肾小球滤过压增高、血小板聚集功能亢进和基底膜电荷改变有关。故对本病的治疗仍停留在控制血糖、血脂、血压及优质低蛋白饮食