大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍

相互关系

大肠菌群(总大肠菌群)>粪大肠菌群&耐热大肠菌群>大肠杆菌

一、大肠菌群介绍

大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明,大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。

大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等),因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。

大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一,目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。

二、总大肠菌群

所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较

北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念,如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法,故而使用粪大肠菌群概念;而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念,较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为,“粪大肠菌群”的提法不太科学,耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。

耐热大肠菌群的卫生学意义

作为一种卫生指标菌,耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物,因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染,可能存在大肠杆菌。但是,耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。

作为粪便污染指标菌,耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似,主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物,有健康者,也有肠道病患者或带菌者粪便,所以粪便中既有正常肠道菌,也可能有肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等)和食物中毒者。因此,食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。

通常情况下,耐热大肠菌与大肠菌群相比,在人和动物粪便中所占的比例较大,而且由于在自然界容易死亡等原因,耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而,耐热大肠菌群在食品中的检出,与大肠菌群相比,说明食品受到了更为不清洁的加工,肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度,且检测方法比大肠杆菌简单地多,而受到重视。

四、大肠杆菌(E-Coli)

大肠杆菌(dachangganjun)(Escherichiacoli)细菌门。细胞杆状,直径约1微米,长约2微米,两端钝圆,周身具鞭毛,可运动。革兰氏染色阴性,不形成芽孢。菌落圆形,白色或黄白色,光滑而具闪光,低平或微凸起,边缘整齐。最适条件下培养20分钟可繁殖1代。大肠杆菌是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌,是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病,可能在肠中对合成维生素K起作用。但它侵入人体一些部位时,可引起感染,如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的,尤其是对孩子及老人。

大肠杆菌的致病物质为定居因子,即大肠杆菌的菌毛和肠毒素,此外胞壁脂多糖的类脂A具有毒性,O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用。大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。

由大肠杆菌导致的疾病:一是肠道外感染。多为内源性感染,以泌尿系感染为主,如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者,大肠杆菌可侵入血流,引起败血症。早产儿,尤其是生后30天内的新生儿,易患大肠杆菌性脑膜炎;二是急性腹泻。某些血清型大肠杆菌能引起人类腹泻。其中肠产毒性大肠杆菌会引起婴幼儿和旅游者腹泻,出现轻度水泻,也可呈严重的霍乱样症状。腹泻常为自限性,一般2~3天即愈,营养不良者可达数周,也可反复发作。肠致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要病原菌,有高度传染性,严重者可致死。细菌侵入肠道后,主要在十二指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。此外,肠出血性大肠杆菌会引起散发性或暴发性出血性结肠炎,可产生志贺氏毒素样细胞毒素。

五、致病性大肠菌

大肠杆菌(escherichia coli)一般不致病。但致病性大肠菌株能引起食物中毒。致病性菌株能侵入肠粘膜上皮细胞,具有痢疾杆菌样致病力。

已知大肠杆菌有菌体(O)抗原170种,表面(K)抗原近103种,鞭毛(H)抗原60种,因而构成了许多血清型。最近菌毛(F?)抗原被用于血清学鉴定,最常见的血清型K88,K99,分别命名为F4和F5型。在引起人畜肠道疾病的血清型中,有肠致病性大肠杆菌(简称EPEC)、肠毒素性大肠杆菌(简称ETEC)和肠侵袭性大肠杆菌(间称EIEC)等之分,多数肠毒素性大肠杆菌都带有F?抗原。在170种“0”型抗原血清型中约1/2左右对禽有致病性,但最多的是O1、O2、O78、O35四个血清型。

另有产肠毒素大肠杆菌,其肠毒素有耐热性及不耐热性两种,均能使人致病。该菌在室温下能生存数周,在土壤或水中可存活数月。加热60℃15~20分钟可杀灭大多数菌株。不耐热性肠毒素60℃、1分钟即破坏;耐热性肠毒素加热100℃、30分钟尚不被破坏。中毒机制致病性大肠杆菌随食物入消化道后,可侵入肠粘膜上皮细胞并繁殖,致回肠及结肠有明显的炎症病变,引起急性菌痢样症状。产肠毒素大肠杆菌亦可在小肠繁殖并释出肠毒素,引起米泔水样腹泻。

六、O157:H7

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病。它除引起腹泻、出血性肠炎外,还可发生溶血性尿毒综合症(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等严重的并发征,后者病情凶险,病死率高。

自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来,肠出血性大肠杆菌

O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延,相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻暴发和流行。我国自1997年在一定范围内开展监测工作以来,已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到肠出血性大肠杆菌O157:H7,特别是1999年我国部分地区发生了肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻的暴发,表明肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻已逐渐成为威胁人群健康的重要公共卫生问题。人类在漫长的岁月里,创造了丰富多彩的音乐文化,从古至今,从东方到西方,中国文化艺术,渊源流长。

我国最早的歌曲可以追溯到原始社会,例如传说中伏羲时的【网罟之歌】,诗经中的【关关雉鸠】,无论是思想内容,还是艺术形式,都已发展到很高的水平。

我们华人音乐有着悠久的历史,有着独特的风格,在世界上,希腊的悲剧和喜剧,印度的梵剧和中国的京剧,被称为【世界三大古老戏剧】,而京剧则是国之瑰宝,是我们华人的骄傲,亦是世界上最璀璨的一颗明珠。

你可知道高山流水遇知音的故事?你可知道诸葛亮身居空城,面对敌兵压境,饮酒抚琴的故事?

列宁曾经说过:我简直每天都想听奇妙而非凡的音乐,我常常自豪的,也许是幼稚的心情想,人类怎么会创造出这样的奇迹?一个伟大的无产阶级革命家,为什么对音乐如此痴狂?音乐究竟能给我们带来什么?

泰戈尔说:我举目漫望着各处,尽情的感受美的世界,在我视力所及的地方,充满了弥漫在天地之间的乐曲。

【二】

音乐,就是灵魂的漫步,是心事的诉说,是情愫的流淌,是生命在徜徉,它可以让寂寞绽放成一朵花,可以让时光婉约成一首诗,可以让岁月凝聚成一条河,流过山涧,流过小溪,流入你我的麦田……

我相信所有的人,都曾被一首歌感动过,或为其旋律,或某句歌词,或没有缘由,只是感动,有的时候,我们喜欢一首歌,并不是这首歌有多么好听,歌词写的多么好,而是歌词写的像自己,我们开心的时候听的是音乐,伤心的时候,慢慢懂得了歌词,而真正打动你的不是歌词,而是在你的生命中,关于那首歌的故事……

或许,在我们每个人的内心深处,都藏着一段如烟的往事,不经阳光,不经雨露,任岁月的青苔覆盖,而突然间,在某个拐角,或者某间咖啡厅,你突然听到了一首歌,或是你熟悉的旋律,刹那间,你泪如雨下,即使你不愿意去回忆,可是瞬间便触碰了你心中最柔软的地方,荡起了心灵最深处的涟漪,这就是音乐的神奇,音乐的魅力!

【三】

德国作曲家,维也纳古典音乐代表人贝多芬,49岁时已经完全失聪,然而,他的成名曲【命运交响曲】却是震惊世界,震撼我们的心灵,在他的音乐世界里,你能感受到生命的悲怆,岁月的波澜,和与命运的抗衡,这就是音乐赋予的力量!

贝多芬说:音乐是比一切智慧、一切哲学更高的启示,谁能渗透我音乐的意义,便能超脱寻常人无以自拔的苦难。

其实,人生就是一次漫长的旅行,一场艰难的跋涉,无论遇见怎样的风景,繁华过后,终归平淡,无论遇见还是告别,相聚亦是别离,我们都应该怀着感恩的心,善待生命,善待自己……

每一首歌都是一个故事,每一段音乐都是一段过往,不知哪首歌里写满了你的故事?哪段音乐有你最美的回忆?想念一个人的时候,是否在安静的夜晚?悲伤的时候,是否单曲循环?高兴时分,是否在音乐里手舞足蹈?

我喜欢音乐,没有任何理由,音乐是我灵魂的伴侣,是我生活的知己,它能懂我的喜,伴我的忧,伴随着淡淡的旋律,它便融入我的生命,浸透我的灵魂。

我喜欢音乐,音乐不仅仅是一种艺术享受,还能丰富我的生活,给我带来创作灵感,一首歌,或一句歌词,都是我写作的素材,都是我灵感的源泉,它犹如涓涓细流,汩汩流淌,令我思绪翩翩,令我意象浓浓……

当我忧伤的时候,我喜欢在音乐里漫步,当我快乐的的时候,我喜欢在音乐里起舞,当我迷茫困惑的时候,唯有音乐,才是我最好的陪伴……

【四】

红尘喧嚣,世事沧桑,三千烟火,韶光迷离,我们在尘世间行走,凡尘琐事总会困扰于心,我已经习惯了,将浅浅的心事蕴藏在文字里,将淡淡的忧伤释怀在音乐中,委婉的旋律,环绕于耳,凄美的歌词,萦绕于心,当我累了,倦了,我只想置身于音乐的海洋,忘记凡尘,忘记喧嚣,安静的去听一首歌……

粪大肠菌群测定复习试题

粪大肠菌群测定复习试题 一、填空题 1.地表水环境质量标准(GHZB1—1999)中,对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目作出明确规定:Ⅰ类水质标准值为;Ⅱ类水质标准值为;Ⅲ类水质标准值为;Ⅳ类水质标准值为,Ⅴ类水质标准值为。 答:≤200个/L;≤1000个/L;≤2000个/L;≤5000个/L;≤10000个/L。 2.粪大肠菌群是一部分,用粪大肠菌群作为卫生学指标比用 更有。目前,粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的。 答:总大肠菌群;总大肠菌群;代表性;指示菌。 3.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基,是由、、 、等配制而成的,调节pH为,应在 灭菌。 答:蛋白胨;牛肉浸膏;乳糖;氯化钠;7.2-7.4;115℃;20min。 4.农田灌溉水质标准(GB5084—92)中,根据农作物的需求状况,将灌溉水质按灌溉作物分为三类:水作、旱作和蔬菜。其生物指标粪大肠菌群标准值定为 。 答:≤10000个/L。 5.为了区别存在于中的大肠菌群和存在于的大肠菌群,可将培养_ __ _____,在此种条件下仍能_____ 并使____________ _,则称为粪大肠菌群。 答:自然环境;温血动物肠道内;温度提高到44℃;生长;发酵乳糖产酸产气。 6.进行复发酵试验时,用3mm 或灭菌棒将转接到 培养液中。在培养。培养后观察发酵管 表明确信。

答:接种环;培养物;EC;44±0.5℃水浴下,24±2h;产气;试验阳性。 7.在污水综合排放标准(GB8978—1996)中,把医院、兽医院及医疗机构含病原体污水的粪大肠菌群分为三级标准:一级标准值;二级标准值;三级标准值。而传染病、结核病医院污水的粪大肠菌群三级标准值分别为:、、。 答:500个/L;1000个/L;5000个/L;100个/L;500个/L;1000个/L。8.EC培养液的配比是:胰胨,乳糖,氯化钠,磷酸二氢钾,胆盐三号,磷酸氢二钾,溶解于蒸馏水中。在 15min,灭菌后应为。 答:20g;5g;5g;1.5g;1.5g;4g;1000mL;121℃灭菌;pH;6.9。 二、问答题 1.粪大肠菌群的涵义是什么? 答:指一群需氧及兼性厌氧在44.5℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2.控制粪大肠菌群指标值的意义是什么? 答:为了人体健康卫生的要求。 3.粪大肠菌群测定有几种方法?通常用哪种方法? 答:有三种:多管发酵法、滤膜法、延迟培养法。用多管发酵法。 4.简诉测定粪大肠菌群多管发酵法的操作步骤? 答:测定分二个步骤进行:量取若干经稀释的水样,接种乳糖蛋白胨培养液,进行初发酵试验:在37±0.5℃下培养24±2h,产酸和产气的发酵管表明试验阳性,再将表明试验阳性的发酵管中的培养物转接到EC培养液中,进行复发酵试验,在44±0.5℃水浴下培养24±2h,发酵管产气表明确信试验阳性。 5.在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种? 答:接种体积为10ml时,试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml。 6.什么叫兼性厌氧细菌? 答:氧存在或不存在的条件下均能繁殖的细菌。

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[1]

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍 相互关系 大肠菌群(总大肠菌群) >粪大肠菌群&耐热大肠菌群> 大肠杆菌 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明,大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等),因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一,目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、总大肠菌群

所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念,如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法,故而使用粪大肠菌群概念;而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念,较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为,“粪大肠菌群”的提法不太科学,耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。 耐热大肠菌群的卫生学意义 作为一种卫生指标菌,耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物,因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染,可能存在大肠杆菌。但是,耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。 作为粪便污染指标菌,耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似,主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物,有健康者,也有肠道病患者或带菌者粪便,所以粪便中既有正常肠道菌,也可能有肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等)和食物中毒者。因此,食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。

GBT 肥料中粪大肠菌群的测定

GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定 1 范围 本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。 2 定义 粪大肠菌群 fecal coliforms 系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 粪大肠菌群数为每克(毫升)肥料样品中粪大肠菌群的最可能数(MPN)。 3 设备和材料(内容略) 4 培养基和试剂 培养基:遵照附录A的规定。 革兰氏染色液:遵照附录B的规定(略)。 5 检验步骤 样品稀释 在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL,加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中,置于摇床上200 r/min 充分振荡30min,即成10-1稀释液。 用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中,混匀成10-2稀释液。这样依次稀释,分别得到10-3,10-4等浓度稀释液(每个稀释度须更换无菌移液管)。 乳糖发酵试验 选取三个连续适宜稀释液,分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内,每一稀释度接种3支发酵管,置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内,培养24h±2h。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气,则为粪大肠菌群阴性;如果有产酸产气或只产酸的发酵管,则按进行。 分离培养 从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线,置36℃±1℃条件下培养18h~24h。 证实试验 从分离平板上挑取可疑菌落,进行革兰氏染色。染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性;如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中,置℃±℃条件下培养24h ±2h。观察产气情况,不产气为粪大肠菌群阴性;产气为粪大肠菌群阳性。 结果 证实实验为粪大肠菌群阳性的,根据粪大肠菌群阳性发酵管数,查MPN检索表,得出每克(毫升)肥料样品中的粪大肠菌群数。 附录 A (规范性附录) 培养基 乳糖胆盐发酵培养基 蛋白胨g 猪胆盐g 乳糖g %溴甲酚紫水溶液m L 蒸馏水1000m L

粪大肠菌群的测定

粪大肠菌群的测定 1 卫生学意义 粪大肠菌群测定的卫生学意义:一、与大肠菌群相比,粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大,而且在自然界容易死亡。因此,粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染;二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况,推断食品中肠道致病菌污染的可能性;三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标。 2 检验方法 2.1 术语与定义 一群在44.5℃培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念,又称为耐热大肠菌群,主要是大肠杆菌,但也包括克雷伯氏菌属等。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: (1)恒温培养箱:36℃±1℃。 (2)冰箱:2℃~5℃。 (3)恒温水浴箱:46℃±1℃。 (4)天平:感量0.1g。 (5)无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 (6)无菌锥形瓶:容量500mL。 (7)无菌培养皿:直径90mm。 (8)pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 2.3 培养基和试剂 (1)月桂基硫酸盐胰蛋白胨(Lauryl Sulfate Tryptose,LST)肉汤:1)成分:胰蛋白胨或胰酪胨:20.0g;氯化钠:5.0g;乳糖:5.0g;磷酸氢 二钾(K 2HPO 4 ):2.75g;磷酸二氢钾(KH 2 PO 4 ):2.75g;月桂基硫酸钠:0.1g; 蒸馏水:1000mL;pH:6.8±0.2 2)制法:将上述成分溶解于蒸馏水中,调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中,每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。 (2)EC肉汤(E.coli,BGLB): 1)成分:胰蛋白胨或胰酪胨:20.0 g;3号胆盐或混合胆盐:1.5 g;乳糖: 5.0g;磷酸氢二钾(K 2HPO 4 ):4.0g;磷酸二氢钾(KH 2 PO 4 ):1.5g;氯化钠:5.0g;

肥料中粪大肠菌群的测定

肥料中粪大肠菌群的测定 一:前期准备 一次性帽子、口罩、脚套 1, 移液管10ml 量筒100ml } 玻璃珠 三角瓶 培养皿 2, 乳糖胆盐发酵培养基(用于乳糖发酵) 乳糖发酵培养基(用于复发酵) 伊红美蓝培养基(用于分离培养) } 121℃,15min 无菌水 } 121℃,15min 二:实验过程 无菌条件下进行: 10.0g 固体样品/10ml 液体样品 ↓ 三角瓶(带玻璃珠,90ml 无菌水)1:10=10-1 ↓ 200r/min 振荡30min ↓ 吸取10-1—5ml ,加入45ml 无菌水(提前准备)1:100=10-2 ↓ 吸取吸取10-2—5ml ,加入45ml 无菌水(提前准备)1:1000=10-3 ↓ ……依次稀释得到10-4,10-5等浓度稀释液(每个稀释度必须更换无菌移液管) ↓ 选取三个连续适宜稀释液,分别吸取1.0ml 加入到乳糖胆盐发酵管内(装有乳糖胆盐发酵培 养基)(每一稀释度接种3支发酵管) ↓ 培养箱45℃,24h ↓ 结果:产酸,颜色变;产气,导管有气泡 不产酸,不产气,为粪大肠菌群阴性 ↓ 分离培养:从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线 ↓ 培养箱36℃,18-24h ↓ 证实实验:从平板上挑取可以菌落,进行革兰氏染色。 结果:染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性 ↓ 革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中(装有乳糖发酵培养基) ↓ 培养箱44.5℃,24h ↓ 结果,不产气为粪大肠菌群阴性,产气为粪大肠菌群阳性 ↓ 证实为粪大肠菌群阳性的,根据粪大肠菌群阳性发酵管数,查MPN 检索表,得出每克(毫 升)肥料样品中的粪大肠菌群数 }160℃,4h }115℃,15min

粪大肠菌群操作细则精编版

粪大肠菌群多管发酵法 1、培养基、试剂与仪器 本标准所用试剂除另有注明外,均为符合国家标准的分析纯化学试剂;实验用水为新制备的去离子水。 单倍乳糖蛋白胨培养液: 称取23.0g乳糖蛋白胨营养液于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每试管约8ml(先用移液管吸取7ml至试管中,再用滴管吸取营养液放至小玻璃管中,直至营养液溢出。注意小玻璃管中不能有气泡,若出现气泡,应将气泡排出后再注入营养液。),于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。 EC 培养液: 称取37.0gEC肉汤于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,每管8ml(操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液),于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。 培养基的存放 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用。 验所需仪器 超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500ml广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环2步骤 前期准备 器皿灭菌(高压蒸汽灭菌):所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。 广口瓶:将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖,用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好,用绳子绑好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。

玻璃试管(已经装好营养液)、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头:用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 采样:采取水样时,可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中,约距水面10~15cm处,拔瓶盖,瓶口朝水流方向,使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖,将采样瓶从水中取出。如果没有水流,可握住瓶子水平前推,直到充满水样为止。采好水样后,迅速盖上瓶盖和包装纸。 采好的水样,应迅速运往实验室,进行检验,一般从取样到检验不宜超过 2h,否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品,但不得超过6h。 4.2 水样接种量 将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。(根据实验经验,经过紫外消毒的水样取0.1mL、0.01mL、0.001mL体积进行检测,可根据水样的洁净度适当调整取样体积。) 表1 接种用水量参考表 如接种体积为10mL,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL;如接种量为1mL 或少于1mL,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL 中。 4.3 初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。 4.4 复发酵试验

《粪大肠菌群的测定》练习题(精)

职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库 《环境监测》练习题 1 《粪大肠菌群的测定》练习题 备注:每题后面的简单、一般、困难是指题目的难易程度。 一、选择题 1.EC 培养液的配比是:胰胨20g ,乳糖5g ,氯化钠5g ,磷酸二氢钾1.5g ,胆盐三号1.5g ,磷酸氢二钾4g ,溶解于1000mL 蒸馏水中。在( C )℃灭菌15min ,灭菌后pH 为6.9。(一般) A 、37 B 、115 C 、121 D 、165 2.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基,是由蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠等配制而成的,调节pH 为( B ),应在115℃灭菌20min 。(一般) A 、5.2-5.4 B 、7.2-7.4 C 、9.2-9.4 D 、12.2-12.4 二、判断题 1.粪大肠菌群是总大肠菌群一部分,用粪大肠菌群作为卫生学指标比用总大肠菌群更有代表性。目前,粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的指示菌。(√)(一般) 2.为了区别存在于自然环境中的大肠菌群和存在于温血动物肠道内的大肠菌群,可将培养温度提高到44℃,在此种条件下仍能生长并使发酵乳糖产酸产气,则称为粪大肠菌群。(√)(一般) 3.进行复发酵试验时,用3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到EC 培养液中。在44±0.5℃水浴下培养24±2h 。培养后观察发酵管产气表明确信试验阴性。(×)(困难) 三、问答题 1.简述粪大肠菌群指标的含义及常用测定方法。(一般) 答案:(1)粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便,在44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。(2)粪大肠菌群指标常用的测定方法为多管发酵法,它是根据统计学理论,估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

APHA 9221E粪大肠菌群

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater ? Copyright 1999 by American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation presence-absence (P-A) procedure.Can. J. Microbiol. 15:771. CLARK, J.A. & L.T. VLASSOFF . 1973. Relationships among pollution indicator bacteria isolated from raw water and distribution systems by the presence-absence (P-A) test. Health Lab. Sci.10:163. CLARK, J.A. 1980. The influence of increasing numbers of nonindicator organisms upon the detection of indicator organisms by the membrane filter and presence-absence tests. Can. J.Microbiol. 26: 827. CLARK, J.A., C.A. BURGER & L.E. SABATINOS . 1982. Characterization of indicator bacteria in municipal raw water, drinking water and new main water samples. Can. J. Microbiol.28:1002. JACOBS, N.J., W.L. ZEIGLER, F.C. REED, T.A. STUKEL & E.W. RICE . 1986. Comparison of membrane filter, multiple-fermentation-tube, and presence-absence techniques for detecting total coliforms in small community water systems. Appl. Environ. Microbiol. 51:1007. RICE, E.W., E.E. GELDREICH & E.J. READ . 1989. The presence-absence coliform test for monitoring drinking water quality. Pub. Health Rep. 104:54. 9221 E. Fecal Coliform Procedure Elevated-temperature tests for distinguishing organisms of the total coliform group that also belong to the fecal coliform group are described herein. Modifications in technical procedures,standardization of methods, and detailed studies of the fecal coliform group have established the value of this procedure. The test can be performed by one of the multiple-tube procedures described here or by membrane filter methods as described in Section 9222. The procedure using A-1 broth is a single-step method. The fecal coliform test (using EC medium) is applicable to investigations of drinking water,stream pollution, raw water sources, wastewater treatment systems, bathing waters, seawaters,and general water-quality monitoring. Prior enrichment in presumptive media is required for optimum recovery of fecal coliforms when using EC medium. The test using A-1 medium is applicable to source water, seawater, and treated wastewater. 1. Fecal Coliform Test (EC Medium) The fecal coliform test is used to distinguish those total coliform organisms that are fecal coliforms. Use EC medium or, for a more rapid test of the quality of shellfish waters, treated wastewaters, or source waters, use A-1 medium in a direct test. a. EC medium: Tryptose or trypticase 20.0g Lactose 5.0g Bile salts mixture or bile salts No. 3 1.5g Dipotassium hydrogen phosphate, K 2HPO 4 4.0g

粪大肠菌群的测定步骤

粪大肠菌群的测定 1、半个月前配好初、复发酵所需培养液 2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样,牛皮纸封口 3、操作 (1) 培养液 初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液: 蛋白胨 10 g 牛肉浸膏 3 g 乳糖 5 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 1000ml 调节PH 为7.2—7.4(NaOH ) 6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml (三倍是5ml )分装于试管中,盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min (0.1—0.5kpa ),冷却后于药品储存箱保存。 单月13个地表水(每个水样需10个单倍,5个三倍),2个创业(每个水样需15个单倍)。共190个(1900ml )单倍,65个三倍(325ml )。 双月10个地表水,2个创业。共130个(1600ml )单倍,50个三倍(250ml )。 创业的水一个月采两次水样 复发酵 EC 培养液 胰胨 20 g 乳糖 5 g 胆盐三号 1.5 g 磷酸氢二钾 4 g 磷酸二氢钾 1.5 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 1000ml 充分混匀后 10ml 分装于试管中,盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min (0.1—0.5kpa ),冷却后于药品储存箱保存。 三倍乳糖蛋白胨培养液: 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml

(2)做样 初发酵: 地表水15根管为一个水样。5根为一组。第一排为5ml三倍培养液,加10ml水样;第二排为10ml单倍培养液,加1ml水样;第三排为10ml单倍培养液,取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。 (10、1、0.1的取样量) 创业,每个水样15根单倍。同上逐级稀释,取样量为0.1、0.01、 0.001ml。 将初发酵管放入培养箱中培养,温度为37℃±0.5℃,时间为24h±2h。 观察:产酸产气为阳性,即变色且有气泡产生,可轻击试管查气泡。 复发酵: 呈阳性的试管进行接种后,做复发酵。将阳性的试管中溶液接种(接种环)到EC培养液中,放在45℃±0.5℃的水浴锅中培养24h±2h。水浴锅液面应高于管中液面。 观察:产气(有气泡)则证实为阳性。记录阳性试管数,查表可得MPN值。 结果表示单位为:个/L

ISO4832大肠菌群和粪大肠菌群测定

BS ISO 4832:2006食品和动物饲料的微生物学大肠菌群计数水 平法--菌落计数技术 序 ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构,也有参与这项工作。ISO与国际电子组织(IEC)在电子标准化方面有着密切的合作关系。 国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。 起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75%成员投赞成票。国际性标准ISO 4831 由ISO/IEC 34技术委员会(农产品,小组委员会SC9,微生物)起草的。 这个第三版的ISO 4832取代了ISO 4832:1991和ISO 5541-1:1986。主要的修改内容如下: ——在35℃下培养这个可选择的程序已被删除(见4.2); ——引入使用亮绿乳糖胆汁培养基做确证实验(见5.4和9.4)。 考虑到本标准的上一个版本已被修改,已确认ISO 4832:1991的选择性方法不受影响。 绪论 由于食品与饲料的种类繁多,这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下,可使用不同的方法,但必须有绝对的技术上的理由。否则,要尽可能地完全遵循本标准。 当这个标准下一次回顾时,将会对这个标准的使用做数据统计,特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。 同一类产品的检测方法也有可能不统一,国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时,会遵循本标准做出相关的修改,以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。 本标准在技术上的描述没有ISO 4831那样精确,但大部分的微生物检测能根据本标准开展,每克或每毫升样品中含大数量的大肠菌群可使用本标准。此外,

总大肠菌群,粪大肠菌群试卷

一.填空题 1.总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为____________、_____________和______________。 2.粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验,是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中,在____℃培养____h,产酸产气则为阳性。 二、判断题 1.总大肠菌群测定时,如果不能实现常规的检验步骤,例如水样运输途中不能保证所要求的温度,或采样后不能在允许的时间内进行检验等,都可采用延迟培养法。() 2.对受污染严重的水体样品,如果在初发酵中未发现产气,则应将其培养到48h,然后再进一步证实有无大肠菌类细菌。( ) 3.如果粪大肠菌群测定的接种体积为10ml,则试管内应装有三倍乳糖蛋白胨培养液10m1,如接种量为1m1,则接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10m1中。( ) 4.粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验,是将培养物转接到EC培养液中,在35℃下培养24h。( ) 5.水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法,适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水。( ) 三、选择题 1.我国目前以为总大肠菌群的报告单位,MPN值再乘即为该体积水样中的总大肠菌群数。( ) A. 100m1, 10 B. 1 L, 1 C, 1 L, 10 四.简答题 1.简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。 2.如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10ml、1m1和0.1ml而是较低或较高三个浓度的水样,应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数?试写出计算公式。

答案 一.1.初发酵试验 平板分离 复发酵试验 2. 37 24 二.1.正确 2.正确 3.错误 4.错误 5.正确 三.1.C 四. 1.答案:(1)将水样做1∶10稀释。(2)在各装有5m1三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入10ml 水样;在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1ml 水样;在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1m1 1∶10的稀释的水样。(3)将各管充分混匀,置37℃恒温箱培养24h 。 2.答案:如果接种的水样量不是10m1、1m1和0.1m1,而是较低或较高的三个浓度的水样,可先查MPN 表求出MPN 指数,再经过下面的公式换算成每100m1的MPN 值。MPN 值乘以10,即为1L 水样中的总大肠菌群数(或粪大肠菌群数)。 ()()ml ml MPN MPN 接种量最大的一管 指数值10?=

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[2]

总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的从属关系及介绍 相互关系 总大肠菌群> 耐热大肠菌群> 大肠埃希氏菌 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明,大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等),因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一,目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、总大肠菌群 所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念,如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法,故而使用粪大肠菌群概念;而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念,较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为,“粪大肠菌群”的提法不太科学,耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。

肥料中粪大肠菌群的测定----流程

肥料中粪大肠菌群的测定 一:前期准备一次性帽子、口罩、脚套 1,移液管{10ml 量筒100ml}160℃,4h 玻璃珠160℃,4h 三角瓶160℃,4h 培养皿160℃,4h 2,乳糖胆盐发酵培养基(用于乳糖发酵)115℃,15min 乳糖发酵培养基(用于复发酵)115℃,15min 伊红美蓝培养基(用于分离培养)121℃,15min 无菌水121℃,15min 二:实验过程无菌条件下进行: 10.0g固体样品/10ml液体样品 ↓ 三角瓶(带玻璃珠,90ml无菌水)1:10=10-1 ↓ 200r/min振荡30min ↓ 吸取10-1—5ml,加入45ml无菌水(提前准备)1:100=10-2 ↓ 吸取吸取10-2—5ml,加入45ml无菌水(提前准备)1:1000=10-3 ↓ ……依次稀释得到10-4,10-5等浓度稀释液(每个稀释度必须更换无菌移液管) ↓ 选取三个连续适宜稀释液,分别吸取1.0ml加入到乳糖胆盐发酵管内(装有乳糖胆盐发酵培养基)(每一稀释度接种3支发酵管) ↓ 培养箱45℃,24h ↓ 不产酸,不产气,为粪大肠菌群阴性→实验终止→<3 结果:产酸,颜色变;产气,导管有气泡 ↓ 分离培养:从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线 ↓ 培养箱36℃,18-24h ↓ 证实实验:无菌落→实验终止→<3 有菌落,进行革兰氏染色。 染色反应阳性者(紫色)→实验终止→<3 染色反应阴性者(红色)为粪大肠菌群阴性 ↓ 革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中(装有乳糖发酵培养基) ↓ 培养箱44.5℃,24h ↓ 结果,不产气为粪大肠菌群阴性→实验终止→<3 产气为粪大肠菌群阳性 ↓ 根据粪大肠菌群阳性发酵管数,查MPN检索表,得出每克(毫升)肥料样品中的粪大肠菌群数

过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法

滤膜法-粪大肠菌群的测定 1、适用范围 本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。用于检验加氯消毒的水样时,在滤膜法之前,先做试验,证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。 2、原理 滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜(孔径0.45微米)的滤器中,经过抽滤,细菌即被截留在膜上,然后将滤膜贴于M-FC培养基上,44.5℃温度下进行培养,计数滤膜上生长的此特性的菌落数,计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。 3仪器: 滤膜(孔径0.45微米)、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹 3、培养基和试剂 本标准所用试剂除另有注明外,均为符合国家标准的分析纯化学试剂,实验室用水为新制备的去离子水。 M-FC培养基: 胰胨 10g 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3.0g 氯化钠 5.0g 乳糖 12.5g 胆盐三号 1.5g 1%苯胺蓝水溶10ml 1%玫瑰色酸溶液(溶于0.2mol/L氢氧化钠液中)10ml 蒸馏水 1000ml 制法:将上述培养基中的成分(除苯胺蓝和玫瑰色酸外),置于蒸馏水中加热溶解,调节PH为7.4,分装于小烧瓶内,每瓶100ml,于115℃灭菌20min。储存于冰箱中备用,临用前,按上述配比,用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液(溶于氢氧化钠溶液)1ml,混合均匀。加热溶解前,加入 1.2%~1.5%琼脂制成固体培养基。如培养物中杂菌不多,则培养基中不加玫瑰色酸亦可。 4、步骤 水样的选择:水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。理想的水样体积是一片滤膜上生长20~60个粪大肠群菌落,总菌落数不超过200个。 滤膜及滤膜灭菌:将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min,滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好,在使用前经121℃灭菌20min,滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。 过滤:用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,稳妥的固定好滤器。将适量的水样注入滤器中,加盖,开动真空泵即可抽滤除菌。

粪大肠菌群检测

粪大肠菌群检测 一、室所用设备、器皿 1、无菌区工作台 2、恒温培养箱 3、高压蒸汽灭菌器 4、冰箱 5、酒精灯 6、天平 7、电炉 8、采样广口瓶 9、烧杯、玻璃棒 10 、玻璃发酵管 11、试管架 12、移液管 13、锥形瓶 二、药品:乳糖胆盐培养基 三、前期准备 1、玻璃器皿灭菌(高压蒸汽灭菌) 所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、锥形瓶等玻璃器皿均需放入高压锅灭菌。 广口瓶:将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖,用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好,用绳子绑好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 玻璃试管、移液管、玻璃棒:用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 2、采样 采取水样时,可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中,约距水面10~15cm处,拔瓶盖,瓶口朝水流方向,使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖,将采样瓶从水中取出。如果没有水流,可握住瓶子水平前推,直到充满水样为止。采好水样后,迅速盖上瓶盖和包装纸。 采好的水样,应迅速运往实验室,进行检验,一般从取样到检验不宜超过2h,否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品,但不得超过6h。 四、实验步骤(多管发酵法) 1、配制乳糖胆盐培养基试制 (注:做15管的话,10ml的要配双料的,如:30g配1000ml,就应称取60g配1000ml,其他1ml、0.1ml的配制成单料的),配制试剂时不用定容,只需大概体积即可。 2、称取12g乳糖胆盐培养基溶于200ml蒸馏水中,置于电炉上加热至溶解完全为止,冷却至室温后,分装于玻璃发酵管里。(5管10ml) 3、称取6g乳糖胆盐培养基溶于100ml蒸馏水中,置于电炉上加热至溶解完全为止,冷却至室温后,分装于玻璃发酵管里。(10管10ml) 5、所有发酵管盖好盖子,包裹好置于高压锅灭菌15 分钟(第一次曝气开始计时) 6、分别加入5管10ml、5管1ml、5管0.1ml的水样于已冷却至室温的发酵管中,并置于恒温培养箱里培养24小时(温度为44.5℃) 五、结果 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从MPN表中查得相应的MPN指数,按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值。

粪大肠菌群检测方法20110520

粪大肠菌群的测定(多管发酵法) 一、检测限 二、试剂(均为分析纯) 1、配制单倍乳糖蛋白胨培养液(1份量)(因有固体培养基,以下配置方法仅做参考) 单倍乳糖蛋白胨培养液成分:蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、碳酸钠10.6g。 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液(1mL):称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯,用少量95%乙醇溶解,移至100mL容量瓶,用95%乙醇多次洗小烧杯,洗液移入容量瓶,最后用95%乙醇定容至100mL,摇匀备用。(滤纸、100mL小烧杯2只、100mL容量瓶1只、95%乙醇、玻璃棒、药匙、天平、滴管、溴甲酚紫) 碳酸钠(10.6g):称取10.6g碳酸钠溶于蒸馏水,并定容到100mL。(100mL容量瓶1个、100mL小烧杯2只、碳酸钠) 将单倍乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g加热溶解于1000mL蒸馏水中,调节pH为7.2~7.4(用10%碳酸钠调节),再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于含有倒置的小玻璃管的试管(10mL左右)中,于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用(冰箱中可存放3个月)。(>1L锥形瓶1只、1mL移液管1根、pH计、电炉、倒置的小玻璃管的试管60套(小试管(12x150mm )+小套管(杜氏小管)(约6mm × 36mm ))、高压蒸汽灭菌器、试管架(10只入)、纱布和棉花) 2、三倍配制单倍乳糖蛋白胨培养液:制法同上,除蒸馏水外,其余配方比例三倍。 3、EC培养液(1份量) 将EC培养液所需成分胰胨20g、乳糖5g、胆盐三号1.5g、磷酸氢二钾(K2HPO4)4g、磷酸二氢钾(KH2PO4)1.5g、氯化钠5g,加热溶解于1L烧杯中,然后分装于含有玻璃倒管的试管中。用10%Na2CO3调节pH以防止培养基灭菌后pH上升0.2左右(确定值需要前期在实验室寻找规律)。再将分装试管置高压蒸汽灭菌器中,115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。(>1L烧杯1只) 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养基颜色变化,或体积明显变化时废弃不用。 三、耗材和仪器 1、仪器:高压蒸汽灭菌器、生化培养箱(恒温箱)(25-44℃)、无菌操作台、天平 2耗材:倒置的小玻璃管的试管70套(小试管(12x150mm)+小套管(杜氏小管)(约6mm × 36mm ));与小试管配套的棉塞或纱布和棉花;药匙、电炉、3mm接种环3根、吸耳球、牛皮纸、酒精灯1个、火柴、镊子2个、笔、试管架、滤纸(1盒)、、1mL及10mL移液管各2支 三、实验步骤 1、水样接种量 将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管(平行)。 (如接种体积为10mL,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL;如接种量为1ml或少于1mL,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中) 2、初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管(含有玻璃倒管的试管)中(取原水样1mL,加如到9mL无菌生理盐水中混匀。这时候得到的稀释液1mL就相当与0.1mL,

水质粪大肠菌群的测定

精心整理 检测报告 B&C(2017)字054号 标准名称水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法 标准号HJ/T 347-2007 编制日期2017年9月5日 编制人:校核人: 审核人:签发人:

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一、检测依据及设备 表1 检测方法标准及设备一览表 检测类别检测项目方法名称及编号仪器设备名称及型号仪器设备编号 水质粪大肠菌群水质粪大肠菌群的测定多 管发酵法和滤膜法 HJ/T 347-2007 超净台() 恒温培养箱() 水浴锅() / 二、试剂和材料 (1)检测试剂:同HJ/T 347-2007中多管发酵法“试剂和材料”配制。 (2)检测样品:2009年9月1日取自遗爱湖1L水样。 三、检测步骤 同HJ/T 347-2007中多管发酵法“检测步骤”测定。 四、实验结果 4.1 样品测定 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果数目,从表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。 4.2 实验结果 表2 多管发酵法测定粪大肠菌群的结果 初发酵实验2017年9月1日 至 2017年9月2日 将0.1mL、0.01mL和0.001mL水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的5个10mL 发酵管中。在恒温培养箱中 37℃±0.5℃下培养 24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。 接种量0.1mL 0.01mL 0.001mL 阳性试管数量 4 3 3 复发酵实验2017年9月2日 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用 3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养液中。在 44.5℃±0.5℃温度下培养 24h±2h(水浴锅的水面应高于试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在 30min 内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。

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