肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞比例检测的临床意义
中国实验诊断学 2019年3月 第23卷 第3期381文章编号：1007-4287(2019)03-0381-04
肿瘤患者外周血T 淋巴细胞亚群
及NK 细胞比例检测的临床意义
赵美淇，梁新强，刘海洲，宋庆峰，张梦雅，毛莉莎，蒋士偲，杜江标?曹 雪，崔 英*
*基金项目：国家科技重大专项课题资助项目(2013ZX10002009)* 通讯作者,ycuiyx@ 139. com (广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，广西南宁530022)
摘要：目的 探讨肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群和NK 细胞表达水平检测的临床意义。方法 选取621例肿瘤 患者(包括肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌和鼻咽癌)为肿瘤组，同期115名健康人为健康组?采用流式细胞术检测外周血中 T 淋巴细胞亚群,CD19+B 细胞和NK 细胞的细胞免疫表达水平并进行对比分析。结果 肿瘤组外周血的CD3、 CD4—、CD19”细胞比例及CD4-/CD8+比值均低于健康组，NK 细胞比例高于健康组，差异均有统计学意义(PV 0.05)。亚组分析结果显示?不同肿瘤间的CD8*细胞比例差异无统计学意义(P>0. 05),CD3+、CD4、CD1『、NK 细胞比例及CD4「/CD 旷比值差异均有统计学意义(PV0. 05)。结论 肿瘤患者外周血中不同淋巴细胞亚群及NK 细胞的变化对早期发现和早期诊断具有指导意义，同时也可作为临床监测肿瘤患者细胞免疫功能状态的指标之一。
关键词：肿瘤；外周血T 淋巴细胞；流式细胞术；免疫指标
中图分类号:R730.43 文献标识码：A
Clinical significance of peripheral blood 1' lymphocyte subsets and NK levels in tumor patients ZHAO Mei-qi , LIANG Xin-qiang .LIU Hai-zhou ^et al. {Experimental Research Department .A ffiliated Tumor Hospital of Guan^xi Med -ical University , Nanning 530022 .China)
Abstract : Objective To investigate the change of peripheral lymphocyte subsets and NK cells in tumor patients and its clinical significance. Methods 621 patients with tumor(including lung cancers,liver cancers,breast cancers,stomach cancers and nasopharyngeal cancers)were selected as the tumor group and 115 healthy people as the healthy controls in the same period. The flow cytometry was adopted to detect the expression levels of peripheral blood T lymphocyte sub- populations ,CD19+ cells and NK cells. Results The proportion of CD3 ,CD4 , CD19 cells and the ratio of CD4 / CD8^ in peripheral blood of the Tumor group were lower than those in the healthy controls(P Key words : Tumor ； peripheral blood T lymphocyte subsets ； Flow cytometry ； immune indexes (Chin J Lab Diagw ,2019,23 ：0381) 研究表明.肿瘤的发生与机体免疫功能有着密 切的联系。人体的免疫细胞有很多种，其中外周血 T 淋巴细胞及自然杀伤细胞起重要作用，T 淋巴细 胞在肿瘤的发生、发展和抗肿瘤环节中.起到识别、 标记和清除肿瘤细胞的作用"，而自然杀伤细胞 不仅与抗肿瘤、免疫调节有关,还有可能参与自身免 疫性疾病的发生。通过对淋巴细胞亚群的检测，可 以反映机体的免疫功能状态穴。本研究采用流式细 胞技术对肿瘤患者和健康人外周血T 细胞亚群和 NK 细胞活性进行研究，以了解机体的免疫状态，分 析其在健康人与肿瘤患者中的区别?为临床诊治提 供相应依据。 1资料与方法1. 1临床资料选取2013年10月一2018年1月广西医科大 学附属肿瘤医院收治的621例肿瘤患者作为肿瘤 组,其中男406例，女215例，年龄16-88岁.平均年 龄(54.58+ 12. 25)岁；其中，肝癌183例，肺癌114 例.胃癌168例，乳腺癌67例，鼻咽癌89例。所有 T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。 首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。 B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。但CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。 在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。 CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于。监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。 淋巴细胞担负着免疫的主要功能。淋巴细胞亚群的测定有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的亚群包括T细胞（CD3）、B细胞（CD19）、NK细胞（CD16+56）、辅助性T细胞（CD3+CD4+）和抑制性T细胞（CD3+CD8+）等等。 C D和C D T淋巴细胞 检测 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08] CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测?? ? 1? 范围 本章规定了用多平台三级程序法和单平台一步法检测全血中的CD4+ 和 CD8+ T淋巴细胞。 ? 2?? 规范性引用文件 1997 Revised Guidelines for Performing CD4+ T-Cell Determinations in Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus (HIV) MMWR 46(RR-2);1-29 Publication date: 01/10/1997。 ? 3? 实验室条件 3.1 人员 进行HIV感染者CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。 3.2? 设施和设备 3.2.1? 样品处理区：生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器（5μl~50μl、20μl~200μl、200μl~1000μl）。 3.2.2? 流式细胞仪检测区：流式细胞仪 3.3? 功能分区 实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区,各区的功能是： 3.3.1? 样品处理区应达到生物安全Ⅱ级（BSL-2）实验室要求，用于样品处理、流式检测样品制备。 3.3.2? 流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。 ? 4? 样品采集、运输和接收 4.1? 样品的采集 4.1.1? 选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。 4.1.1.1? 用于血液学检测的抗凝剂 （1） EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。 （2）在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过30h，不检测超出抗凝时间范围的样品。 4.1.1.2? 用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂 （1）用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。 （2）用ACD或肝素抗凝，收集样品在48h以内，尽早（8h以内）处理。 4.1.2? 静脉采血收集血样，将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管（用真空试管）。 4.1.2.1? 当收集儿童样品时，采用儿童用注射器、小试管。 4.1.2.2? 采血后立即握住试管两端，颠倒混匀数次，将血液与抗凝剂混匀，以防止凝固。 4.1.3? 准备适当数量的样品管 4.1.3.1? 当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在不同实验室内进行时，用2个装有K3EDTA的试管即可。 4.1.3.2? 在所有其它条件下用2个试管（用K3EDTA作血球检测，用K3 EDTA、ACD或肝素作流式细胞仪免疫表型检测）。 4.1.4 ?对所有样品编号，并写明日期和收集时间。 4.2? 样品运输 机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T、B和NK淋巴细胞的水平。 T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。 首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。 B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。但 CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。 在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。 CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于0.5)。监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。 一、流式淋巴细胞亚群检测的临床意义 1.了解不同情况下机体免疫功能状态 肿瘤（手术、放化疗患者的免疫功能检测） 感染（脓毒血症、重症监护患者等） 自身免疫病、免疫缺陷病等 不孕不育 某些血液系统疾病 其他：慢性肾病、骨髓移植恢复期等 2.辅助临床疾病的诊断 3.探索疾病的发病机理、病程及预后 4.观察监测疗效，指导临床建立治疗方案 二、淋巴细胞的分类及功能 B细胞(CD19+)：体液免疫 辅助/诱导T细胞(Th):介导和增强免疫应答 (CD4+) 淋巴细胞T细胞(CD3+）细胞毒性(Tc) /抑制性T细胞(Ts): 抗病毒、抗肿瘤 (CD8+) 调节性T 细胞(Treg):抑制免疫应答、维持免疫耐受 (CD4+CD25+) NK细胞：抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节 (CD16+/CD56+) 三、流式淋巴细胞亚群检测的临床应用 淋巴细胞亚群检测与儿科疾病 （一）评估机体免疫功能状态 多种小儿疾病原发或继发疾病均存在T细胞异常，观察T细胞变化，对小儿疾病病因、发病机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值。 类型指标CD3+ CD4+CD8+CD4+/CD8+细菌性肺炎↓↓↓↓↑↓↓ 支原体肺炎↓↓↓↓↓↓↓↓ 病毒性肺炎↓↓↓↓↓↓↓↓ 传单增多症↑↑↓↓↑↑↓↓ 支气管哮喘↑↓↑ T 细胞CD4、CD8、CD3 检测介入时间-----结合退热、消咳、肺罗音消失时间观察T 细胞变化，特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用，改善预后，避免药物损伤. （二）原发性免疫缺陷病的早期识别和干预 1.流式细胞仪分析T细胞亚群(包括CD3+、CD4+和CD8+)、B细胞(CD19+) 和NK细 胞(CD16+/CD56+)比例等主要检查项目,可对大多数原发性免疫缺陷病患儿作出诊断。 2.评估免疫接种前机体免疫状态 案例：T/B细胞联合免疫缺陷患 儿，未评价免疫系统功能，直接 接种灭活疫苗，造成严重感染T 细胞CD4、CD8、CD3 检测介入时间-----结合患儿科反复感染的临床症状及时检测； 在疫苗接种前2-3天作出评估。 淋巴细胞亚群检测在肿瘤临床的应用 恶性肿瘤的发生、发展、转移与人体免疫功能下降密切相关。人体的抗肿瘤免疫以细胞 免疫为主，体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由CD4和CD8细胞完成。 （一）评价肿瘤患者的整体免疫功能 1．肿瘤患者处免疫抑制状态，T淋巴细胞降低。 2．肿瘤患者T淋巴细胞与病程相关，随病程逐渐降低。 CD3、CD4、CD4/CD8细胞数下降程度：Ⅳ期> Ⅲ期> Ⅱ期>Ⅰ期3．肿瘤患者T淋巴细胞持续低下，转移率高、易复发 一、目的： 保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。 二、修改程序： 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。 三、适用范围： 外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。 四、实验原理： 人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。 六、主要试剂： CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)， 七、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2、染色和固定细胞： （1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。 （2）A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。 （3）A1管中再加入全血100ul，混均。 （4）置室温，避光孵育15min。 （5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。 （6）300g离心5min，弃上清液。 （7）PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。 3、上机检测；分析结果；打印实验报告。 八、参考值： 总T细胞（CD3+）：59.4-84.6 辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5 抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3 Th/Ts: 0.9-3.6 九、临床意义： T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。 十、质量控制： 1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。 2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋 巴瘤可能有较大差异。 3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细 胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。 4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的 干干扰。 淋巴细胞亚群与临床 人体外周血的淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，主要包括三种：T淋巴细胞（TC）、B淋巴细胞（BC）、自然杀伤细胞（NK）。TC主要表达CD3+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的60--80%；BC主要表达CD19+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的15--20%；自然杀伤细胞（NK）主要表达CD3--CD16+CD56+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的10--20%。 通过T淋巴细胞亚群的监测可以了解在不同疾病状态下患者的细胞免疫功能状态，已经广泛在肿瘤、自体免疫、感染性疾病中, 辅助临床诊断、帮助了解发病机理、判断预后和指导临床治疗。T淋巴细胞亚群检测的内容为总T细胞（CD3+）及其亚群（辅助性T淋巴细胞，CD4+；抑制性或细胞毒T淋巴细胞，CD8+）的数量和比例。 在某些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、自体免疫性溶血性贫血患者中CD3+/CD4+细胞的比值升高。在病毒感染（上感，AIDS等）、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等疾病中，患者CD4+/CD8+比值降低，三种淋巴细胞的数量和比例均可能有相应的改变。T细胞亚群已被用来监测器官移植病人的免疫状态，协助发现和使其避免受到GVHD的攻击。由于在感染性、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病和器官移植中患者的免疫功能和预后之间有着密切的关系，对其给予密切注意并及时采取适当措施、调节患者的免疫状态以改善预后就成为现代医学的一个重要内容。 常见疾病T淋巴细胞的改变（参考） 疾病 T细胞亚群 CD4+/CD8+ CD4+（辅助T） CD8+（抑制T） 类风关↑（活动期）↑↑ SLE --或↓（活动期）↑↓↑ 胰岛素依赖性糖尿病↑ 多发性硬化症↓↓↑ 乙型肝炎↑ 自身免疫溶血性贫血↑↑ 上呼吸道感染↓↓↓ 结核↓ AIDS ↓↓↑ CD4+/CD8+ CD3+ （总T） CD4+（辅助T） CD8+（抑制T）恶性肿瘤（白血病）↓↓↓↓↑↑↑↑ 再障及粒细胞减少症↓↑↓ CMV感染↓↑↓ 血小板减少↓↓↓↓↓↓ CD19为全部B细胞共有的表面标志，增高见于B细胞系统的恶性肿瘤，减低见于体液免疫缺陷病。BC主要介导抗感染等体液免疫，故不作为肿瘤患者的检测指标。 NK细胞主要表达CD3--CD16+CD56+ ，约占淋巴细胞的10--15%左右。NK细胞能非特异性杀伤肿瘤细胞，是机体第一道肿瘤防线，其杀伤活性可被IL-2等细胞因子诱导而显著增强。 通常在肿瘤患者外周血中， CD3+、CD4+、NK细胞减少，而CD8+细胞增加，CD4+/ CD8+的比值降低，。说明肿瘤病人的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长与转移。因此，淋巴细胞亚群的检测对了解肿瘤发病机制、了解某些药物或治疗方法对机体免疫功能的影响，了解患者自身免疫功能状态的变化，指导临床治疗和科研应用等，都有着极其重要的理论意义和应用意义。 免疫功能淋巴细胞亚群检测的临床意义修订版 IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】 免疫功能（淋巴细胞亚群）检测的临床意义 外周血淋巴细胞根据生物学功能和细胞表面抗原表达分为3个群：T淋巴细胞 （CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK淋巴细胞【自然杀伤细胞（natural killer)， CD3-CD16+和/或CD56+】。T细胞又分为辅助T细胞（CD3+CD4+）和抑制T细胞 （CD3+CD8+)。淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它 总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病，如自身 免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等，分析发病机制，观察疗效 及检测预后有重要意义。 T淋巴细胞百分率或计数绝对值可用于区别和监测某些免 疫缺陷病和自身免疫性疾病。辅助T淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺 陷病、艾滋病、应用免疫抑制患者。抑制T淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病， 如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。抑制T细胞百分率在一些免 疫性疾病表现出超出正常参考范围，在许多先天性或获得性免疫缺陷病人中升高（如重症 综合性免疫缺陷SCID,AIDS）。 CD4+/CD8+>2.5表明细胞免疫功能处于“过度活 跃”状态，容易出现自身免疫反应，见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。CD4+/CD8+ 在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚群数值都有异常，其特征是患者体内CD3+细胞、CD4+ 细胞明显减少，而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显着降低，说明肿瘤患者的细胞免 疫功能处于免疫抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。骨髓造血细胞的增殖和分化障碍也与T细胞亚群异常有关。如在再生障碍性贫血与粒 细胞减少症中，患者的外周血CD4+细胞数减少，CD8+细胞数增多，CD4+/CD8+比值明显下降。 NK细胞介导某些肿瘤和病毒感染细胞的细胞毒性反应。 B淋巴细胞为 体液免疫的重要指标。 淋巴细胞亚群 T淋巴细胞亚群分析 T淋巴细胞及亚群的检测结果可以解释一些疾病发病机理、对患者的免疫功能和预后做出判断以及指导治疗。这些疾病主要包括：1.病毒感染性疾病；2.肿瘤性疾病；3.自身免疫性疾病；4.器官移植患者；5.其他免疫缺陷或异常的患者。 淋巴细胞是白细胞中非常重要的一类。它分为主要参与细胞免疫的T淋巴细胞（CD3+）和主要参与体液免疫的B淋巴细胞（CD19+）。而T淋巴细胞又分为辅助性T淋巴细胞（CD3+C D4+）和抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（CD3+CD8+）。在正常情况下，各群淋巴细胞的数目和相对比例都在一定的范围内。 在T淋巴细胞亚群的报告中提供了以下内容： 1. 总T（CD3+）淋巴细胞的绝对计数： 就如白细胞计数一样，该细胞的绝对计数(个/ul)一般也在一定范围内。在一些情况下，如病毒感染、化学和物理因素、免疫系统的衰竭或其它功能紊乱、造血系统异常等疾病时此值可能会有异常。 2. 辅助T（CD3（+）CD4（+））细胞的绝对计数和百分比。 3. 抑制T（CD3（+）CD8（+））细胞的绝对计数和百分比。 无论是CD3（+）CD4（+）还是CD3（+）CD8（+）细胞，都可以进一步划分为更进一步的亚群。 4. CD3(+)细胞中的CD4、CD8双阳性或双阴性细胞： 在淋巴细胞的分化增殖异常时，CD4、CD8双阳性或双阴性细胞的数量和百分比会有相应的升高和降低。 5. CD4（+）和CD8（+）细胞的比值----T细胞亚群报告中最为简单和明确的指标： 在淋巴细胞的分化中产生的总T细胞的数量是有限的，加之在病变中主要为辅助T或抑制T的升高或降低，因而CD4（+）和CD8（+）细胞的比值会发生相应的变化，该值就成为一个简单和明确的指标. 若其比值＞正常值表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。 CD4／CD8＜正常值一般被称为“免疫抑制”状态，常见于 （1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于正常值 （2）恶性肿瘤； （3）再生障碍性贫血、白血病； （4）某些病毒感染； （5）自体免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等的活动期。 免疫性不孕不育 自然流产是生殖过程中一种常见的现象,一次流产的发生率时13%~17%。复发性流产(r ecurrent spontaneous abortion, RSA)是指连续发生2次或2次以上的自然流产，又称习惯 性流产,而流产常发生在同一妊娠月份,约占妊娠总数的1%~3%,是临床上难以处理的不育症,严重影响广大妇女的生殖健康。临床研究发现,此类患者再次妊娠发生流产的风险高达70%~80%。RSA的病因复杂,除了胚胎染色体(孕8周以前流产的胚胎60%为非整倍体)或流产夫妇染色体 异常(常见者为平衡易位、罗伯逊易位、和染色体数目异常)、解剖异常(如先天性苗勒管发育异常、子宫动脉发育异常、宫腔粘连、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫腺肌症等)、内分泌异 常(如黄体功能不全、甲状腺功能异常、胰岛素抵抗等)、感染(如弓形虫、巨细胞病毒、细菌、支原体、衣原体感染等)等经典的四大病因外, 项目十八B淋巴细胞功能检测 一、溶血空斑试验 (Plaque forming cell assay) 【实验原理】 将SRBC免疫动物，隔一定时间取其脾脏制成细胞悬液，当与SRBC混合孵育时，其中抗体形成细胞释放的抗体会与周围SRBC特异性结合，在补体作用下，使这些致敏的SRBC 溶解，从而在琼脂凝胶中的每个抗体形成细胞周围形成一个肉眼可见的溶血空斑。测定与补体结合力强的IgM形成细胞采用直接方法；测定与补体结合力弱的IgG或IgA形成细胞采用间接法，即实验中需加入抗免疫动物Ig的抗体(二抗)，才能促进溶血空斑形成。 此处只介绍小鼠琼脂直接溶血空斑技术。 【试剂和器材】 1．小白鼠体重18~22 g。 2．补体豚鼠混合新鲜血清。 3．SRBC悬液用Gey液将SRBC洗3次，分别配成2.5×108个细胞/ml和5×108个细胞/ml浓度的红细胞悬液。 4．Gey液、琼脂糖。 5．注射器、剪刀、镊子、不锈钢网、小平皿、试管、吸管、显微镜、温箱、水浴箱。 【步骤和方法】 1．免疫小鼠取1ml 2.5×108个细胞/ml 浓度的SRBC悬液注入小鼠腹腔，或取0.2 ml SRBC悬液经小鼠尾静脉注入。 2．制备脾细胞悬液将免疫4天后的小鼠处死，取脾脏制备细胞悬液(制备方法见动物组织中免疫细胞收集)，用Gey液配成1×107个细胞/ml的细胞悬液(每只小鼠约加6~10ml Gey 液)。 3．制备底层琼脂将14g/L琼脂糖(用Gey液配制)溶化后取2~3ml倾注于水平的小平皿内，凝固后去盖反扣于37℃温箱中预温备用。 4．制备顶层琼脂将5g/L琼脂糖(用Gey液配制)溶化，置48℃水浴中平衡备用。取脾细胞悬液和5×108个细胞/ml SRBC悬液各0.1ml，再加入未稀释补体0.05ml，混匀，置48℃水浴平衡片刻。加入0.8ml已平衡好的琼脂糖，混匀后倒入底层琼脂上，旋转平皿使之均匀平铺，凝固后置37℃温育3h。计数溶血空斑形成细胞(PFC)。 【结果判定】 1．将平皿置低倍显微镜下观察计数。溶血空斑中心有淋巴细胞，周围为透明区。 2．全脾中PFC数计算： 每个平皿PFC数×10×脾细胞悬液体积(ml) 或以每百万脾细胞所含PFC数来表示。 【注意事项】 1．试验选用Gey液为洗涤液和培养液，优于Hanks液、Eagle液和Dullecco液，但工作液需现用现配。 2．最好选用近交系小鼠，且鼠龄和体重应基本一致。 3．制备脾细胞过程所用Gey液应预先4℃预冷，制好的细胞悬液应及时放4℃备用，以保持脾细胞活力。 4．制备顶层琼脂时，温度应控制在45～48℃之间，温度太高细胞会失活，过低会使琼脂凝固，细胞不能分散，无法倒入平皿。各细胞成分要充分混匀，同时避免出现气泡；与琼 T淋巴细胞亚群 T细胞是具有高度异质性的细胞群体，摘要介绍如下几种不同的分类方法：（1）根据TCR 肽链组成情况的不同，可将T细胞分为αβT细胞和γδT细胞；（2）根据T细胞是否接受过抗原刺激或接受抗原刺激后的分化情况，可将其分为初始T细胞、效应T细胞和记忆T细胞；（3）根据T细胞内外标志和功能特性，可将其分为CD4+Th细胞、CD8+CTL细胞和CD4+调节性T细胞。 （一）αβT细胞和γδT细胞 1. αβT细胞是执行适应性免疫应答的T细胞，主要分布于外周淋巴组织和血液中；其TCR由α和β两条肽链组成，具有高度多样性和抗原识别特异性。αβT细胞只能识别MHC分子提呈的抗原肽，即表达在APC表面的抗原肽-MHC分子复合物，并且具有自身MHC限制性；其主要功能是执行适应性细胞免疫应答，辅助B细胞产生适应性体液免疫应答和参与免疫应答的调节。 2. γδT细胞是执行固有免疫应答的T细胞，主要分布于粘膜和皮下组织，其TCR由γ和δ两条肽链组成，缺乏多样性。γδT细胞可直接识别某些细胞表面的糖蛋白、MIC A/B分子、热休克蛋白或CD1分子提呈的脂类抗原和磷酸化抗原，且不受MHC限制。他们对某些肿瘤细胞和病毒或胞内寄生菌感染的靶细胞具有泛特异性杀伤作用，也可通过分泌不同类型的细胞因子发挥免疫调节和介导炎症反应。αβT细胞与γδT细胞主要特征及其分布和功能如表所示。 αβT细胞与γδT细胞主要特征及其分布和功能 （二）初始T细胞、效应T细胞和记忆T细胞 1. 初始T细胞（naive T cell，Tn）是指离开胸腺进入外周后，从未与其特异性抗原相遇，即对相应抗原尚未产生应答的成熟T细胞。该种T细胞表达CD45RA和高水平与其归巢相关的L-选择素（CD62L）及其他粘附分子，参与淋巴细胞再循环。在外周免疫器官，CD4+初始T细胞通过表面TCR-CD3复合体和粘附分子与树突状细胞表面相应抗原肽-MHC分子复合物和相应粘附分子结合相互作用后，首先分化为CD4+Th0细胞；后者在局部微环境中不同病原体和/或细胞因子作用下，可增殖分化为功能不同的T细胞亚群，参与适应性免疫应答，并最终分化为效应T细胞和记忆T细胞。 2. 效应T细胞（effector T cell,Te）是指接受抗原刺激后，经克隆扩增和分化形成的能够发挥免疫效应的终末T细胞。效应T细胞不表达CD45RA和L-选择素（CD62L），而表达CD45RO和高水平IL-2R,借此能与初始T细胞相区别。效应T细胞能向外周炎症部位或某些器官组织迁移,而不参与淋巴细胞再循环。CD4+/ CD8+效应T细胞与APC或肿瘤和病毒感染靶细胞表面相应抗原肽-MHC分子复合物特异性结合后，可通过释放IL-2、IFN-γ、TNF-β等多种细胞因子或分泌穿孔素、颗粒酶等细胞毒性物质，介导产生细胞免疫效应或细胞毒作用。 3. 记忆T细胞（memory T cell，Tm）是指接受抗原刺激后，在增殖分化过程中停止分化，成为静息状态的具有免疫记忆功能的长寿T细胞。记忆T细胞介导再次免疫应答，他们对相应抗原和细胞因子的刺激较初始T细胞更为敏感；在与相应抗原相遇后可迅速活化、增殖分化为效应T细胞和产生新的记忆T细胞。记忆T细胞主要存在于血液和外周淋巴器官，也能向外周炎症组织等部位迁徙；其中参与淋巴细胞再循环的记忆T细胞称为中央型记忆细胞（central memory cell,Tcm）。此型记忆T细胞为CD45RO+ CD62L+ CCL7+ T细胞，能与表型为CD45RO- CD45RA+ CD62L+的初始T细胞和表型为CD45RO+ CD62L- CCL7-的效应T细胞相区别。 （三）CD4+Th细胞、CD8+CTL细胞和CD4+调节性T细胞 淋巴细胞亚群与临床人体外周血的淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，主要包括三种：T 淋巴细胞（TC）、B淋巴细胞（BC）、自然杀伤细胞（NK）。TC主要表达CD3+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的60--80%；BC主要表达CD19+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的15--20%；自然杀伤细胞（NK）主要表达CD3--CD16+CD56+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的 10--20%。 通过T淋巴细胞亚群的监测可以了解在不同疾病状态下患者的细胞免疫功能状态，已经广泛在肿瘤、自体免疫、感染性疾病中, 辅助临床诊断、帮助了解发病机理、判断预后和指导临床治疗。T淋巴细胞亚群检测的内容为总T细胞（CD3+）及其亚群（辅助性T淋巴细胞，CD4+；抑制性或细胞毒T淋巴细胞，CD8+）的数量和比例。 在某些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、自体免疫性溶血性贫血患者中CD3+/CD4+细胞的比值升高。在病毒感染（上感，AIDS等）、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等疾病中，患者CD4+/CD8+比值降低，三种淋巴细胞的数量和比例均可能有相应的改变。T细胞亚群已被用来监测器官移植病人的免疫状态，协助发现和使其避免受到GVHD的攻击。由于在感染性、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病和器官移植中患者的免疫功能和预后之间有着密切的关系，对其给予密切注意并及时采取适当措施、调节患者的免疫状态以改善预后就成为现代医学的一个重要内容。 常见疾病T淋巴细胞的改变（参考） 疾病 T细胞亚群 CD4+/CD8+ CD4+（辅助T）CD8+（抑制T） 类风关↑（活动期）↑↑ SLE --或↓（活动期）↑↓↑ 胰岛素依赖性糖尿病↑ 多发性硬化症↓↓↑ 乙型肝炎↑ 自身免疫溶血性贫血↑↑ 上呼吸道感染↓↓↓ 结核↓ AIDS ↓↓↑ CD4+/CD8+ CD3+ （总T） CD4+（辅助T） CD8+（抑制T） CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测 1 范围 本章规定了用多平台三级程序法和单平台一步法检测全血中的CD4+ 和 CD8+ T淋巴细胞。 2 规范性引用文件 1997 Revised Guidelines for Performing CD4+ T-Cell Determinations in Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus (HIV) MMWR 46(RR-2);1-29 Publication date: 01/10/1997。 3 实验室条件 3.1 人员 进行HIV感染者CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。 3.2 设施和设备 3.2.1 样品处理区：生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器（5μl~50μl、20μl~200μl、200μl~1000μl）。 3.2.2 流式细胞仪检测区：流式细胞仪 3.3 功能分区 实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区,各区的功能是： 3.3.1 样品处理区应达到生物安全Ⅱ级（BSL-2）实验室要求，用于样品处理、流式检测样品制备。 3.3.2 流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。 4 样品采集、运输和接收 4.1 样品的采集 4.1.1 选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。 4.1.1.1 用于血液学检测的抗凝剂 （1）EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。 （2）在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过30h，不检测超出抗凝时间范围的样品。 4.1.1.2 用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂 （1）用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。 （2）用ACD或肝素抗凝，收集样品在48h以内，尽早（8h以内）处理。 4.1.2 静脉采血收集血样，将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管（用真空试管）。 4.1.2.1 当收集儿童样品时，采用儿童用注射器、小试管。 4.1.2.2 采血后立即握住试管两端，颠倒混匀数次，将血液与抗凝剂混匀，以防止凝固。 4.1.3 准备适当数量的样品管 4.1.3.1 当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在不同实验室内进行时，用2个装有K3EDTA的试管即可。 4.1.3.2 在所有其它条件下用2个试管（用K3EDTA作血球检测，用K3 EDTA、ACD或肝素作流式细胞仪免疫表型检测）。 4.1.4 对所有样品编号，并写明日期和收集时间。 4.2 样品运输 4.2.1 在室温下（18~23℃）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过热）。超过37℃的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天气热时，需要用一个隔热的容器装样品，并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。这种方法有助样品的保存。 4.2.2 尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。 淋巴细胞亚群检测 检测对象 原则：免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群 免疫功能包括： 免疫防御功能 免疫自稳和耐受功能 免疫监视功能 免疫防御功能受损 易发生感染 反复感染 严重感染 多种病原与特殊病原感染 常规治疗效果不佳的感染 除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发和继发两方面的问题。 免疫自稳和耐受功能受损 过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。 ①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。 ②嗜酸性粒细胞显著增多 ③血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L） ④伴有反复、严重感染的患者 自身免疫和自身炎症性疾病 ①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况 ②合并反复感染的患者 ③存在自身炎症反应 ④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后 免疫监视功能受损 主要引起肿瘤 血液系统肿瘤：儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤 其他肿瘤及实体瘤：其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响 其他特殊情况 血常规中淋巴细胞明显异常 家族成员中有免疫缺陷病史 长期使用免疫抑制剂者 淋巴细胞亚群分析结果判读，应对淋巴细胞亚群的相对计数和绝对计数分别进行判别。 结果分析 (一)基本数据判断 1．相对计数的3个基本公式： FCM检测淋巴细胞亚群结果应首先根据下述3个公式进行评估[15]。公式1: CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%＝100%±5% 公式2：CD4＋%＋CD8＋%＝CD3＋%±5% 公式3：CD4＋/CD8＋比值>1.0(1.5～2.0，新生儿期可达4.0) 2．相对计数基本公式意义： (1) CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%明显大于或小于100%±5%，提示检测系统异常或存在明显淋巴细胞亚群异常。(2) CD4＋%＋CD8＋%之和明显大于或小于CD3＋%±5%，提示存在双阳性(CD4＋CD8＋)或双阴性(CD4-CD8-)T淋巴细胞。(3)一般情况CD4＋/CD8＋比值>1，年龄越小CD4＋/CD8＋比值越大。CD4＋/CD8＋比值<1，提示T淋巴细胞亚群存在异常。 3.绝对计数的判断： 绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。个体间变化也比较大。各个实验室所采用的标准有所不同。应根据实验室的参考范围进 ?５０?垦竖垫墼堕堂垄查！！！！生！旦箜！！鲞箜！塑丛』！坐！！型！』竺！！！型垫！！！ｙ堕：！！：垒坠！ ?临床研究?流式细胞术检测体液Ｔ淋巴细胞亚群的临床应用 莫扬１，许小东２ （华中科技大学同济医学院附属裹樊医院检验科，湖北襄樊４４１０２１；２．卫生部北京医院流式细胞仪室１００７３０） 【摘要】目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的５０例胸水、４６例腹水、４７例肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ｔ淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果１）胸水：结核性胸膜炎组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（２７．３６±６．４１）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９８±７．４１）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．６０±０．６４，肺部恶性肿瘤组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９７士４．２０）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３７．６１±４．８０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．４７－４－０．１０，与结核性胸膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１）而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）；２）肺泡灌洗液：肺良性疾病组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４４．５４－４－９．５６）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４９．２８－＋４－１２．８８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为１．１３±０．２９，肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６５．１１±７．７７）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３４．５７±６．６５）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．５４－４－０．１９，与良性病变组比较，恶性组Ｔｈ卜．降（Ｐ＜ｏ．０５），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著卜．降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）。３）腹水：结核性腹膜炎组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３３．１１±３．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６６．６９±３．７８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．０３士０．２８，恶性组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（５６．６４±９．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３５．８６士３．３０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．６５±０．１０，与结核性腹膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。结论胸腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。 【关键词】支气管肺泡灌洗液；流式细胞术；Ｔ淋巴细胞哑群 中图分类号：Ｒ４４６．６１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—４１３０（２０１０）０１—００５０—０２ ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ＭＯＹａｎｋｌ，ＸＵＸｉａｏ－ｄｏｎｇ２ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＡｆＪ’ｉｌｉａｔｅｄｘｉａｎｇＪａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴＤ竹ｇＪｉ ＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅ， ＨｕａｚｈｏｎｇＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｇｆａｎ，Ｈｕｂｅｉ４４１０２１，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａ—ｔｉｅｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｏｖｄｅｒｔｏｇｅｔＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｂｙ３－ｃｏｌｏｕｒｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｕｔｉｌｉｚｉｎｇＳＳＣ／ＣＤ３Ｐｅｒｃｐａｎｔｉｂｏｄｙ，４７ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｎｄ５０ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ１）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（６７．９８±７．４１）％，Ｔｓ（２７．３６士６．４１）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（２．６０±０．６４）ｉｎＢＡＩ。Ｆｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ。ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３７．６１士４．８）％，Ｔｓ（６７．９７±４．２０）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．４７士０．１０）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ。ａｎｄｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５）。ａｎｄｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｗｈｉｌｅｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１），ｅｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；２）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６＋－７．７１）％ａｎｄＴｓ（６４．３１士７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．５７土０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓ（４４．５４士９．５６）ｏＡ，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．ＴｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；３）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６士７．７１）％，Ｔｓｉｓ（６４．３１±７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓａｒｅ（０．５７士０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓｉｓ（４４．５４±９．５６）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎ ＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎ ｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／Ｔｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗ— ｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｃｏｎ‘ｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ．ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｅａｐｐｒｏａｃｈｉｓｖａｌｕａｂｌｅｉｎａｎａｌｙｚｉｎｇＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎＢＡＩ。Ｆ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ；Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓ 恶性浆膜腔积液确诊的金标准是在积液巾找到肿瘤细胞。然而在临床上，常有高度怀疑为恶性积液但未能找到肿瘤细胞的情况，从而影响到诊断的最终判断。笔者通过对患者胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的分析判断其性质，为临床恶性积液的诊断提供了一种检测指标，现报道如下。 资料与方法 １．标本来源病例为２００６年６月至２００７年１２月在襄樊市巾心医院及卫生部北京医院呼吸科、消化科、肿瘤科住院治疗的相应疾病患者。１）胸水来源：肺癌２０例（均经病理最终证实），年龄３１～６９岁，男１７例，女３例。组织学分型：鳞癌１４例。腺癌４例，小细胞癌２例；结核性胸膜炎３０例，年龄２６～６８岁，男１８例，女１２例。刷检见结核杆菌（抗酸染色阳性）确诊。２）肺泡灌洗液来源：肺癌组２５例（男１５例、女１０例），均经病理证实，年龄３９～７１岁；肺部良性疾病组２２例（男１５例、女７例），年龄２８～７０岁，其中肺结核８例、肺炎ｌｌ例、肺结节病３淋巴细胞亚群
CD和CDT淋巴细胞检测
淋巴细胞亚群(详细资料)
淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林
T淋巴细胞亚群检测操作程序
淋巴细胞亚群检测的临床意义
免疫功能淋巴细胞亚群检测的临床意义修订版
淋巴细胞亚群
项目十八 B淋巴细胞功能检测
T淋巴细胞亚群
淋巴细胞亚群检测的临床意义
CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测
淋巴细胞亚群检测
流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用