小鼠子宫平滑肌细胞的分离培养及鉴定

子宫内膜容受性的预防及治疗

子宫内膜容受性的预防及治疗 众所周知，“子宫内膜容受性”问题已日益成为不孕症及自然流产、生化妊娠的主要病因之一，且近年来有逐年增加的趋势，也是目前不孕症领域的重要研究课题。其中，“薄型子宫内膜”最为常见及重要，发病率在子宫内膜容受性中可占80%左右，其影响生育的问题已经是成为目前治疗不孕症的重点之一。在这里，主要探讨一下对于“薄型子宫内膜”的预防及治疗问题。 一、“薄型子宫内膜”的预防：主要是针对病因进行预防。 1、建议尽量减少宫腔内操作，尤其是对于年轻女性或者是有生育要求的患者，在没有高度怀疑子宫内膜恶性变的情况下，尽量不要做诊断性刮宫；对于有月经不调、子宫内膜炎、子宫内膜息肉的情况，主要是通过妇科查体、彩超检查、内分泌检查等无创性操作来做出诊断，而不能单纯依据所谓的“子宫内膜厚”就轻易刮宫。 2、在流产方式的选择上，尽量鼓励患者采用药物流产：众所周知，药物流产对子宫内膜的损伤是相对比较少的，即便是出现了不全流产，在确实是需要清宫的情况下，手术操作也是相对比较容易的，不需要过多的刮宫。反过来，很多人认为，因为药物流产存在一定的不成功率，或者是容易出现不全流产而不建议选择药物流产的做法并不可取，完全是属于“以偏概全”的逻辑错误，另外，事实上，只要是掌握好适应症，药物流产的成功率还是比较高的，与人工流产相比，不存在明显的差异，即便是人工流产，也不是百分之百的成功率。 3、预防反复发作的妇科炎症，强调治疗妇科炎症要严格针对病因来治疗，治疗上需要正规治疗，但不能盲目用药或者是乱用药。

二、“薄型子宫内膜”的治疗--目前并没有比较有效的办法。 1、雌激素治疗或者是雌孕激素周期治疗： 目前这个办法仍是作为治疗“薄型子宫内膜”的主要办法。但是需要强调一点，薄型子宫内膜是由于损伤了子宫基底层或者是炎症造成的，因此单纯补充雌激素或者是激素周期治疗的效果并不理想；且自然月经周期下，使用大量雌孕激素反而会影响卵泡发育，继而造成卵巢没有排卵、内分泌紊乱的情况。 2、其它辅助治疗： 如应用维生素E、阿斯匹林、人绒毛膜促性腺激素等，目前来看效果都不好。本人认为，某些中成药的治疗效果是不错的，如滋肾育胎丸、六味地黄丸、益母草颗粒等，没有副作用，可长期用药，是可以配合激素周期治疗或者是单独使用的。 3、干细胞治疗： 目前还处于研究阶段，认为造血和非造血骨髓来源的干细胞(BMDSCs)通过损伤刺激会被招募到子宫内膜，有可能会成为治疗薄型子宫内膜的比较有效的治疗办法。

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小鼠子宫内膜干细胞损伤修复调控机制的研究

小鼠子宫内膜干细胞损伤修复调控机制的研究 发表时间：2018-12-13T15:06:46.090Z 来源：《医药前沿》2018年34期作者：叶国柳靳丽杰王玲玲周玉 [导读] 人类子宫内膜是一种高度再生组织，一个生育年龄妇女的子宫内膜要经历超过400个周期以上的增长，分化，和脱落。 （蚌埠医学院第一附属医院妇产科安徽蚌埠 233004） 【摘要】目的：本研究组通过对经典Wnt信号通路的干涉，观察其对子宫内膜损伤后修复的影响，探讨小鼠子宫内膜干细胞损伤修复调控机制的研究，为子宫内膜损伤修复障碍及其引发疾病的干细胞治疗方法提供新的研究思路。方法：利用Wnt/β-catenin信号通路转基因报告鼠（BAT-gal小鼠）建立子宫内膜损伤模型，了解Wnt信号分布和表达的变化；western blot和QPCR等方法检测来证实Wnt信号通路激动剂Wnt-7a和阻断剂SFRP-2后Wnt信号通路的调节变化。通过直接荧光显微镜观察和免疫组化染色后显微镜下观察,证实产后小鼠子宫内膜边缘（SP）群干/祖细胞分离纯化并进行培养后移植到损伤的宫腔内，能在宫腔内存活和迁移并且对损伤内膜组织发挥修复作用。结果：A.通过特殊的X-gal染色确证Wnt/β-catenin信号通路存在于子宫内膜损伤修复中并起着重要作用。证实产后小鼠子宫内膜边缘（SP）群干/祖细胞分离纯化并进行培养后移植到损伤的宫腔内，能在宫腔内存活和迁移并且对损伤内膜组织发挥修复作用。证实Wnt/β-catenin信号通路在（SP）群干/祖细胞修复损伤子宫内膜中的调节作用。结论：Wnt/β-catenin信号通路在（SP）群干/祖细胞修复损伤子宫内膜中的调节作用。 【关键词】子宫内膜干细胞；调控；损伤修复 【中图分类号】R324 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）34-0176-02 1.引言 人类子宫内膜是一种高度再生组织，一个生育年龄妇女的子宫内膜要经历超过400个周期以上的增长，分化，和脱落。子宫内膜炎，子宫内膜结核等妇科疾病以及宫腔手术都可能导致子宫内膜损伤，从而引起继发性闭经、不孕、习惯性流产等疾病。近年来宫腔镜的广泛应用使子宫内膜疾病的诊断及疗效更具针对性，但是对于子宫内膜修复障碍的治疗方法仍旧十分有限。近年来，国内外的学者从子宫内膜中分离出基质和上皮两种类型的干细胞，而子宫内膜上皮在月经中脱落后的再生有可能是间充质干细胞增殖分化的结果。总之，子宫内膜干细胞的相关研究，为子宫内膜损伤修复的细胞疗法提供了理论依据，但对于子宫内膜干细胞分化调控机制需要进一步的研究。 2.材料与方法 2.1 材料 10～14周龄Wistar雌鼠(220～250g），中国医科大学实验动物中心提供)20只；40mg/kg 戊巴比妥(Sigma)；SP免疫组织化学超敏试剂盒、DAB显色剂、多聚赖氨酸（上海生工）；辣根过氧化物酶标记二抗（1:2000稀释），羊抗鼠单克隆抗体 Wnt-1（1:100稀释），兔抗鼠单克隆抗体β-Catenin（1:200稀释，碧云天）；PVDF膜（Takara） 2.2 方法 2.2.1确证Wnt/β-catenin信号通路存在于子宫内膜损伤修复中并起着重要作用本部分实验中，应用Wnt/β-catenin信号通路转基因报告鼠（BAT-gal 小鼠）进行研究，用100°热水导管损伤小鼠Y型子宫一侧宫角，在损伤后6h、8h、7d、14d 进行取材制作小鼠子宫内膜损伤模型，与正常小鼠比较通过对子宫内膜进行组织切片及X-gal染色，了解Wnt信号在小鼠子宫内膜的分布和表达的变化。 2.2.2分离纯化小鼠子宫内膜边缘（SP）群干/祖细胞；观察它们移植到小鼠损伤子宫内膜后的存活和迁移。 利用MEF作为饲养层培养EGFP+SP细胞，急性损伤后移植一定量未分化的GFP+小鼠边缘（SP）群干/祖细胞至内膜损伤小鼠宫腔内，14天后取子宫，直接荧光显微镜观察和HE染色后及抗GFP蛋白抗体免疫组化染色后显微镜下观察小鼠边缘（SP）群干/祖细胞的存活和迁徙情况。 2.2.3本部分研究旨在了解Wnt-7a和SFRP-2 对小鼠子宫内膜损伤模型中经典Wnt信号通路的关键蛋白和下游靶基因的表达水平的影响。 用western blot方法检测各组小鼠子宫内膜损伤模型β-catenin、GSK3b、Apc、c-myc的表达水平；采用BCA蛋白测定试剂盒对蛋白进行定量，聚丙烯酰胺SDS凝胶电泳后电转移至PVDF膜，5％脱脂牛奶封闭后加入一抗，4℃摇动过夜，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，加入化学发光剂，X线片显影、定影，用图像分析仪测定各条带的吸光度值作定量分析，同时检测B一肌动蛋白表达，确保各组蛋白上样量相等 2.2.4统计学分析使用SPSS22.0软件进行统计分析，Western blotting 灰度值利用ANOVA法中的多重比较判断组间差异（设定P＜0.05）。 3.结果 3.1 Wnt/β-catenin信号通路转基因报告鼠（BAT-gal 小鼠）建立小鼠子宫内膜损伤模型；通过特殊的X-gal染色确证Wnt/β-catenin信号通路存在于子宫内膜损伤修复中并起着重要作用。

家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养

畜牧兽医学报 2007,38(11):1242~4247 Acta Veterinaria et Zootechnica S inica 家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养 陈秀荔,赵永贞,靳亚平,张彦明* (西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌712100) 摘 要:本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100 g/mL牛胰岛素、63 5nmo l/L雌二醇(E2)、7 14 nmo l/L孕酮(P4)的DM EM/F12(1 1)培养液和375%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100 g/mL牛胰岛素、63 5nmol/L E2、 7 14nmol/L P4的DM EM/F12(1 1)培养液和375%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内 膜细胞和平滑肌细胞的生长。 关键词:子宫内膜细胞;平滑肌细胞;免疫组织化学;免疫荧光;蜕膜化 中图分类号:S852;Q813 1 文献标识码:A 文章编号:0366 6964(2007)11 1242 06 The Separation and Cultivation of Rabbit Endometrial Cells and Smooth Muscle Cells in vitro CH EN Xiu li,ZH AO Yong zhen,JIN Ya ping,ZH AN G Yan m ing* (K ey L abor atory of A nimal Rep roductive E ndocr inology and Embr y o Biotechnology of A griculture M inistry of China,Nor thw est A&F Univer sity,Yangling712100,China) Abstract:In this paper,rabbit endometrial cells(epithelial cells and strom al cells)and sm ooth muscle cells w ere successfully isolated and cultured,and the w ay s used in purifying endom etrial epithelial cells and strom al cells w er e discussed.The w ays of differential centrifug al speed and differential sticking on the w all w ere applied to obtain the purified epithelial cells and stro mal cells,the w ay of sieve w as chosen to harvest smooth muscle cells,separately.The cells w ere cul tured in the medium that consist o f a1 1mix ture of DM EM F12m edia supplemented with 20%FBS,100 g/m L insulin,63 5nm ol/L estro gen,7 14nmol/L pro gesterone,at37hu m idified atmo sphere of5%CO2in air.Im muno histo chemistry and immunofluo rescence assay w ere used to identify the three kinds of cells and their purificatio n.Results sho w ed that rabbit endo metr ial epithelial cells and stro mal cells w ere successfully separated and cultured,the purifi cation of the two kinds of cells reached about98%.Decidualizatio n w as observ ed in stro mal cells. The purificatio n of smooth muscle cells r eached about97%,cells sho w ed lateral cut g row th.The resear ch indicated that endometrial cells and sm ooth muscle cell could be cultur ed successfully in vitr o;The DM EM/F12(1 1)culture medium supplem ented w ith20%FBS,100 g/mL insulin, 63 5nmol/L estrog en,7 14nm ol/L prog ester one and the incubation under condition of37hu m idified atmosphere of5%CO2w ere optim al to suppor t the g row th of endometrial cells and 收稿日期:2006 11 13 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39770544) 作者简介:陈秀荔(1975 ),女,内蒙古赤峰市人,博士生,主要从事家畜生殖内分泌与生殖免疫研究,E mail:chenx iuli2001@163 com *通讯作者:张彦明(1956 ),男,陕西南郑人,博士生导师,主要从事分子病原学与免疫学研究,E mail:z hangyanm ing@nw suaf edu cn

子宫内膜容受性及相关药物影响的研究进展第1期

摘要：子宫内膜容受性是母体子宫内膜对胚胎的接受能力，是决定胚胎能否顺利着床的关键因素，容受性的高低可影响胚胎种植率及临床妊娠率。因此对子宫内膜容受性的相关研究越来越重视，由于目前相关药物对其的影响研究报道较少，且具体作用机制尚未明确，导致对其认识不深入。该研究分别从相关指标及药物治疗方面对子宫内膜容受性进行综述，以期为临床治疗提供指导。 关键词：子宫内膜的容受性;妊娠率;相关药物 子宫内膜容受性，是母体子宫内膜对胚胎的接受能力，是保证孕卵着床、胎儿及胎盘发育的重要环节，也是决定胚胎能否顺利着床的关键因素。目前关于因子宫内膜容受性低的病因和它的具体的机制还没有明确，因此，增加子宫内膜的厚度和改善子宫内膜的血流等，是现代医学改善子宫内膜容受性主要措施[1]。子宫内膜容受性的相关因素及药物的影响，现报道如下。 一、与子宫内膜容受性相关的研究指标 1.1 超声学指标 Jarvela等[2]报道，子宫内膜的形态与妊娠结局相关，研究表明子宫内膜的类型、厚度、容积以及子宫内膜的血流可以初步反映子宫内膜的功能状态，且现已经成为预测子宫内膜容受性的常用简便参数。也有报道，子宫内膜的形态与妊娠结局有相关性，注射绒促性素前子宫内膜呈现三线征的患者妊娠率可达44.8%。有数据显示，测定子宫内膜容积<2 mL时胚胎着床率和临床妊娠率较低。当PI、RI数值过高，反映子宫动脉血流的减少，血流阻力增高，子宫血流灌注差[3]，可能也是导致妊娠率低下的原因之一。 1.2 甾体激素的指标 莫玉俏等[4]报道，子宫内膜的容受性的减低与高雌激素水平以及雌、孕激素比值的改变有关。成功的妊娠，除了要求受精卵和子宫内膜同步发育外，还要求妊娠患者的体内必需有足够的甾体激素。甾体激素是胚泡着床的启动因素，子宫内膜在卵巢甾体激素的影响下，呈现周期性的变化。雌、孕激素水平的比例失调可直接影响子宫内膜自身或其它受体的表达。雌激素水平较低可使子宫的窗口期延长，雌激素水平若高则可使其很快关闭。 1.3 相关因子指标

小鼠腮腺细胞使用说明

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子宫内膜异位症

子宫内膜异位症 分享| 发布时间：2013年12月25日点击数：4137 次字体：小大具有生长功能的子宫内膜组织（腺体和间质）出现在宫腔被粘膜覆盖以外部位时称为子宫内膜异位症（EMT），简称内异症。 EMT以痛经、慢性盆腔痛、不孕为主要表现，是育龄妇女的常见病，该病的发病率近年有明显增高趋势，发病率约占育龄妇女的10%～15%，占痛经妇女的40%～60%。在不孕患者中，30%～40%合并EMT，在EMT患者中不孕症的发病率约40%～60%。 该病一般仅见于生育年龄妇女，以25～45岁妇女多见。绝经后或切除双侧卵巢后异位内膜组织可逐渐萎缩吸收，妊娠或使用性激素抑制卵巢功能可暂时阻止此病的发展，故EMT 是激素依赖性疾病。 EMT虽为良性病变，但具有类似恶性肿瘤远处转移、浸润和种植生长能力。异位内膜可侵犯全身任何部位，最常见的种植部位是盆腔脏器和腹膜，以侵犯卵巢和宫底韧带最常见，其次为子宫、子宫直肠陷凹、腹膜脏层、阴道直肠膈等部位，故有盆腔EMT之称。 一、发病机制 本病的发病机制尚未完全阐明，关于异位子宫内膜的来源，目前有多种学说。 1．种植学说妇女在经期时子宫内膜碎片可随经血倒流，经输卵管进入盆腔，种植于卵巢和盆腔其他部位，并在该处继续生长和蔓延，形成盆腔EMT。但已证实90%以上的妇女可发生经血逆流，却只有10%～15%的妇女罹患EMT。剖宫产手术后所形成的腹壁瘢痕EMT，占腹壁瘢痕EMT的90%左右，是种植学说的典型例证。 2．淋巴及静脉播散子宫内膜可通过淋巴或静脉播散，远离盆腔部位的器官如肺、手或大腿的皮肤和肌肉发生的EMT可能就是通过淋巴或静脉播散的结果。 3．体腔上皮化生学说卵巢表面上皮、盆腔腹膜都是由胚胎期具有高度化生潜能的体腔上皮分化而来，在反复经血逆流、炎症、机械性刺激、异位妊娠或长期持续的卵巢甾体激素刺激下，易发生化生而成为异位症的子宫内膜。 4．免疫学说免疫异常对异位内膜细胞的种植、粘附、增生具有直接和间接的作用，表现为免疫监视、免疫杀伤功能减弱，粘附分子作用增强，协同促进异位内膜的移植。以巨噬细胞为主的多种免疫细胞可释放多种细胞因子，促进异位内膜的种植、存活和增殖。EMT 患者的细胞免疫和体液免疫功能均有明显变化，患者外周血和腹水中的自然杀伤细胞（NK）的细胞毒活性明显降低。病变越严重者，NK细胞活性降低亦越明显。雌激素水平越高，NK 细胞活性则越低。血清及腹水中，免疫球蛋白IgG、IgA及补体C3、C4水平均增高，还出现抗子宫内膜抗体和抗卵巢抗体等多种自身抗体。因此，个体的自身免疫能力对异位内膜细胞的抑制作用，对本病的发生起关键作用。 5．在位内膜决定论中国学者提出的“在位内膜决定论”揭示了在位子宫内膜在EMT 发病中的重要作用，在位内膜的组织病理学、生物化学、分子生物学及遗传学等特质，与EMT的发生发展密切相关。其“黏附-侵袭-血管形成”过程，所谓的“三A程序”，可以解释EMT的病理过程，又可以表达临床所见的不同病变。 二、病理 EMT最常见的发生部位为靠近卵巢的盆腔腹膜及盆腔器官的表面。根据其发生部位不同，可分为腹膜EMT、卵巢EMT、子宫腺肌病等。 1．腹膜EMT 腹膜和脏器浆膜面的病灶呈多种形态。无色素沉着型为早期细微的病变，具有多种表现形式，呈斑点状或小泡状突起，单个或数个呈簇，有红色火焰样病灶，白色透

什么是子宫内膜容受性

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 什么是子宫内膜容受性 导语：相信很多朋友对子宫内膜容受性比较陌生，不知道子宫内膜容受性是什么意思，那么什么是子宫内膜容受性呢？接下来。本文就为大家介绍子宫内膜 相信很多朋友对子宫内膜容受性比较陌生，不知道子宫内膜容受性是什么意思，那么什么是子宫内膜容受性呢？接下来。本文就为大家介绍子宫内膜容受性的相关内容，想要了解什么是子宫内膜容受性的朋友不妨接着往下看哦！下面请大家看详细的介绍。 子宫内膜容受性是指内膜的一种状态，在这种状态下囊胚能够黏附，穿入内膜并诱导内膜间质发生一系列变化，最终植入内膜，这段时间称为“着床窗”，一般在排卵后的6~10 d，即正常月经周期的第20~24天。 影响子宫内膜容受性的因素众多，包括：子宫内膜厚度、形态等。其中子宫内膜的厚度、形态和血流分布可以通过超声影像显示，在子宫肌层及子宫内膜之间有一个特殊的结合区域，超声下显示为一低回声薄层，这一区域在子宫内膜容受性方面起重要作用。 在自然妊娠或辅助生育技术中，胚胎的质量和子宫内膜的容受性是妊娠成功的关键因素。通过使用B超测量子宫内膜厚度来评价子宫内膜容受性是目前最常用和最简单的方法。一些研究认为子宫内膜厚度是预测妊娠结局的重要因子，适当厚度的子宫内膜是胚胎种植的必备条件，而子宫内膜过薄可导致胚胎种植率明显降低在临床已成共识。但其机理尚不完全清楚，致使目前仍缺乏有效的治疗手段。 月经周期中子宫内膜厚度可反映内膜功能状态，适度厚度内膜易于胚胎着床。有学者研究适合着床的内膜最佳范围≥10 mm，当内膜厚度子宫内膜厚度与ER相关。但有些学者持相反观点，认为内膜厚度和妊 生活中的小知识分享，对您有帮助可购买打赏

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良解读

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 [ 08-10-30 13:48:00 ] 作者：吴建芳编辑：studa20 【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法改良酶消化法。结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98% 以上，足以满足各种细胞试验需求。结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 1．1 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 1．2 试剂：鼠抗SMC-α -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgG［H/L］，戊巴比妥钠注射液。 1．3 培养基：在DMEM 培养基中添加１５％胎牛血清、１％青霉素、链霉素、１％谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 1．4 酶消化液：Collagenase TypeⅡ 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)，过滤除菌即用。

子宫平滑肌收缩功能的变化与产后出血的关系

子宫平滑肌收缩功能的变化与产后出血的关系 发表时间：2018-08-03T16:07:33.007Z 来源：《心理医生》2018年7月19期作者：李建平 [导读] 探究并分析子宫平滑肌收缩功能的变化与产后出血的关系 李建平 （中宁县人民医院宁夏中卫 755100） 【摘要】目的：探究并分析子宫平滑肌收缩功能的变化与产后出血的关系。方法：选取我院2017年1月—2018年2月收治的108例出现产后出血的患者作为研究对象，回顾性分析患者出现产后出血的原因，并找出与子宫平滑肌收缩功能的关系。结果：108例产后出血的患者中，宫缩乏力是最主要的病因，有77例（71.30%），其次是胎盘因素导致的，有15例（13.89%）。精神紧张所致宫缩乏力的有25例（31.65%），子宫过度膨胀导致宫缩乏力的有15例（18.99%），产程过长导致宫缩乏力的有27例（34.18%），在分娩前使用子宫收缩抑制剂的有12例（15.19%）。结论：子宫平滑肌收缩功能的降低会导致子宫收缩乏力，从而造成产后出血。应在分娩前和术中术后积极预防宫缩乏力，保持子宫平滑肌收缩功能的正常。 【关键词】平滑肌收缩功能；产后出血；关系研究 【中图分类号】R714 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）19-0158-02 产后出血是当前我国产妇死亡的最主要原因，主要表现为产后24小时内出血量大于500ml[1]。因此正确区分其早期致病因素与预后有重要的关系。一般来说，产后出血常与子宫收缩乏力、凝血障碍、炎症、软产道损伤以及患者的精神因素等有关[2]，其中子宫收缩乏力是最主要的因素。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取我院2017年1月—2018年2月收治的108例足月妊娠分娩并伴有产后出血的患者作为研究对象，所有患者均签署知情同意书。其中剖宫产手术71例，自然分娩37例，患者年龄21～36岁，平均（26.59±3.24）岁，BMI指数26.45±2.87，孕周（38.54±1.21）周，新生儿体重（3.054±0.498）kg。产后24小时内出血86例，产后24小时～14天出血22例，出血量750～3300ml。 1.2 方法 判定产后出血的标准是：分娩后24小时内出血超过500ml。 手术后发生出血的患者，应使用科学合理的方法测量出血量。①容积法：使用量具直接收集产妇出血，并进行读数和记录。②面积法：通过产妇所使用的敷料被出血污染的面积进行计算。③称重法：称量出血前后所使用的纱布、卫生垫等重量，计算差值即为出血的重量，再根据重量计算血液的体积。本研究选择使用称重法和容积法综合测定计算得出产后出血量。 1.3 数据处理 本研究数据的计数资料使用率表示。 2.结果 108例产后出血的患者中，宫缩乏力是最主要的病因，有79例（73.15%），其次是胎盘因素导致的，有15例（13.89%）。产道裂伤和凝血障碍各6例（5.56%），由于子宫破裂导致产后出血的病例数较少，只有2例（1.85%）。在宫缩乏力的患者中，精神紧张所致的有25例（31.65%），子宫过度膨胀的有15例（18.99%），产程过长导致宫缩乏力的有27例（34.18%），在分娩前使用子宫收缩抑制剂的有12例（15.19%）。 3.讨论 本研究所得出的导致产后出血病因的情况中子宫收缩乏力占比最多，为73.15%，精神紧张、子宫膨大和产程过长是导致子宫收缩乏力的主要因素，这与以往研究的结果是一致的，即宫缩乏力是导致产后出血的最主要因素。其可能的原理是：子宫和胎盘的剥离面在产后会出现许多血窦，宫缩乏力使这些血窦不能收缩和闭合，成为开放性创口，导致血液大量涌出造成产后出血[3]。子宫收缩乏力与子宫平滑肌收缩功能关系密切，由于子宫的肌肉部分占比较大，因此所有可能会影响子宫平滑肌的收缩功能的因素都可能导致子宫收缩乏力，进而引起产后出血。生理学上肌肉的收缩与信号转导和信息因子有关，有研究显示子宫平滑肌组织中的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路和MAPK激活后的靶物质CS43蛋白参与影响子宫平滑肌的收缩功能[4]。ERK1/2参与细胞间的信号转导，CX43蛋白作为靶物质对细胞的生长繁殖起重要作用。各种因素综合作用共同预防着产后出血的发生。子宫收缩是受到下丘脑分泌的催产素的影响，催产素通过与其受体结合，激活钙通道的开放，使细胞内游离钙离子浓度迅速增加，激活收缩蛋白，使子宫平滑肌收缩能力增加，压迫子宫壁的血管，使血窦闭合，减少血液涌出，即减少产后出血量[5]。临床分娩过程中经常给与患者的缩宫素就是人工制成的催产素，对子宫平滑肌有直接的刺激收缩功能,在减少产后出血方面有一定功效。 对于子宫收缩乏力，需要在分娩前和分娩中采用适当的药物和操作干预来刺激平滑肌生理功能，孕妇在孕期注意增加适当的运动，防止营养过剩造成巨大儿，分娩中既要防治产妇休克，也要进行适当的按摩和子宫收缩剂的使用，同时对产妇进行精神疏导，使其降低压力并提升自信心，主动配合术中护理进行科学的呼吸和用力，以维持和促进平滑肌的收缩功能。 本研究发现子宫收缩乏力占所有导致产后出血因素的最主要部分，而精神紧张、子宫膨大和产程过长是导致子宫收缩乏力的主要因素。产妇精神紧张、胎儿巨大和手术过程持续较长都会增加分娩中的危险，使产妇体力消耗增多，影响产妇子宫平滑肌收缩功能，从而导致宫缩乏力性产后出血。在今后的临床中，要注意预防任何可能影响子宫平滑肌收缩功能的因素，并做出及时有效的应对。 【参考文献】 [1]劳力,张婷.宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌自发性收缩功能变化及产后出血关系研究[J].中国妇幼保健,2018(2). [2]黄科华,颜建英,林顺和,等.子宫平滑肌中缝隙连接变化及CX43表达与子宫收缩乏力性产后出血关系的研究[J].中国卫生标准管理,2016,7(23):40-43. [3]李瑞平,刘礼兰,魏海云,等.子宫收缩乏力性产后出血的防治研究[J].中国现代药物应用,2017,11(7):122-123.

Calponin_1表达沉默对子宫平滑肌细胞生物学行为的影响

Calponin-1表达沉默对子宫平滑肌细胞生物学行为的影响 谷永红1，周昌菊2，胡灵玉2，陈倩1，张卫社3（中南大学湘雅三医院1病理科，2妇产科，湖南长沙410013；3中南大学湘雅医院妇产科，湖南长沙410008） 摘要：目的研究抑制calponin-1表达对人子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡和细胞骨架的影响，探讨妊娠时人子宫平滑肌细胞中calponin-1蛋白表达上调在分娩发动中的作用机制。方法构建腺病毒siRNA-calponin-1质粒，转染原代培养的人子宫平滑肌细胞，分别用四甲基偶氮唑蓝（MTT ）、Transwell 侵袭实验和流式细胞术（AnnexinV/PI 双染法）检测转染siRNA-calponin-1前后对子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响；同时用Rhodamine-Phalloidin 标记子宫平滑肌细胞骨架蛋白（F-actin ），荧光显微镜观察其变化并进行荧光定量检测。结果实验组与空载体组、空白对照组比较，子宫平滑肌细胞的运动能力明显下降（P <0.05），细胞增殖能力及凋亡率无明显差异（P >0.05）；空载体组与空白对照组比较，差异无统计学意义(P >0.05)。实验组子宫平滑肌细胞中F-actin 的含量减少，排列松散、不规则、微丝较细；空载体组、空白对照组子宫平滑肌细胞中F-actin 微丝明显增多增粗、呈束状平行排列。结论体外实验表明抑制calponin-1的表达可以抑制子宫平滑肌细胞的运动而不影响其增殖和凋亡，并可引起子宫平滑肌细胞F-actin 的形态变化与重排。此结果提示：妊娠时子宫平滑肌细胞迁移能力的改变及F-actin 的重排，可能是导致分娩发动的重要机制之一。关键词：calponin-1；RNA 干扰；分娩发动中图分类号：R329.28 文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2010)06-1369-04 Effects of calponin -1gene silencing on the biological behavior of uterine smooth muscle cells GU Yong-hong 1,ZHOU Chang-ju 2,HU Lin-yu 2,CHEN Qian 1,ZHANG Wei-she 3 1 Department of Pathology, 2 Department of Obstetrics and Gynecology,Third Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 410013,China;3Department of Obstetrics and Gynecology,Xiangya Hospital,Central South University ,Changsha 410008,China Abstract:Objective To study the effects of calponin-1expression inhibition on the proliferation ,invasiveness,apoptosis and cytoskeleton of uterine smooth muscle cells,and explore the molecular mechanism of calponin-1in the uterine smooth muscle cells for labor onset.Methods siRNA-calponin-1adenovirus plasmid was constructed and transfected into primarily cultured uterine smooth muscle cells.The proliferation,invasiveness and apoptosis of the cells were determined by MTT assay,matrigel invasion assays and flow cytometry,respectively.Rhodamine-Phalloidin was used for labeling filamentous actin (F-actin),and the morphology and the distribution of F-actin was observed under fluorescence microscopy and analyzed quantitatively.Results The motor ability of uterine smooth muscle cells decreased significantly after transfection with siRNA-calponin-1adenovirus plasmid (P <0.05).The transfected cells showed thinner,loosened and irregular F-actin microfibers,and the cells in the empty vector and blank control groups showed thicker and longer F-actin microfibers.Conclusion Inhibition of calponin-1expression can inhibit uterine smooth muscle cell migration and cause the morphological change and rearrangement of F-actin without affecting its proliferation and apoptosis in vitro ,suggesting that the morphological change and rearrangement of F-actin of uterine smooth muscle cell may be one of the important mechanisms in the labor onset. Key words:calponin-1;small interfering RNA ;labor onset calponin-1是平滑肌能量和信号传递系统的重要 组成部分。它主要的功能包括调节平滑肌收缩、抑制细胞增生、参与细胞信号转导和维持细胞骨架等。我们在前期的研究中发现，calponin-1在分娩活跃期子宫体部与子宫下段平滑肌细胞中表达均上调，由此推测calponin-1与分娩发动后子宫平滑肌的收缩有必然联系，可能是分娩发动的调节因子。我们应用RNA 干扰（RNA i ）技术构建calponin-1重组腺病毒质粒，并转染原代培养的人子宫平滑肌细胞，观察抑制 calponin-1表达对子宫平滑肌细胞生物学行为的影 响，进一步探讨妊娠时人子宫平滑肌细胞中 calponin-1蛋白表达上调在分娩发动中的作用机制。1材料与方法1.1材料 细胞培养、质粒构建及细胞转染等所用材料及试剂见参考文献［1-2］。其他主要试剂：Transwell 小室 (Corning Costar ，美国)，四甲基偶氮唑蓝（MTT ）（Amresco ，美国），AnnexinV-Cy5/PI Assay Kit （深圳晶 收稿日期：2009-12-05 基金项目：湖南省科技计划项目（2008SK3116） 作者简介：谷永红（1966-），女，博士，副主任医师，E-mail:guyonghong 0815@https://www.360docs.net/doc/93190650.html, 通讯作者：周昌菊，女，主任医师，E-mail:huangdong6619@https://www.360docs.net/doc/93190650.html, 2010;30(6)南方医科大学学报(J South Med Univ) 1369··