(整理)触酶试验氧化酶试验

触酶试验

(1)原理：

触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

(2)方法：

取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。

(3)结果：

若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

(4)应用：

大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。注意事项：

①3％H2O2溶液要新鲜配制。②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。③取对数生长期的细菌。

氧化酶试验

（1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。（2）试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。

（3）方法：常用方法有三种；

1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。

2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。

3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

（4）结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)

2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红

0.3g 95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL

2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。美蓝0.3g；95%乙醇 30mL；0.01%氢氧化钾溶液 100mL；将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.3.4 染色法

2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。

2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。

2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。

2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。

抗酸染色一般步骤

1）初染

用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

2）脱色

3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。

3）复染

用碱性美兰溶液复染1分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。

苯酚、美蓝、盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺、双氧水