动物肝脏中DNA的提取

南京大学医学院生化实验报告———————————————————————————

动物肝脏中DNA的提取

一实验目的

1.学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术

2.了解分离提取DNA的一般原理

二实验原理

一、核酸提取的主要步骤：

1.破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声波、冻融；一硫氰酸胍、碱裂解；酶解（溶菌酶）

2.除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子：酚/氯仿抽提、蛋白质变性（SDS、异硫氰酸胍等）、蛋白酶处理、高盐洗涤

3.除去其他不需要的核酸分子

4.沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质

二、提取DNA的注意事项

1.避免过酸、过碱及高温

2.加入DNA酶抑制剂：柠檬酸、氰化物、砷酸盐、EDTA、SDS、苯酚等

3.蛋白变性剂反映不宜过于剧烈，以防机械张力使核酸链破坏。

4.加入RNA降解酶除RNA

三、DNA的主要来源

1.动物组织及器官：脾、肝、胸腺、鱼类精子等。

2.植物：种子的胚芽等

3.微生物：细菌、酵母菌等

核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。

生物体组织细胞中的脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），大部分与蛋白质结合，以核蛋白——脱氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）的形式存在，这两种复合物在不同的电解质溶液中的溶解度有较大差异。在低浓度的

将抽提得到的DNP用十二烷基硫酸钠（SDS）处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异丙醇将蛋白质沉淀除去，而DNA溶于溶液中，加入适量的乙醇，DNA即析出，进一步脱水干燥，即得白色纤维状的DNA粗制品。为了防止DNA(或RNA)酶解，提取时加入乙二胺四乙酸(EDTA)。大部分多糖在用乙醇或异丙醇分级沉淀时即可除去。DNA中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应。

制备过程应在低温下（4度）进行，防止过酸，过碱及其他引起核降解的因素。必要时加入酶抑制剂（柠檬酸、EDTA等可以抑制DNA酶活性，SDS或苯酚等蛋白质变性剂可以使核酸降解酶破坏）

动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。在核酸分子中，由于磷酸基的存在，使其酸性占优势，DNA或RNA都能溶于水中，而不溶于有机溶剂。用络合剂EDTA抑制核酸水解酶的活力, 同时用去污剂SDS把蛋白质和DNA分开,再用氯仿-异丙醇作为蛋白质的变性剂沉淀蛋白质, 最后用乙醇

把DNA沉淀出来。

三实验器材

1. 捣碎机

2. 离心机

3. 手术剪

4. 离心管

5. 刻度吸管

6. 烧杯（100ml，250ml）

7. 玻棒

8. 新鲜动物肝脏

9.石英比色皿

10.量筒（10ml，100ml）

11.容量瓶（50ml）

四实验试剂

1、0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液（pH6.8）。

2、0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液：氯化钠0.828克及柠檬酸三钠0.341克溶于蒸馏水，稀释至1000ml。

3、95%乙醇（A.R.）。

4、NaCl固体（A.R.）。

5、5%SDS溶液：5gSDS溶于100ml水中。

6、氯仿（A.R.）。

7、V（氯仿）：V（异戊醇）混合液20：1

五实验操作

1）粗提

1．称取猪肝8g于100ml的小烧杯中，用剪刀剪碎，加入2倍重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液（16ml），高速匀浆。

2．将匀浆液（~25ml）转移到100ml离心管中，在4000r/min下离心10min，弃去上清液。沉淀中继续加入25ml缓冲液，搅拌均匀后于4000r/min离心20min，

取沉淀。

2）分离DNP、除蛋白

3．将上述沉淀转移至250ml烧杯中，加入40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、21ml氯仿/异戊醇、4ml5%SDS，用保鲜膜封口，振摇30min。

4．缓慢加入3.6gNaCl（事先在研钵中研成粉末）使体系终浓度为1mol/L。将混合液转移至离心管中于3500r/min离心20min，取上清水相（用滴管吸取并量体积）。

3）沉淀DNA

5．在水相中加入等体积95%乙醇，边加边用玻璃棒朝一个方向慢慢搅动直至溶液澄清，将DNA凝胶缠绕在玻璃棒上，用滤纸吸去多余的乙醇，得DNA粗品。【注】用玻棒缠绕DNA有困难时，亦可缓慢摇动烧杯以助于DNA聚集。6．将DNA粗品用5mmol/L NaOH溶解并定容至50ml，作为待测样品。

六注意事项

1、匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。

2、固体NaCl应磨碎，加入应分批慢慢加入，且边加边摇，避免局部浓度过大或未及溶解而沉入氯仿层。

3、变性蛋白质层易散，吸取上清液时应仔细，不要将蛋白质及下层的氯仿吸入。

4、实验结束后将变性蛋白质（肝糜）小心取出置于专用废物袋中，氯仿倒入回收瓶内。

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告(肝相关类)

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。 DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA 的解螺旋。在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；

而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。脱氧核糖核酸的结构 DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA（信使RNA）的核酸分子。 DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA 和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些

动物肝脏中提取DNA

动物肝脏中提取DNA 【实验目的】 1.掌握肝脏DNA分离的原理及操作过程 2.掌握主要试剂的作用 3.熟悉DNA纯度及含量鉴定方法【实验原理】动物肝脏。小牛胸腺和鱼类精子含有较多的DNA，是提取DNA的良好材料。动植物的DNA室以核蛋白的形式存在于生物体中（主要在核内），DNA核蛋白（DNP)在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度很低，近视它在纯水中的1%。，而在1mol/L NaCl溶液中，其溶解度至少是纯水中的二倍。相反，核糖核蛋白（RNP）能在0.15mol/L NaCl溶液中溶解。利用这一性质，可使脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白分开。制备过程中，当细胞破碎时，脱氧核糖核酸酶的活性增加，DNA将遭受降解，为此在提取液中加入柠檬酸盐、EDTA做抑制剂，并要求整个提取操作在4℃以下进行，以减少酶对DNA的破坏。分离得到的DNP，进一步用十二烷基硫酸钠（SDS）使蛋白质变性，用含有异丙醇的氯仿除去变性蛋白，最后用95%的冷乙醇从溶液中把DNA沉淀出来。 DNA纯度可以通过A260/A280进行鉴定，而浓度可以用紫外吸收法、定磷法、二苯胺显色法测定。【实验操作】 1．取新鲜猪肝脏，除去血水和结缔组织，在冰浴上切成小块，称取10g，加入2倍体积（20ml）0.15mol／L NaCl－0.015mol／L枸橼酸钠缓冲溶液，于组织捣碎机中迅速捣成匀浆，再以玻璃匀浆器2～3次使细胞破碎，最后加缓冲液至50ml。 2.组织匀浆移入离心管内，浸入冰盐溶液中冷却，而后在4℃下6000r／min离心5～10min。弃上清（可用于制备RNA）。将沉淀用2倍体积的冷的上述缓冲液洗涤2次，洗涤时用匀浆器研磨洗涤，离心条件同上。 3．将离心后所得沉淀物悬于5倍体积的0.15mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA-Na2（pH8.0）溶液中，而后边搅拌边慢慢滴加5％SDS溶液，直至SDS的最终浓度达到1%为止。然后加入固体NaCl，使其最终浓度达1mol/L。继续不断搅拌30～45min，以确保NaCl

动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中D N A的提取及检测实验报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic?acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。 DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。脱氧核糖核酸的结构

DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA（信使RNA）的核酸分子。 DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。浓盐法从动物组织中提取DNA 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14 M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于

实验6 动物肝脏中DNA的提取

实验六：动物肝脏中DNA的提取及定量测定一、实验目的 1、学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。 2、了解常见生化组分提取技术。 3、学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。二、实验原理核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形成存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及胞质中，在制备核酸时应防止过酸、过碱及其他能引起核酸降解的因素的作用。全部操作过程应在低温下(4℃)进行，必要时还要加入酶抑制剂。如柠檬酸、氰化物、砷酸盐、乙二胺四乙酸(EDTA)等可以抑制DNA酶活性，皂土可抑制RNA酶活性，同时SDS 或苯酚等蛋白变性剂也可使核酸降解酶破坏。动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液(如1mol/L NaCl)，但在0.14mol/L的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/L盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA即呈纤维状沉淀出来。 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成w-羟基-r-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物(λmax=595nm)。 DNA(脱氧戊糖基) [H+]HO-CH2-C(=O)-CH2-CH2-CHO 二苯胺蓝色化合物在DNA浓度为20~200μg/ml范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。三、实验器材猪肝，分光光度计（595nm），比色杯，匀浆器，量筒（50ml、10ml），离心机(5000r/min)，离心管，试管及试管架，移液管（1.0ml、2.0ml、5.0ml），恒温水浴锅四、实验试剂氯化钠，柠檬酸钠，95%乙醇，SDS，氯仿，异戊醇，二苯胺试剂，DNA标准溶液（200μg/m1），二苯胺试剂等。五、实验操作 1、配制溶液： 0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液（2.925g氯化钠，20.85g柠檬酸钠，溶解于500mL 蒸馏水）。氯仿-异戊醇混合液：按照体积比20:1配制500mL。 5％SDS溶液：10g SDS溶于200ml水中。二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70％乙醇中重结晶2次）5克溶于500ml 分析纯的冰醋酸中，再加入50ml过氯酸(A.R，60％以上)，混匀待用。当所用药品纯净时，配得试剂应为无色。临用前加入5ml 1.6％乙醛溶液(乙醛溶液应保存于冰箱中，一周内可使用)，贮于棕色瓶。 2、称取猪肝2g，用匀浆器磨碎(冰浴)，加入4ml的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物，匀浆物在4000r/min下离心10min，弃上清；沉淀中再加入6ml缓冲液，于4000r/min离心10min；取沉淀。

动物肝脏中DNA得提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA得提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸(DNA,为英文Deoxyribonucleic acid得缩写),又称去氧核糖核酸,就是脱氧核糖核酸染色体得主要化学成分,同时也就是组成基因得材料。有时也被称为“遗传微粒”,原因就是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA得一部分复制传递到子代中,从而完成性状得传播。 DNA就是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高得粘度,可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来得水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间得氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA 得解螺旋。在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言,正常得体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中得拟核内。染色体上得染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助

DNA与其她蛋白质进行交互作用,进而调节基因得转录。脱氧核糖核酸得结构 DNA得结构: DNA得结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构与四级结构四个水平。 DNA就是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP 脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP 脱氧胸苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP 脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP 脱氧鸟苷)。而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里得其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成得序列,可组成遗传密码,指导蛋白质得合成。读取密码得过程称为转录,就是以DNA双链中得一条单链为模板转录出一段称为mRNA(信使RNA)得核酸分子。 DNA就是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’, 5’-磷酸二酯键相连构成得长链。大多数DNA含有两条这样得长链,也有得DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA与链状DNA之分。在某些类型得DNA中,5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚DNA得5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中,5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期,查加夫(E、Chargaff)发现不同物种DNA得碱基组成不同,但其中得腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数(A=T),鸟嘌呤数等于胞嘧啶数(G=C),因

动物肝脏中DNA的提取

实验报告实验课程：动物肝脏中DNA的提取学生姓名：15级学长学号：560311xxxx 专业班级：食科xxx班 2017年 5 月 2 日

实验背景： DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。真核生物基因组DNA广泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中.无论是基因工程,还是蛋白质工程,核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象,所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术.哺乳动物DNA的分离通常是在存在EDTA及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提蛋白质而实现的一、实验目的学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术。二、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离成DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

DNA遇二苯胺（沸水浴）会生成蓝色物质，因此可用二苯胺鉴定DNA。三、实验仪器和材料 1、实验仪器 ①量筒②离心机③离心管④移液枪⑤恒温水浴锅⑥研钵⑦电子天平 2、实验试剂和材料 ①新鲜猪肝②0.1mol/L NaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠溶液③95%乙醇④NaCl固体⑤5%SDS溶液⑥V(氯仿)：V（异戊醇）20：1的混合液四、实验步骤 1、称取 2.2g质量的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用碾砵磨碎；将匀浆倒入两个10毫升离心管中，在4000r/min下离心10min ，沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；弃上清，取沉淀。 2、向沉淀中加入檬酸钠缓冲液至10ml，摇匀后将溶液平均分装到2个10毫升离心管中。每个管分别加入2.5 ml 氯仿-异戊醇

动物肝脏中dna的提取及检测实验报告精编WORD版

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动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

动物肝脏中DNA勺提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA为英文Deoxyribo nucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA勺一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。 DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA寸紫外线（260nm有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开一也称为DNA 的解螺旋。在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其

他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。脱氧核糖核酸的结构 DNA勺结构：DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRN（信使RNA 的核酸分子。 DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3', 5'-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA 为单链，如大肠杆菌噬菌体? X174 G4 M13等。DNA有环形DNA 和链状DNA之分。在某些类型的DNA中, 5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA勺5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff ）发现不同物种DNA勺碱基组成不同，但其中的腺嘌呤

动物肝脏DNA的提取

动物肝脏DNA 的提取点击： 440 作者：来源：时间： 2007-03-07 本站论坛一、目的：了解分离提取DNA 的一般原理，掌握从动物肝脏中提取DNA 的方法。二、原理：在浓氯化钠（1—2mol·L -1）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠（0.14mol·L -1）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。将抽提得到的核蛋白用SDS （十二烷基磺酸钠）处理，DNA （或RNA ）即与蛋白质分开，可用氯仿一异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA 则溶解于溶液中。向溶液中加入适量乙醇，DNA 即析出。为了防止DNA （或RNA ）酶解，提取时加EDTA （ethy-lenediamine tetracetic acid ，乙二胺四乙酸）。三、器材及试剂： 1．器材： ①新鲜猪肝（一次用不完一定要冷冻保存） ②匀浆器 ③离心机5000r·min -1 ④量筒50ml （×1）、10ml （×1） ⑤水浴锅 ⑥纱布 ⑦真空干燥器 2．试剂： ①5mol·L -1 NaCl 溶液：将292.3gNaCl 溶于水，稀释至1000ml 。 ②0.14mol·L -1 NaCl-0.10mol·L -1 EDTA-Na 溶液：溶8.18gNaCl 及37.2gEDTA-Na 于蒸馏水，稀释至1000ml 。四、操作步骤： 1．取猪肝20~30g ，用适量0.14mol·L-1NaCl-0.10mol·L -1 EDTA 溶液洗去血液，剪碎，加入约30~50ml0.14mol·L -1 NaCl-0.10mol·L -1 EDTA 溶液，置匀浆器或研钵中研磨，研磨一定要充分，待研成糊状后，用单层纱布滤去残渣，将滤液离心10分钟（4000r·min-1）弃去上清液，沉淀用0.14mol·L-1NaCl-0.10mol·L -1 EDTA 溶液洗二、三次。所得沉淀为脱氧核糖核蛋白粗制品。 2．向上述沉淀物加入0.14mol·L -1 NaCl-0.10mol·L-1EDTA 溶液，使总体积为37ml ，然后滴加25%SDS 溶液3ml ，边加边搅拌。加毕，置60℃水浴保温10分钟（不停搅拌）溶液变得粘稠并略透明，取出冷至室温。此步操作系使核酸与蛋白质分离。 3．加入5mol·L -1 NaCl 溶液10ml ，使NaCl 最终浓度达到1mol·L -1，搅拌10分钟，加入约一倍

动物肝脏中dna的提取及检测实验报告

动物肝脏中d n a的提取及检测实验报告 This model paper was revised by LINDA on December 15, 2012.

动物肝脏中DNA的提取

南京大学医学院生化实验报告——————————————————————————— 动物肝脏中DNA的提取一实验目的 1.学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术 2.了解分离提取DNA的一般原理二实验原理一、核酸提取的主要步骤： 1.破碎细胞：研磨、组织匀浆、超声波、冻融；一硫氰酸胍、碱裂解；酶解（溶菌酶） 2.除去与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子：酚/氯仿抽提、蛋白质变性（SDS、异硫氰酸胍等）、蛋白酶处理、高盐洗涤 3.除去其他不需要的核酸分子 4.沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质二、提取DNA的注意事项 1.避免过酸、过碱及高温 2.加入DNA酶抑制剂：柠檬酸、氰化物、砷酸盐、EDTA、SDS、苯酚等 3.蛋白变性剂反映不宜过于剧烈，以防机械张力使核酸链破坏。 4.加入RNA降解酶除RNA 三、DNA的主要来源 1.动物组织及器官：脾、肝、胸腺、鱼类精子等。 2.植物：种子的胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。生物体组织细胞中的脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），大部分与蛋白质结合，以核蛋白——脱氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）的形式存在，这两种复合物在不同的电解质溶液中的溶解度有较大差异。在低浓度的

NaCl溶液中，DNP的溶解度随NaCl浓度的增加而逐渐降低，当NaCl浓度达到0.14mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的1%（几乎不溶）；但当NaCl 浓度继续升高时，DNP的溶解度又逐渐增大，当NaCl浓度增至0.5mol/L时，DNP的溶解度约等于纯水中的溶解度，当NaCl浓度继续增至1.0mol/L时，DNP 的溶解度约为纯水中溶解度的2倍（溶解度很大）。而RNP则不一样，它在浓NaCl溶液和稀NaCl溶液中的溶解度都很大。因此，可以利用不同浓度的NaCl 溶液将DNP和RNP分别抽提出来。在低浓度的NaCl溶液中，DNP的溶解度随NaCl浓度的增加而逐渐降低，当NaCl浓度达到0.14mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的1%（几乎不溶）；但当NaCl浓度继续升高时，DNP的溶解度又逐渐增大，当NaCl浓度增至0.5mol/L时，DNP的溶解度约等于纯水中的溶解度，当NaCl浓度继续增至1.0mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的2倍（溶解度很大）。而RNP则不一样，它在浓NaCl溶液和稀NaCl溶液中的溶解度都很大。因此，可以利用不同浓度的NaCl溶液将DNP和RNP分别抽提出来。将抽提得到的DNP用十二烷基硫酸钠（SDS）处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异丙醇将蛋白质沉淀除去，而DNA溶于溶液中，加入适量的乙醇，DNA即析出，进一步脱水干燥，即得白色纤维状的DNA粗制品。为了防止DNA(或RNA)酶解，提取时加入乙二胺四乙酸(EDTA)。大部分多糖在用乙醇或异丙醇分级沉淀时即可除去。DNA中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应。制备过程应在低温下（4度）进行，防止过酸，过碱及其他引起核降解的因素。必要时加入酶抑制剂（柠檬酸、EDTA等可以抑制DNA酶活性，SDS或苯酚等蛋白质变性剂可以使核酸降解酶破坏）动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。在核酸分子中，由于磷酸基的存在，使其酸性占优势，DNA或RNA都能溶于水中，而不溶于有机溶剂。用络合剂EDTA抑制核酸水解酶的活力, 同时用去污剂SDS把蛋白质和DNA分开,再用氯仿-异丙醇作为蛋白质的变性剂沉淀蛋白质, 最后用乙醇

动物肝脏DNA的提取

动物肝脏DNA的提取一．实验目的学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术二．实验原理核酸和蛋白在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存在细胞核中，RNA主要存在于核仁和细胞质中，在制备核酸时应防止过酸、过碱及其它引起核酸降解的因素。必要时还要加入DNA酶抑制剂。动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液（1~2mol/L NaCl），将抽提得到的脱氧核糖核蛋白用SDS（十二烷基硫酸钠）处理，DNA即与核蛋白分开，可用氯仿—异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解于溶液中。向含有DNA的水相中加入冷乙醇，DNA 即成纤维状沉淀出来。含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热10分钟后，产生蓝色这是因为DNA嘌呤核苷酸的脱氧核糖遇酸生成酮基戊醛。它再和二苯胺作用产生蓝色物质。三．实验试剂和器材器材：动物肝脏、离心机、试管、离心管、玻璃棒试剂：0.1mol/L氯化钠—0.05mol/L柠檬酸钠缓冲溶液、氯仿—异戊醇混合液（20：1）、5%SDS、95%乙醇、二苯胺试剂、固体NaCl. 四．实验操作 1.称去肝脏4g，放在培养皿中，用剪刀剪碎，再研磨6次，并分6次加入6ml氯化钠—柠檬酸缓冲溶液，装在10ml的离心管中。将匀浆物放在4000r/min下离心10min。 2.把上述沉淀转入20ml大试管中，加入6ml氯化钠—柠檬酸钠缓冲液、3ml氯仿—异戊醇混合液、0.5mlSDS使其浓度为0.41%，手摇15min，然后缓慢加入NaCl（约0.55g）使其终浓度为1ml/L。慢摇5min，使氯化钠充分溶解。 3.将上述混合液在4000r/min离心15min，取上清液于50ml烧杯中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻璃棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品。（注意不要让样品过分干燥）用蒸馏水溶解至2ml。 4.显色反应：取反应物2ml加入二苯胺试剂2ml放沸水浴显色，观察颜色。五．实验结论显色反应：DNA水溶液加入2ml的二苯胺试剂后，将试管放进沸水浴中，约5min,试管的试剂显出蓝色。说明实验成功。

动物肝脏中DNA的提取和鉴定

动物肝脏中DNA的提取和鉴定一、实验目的 1.学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。 3.学习核酸染色的方法。二、实验原理为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等。 1.DNA的基本功能生物遗传信息复制的模板和基因转入的模板，是生命遗传繁殖的物质基础，也是个体生命活动的基础；作为DNA分子中的某一区段，有复制、转录和翻译等主要功能称为基因。 2.核酸的结构与功能核酸（nucleic acid)是以核苷酸为基本组成的生物大分子。天然存在的核酸有两类，一类为脱氧核苷酸（deoxyribonucleic acid,DNA)，另一类为核糖核酸（ribonucleic acid,RNA)。DNA存在于细胞核和线粒体中，携带遗传信息。RNA存在于细胞质和细胞核内，参与细胞内DNA遗传信息的表达。 3.DNA的存在形式天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在于细胞核中。要从细胞核中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖、RNA及无机离子等，从中分离DNA。DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中几乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中溶解度很大，比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此在提取时