标准蛋白曲线制作 标准蛋白曲线
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
一、标准曲线
一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、蛋白质含量测定方法
1、凯氏定氮法
2、双缩脲法
3、Folin-酚试剂法
4、紫外吸收法
5、考马斯亮蓝法
三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作
（一）、试剂
1、考马斯亮蓝试剂
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%
H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。
2、标准蛋白质溶液
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材
1、722S型分光光度计。
2、移液管。
（三）、标准曲线制作
试管编号0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白（ml）0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml）0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂（ml）0 0 0 0 0 0 0
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
1、A595nm
2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
1）、利用标准曲线查出回归方程。
2）、用公式计算回归方程。
3）、或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6 一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。
4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。
（四）、蛋白质含量的测定
样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm 值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
（五）、注意事项
1、玻璃仪器要洗涤干净。
2、取量要准确。
3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
4、对照用被测物质以外的物质作空白对照。
药品的配制（磷酸缓冲液的配制）
一、药品的配制步骤
（一）、实验准备
1、准备所需的药品和玻璃仪器。
2、洗涤。（怎样洗涤算干净？）
（二）、计算
1、百分比浓度计算
1)、G/V比
例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。
2）、V/V比
例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇，加25ml蒸馏水。
乙醇乙醚丙酮=212配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。
3）G/V比用的较少，如计算灰分中某种元素
如Fe的含量。
2、摩尔浓度计算注药品的分子量一般在标签中注明。
1）、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。
M=质量/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩尔数=G（g）/摩尔质量
2）、0.1mMNaCl配100ml
mM=毫摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g
毫摩尔数=G（mg）/摩尔质量
3）、0.1uNaCl配100ml
mM=微摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg
微摩尔数=G（ug）/摩尔质量称取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug
3、混合溶液配制的计算
如配3uMEDTA，25mM NBT以及60uM 溶液100ml，用50mM磷酸缓冲液配制。
注意1、分别标定体积计算
2、分别配制再混合，但总体积不能为100ml
（三）、标量
1、根据需要选择不同量程的天平根据要求去不同精度的测量器，如量筒或移液管。
2、电子分析天平。
（四）、溶解
1、根据药品配置要求选择溶剂。蒸馏水，双蒸水，无离子水等。
2、只能用烧杯溶解。注意加入溶剂只能加入总体积的2/3左右，剩余溶剂洗涤烧杯三次左右，直到洗涤干净。
小常识药品标签中一般标识有药品的溶解性能和分子式，可根据分子式和所学的常识判断药品的结构和性质特点（包括溶解性质）。
如酸碱两性物质的配制（AA、蛋白质、核苷酸等）如果溶解性能不好可以用稀酸或稀碱促进溶解，但pH应在被要求的范围内。
3、加热促进溶解，但注意应在配制的范围内有的药品还需水溶加热较好。如:配0.1%的淀粉，水裕加热（温度在80-90。C），过量会糊化。
（五）、定容
1、用容量瓶定容；
2、用玻璃棒引流或用小漏斗；
3、用溶剂加入到接近刻度，然后用滴管加入到刻度。要求刻度与液体凹面相切为止（眼睛可视）；
4、上下窑洞容量瓶几次，混合均匀即可。(注意不再定容了，防止溶液漏掉。)
（六）、装入试剂瓶，贴上标签。
标签应注明以下内容药品浓度、名称、配制人、配制日期等。（七）、清理实验场所。
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 2、标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。 （二）、器材： 1、722S型分光光度计使用及原理（）。 2、移液管使用（）。 （三）、标准曲线制作： 1、 2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、
40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。 1）、利用标准曲线查出回归方程。 2）、用公式计算回归方程。 3）、或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=a×X( )+6 一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。 4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。 （四）、蛋白质含量的测定： 样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1操作，测出样品的A595nm，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。 一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。 （五）、注意事项： 1、玻璃仪器要洗涤干净。 2、取量要准确。 3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。 4、对照：用被测物质以外的物质作空白对照。
牛血清蛋白标准曲线定制
00.20.40.60.8 2 4 6 8 10 12 14 牛血清蛋白的显色浓度μg/ml A 595处吸光度 A595nm处测得的吸光度 回归方程对应的吸光度 表一 考马斯亮兰G250染色法测定牛血清蛋白标准曲线家养表及样品595nm 处测得的OD 值 项目 试管 编号 1 2 3 4 5 6 7 样1 样2 100μg/mL 牛血清蛋白溶液 /ml 0.00 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 1.00 1.00 各管中血清蛋白显色浓度 μg/mL 0.00 3.33 5.00 6.67 8.33 10.0 11.67 13.33 考马斯亮兰试剂ml 各加 入5ml 后摇匀 3分钟后 开始测 定20分 钟测完 A595处测定各管OD 值 0.000 0.186 0.277 0.365 0.451 0.527 0.596 0.664 0.398 0.404 表二 考马斯亮兰G250染色定制牛血清蛋白标准曲线数据处理统计表 项目 试管 编号 1 2 3 4 5 6 7 牛血清蛋白标准显色浓度 μg/mL 0.00 3.33 5.00 6.67 8.33 10.0 11.67 13.33 A595处测定的OD 值 0.000 0.186 0.277 0.365 0.451 0.527 0.596 0.664 回归方程对应浓度下的OD 值 0.0192 0.185 0.269 0.352 0.435 0.518 0.602 0.684 线性回归方程斜率 0.0192 线性回归方程截距 0.0499 线性回归方程 y=0.0499x+0.0192 实验数据的相关因素 0.9960
蛋白质的定量法与标准曲线的制备
蛋白质的定量法与标准曲线的制备 A. Folin-phenol(lowry method)定量法 此法以Biuret方法反应为基础发展而起，因此会严重干扰Biuret测定方法的因 子都会影响此测定法的准确度。这些干扰因子包括：含-CS-NH2，-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CH2-NH-CHNH2-CH2OH，-CHOH-CH2NH2等基团的物质以及 缓冲剂如Tris、蔗糖、低浓度的酚类、柠檬酸等，但低浓度的尿素、硫酸胺可以增加碳酸钠-氢氧化钠的浓度来校正显色结果。1951年Lowry对于 Folin-Ciocalteu 试剂在不同的pH值条件下得到此试剂作用的最佳反应条件， 此法的灵敏度较Biuret方法高约100倍，反应时间只要约15分钟即可显色，颜色的稳定度可达数小时，故目前多用Folin-phenol法测定待测样本的蛋白质浓度。 原理：蛋白质与Folin试剂作用分成两个阶段： 1.蛋白质先与碱性铜离子作用 Cu2+ + Protein- Cu-Protein 当碱性的铜离子试剂和蛋白质中的peptide bond反应时会产生biuret test 的初步呈色反应，此蛋白质铜复合物会再由Phosphomolybdic-phosphotungstic试剂(Folin-Ciocalteu Reagent)作用形成蓝色物质。 蛋白质分子中可和Folin – Ciocalteu 试剂作用的团基有：Histidine的Imidazole Group、Tyrosine的Phenolic Hydroxyl Group、Cysteine的Sulfhdryl Group、Arginine的Guanidino Group。在这些团基中，Tyrosine的Phenolic Hydroxyl Group最为重要，碱性蛋白质与Folin-Ciocalteu Reagent复合物的颜色强度与 蛋白质中的芳香族官能基(aromatic group) 成正比。 值得注意的是当Folin-Ciocalteu 试剂在强碱的环境中易使phosphomolybdate 解离而丧失作用的能力，所以此剂须新鲜配制并避免与蛋白质中的Tyrosine 及Tryptophan 反应前置于强碱的环境中，依比色的方法测其吸亮度，换算蛋白质的量。 * 注意 Folin-Ciocateu phenol 试剂在酸性环境中才稳定，但Lowry method 必须在 pH=10 才会发生，所以Folin - Ciocalteu Reagent 一加入碱性的硫酸铜-蛋白质溶液中(alkaline cooper protein )必须马上混合均匀，以确保还原反应在phosphomolybdic- phosphotungstate 分解之前发生。 以上两种蛋白质显色定量法均会破坏样本中的蛋白质，故当蛋白质样本量少又需要回收时，不可以使用此种方法定量。 B.紫外线吸收值测定法
Excell软件绘制ELISA标准曲线
怎么用Excell软件绘制ELISA标准曲线 许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题,究竟如何绘制或制作标准曲线呢? 用Excell和SPSS的软件能做出来吗?,怎么操作?能一起求出计算公式吗? 有没有专门的软件来处理呢?介绍几种? 希望有这方面经验的介绍自己的经历,与大家分享,“与众同乐才是真的快了” 的确,标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败。 首先,做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意: 1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。 2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段,即曲线几乎成直线的范围内。 3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。 4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。 5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。 6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.
怎样绘制标准曲线? 标准曲线浓度得到后,可通过计算器、Excell或SPSS统计软件进行绘制,并得到相关的回归方程(即计算公式和相关系数(回归系数,个人认为,Excell 软件比较好用一些;SPSS也行,不过是英文的,初学者不是很容易掌握;计算器嘛太麻烦了,所以现在一般不用。 双抗夹心法ELISA拟和曲线: 拟和曲线: 打开EXCEL软件;在工作表中 输入第一行:浓度值,如0 10 50 100 400 输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42 选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”,按“下一步”;选择“系列产生在行”,按“下一步”;数据标志,可以填写:如数据y 轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。 单击曲线,按右键,选择“添加趋势线”,在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。得到公式和R平方值。 也可以用上面说的方法,在公司已经提供的图表上,双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和新的曲线。 计算浓度: 举例:第一次实验: 标准曲线为:
标准曲线的制作方法
标准样品的准备 由于你做的是基因表达分析，样品的准备就比较简单了，因为你要知道都是相对的数值（你的对照样品和实验样品中基因表达的比值），这样就不需要知道精确的拷贝数，所以标准品也就无须知道精确的拷贝数，只需知道稀释的倍数就可以了。 你实验中的标准品可以是来源比较丰富的细胞或组织的RNA转录得到的cDNA。将这种cDNA进行梯度的稀释，可以是稀释10倍，100，1000，10000等倍（具体到你的实验要根据具体的情况来调整稀释倍数。最好能作一个预实验来看看什么样的稀释倍数比较适合你的这种基因的扩增）。而对于各个稀释倍数我们要对它的拷贝数进行赋值，这个值当然不是标准品中真实含有的基因数量（在基因表达分析中也不需要），而是我们根据稀释倍数给每一个稀释度人为赋予的拷贝数，这只是为了方便实验最终结果的计算而已。比如我们把前面稀释十倍的样品赋值为10000个拷贝，100倍的赋值为1000个拷贝依次类推把10000倍的赋为10等。要注意，赋值的数目的倍数差异和你稀释的倍数是一样的，比如前面是10稀释，后面赋值也是10倍变化。 如何做标准曲线 在定量实验中标准品是要和你的未知样品一起进行定量实验的，这样在实验结束，无论是标准品还是未知样品都将跑出曲线，获得Ct值。那么我们先可以把未知样品放到一边，对于标准品来说，我们既获得了Ct值，还知道他们的拷贝数（虽然这个拷贝数是我们自己赋予的）。这样我们可以通过标准品的Ct值和拷贝数做一条标准曲线（以拷贝数为横坐标，而Ct值为纵坐标）。一旦作出了标准曲线，而未知样品的Ct值我们知道（通过实验求得的），这时候就在标准曲线上进行定位，就可以得到未知样品的拷贝数了。 事实上，操作起来没有那么复杂，你只需要告诉软件你的哪个孔是标准品，哪个是未知样品，以及标准品的拷贝数等必要信息，软件会自动帮你把标准曲线和未知样品的拷贝数计算出来。 举例来说如何进行设置 先进入软件，在板设置中选择所放样品的位置，并标上unknow或standard等信息。 选择要使用的荧光染料。
标准曲线法与标准加入法的区别
1 标准曲线法 1.1标准曲线法的计算公式 在一定条件下，标准曲线是一条直线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。现在好多仪器软件都能自动生成标准曲线，所以一小部分版友不清楚标准曲线的具体计算方法。本人查找了一些资料，找到标准曲线的斜率和截距的计算方法，和大家分享。 工作曲线可以用一元线性方程表示： y=a+bx （1） 式中，x为标准溶液的浓度，y为相应的吸光度。 使用最小二乘法确定的直线称为回归线，a,b称为回归系数。 b 为直线的斜率，可由下式求得：
1.2 灵敏度 灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应量变化的过程。一般用标准曲线的斜率b为方法的灵敏度，b越大，灵敏度越高。 不要小看灵敏度，用处可大了。灵敏度由于仪器的不同，实验条件等的不同，在不断的变化。但在一定的实验条件下，灵敏度相对还是比较稳定的。所以，建议对灵敏度也做个质量控制图，具体做法见我另一个帖子。 每次标准曲线做好以后，观察灵敏度是否在一定的范围内维持稳定。如果发现灵敏度突然降低，就需要考虑，是否是仪器出问题了。火焰首先考虑雾化器是否堵塞，石墨炉首先考虑石墨管是否是烧坏。解决方法是用通丝清理雾化器，更换石墨管后继续测定标准曲线，带灵敏度稳定后进行样品测定。还有，在打开一瓶新的标准溶液的时候，在仪器进行维修以后，一定要注意灵敏度的变化。 1.3线性范围 线性范围这个大家都比较清楚，主要从相关系数r看，一般要求r大于等于三个九。我在这里和大家分享的是，我想了好久才想开的一个问题。之前看好多书上
后来专门做了好多次实验，还是一直是直线在，只是有时候浓度高时，线性不好，高浓度点不在标准曲线上，而是在标准曲线的下面，而且离拟合的标准曲线比较远。遇到这种情况，标准曲线的线性相关系数就很差，有时候才一个九，如图2所示。最后我终于想明白了，如果自己用手动拟合的话，用平滑的曲线去连接所有点的话，你就会发现，如果在线性范围内，连接起来就是直线，如果超出了线性范围，连接起来就是一条弯曲的曲线。从弯曲的拐点开始，就已经超出了线性范围，如图3所示。 所以，判断是否超出线性范围，个人觉得不是看是否弯曲，软件用最小二乘法拟合的一次曲线，永远是直线。要看你的高浓度点是否在拟合的标准曲线上或离得比较近，相关系数是否在三个九以内。如果不在，从拐点开始的那个点，就超出了线性范围，应该删除，从新拟合。 1.4检出限 检出限是指对某一特定的分析方法在给定的置信水平内可以从样品中检测待测物质的最小浓度或最小量。
蛋白质标准曲线测试方法
试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100 mg溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL。 二、标准和待测蛋白质溶液 1. 标准蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用9gl/L NaCl配制成 0.1 mg/mL蛋白溶液。 三、器材 试管1.5×15 cm(×6)，试管架，移液管管0.5 mL(×2);1 mL(×2);5 mL(×1);恒温水浴;分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取7支试管，按下表平行操作。 试管编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白溶 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 液（mL） 9gl/LNaCl 0.1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 （mL） 考马斯亮蓝 4mL 试剂 蛋白质浓度 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ug/ml 摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595 nm处比色 绘制标准曲线：以A595 nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 二、未知样品蛋白质浓度测定 测定方法同上，取1样品，加4ml考马斯亮蓝溶液，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595 nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(ug/mL)。（超出范围应稀释样品。） 注意事项 在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。 测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。 利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
运用Ecel做标准曲线
E x c e l绘制标准曲线全图片教程 随着计算机的日益普及，越来越多的检验工作者希望能从一些烦琐的工作中解脱出来，如：绘制标准曲线、绘制质控图、计算检测值等等。当然借助检验科办公系统理论上是最方便的，但很多单位是没有检验科办公系统的。其实借助Microsoft的Excel电子表格工具对检验工作也会带来很大的便利。 Excel是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。 现就先介绍一下如何使用Excel绘制标准曲线。 首先，将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图所示。 点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。 如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图。 如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图：
出现上图后，如图在表上选取正确的数据区域。然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图，上应调整选项，以满足自己想要的效果。 点击“下一步”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。 完成了散点图，现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。如下图。 由于本例是线性关系，在类型中选“线性”如下图 点击“确定”，标准曲线就回归并画好了。 标准曲线是画好了，可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢这了简单，点击趋势线（也就是我们说的标准曲线）然后按右键，选趋势线格式，如下图：在显示公式和显示R平方值（直线相关系数）前点一下，勾上。再点确定。好了，现在公式和相关系数都出来了。如图：呵R的平方达，线性相当好。 可是有时候有的项目是成指数增加的，散点图如下图， 将左下方的对数刻度选中，确定。完整的一个半对数标准曲线就做好了。 利用Excel制作标准曲线简单吧如果认真调整参数可以得到不同的效果，大家多研究一下吧。 有人说标准曲线是拿来用的，要是能输入信号值就可以得出浓度那就好了，其实使用Excel也能很自如的处理。具体请听下回分解。
考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量
考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量 实验目的： 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。 实验原理： 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 新鲜绿豆芽 2．主要仪器 （1）分析天平、台式天平 （2）刻度吸管 （3）具塞试管、试管架 （4）研钵 （5）离心机、离心管 （6）烧杯、量筒 （7）微量取样器 （8）分光光度计 3．试剂 （1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。 （2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 （3）乙醇 （4）磷酸（85％） 四、操作步骤 1．标准曲线制作 （1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。
标准曲线的绘制吸光度标准曲线绘制
标准曲线的绘制-吸光度标准曲线绘 制 生物化学实验报告ALT与其吸光度的标准曲线绘制 采集样本：广西医科大学口腔医学2016级13班四个组中7组生物化学实验数据采集时间：2016年11月15日2016~2016上学期第十一周周一下午采集人：何洁梅 一、几组ALT与其吸光度的标准曲线数据记录 ALT活力单位A520吴修团1组A520黎丁菱1组A520杨璇璇1组A520谢晓兰2组A520莫雪玲2组A520李文良3组A520文全海4组 00000000
二、各采集样本汇总图 样本1测定得待测血清ALT活力单位为50U/L 样本2测定得待测血清ALT活力单位为 97U/L 样本3测定得待测血清ALT活力单位为 135U/L 样本4测定得待测血清ALT活力单位为 70U/L 样本5测定得待测血清ALT活力单位为 148U/L 样本6测定得待测血清ALT活力单位为
45U/L 样本7测定得待测血清ALT活力单位为 98U/L 四、采集数据处理结果分析 1．数据总结 样本编号测定的ALT活力单位是否大于40U/L正常/非正常 150是非正常 297是非正常 3135是非正常 470是非正常 5148是非正常 645是非正常 798是非正常 平均值92均为“是”均为“非正常” 2.针对数据处理结果的分析 采集的7组数据经标准曲线测量后，得到的ALT活力单位值均大于40，即均为非正常值，综上，认为待测血清中ALT 含量超于正常值。 3.针对源数据的分析
采集的7组数据中样本4、5、6的数据经画图后可基本分布呈过原点的线性关系，符合理论规律，但其他的数据误差较大。另外，比较符合理想标准曲线的4、5、6样本的三个ALT活力单位值也存在较大的出入。 4.经分析，总结可能的误差来源如下 配置丙酮酸标准溶液、底物溶液、磷酸缓冲液的混合溶液时，丙酮酸标准溶液的剂量都很小，容易造成误差。 加入2,4—二硝基苯肼的时间可能有误差，保温的时间，以及加入NaOH 以停止反应的时间都有可能有偏差，容易造成较大。如何用EXCEL绘制标准曲线 Excel是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。 现就先介绍一下如何使用Excel绘
标准曲线的作法
标准曲线的作法 (1)标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值，一般可选择5种浓度。浓度差距最好是成倍增加或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。 (2)标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少仪器不稳定而产生的误差。 (3)标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度一浓度标准曲线。 ①用普通方格纸作图。图纸最好是正方形(长：宽=l：1)或长方形(长：宽=3 ： 2)，以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占用相同的格数。 在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度位置向上延长，光密度位置向右延长、交点即为此座标标点。然后，将各座标点和原点联成一条线，若符合Lambert-Beer氏定律，则系通过原点的直线。 ②若各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边。 ③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。 ④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应用。 ⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。 ⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。 1.5 原子吸收光谱分析的定量方法 原子吸收光谱分析是一种动态分析方法，用校准曲线进行定量。常用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和浓度直读法。如为多通道仪器，可用内标法定量。在这些方法中，标准曲线法是最基本的定量方法。 1.5.1 标准曲线法 前面已经指出，原子吸收光谱和原子荧光光谱分析是一种相对测定方法，不能由分析信号的大小直接获得被测元素的含量，需通过一个关系式将分析信号与被测元素的含量关联起来。校正曲线就是用来分析信号（即吸光度）转换为被测元素的含量（或浓度）的“转换器”，此转换过程成为校正。之所以要进行校正，是因为同一元素含量在不同的试验条件下所得到的分析信号是不同的。校准曲线的制作方法是，用标准物质配制标准系列溶液，在标准条件下，测定各标准样品的吸光度值Ai，以吸光度值Ai（i＝1，2，3，4，5）对被测元素含量ci（i＝1，2，3，4，5）绘制校准曲线A＝f（c）。在同样条件下，测定样品的吸光度值Ax，根据被测元素的吸光度值Ax从校准曲线求得其含量Ci。校准曲线如图1－4所示。 校准曲线的质量直接影响校准效果和样品测定结果的准确度。正确地制作一条高质量校准曲线是非常重要的，为此需要：（1）合理的设计校准曲线；（2）分析信号的准确测定；（3）正确绘制校准曲线。 首先，从数理统计的观点出发合理设计校准曲线。根据一组实验点绘制校准曲线所遵循的原则是最小二乘原理，即要让实验点随机地分布在校正曲线的周围，并有尽可能多的实验点落在标准曲线上，使得由这些实验点绘制的标准曲线的标准偏差最小。从校准曲线的置信范围考虑，当实验点数目，<4时，置信系数较大且变化速率较快，置信范围较宽，由校正
标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 2、标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。 （二）、器材： 1、722S型分光光度计使用及原理（）。 2、移液管使用（）。 （三）、标准曲线制作： 1、 试管编号0 1 2 3 4 5 6 100ug/ml标准蛋白（ml）0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5 摇匀，1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色 A595nm 2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、
药品的配制（磷酸缓冲液的配制） 一、药品的配制步骤 （一）、实验准备： 1、准备所需的药品和玻璃仪器。 2、洗涤。（怎样洗涤算干净？） （二）、计算： 1、百分比浓度计算： 1)、G/V比 例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。 2）、V/V比： 例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇，加25ml蒸馏水。 乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。3）G/V比：用的较少，如计算灰分中某种元素如Fe的含量。 2、摩尔浓度计算：注：药品的分子量一般在标签中注明。 1）、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。 M=质量/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩尔数=G（g）/摩尔质量2）、0.1mMNaCl配100ml mM=毫摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 毫摩尔数=G（mg）/摩尔质量 3）、0.1uNaCl配100ml mM=微摩尔数/体积（L）称取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg 微摩尔数=G（ug）/摩尔质量称取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug 3、混合溶液配制的计算： 如配3uMEDTA，2.25mM NBT以及60uM 溶液100ml，用50mM磷酸缓冲液配制。 注意：1、分别标定体积计算 2、分别配制再混合，但总体积不能为100ml
运用EXCEL做标准曲线
运用E X C E L做标准曲线 TPMK standardization office【 TPMK5AB- TPMK08- TPMK2C- TPMK18】
E x c e l绘制标准曲线全图片教程 随着计算机的日益普及，越来越多的检验工作者希望能从一些烦琐的工作中解脱出来，如：绘制标准曲线、绘制质控图、计算检测值等等。当然借助检验科办公系统理论上是最方便的，但很多单位是没有检验科办公系统的。其实借助Microsoft的Excel电子表格工具对检验工作也会带来很大的便利。 Excel是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD 字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。 现就先介绍一下如何使用Excel绘制标准曲线。 首先，将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图所示。 点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。
如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图。 如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图：出现上图后，如图在表上选取正确的数据区域。然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图，上应调整选项，以满足自己想要的效果。 点击“下一步”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。 完成了散点图，现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。如下图。 由于本例是线性关系，在类型中选“线性”如下图 点击“确定”，标准曲线就回归并画好了。 标准曲线是画好了，可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢？这了简单，点击趋势线（也就是我们说的标准曲线）然后按右键，选趋势线格式，如下图：
标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作考马斯亮蓝法测蛋白 质含量 标准曲线制作一考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出 所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Foli n-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量一标准曲线制作 （一）、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G —250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4,雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V） 考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V ）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 2、标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度 同0.15mol/LNaCI配制成100ug/ml蛋白溶液。 （二）、器材： 1、722S型分光光度计使用及原理（）。
2、移液管使用（）。 （三）、标准曲线制作： 1、 2、以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、
40 ugx 50 ug、60 ug）,在坐标轴上绘制标准曲线。 1）、利用标准曲线査出回归方程。 2）、用公式计算回归方程。 3）、或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=aXX（）+6 一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。 4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。 （四）、蛋白质含量的测定： 样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内），依照操作步骤1 操作，测出样品的A595E，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。 一般被测样品的A595nm值在0?1一0?05之间，所以上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。 （五）、注意事项： 1、玻璃仪器要洗涤干净。 2、取量要准确。 3、玻璃仪器要干燥，避免温度变化。 4、对照：用被测物质以外的物质作空白对照。
标准曲线的制作
标准曲线的制作(附甲醛标液工作曲线图)： 精确吸取上述甲醛标液（S2）：0.00，0.20，0.50，1.00，1.50，2.00 ml，分别置于50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，再分别吸取上述浓度溶液5.0ml于25ml比色管中，然后加入5.0ml乙酰丙酮溶液，摇匀，置40℃水浴中显色30min，以零管液为参比，于412nm处测吸光度，以吸取甲醛标液（S2）的体积为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制工作曲线。[2] 本法的优点： ①仅用1.00，5.00的环标刻度移液管吸取甲醛标液（S2）、50ml容量瓶定容，相当于国标中吸取甲醛标液（S2）的体积、定容的体积同时缩小10倍，但浓度相当；减少了由于不同刻度单标移液管之间的系统误差。 ②用吸取甲醛标液（S2）的体积ml数为横坐标，便于作图计算（计算方法见四、结果计算），提高了准确度和精确度。 甲醛标液工作曲线图 仪器名称：722N 可见分光光度计比色皿厚度：1.0cm 吸收波长：λ＝412nm HCHO标液浓度：C＝82.5600μg/mL 序号 1 2 3 4 5 6 吸取标液V，ml 0.00 0.20 0.50 1.00 1.50 2.00 吸光度，A 0.000 0.014 0.031 0.056 0.091 0.123 三、样品的测定： 各吸取处理好的三个平行样品液5.0ml，加5.0ml乙酰丙酮溶液，摇匀，按标准曲线同样操作进行比色测定，测得吸光度A。[2] 如果样品褪色，则用水作参比液，吸取样品液5.0ml，加5.0ml水，摇匀，进行比色测定，测得吸光度Ad，则样品的吸光度为A－Ad。 四、结果计算： 由样品的吸光值A从甲醛标准曲线上查得相当于样品的体积V（ml），再换算成样品的浓度C（μg/mL）＝V×C（S2）/50 ，则甲醛的含量F计算公式如下： F＝C(S2) ×V ×100 50 m F–从织物样品中萃取的甲醛含量，mg/kg； C(S2)–甲醛标准溶液S2的浓度，μg/mL，即：mg/kg； V–读自工作曲线上相当于样品萃取的液中甲醛的体积，ml（因为吸取标液 的体积与浓度反映在工作曲线上，是一一对应的，样品也同理）； 100–萃取样品用水的体积，ml； 50–制作标准曲线时，吸取甲醛标准溶液S2定容的体积，ml； m–试样的质量，g 。 五、其它注意事项： ①定期校正标准工作曲线，因为过一段时间，吸光度会偏低，从而影响结果的准确性。 ②每次检测时，应保持条件的一致性，连贯性。
蛋白质标准曲线的制作
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法测定蛋白 质含量 考马斯亮蓝G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 关键词：马斯亮蓝测定考马斯亮蓝G-250CoomassiebrilliantblueG-250 蛋白质含量 一、目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。 二、原理 考马斯亮蓝G- 250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 0
00μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 二、材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 新鲜绿豆芽 2．主要仪器 （1）分析天平、台式天平 （2）刻度吸管 （3）具塞试管、试管架 （4）研钵 （5）离心机、离心管 （6）烧杯、量筒 （7）微量取样器 （8）分光光度计 3．试剂 （1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。 （2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。（3）乙醇 （4）磷酸（85％） 四、操作步骤
标准曲线的最小二乘法拟合和相关系数
标准曲线的最小二乘法拟合和相关系数 （合肥工业大学控释药物研究室尹情胜） 1 目的 用最小二乘法拟合一组变量（，，i＝1-n）之间的线性方程（y＝ax+b），表示两变量间的函数关系；（开创者：德国数学家高斯） 一组数据（，，i＝1-n）中，两变量之间的相关性用相关系数（R）来表示。（开创者：英国统计学家卡尔·皮尔逊） 2 最小二乘法原理 用最小二乘法拟合线性方程时，其目标是使拟合值（）与实测值（）差值的平 方和（Q）最小。 式（1）3 拟合方程的计算公式与推导 当Q最小时，；得到式（2）、式（3）： 式（2） 式（3）由式（3）和式（4），得出式（4）和式（5）： 式（4） 式（5）
式（4）乘以n，式（5）乘以，两式相减并整理得斜率a： 斜率（k＝xy／xx，n*积和-和积）式（6）截距b的计算公式为公式（5），也即： 截距b＝（y-x）／n，差平均差）式（7）
4 相关系数的意义与计算公式 相关系数（相关系数的平方称为判定系数）是用以反映变量之间相关关系密切程度的统计指标。 相关系数（也称积差相关系数）是按积差方法计算，同样以两变量与各自平均值的离差为基础，通过两个离差相乘来反映两变量之间相关程度；着重研究线性的单相关系数。 相关系数r xy取值在-1到1之间。r xy = 0时，称x,y不相关；| r xy | = 1时，称x,y完全相关，此时，x,y之间具有线性函数关系；| r xy | < 1时，X的变动引起Y的部分变动，r xy的绝对值越大，x的变动引起y的变动就越大，|r xy | > 0.8时称为高度相关，当0.5< | r xy|<0.8时称为显著相关，当0.3<| r xy |<0.5时，成为低度相关，当| r xy | < 0.3时，称为无相关。 (式（7） 5 临界相关系数的意义 5.1 临界相关系数中显著性水平（α）与置信度（P）的关系 显著性水平取0.05，表示置信度为95%；取0.01，置信度就是99%。 在正常的分布条件下，一般要求实际值位于置信区间的概率应该在95%以上，这个置信区间为Y±2S，从而置信区间的上下限分别为：Y1=a+bX+2S，Y2=a+bX-2S。 5.2 临界值表中自由度（f） 自由度(degree of freedom, f)在数学中能够自由取值的变量个数，如有3个变量x、y、z，但x+y+z=18，因此其自由度等于2。在统计学中，自由度指的是计算某一统计量时，取值不受限制的变量个数。通常f=n-k。其中n为样本含量，k为被限制的条件数或变量个数，或计算某一统计量时用到其它独立统计量的个数。自由度通常用于抽样分布中。 f=n—p—1 其中：n为样本数(点的个数)，p为因子数（p元回归，一元线性回归，p＝1）。
蛋白质标准标准曲线的绘制
考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量定 一、目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。 二、原理 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 二、材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 新鲜绿豆芽 2．主要仪器 （1）分析天平、台式天平（2）刻度吸管 （3）具塞试管、试管架（4）研钵（5）离心机、离心管（6）烧杯、量筒 （7）微量取样器（8）分光光度计 3．试剂 （1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。 （2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 （3）乙醇 （4）磷酸（85％） 四、操作步骤 1．标准曲线制作