蛋白质样品制备2009中文版
GE Healthcare
蛋白质样品制备赢在起点！
差异表达分析一 一 蛋白谱的研究
过表达并纯化特异的蛋白一 一 用于结构和功能研究
样品：血液、组织、细胞、细菌等
脱盐去除杂质脱盐去除杂质
蛋白质抽提
处理少量组织和细胞样品时，可直接用Sample Grinding kit，10分钟内在1.5ml离心管中加入蛋白抽提液，用研磨颗粒处理最多100mg的样品，提取蛋白质。在裂解液中加入 Protease inhibitor Mix 可抑制蛋白酶的活性；加入Nuclease Mix，降解DNA和RNA。
处理人血清样本时，里面含有高浓度的白蛋白和IgG，可以直接用Albumin and IgG removal kit，采用离心管一次实现富集低丰度蛋白，去除高丰度蛋白的干扰。
抽提哺乳动物细胞和酵母蛋白的缓冲液试剂盒
哺乳动物细胞蛋白抽提缓冲液和酵母蛋白抽提缓冲液试剂盒基于有机缓冲试剂，温和的非离子去污剂以及不同盐和试剂的组合，可温和破碎细胞壁，释放出可溶蛋白。可在使用前根据应用的不同，直接添加其他的试剂如螯合剂、还原剂、或蛋白酶抑制剂到抽提缓冲液中。两种缓冲液都适用于大部分的下游应用，包括色谱、电泳、免疫分析或酶分析。
酵母细胞的机械破碎通常需要玻璃珠，而酵母蛋白抽提缓冲液试剂盒则省却了这个需要。试剂盒中包含了即用型的Zymolyase及酵母悬浮缓冲液。在细胞裂解时，酵母悬浮缓冲液与Zymolyase （一种消化酵母细胞壁的酶）共同使用。裂解之后得到的酵母沉淀物，即原生质球中，加入酵母蛋白抽提缓冲液，即可抽提出具生物活性的可溶蛋白。
双向电泳的蛋白抽提缓冲液
2-D蛋白抽提缓冲液专门为获得高质量的双向电泳结果而设计，提供便利的缓冲液配制和有效的蛋白质提取。所有6种缓冲液都能与变性条件下的1-D和2-D电泳兼容，并可在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂混合物之类的试剂。大部分的缓冲液与2-D 荧光差异凝胶电泳（2-D DIGE）中使用的CyDye? DIGE Fluor兼容1。
12-D蛋白抽提缓冲液-I不推荐与CyDye DIGE Fluor minimal Dyes共同使用，而抽提缓冲液-III和-IV不适用于稀有样品的CyDye DIGE Fluor标记试剂盒。
双向电泳用其它试剂
为获得高质量的双向电泳结果，合适的上样量也是关键，所以可以采用2-D Quant kit，特异沉淀蛋白质，在有非蛋白类干扰物质存在下精确测定蛋白质的含量。
碱性蛋白的聚集通常是双向电泳的一个难点，采用Destreak试剂配合杯上样的方法可以有效解决碱性蛋白的拖尾问题。
illustra ? triplePrep试剂盒
使用illustra ? triplePrep试剂盒可以从单个样品（来自不同动物器官如肝，肾，脾，脑，肺，肠等器官的组织，或者哺乳动物细胞的培养物，例如，HeLa， NIH-3T3，CHO-K1，和HEK-293细胞等）中提取高质量的基因组DNA、总RNA以及变性的总蛋白质。使得分离产物在PCR反应、RT-PCR、测序、Western印迹、双向电泳和LC-MS法等应用中有良好应用。使用总量极为有限的样品，如活组织切片，组织和肿瘤标本，分析获得关于基因表达、蛋白表达和基因组分析方面的信息。
富集蛋白质、多肽
富集蛋白质、多肽
因为不同样品的复杂性和动态范围，导致蛋白分离和分析是非常有挑战的，通常采用富集目标蛋白质的方法，提高后续分析的信号强度。因此需要自动的、可重复的样品制备方法，而把填料装填到Spin柱（SpinTrap）或 96孔滤板（MultiTrap）中，可以有效提高样品制备方法的自动化程度和重复性。
把抗体耦联到Protein G Sepharose HP填料
上，然后通过该抗体可以捕获、富集感兴
趣的目标蛋白。该填料有不同的包装形
式，如单纯的填料，可以直接在离心管里
操作；也有离心柱Protein G HP SpinTrap，
或96孔滤板Protein G HP MultiTrap。富集
后的蛋白即可以电泳研究该抗体垂钓的蛋
白及蛋白复合物，也可以酶解后进行质谱
鉴定特异性结合的蛋白。
金属螯合层析富集磷酸化多肽
磷酸化蛋白经常表达水平低，不易离子化，导致质谱鉴定非常困难。Phos SpinTrap Fe是螯合Fe离子的离心柱，用于富集质谱分析前蛋白酶解物中的磷酸化多肽。经过优化后，该试剂盒的洗脱条件可以直接满足质谱鉴定的需要。经Phos SpinTrap Fe富集的产物可以明显提高磷酸化多肽的纯度和质谱谱图的信噪比。
一步抗体纯化
Protein A/Protein G都和抗体的Fc区有特异性的结合，所以Ab SpinTrap，Protein A HP SpinTrap，Protein G HP SpinTrap非常适合从血清和细胞培养液上清中有效、小规模纯化单克隆和多克隆抗体，也适用于抗体筛选实验。免疫检测试剂经常采用多克隆抗体，采用Ab SpinTrap，粗样无需过滤和离心处理，20分钟内即可从血清中得到高纯度（>95%）的抗体。
富集标签蛋白
采用基因工程方法表达的带标签的重组蛋白，为后续目标蛋白的富集带来非常大的便利。可以利用标签和配基特异性的相互作用，通过亲和层析一步纯化得到高纯度的样品。常用的标签有谷胱甘肽 S一转移酶（GST）、多聚组氨酸（His）、Strep（‖）、MBP（麦芽糖结合蛋白）。如果需要切除标签，可以柱上直接去除标签。
标签蛋白的纯化填料和预装柱发展迅速，允许用注射器手动纯化或自动纯化非澄清和澄清的细胞裂解物以得到高纯度和产量。SpinTrap方便快速纯化标签蛋白。96孔滤板MultiTrap便于表达和缓冲液的筛选，以及标签蛋白的小规模纯化。
PD 脱盐家族
脱盐/缓冲液更换/去除杂质
脱盐
去除小分子标记物去除添加剂
去除小分子抑制剂交换缓冲液
Sephadex G-25填料，截留分子量大于5000，采用分子筛原理，达柱体积30%的样品可被简单地一次性上柱、脱盐并转换到新的缓冲液，一些不需要的低分子量的物质如盐、小分子标记物就被
洗脱了。
PD SpinTrap TM G-25上样体积：70-130μl 离心洗脱体积：130μl
PD MultiTrap TM G-25上样体积：70-130μl
离心洗脱体积：130μl
PD MiniTrap TM G-10
上样体积：100-300μl 重力洗脱体积：500μl
PD MiniTrap TM G-25 离心洗脱体积：0.5ml 上样体积：
0.1-0.5ml 重力洗脱体积：1.0ml PD MidiTrap TM G-25 离心洗脱体积：1.0ml 上样体积：0.5-1.0ml 重力洗脱体积：1.5ml PD -10 Desalting Columns 离心洗脱体积：2.5ml 上样体积：1.0-2.5ml
重力洗脱体积：3.5ml
Sephadex G-10填料，截留分子量大于700，尤其适合亲水蛋白、多肽和寡糖类样品有效去除低分子量的物质，如盐、染料和同位素标记物，可以实现酶切多肽混合物的有效除盐，满足质谱鉴定的需要。
Cleanup 家族
在蛋白电泳中经常担心非蛋白类物质会干扰电泳的结果，现在有专门针对双向电泳的 2-D Clean-up kit 和针对一维电泳的SDS PAGE Clean-up kit ，可以把蛋白有效沉淀下来，同时去掉影响电泳结果的去垢剂、盐类、磷脂、核酸和酚类化合物，蛋白回收率接近100%。
Vivaspin 样品浓缩管浓缩样品
Vivaspin? 样品浓缩管利用膜超滤，对生物样品进行快速、非变性浓缩。最多可对样品进行30倍浓缩，而靶分子的回收率通常超过95%。整个浓缩过程在一支管内完成，上层为样品，下层由半通透的膜分开，分子量截留范围（MWCO）可由用户自行选择。通过离心可使得溶剂通过膜，这样即可对上层样品进行浓缩。 Vivaspin样品浓缩管可用于浓缩100 μl到20 ml的样品，分子量截留范围从3 000到100 000。
特点：
一步法浓缩样品，浓缩过程在单一管中完
成，从而减少了样品的操作和样品的损失。
已申请专利的死停技术，确保样品不会浓
缩过干，可以直接回收浓缩后样品。
垂直的聚醚砜膜，可最大程度的避免滤膜
的阻塞，并可以耐受高的流速。
通过反甩可将浓缩后样品甩回回收帽中，
储存简易、无需接触
可兼容从1到9的pH值范围
从左到右依次是 Vivaspin 500, Vivaspin 2,
Vivaspin 6, and Vivaspin 20.
Vivaspin 样品浓缩管选择指南
MWCO（截留分子量）值
容量范围100-500μl 400μl-2ml 2-6ml
2-20ml 产品
Vivaspin 500
Vivaspin 2
Vivaspin 6
Vivaspin 20*
3 000
28-9322-18
28-9322-40
28-9322-93
28-9323-58
5 000
28-9322-23
28-9322-45
28-9322-94
28-9323-59
10 000
28-9322-25
28-9322-47
28-9322-96
28-9323-60
30 000
28-9322-35
28-9322-48
28-9323-17
28-9323-61
50 000
28-9322-36
28-9322-57
28-9323-18
28-9323-62
100 000
28-9322-37
28-9322-58
28-9323-19
28-9323-63
*：Vivaspin 20 不同截留分子量的产品，每个包装都是12个；其它体积的每个包装都是25个。
? ? ? ? ? ?
Buffer-VI
illustra TM triplePrep kit
28-9425-44
蛋白质样品制备选择指南
https://www.360docs.net/doc/a22844117.html,
lifesciences@https://www.360docs.net/doc/a22844117.html,
( )
6
? 1005 !
;(86871)3157017
;(86871)3157289
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800热线：800-810-9118 imagination at work
细胞总蛋白的制备, SDS-PAGE,Western Blot
医学生物学研究技术与实验 实验报告 实验名称：细胞总蛋白的制备,SDS-PAGE，Western Blot 一、实验目的 1.掌握SDS直接裂解细胞法提取蛋白质 2. 掌握Lowry法测定蛋白质浓度的原理 3. 掌握SDS-PAGE分离蛋白质的原理和技术 4. 掌握半干转移的操作和Western Blot 的原理和技术 二、实验原理 1.蛋白质提取常见裂解方法极其原理。 蛋白质的抽提是指破碎过程中，将生物材料在水，缓冲液或稀盐溶液等适当溶剂中浸泡，使胞内的蛋白质等内容物释放到溶剂中。血浆，消化液和分泌液等体液中可溶性蛋白质，可不经抽提，直接进行分离。细胞内一般蛋白质的抽提，应先将细胞膜或细胞壁破碎，然后用适当溶剂将蛋白质溶出，再用离心法除去不溶物，得到出抽提液。膜蛋白的抽提比较复杂。膜蛋白按其所在位置分为外周蛋白和固有蛋白。外周蛋白通过次级键和膜外侧脂质的性头部鳌和在一起，应选则适当离子强度及PH的缓冲液，其中要好友EDTA，将其抽出。固有蛋白嵌和在膜脂质双层中，通过疏水键于膜内侧脂质层的疏
水性尾部结合。在抽提固有蛋白时，要减弱器与膜脂的疏水性结合，又要使其保持部分疏水基暴露在外的天然状态，这一过程叫增溶作用。较为理想的增溶剂是去垢剂。目前用的去垢剂分为阴离子型，阳离子型，两性离子型，非离子型。增溶后的膜蛋白抽提剂有较好的均一性，便于进一步纯化。纯化后的膜蛋白，可通过透析法去除去垢剂，进行膜蛋白重组。抽提蛋白质的理想条件是尽可能促进蛋白质在溶剂中溶解，而减弱蛋白水解酶活力，以减少细胞的自溶过程。主要是通过选择适当PH，温度，或溶剂，以及加适当蛋白水解酶抑制剂。常见裂解方法有：1 低渗裂解，2 冻融法，3 Triton100或者NP-40等非离子去污剂（比较温柔），4 脱氧胆酸钠、SDS、Triton100 （强烈），5 上样缓冲液（含SDS）＋细胞沸水浴5 min，6 匀浆器。 2.Lowry法测定蛋白质浓度 1. 蛋白质与碱性铜试剂产生双缩脲反应，形成紫红色蛋白质-铜复合物； 2. 紫红色复合物中的酪氨酸和色氨酸残基还原磷钼酸和磷钨酸，产生深蓝色，呈色强度与蛋白质浓度呈正相关，分光光度计测A750吸光度，做标准曲线 3.SDS-PAGE分离蛋白质 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是蛋白分析中最经常使用的一种方法.它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS）及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部及肽键之间的二硫键被还原，肽键被打开，打开的肽键靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。 4. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE） 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。未
样品管理控制流程
目的 规范样品的管理操作，确保样品得到有效的控制，从而确保工程，生产和检验有据可依。 1适用范围 适用于本公司所有样品的采集、制作、管理及使用全过程。 2定义 样品：由客户提供或由公司授权人员签发的，用于工程，生产或检验人员检验时作为参照使用的某种产品的认可实物。 3职责 3.1工程部 3.1.1负责供应商样品的确认、承认、测试测量和签署。 3.1.2负责提交客户样品的制作，试模样品，材料的内部评估、承认和签署。 3.1.3负责客户签署样件要求的信息获取，样品的验证确认。 3.1.4负责样品结构，性能，外观及颜色的确认。 3.1.5负责生产样品，限度样品的样品签署。 3.1.6负责工程样品档案的建立，保存管理。 3.1.7负责客户签署样品接受的登记,样品复稿的封存保护。 3.2质量部 3.2.1负责协助工程部对供应商样品的确认、承认、测试测量和签署。 3.2.2负责协助工程部向客户提交样品，材料的测试和检验。 3.2.3负责样品的使用，归还和有效周期的管理。 3.2.4负责质量样品档案的建立，保存管理。 3.3市场部 3.3.1负责样品提交客户的确认，客户产品的信息沟通，获取。 3.3.2负责客户签署样品接受的登记,样品原稿的封存保护。 3.4采购部 3.4.1负责供应商提交样品信息要求的沟通，获取。 3.4.2负责向相关部门（工程部/质量部等）送交供应商的提交样品，协助工程部和质量部建立 供应商提交样品的相关资料和信息。
5、作业程序内容 5.1样品收集： 5.1.1 由客户或工程部/市场部提供样品来源。 5.1.2 工程部和品质部收到样品后，经工程部主管和质量部主管确认，然后进行封样。 5.1.3 由公司授权人签发的特殊情况下的让步接受，暂收样品。 5.2样品的分类： 5.2.1 供应商样品：指由供应商制作提供，由我公司确认签发的样品，供供应商生产，检验和本公司工 程、质量检验和追溯时的参考依据。 5.2.2 客户样品：指经由客户确认签发的，用于指导本公司工程设计开发，生产及验收参考标准的样品。 包括：色板，结构，电路，功能等。(也称外来样品) 5.2.3 自制样品:指由本公司工程部、质量部确认签发的样品，供生产，检验参考使用（也称生产样品）。 5.2.4 临时样品：因生产异常时与客户样品存在差异时，经客户认可暂时接收，或由工程部，品质部认 可可让步接收的样品。 5.3 样品管理： 5.3.1 供应商样品 a. 当采购部开发新的供应商或供应商材料、生产工艺变更时，由采购部要求供应商附《自检报 告》，《材质证明》送样进行确认。 b. 采购部接到上述供应商的报告，材料样品时，转给工程部进行确认。工程部进行样品（5PCS 以上）检测，包括材料的适配动作，适时安排由生产制造部门进行试用，合格后工程部进行样品确认。 c. 工程部应把对样品的确认与测试记录在《样品确认单》上，工程部确认OK的话，须完成供应 商《样品确认单》的制作，并将《样品确认单》转给采购，若确认NG，工程部将该供应商提供的所有资料和样品退还给采购部，经确认变更影响客户产品特性或客户有要求材料变更时由工程部依据《工程更改通知单》交客户承认。 d. 若供应商材料样品经检验测试合格，工程部将《样品确认单》原件发回供应商，副本两份， 一份给采购部，一份给质量部。工程部与质量部依据要求建立《供应商样品清单》进行管理。若不合格，则将相关结果告之供应商并给予说明，若供应商要求样品全部退回，那么工程部应将所有供应商送样品资料与样品进行全部退回。 e. 质量部接到采购部转来的上述供应商的报告，环保资料应登记到《环保测试信息清单》，内 容包括供应商名称、物料名称、物料编号、测试日期、测试机构、报告编号、报告有效周期、报告有效期、测试项目、报告有效测试结果、下次索要报告时间、MSDS（化工品）、结合《供应商样品清单》,作为以后供应商送货的依据。
第十五章：蛋白质的生物合成.doc
第十五章蛋白质的生物合成 一：填空题 1.蛋白质的生物合成是以________________作为模板，________________作为运输氨基酸的工具， ________________作为合成的场所。 2.细胞内多肽链合成的方向是从________________端到________________端，而阅读mRNA的方向是从________________端到________________端。 3.核糖体上能够结合tRNA的部位有________________部位、________________部位和 ________________部位。 4.ORF是指________________，已发现最小的ORF只编码________________个氨基酸。 5.蛋白质的生物合成通常以________________作为起始密码子，有时也以________________作为起始密码子，以________________、________________和________________作为终止密码子。 6.SD序列是指原核细胞mRNA的5′-端富含________________碱基的序列，它可以和16SrRNA的3′-端的________________序列互补配对，而帮助起始密码子的识别。 7.含硒半胱氨酸的密码子是________________。 8.原核生物蛋白质合成的起始因子(IF)有________________种，延伸因子(EF)有________________种，终止释放因子(RF)有________________种；而真核生物细胞质蛋白质合成的延伸因子通常有 ________________种，真菌有________________种，终止释放因子有________________种。 9.密码子的第2个核苷酸如果是嘧啶核苷酸，那么该密码子所决定氨基酸通常是________________。 10.原核生物蛋白质合成中第一个被参入的氨基酸是________________。 11.真核生物细胞质蛋白质合成对起始密码子的识别主要通过________________机制进行。 12.无细胞翻译系统翻译出来的多肽链通常比在完整的细胞中翻译的产物要长，这是因为 ________________。 13.蛋白质的半寿期通常与________________端的氨基酸性质有关。 14.tmRNA是指________________。 15.同工受体tRNA是指________________。 16.疯牛病的致病因子是一种________________。 17.已发现体内大多数蛋白质正确的构象的形成需要________________的帮助，某些蛋白质的折叠还需要________________和________________酶的催化。 18.SRP是指________________，它是一种由________________和________________组成的超分子体系，它的功能是________________。 19.蛋白质定位于溶酶体的信号是________________。 20.分子伴侣通常具有________________酶的活性。 答案：1. 2 3 4
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。真球蛋白 : 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如脂肪部分露于外，则脂溶性占优势，如脂肪部分被包围于分子之中，则水溶性占优势。 蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。近年来虽然有了不改进，但其主要原理仍不外乎两个方面： 一是利用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析、有机溶剂提取、层析和结晶等； 二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离的目的，如电泳、超离心、超滤等。由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物相只限于固相和液相，并在这两相间互相交替进行分离纯化。 制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶解度等主要因素进行分类。按分子大小和形态
产品设计开发控制程序
1目的 对设计和开发全过程进行控制，以确保设计产品的质量满足客户和有关标准、法规的要求。 2 范围 本程序规定了设计和开发的策划、输入、输出、评审、验证、确认及更改的控制要求。 本程序适用本公司各类产品设计的全过程，包括产品的重大技术改进。 3 职责 3.1总经理负责批准设计项目，技检副总组织协调设计和开发全过程的工作。 3.2 技术部负责设计和开发计划书、设计输出文件、评审验证报告等的编制、样 品的制作及整个设计工作的实施。 3.3 市场部负责提供市场调研报告，提出对新产品的设想与要求，并负责新产品 的试用安排。 3.4 采购部负责样品及试制所需零部件的采购 3.5 生产部负责批量试制（试产）的安排。 3.6 质检部负责产品鉴定报告的编制，样品及试制产品的检测。 3.7 相关部门负责各自范围内的配合工作。 4 工作程序 4.1 设计和开发的工作流程见附图。 4.2 设计、开发的策划和输入 4.2.1立项的依据、设计和开发的项目来源于以下方面：
4.2.1.1与顾客签订的特殊合同或技术协议。 4.2.1.2市场调研和分析。 4.2.2技术部根据以上立项依据，组织编制《设计和开发计划书》，计划书应 包括以下内容： 4.2.2.1设计输入、设计输出初稿、设计评审、样品制作、设计验证、设 计确认等各阶段的划分和主要工作内容； 4.2.2.2各阶段的人员职责分工、进度要求、信息传递和联络方式； 4.2.2.3需要增加或调整的资源（如仪器、设备、人员等）。 4.2.2.4产品功能、主要技术参数和性能指标及主要零部件结构要求等； 4.2.2.5适用的相关标准、法律法规、顾客的特殊需求等； 4.2.2.6以前类似设计的有关要求，及设计开发所必须的其它要求，如环 境、安全、寿命、经济性等要求。 4.2.3 每个设计项目均指定具有合适资格的设计人员作为项目负责人，负责 设计项目各项工作的开展。 4.2.4由技术部组织相关部门对《设计和开发计划书》进行评审（保持评审记 录），对其中不完善、含糊或矛盾的要求作出澄清和解决。经技检副总审批后，作为正式文件予以实施，设计和开发计划书将根据设计进展的变化作出修改。 4.3设计输出 4.3.1各组设计人员根据《设计和开发计划书》的要求开展各项设计工作，编 制相应的设计初稿，包括指导采购、生产、检验等活动的图样和文件，如
第十一章蛋白质生物合成
商洛职业技术学院教案教案首页
教案续页
基酸的工具，以核蛋白体为合成场所，在多种酶和辅助因子等200多种成分共同参与下完成。 准备过程：氨基酸的活化与转运氨基酰-tRNA合成酶具有绝对专一性，对氨基酸、tRNA两种底物都有高度特异的识别功能，并将氨基酸连接在对应的tRNA上，从而保证了遗传信息的准确翻译。 一、 一、肽链合成的起始 由核糖体、大小亚基，模板mRNA及起始tRNA组装形成起始复合物的过程，需GTP、三种IF及Mg2+的参与。 1. 核糖体大、小亚基分离 2. mRNA 在小亚基上定位结合 3. 起始氨基酰-tRNA的结合 4. 核糖体大亚基结合 二、肽链合成的延长 1．注册：又称进位，按照A位处对应的mRNA第2个密码子，相应的氨基酰tRNA与EF-TuGTP构成复合物，并通过反密码识别mRNA模板上的密码子。 2．成肽：在大亚基上转肽酶的催化下，P位上起始tRNA所携带的氨基酰与A位上新进入的氨基酸的氨基缩合形成肽键。 3．移位：又称转位，EF-TuGTP复合物与核糖体结合，并水解GTP 提供能量，促使核糖体沿mRNA向3＇-端移动移动一个密码子的距离。 新生肽链上每增加一个氨基酸残基都要经过进位、成肽、移位三步反应，此过程需要2种EF参与，消耗2分子GTP。 三、肽链合成的终止 当核蛋白体的A位出现mRNA的终止密码后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA大小亚基等分离，这些过程称为肽链合成终止。 蛋白质的生物合成
以上所述是单个核蛋白体合成肽链（单个核蛋白体循环）的情况。 每条mRNA模板在蛋白质合成过程中同时与多个核蛋白体结合所形成 的念珠状结构称为多聚核蛋白体，是多肽链合成的功能单位。 由此可见，多个核蛋白体利用同一条mRNA模板，按不同进度各 自合成多条相同的肽链，从而提高了翻译的效率。蛋白体合成的速度很 快，据估算，每一个核蛋白体每秒钟可翻译约40个密码，即每秒合成 相当于40个左右氨基酸残基组成的多肽链。 第三节翻译后加工 包括一级结构的修饰和空间结构的修饰： （一）新生肽链的折叠：新合成的肽链需经过折叠形成特定空间 结构才具有生物活性。这一过程主要在细胞内质网中进行，一般需要在 折叠酶和分子伴侣参与下才能完成。 （二） N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除：在肽链合成后或肽链延长 过程中，由脱甲酰基酶或氨基肽酶催化，将甲酰蛋氨酸或蛋氨酸残基水 解切除掉。 （三）氨基酸残基侧链的修饰：例如，丝氨酸和苏氨酸残基的磷 酸化；脯氨酸和赖氨酸残基的羟基化；组氨酸残基的甲基化；谷氨酸残 基的羧基化等。 10分钟
蛋白样品制备
双向电泳之样品的制备 2008-04-02 21:58:37| 分类：默认分类|举报|字号订阅 一般性原则： 样品制备是双向电泳中最为关键的一步，这一步处理的好坏将直接影响2-DE 结果。目前并没有一个通用的制备方法，尽管处理方法是多种多样，但都遵循几个基本的原则： 1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰； 3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。 根据这一原则，样品制备需要四种主要的试剂：离液剂(chaotropes),主要包括尿素（Urea）和硫脲（thiourea）；表面活性剂（sufactants），也称去垢剂，早期常使用NP-40、TritonX -100 等非离子去垢剂，近几年较多的改用如CHAPS 与Zwittergent 系列等双性离子去垢剂；还原剂（reducing agents ），最常用的是二硫苏糖醇（DTT），也有用二硫赤藓糖醇（DTE）以及磷酸三丁酯（TBP）等。当然，也可以选择性的加入Tris-base,蛋白酶抑制剂（如EDTA 、PMSF or Protease inhibitor c℃ktails ）以及核酸酶。 样品的来源不同，其裂解的缓冲液也各不相同。通过不同试剂的合理组合，以达到对样品蛋白的最大抽提。在对样品蛋白质提取的过程中，必须考虑到去除影响蛋白质可溶性和2DE 重复性的物质，比如核酸、脂、多糖等大分子以及盐类小分子。大分子的存在会阻塞凝胶孔径，盐浓度过高会降低等电聚焦的电压，甚至会损坏IPG 胶条；这样都会造成2-DE 的失败。样品制备的失败很难通过后续工作的完善或改进获得补偿。 核酸的去除可采用超声或核酸酶处理，超声处理应控制好条件，并防止产生泡沫；而加入的外源核酸酶则会出现在最终的2D 胶上。脂类和多糖都可以通过超速离心除去。透析可以降低盐浓度，但时间太长；也可以采取凝胶过滤或沉淀/重悬法脱盐，但会造成蛋白质的部分损失。因此，处理方法必须根据不同的样品、所处的状态以及实验目的和要求来进行选择。 样品制备程序：
样品制作管理程序
样品制作管理程序 1.0 目的 规范 样品 制作、 检验、 确认、 保管 及使 用，从 而提 高样 品阶段各项工作效率满足市场需求。 2.0 适用范围 适用于我司新项目样品阶段管理 3.0 定义 工程资料：图纸、样板、色板、菲林、电子图、样单等。 4.0 职责 4.1 业务部提供客户打样信息，下发样品打样通知。负责样品在客户端跟踪确认情况， 并反馈确认信息。 4.2 工程部负责工程资料输出，样品打样过程跟进，问题处理、样品确认及新物料、新工 艺导入。 4.3 品质部负责样品品质检验，封样品会签等。 4.4 采购部负责新物料的采购及跟进工作。 4.5 打样组负责样品制作，样品制作总结等。
样品制作管理程序流程图 5.0程序内容 （流程图见第3页） 5.1 样品制作 5.1.1 客户有新项目需求时由业务传达需求信息，并提供相关资料（具体资料依《产品 实现控制程 序》内容所示，并提供《产品制作需 求 单》给工程 部。 5.1.2 工程部接到市场打样信息后， 由主管分配 项目，工程师根据资料排查物料，如 为 常规库存物料直接下工程资料给生产 打样，如为特殊物料需要采购请购开 发。 5.1.3 工程师严格依客户要求及设计规范进行资料 输 出，必要时 及时与客户或业务 联络， 确保技术要求完整 性，同进将 打样信息统计于《打样反馈跟踪 表》。 5.1.4 资料
完成经主管批准后可下发，特殊情况可下发临时文件，但事后及时补发。（每 款项目资料输出平均在4小时内完成） 5.1.5 采购部根据工程师要求对特殊物料进行采购，并及时跟进物料到位情况 5.2 样品检验及送样 5.2.1 品质人员除在每款项目打样过程进行巡检外，还要对样品出样最终确认或测试， 检验结果记录在《出货检测报告》中。 5.2.2 样品完成后，品质工程师应对每款样品再次确认，对品质反馈的问题做判定。对不符 合要求的样品及时要求重新制作，OK的样品交业务部。同时，需在留样的样品上 做好标识（注明日期、名称、效果等），以便后期复制样板及追朔。 5.2.3 对于客户要求的或特殊性需做可靠性测试的由工程安排品质进行，并提交可靠性 测试报告，补发给客户。 5.2.4 每款产品送样时需做《样品承认书》，对于临时打样可不用；《样品承认书》一 般按客户的要求附带相关资料及份数，未有说明的依以下基本要求来定： A、样品承认书封面，需工程主管审批 B、产品检验标准 C、产品图纸(可附我司或客户图档） D、产品检验报告 E、相关试验记录报告 F、一式四份 5.3 样品确认 5.3.1 业务部将样品送于客户后，及时跟进并反馈结果。符合要求的需要求客户回签《样 品承认书》及样品，对不符合要求工程分析原因，如需重新打样的由业务重发《产 品制作需求单》，在单上注明原由。 5.3.2 工程部在送完样后也需跟进客户确认结果，必须要进行技术沟通及协调。 5.4 样品保管及使用 5.4.1 样品确认OK或封样后，由品质工程师进行封样品复制分发。 5.4.2 各部门接到封样品或客户样板、机壳等在发放表上签收，应妥善保管样品，丢失 或损坏的根据情况给予相应的处罚。同时需及时提出申请，品质由工程主管批准补发。 5.4.3 样品有效期为六个月，存放环境：室内常温，避免潮湿、阳光直射。 5.4.4 各部需设有专用的样品柜，定期对其进行整理，任何人参阅后应及时归位。 5.5 回收及报废样品 5.5.1 工程部文员负责对样品进行回收，各部门必须配合执行。 5.5.2 样品回收通常有三种情况：
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备的原理和方法 蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白 类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。 真球蛋白: 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。 拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如
MY样品制作控制程序
M Y样品制作控制程序集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]
鹤山市美业棉纺织企业有限公司 文件名称：样品制作控制程序 文件编号：MY2-008 版本号：A 编制：审批： 日期：2004/7/1 日期：2004/7/5 修订记录
1目的 为确保样品的制作能满足顾客的需求和期望，并在批量生产中提供技术协助。 2 范围 适用于本公司样品制作与管理。 3 职责 经营部负责样品的品种计划、样品发送。 品管部负责追踪样品试作及检验样品。 经营部负责样品试制所需的原料。样品试制后成品的入库。
生产部负责样品的加工试制和生产，并对样品生产工艺进行上车及验证。 4 工作内容 样品试作的品种安排： 经营部根据市场情况或客户的要求，确定是否需要试制样品，及样品的品种。需要试制时，由经营部通知办公室与品管部安排落实。必要时须经总经理批准。 因技术力量或其它原因不能制作的样品应注明原因，经总经理裁示。 品管部根据经营部试作品种样品的通知，负责准备生产样品所需要的工艺技术资料、原料；生产部负责操作工、保全工、电工、空调工等人员及设施环境的所有准备工作。 品管部根据工艺技术资料，做好原料的检验，合格后，安排好原料的出仓、落实排包工作。开始对试制过程进行跟踪检测，直到对样品成品的检验完 成。 样品试制中原棉检验、过程检验与成品检验及监视按《过程与成品监视和测量控制程序》进行对试制全过程，直到对样品成品的跟踪检测与监视控制。 对合格成品安排入仓。 样品试制现场调度等有关样品试制过程与成品检测、机台安排的工作事项，由品管部负责安排并跟踪。 生产部按照《生产过程控制程序》《设施和工作环境控制程序》《产品标识和可追溯控制程序》对样品制作实现过程及成品进行控制。按工艺资料要求进行落实。同时配合品管部开展工作。 对特殊要求的样品，按特殊工艺要求执行。对不合格品按《不合格品控制程序》执行。 样品制作完成后，由经营部负责送样与信息反馈。对客户不满意或没达到预定目标时，须按《改进控制程序》进行样品重新制作。其控制程序同上述条款。 对样品制作工艺资料的输入及变更输入，须经品管部主任审定，重大事项变更，须报总经理批准后方可进行更改实施。
蛋白质组学样品制备注意事项
蛋白组学样品制备常规流程及注意事项 一、细胞, 组织裂解 ●Lysis buffer (SDT, RIPA…)： ThermoFisher提供了针对于各种样品的解 缓冲液 ●Detergent: SDS, CHAPS, NP40… (破坏细胞膜，蛋白质变性） ●Reducing agent: DTT… (打开二硫键，使得蛋白质结构更为开放，更易 酶解) ●Urea: 增加蛋白质的可溶性，适用于提取全蛋白 二、蛋白质抽提 三、样品蛋白质含量测定、还原烷基化 还原烷基化原理: 蛋白质不能从PAGE胶里被抽提出，而肽段则可以被抽提出，打断蛋白质的二硫键，破坏蛋白质二级结构，是蛋白质结构松散，增加蛋白质酶切效率。 四、蛋白水平的预分级或蛋白质免疫沉淀 五、蛋白质酶解 i.胶内酶解 (In-gel digestion) ●将考染后的SDS-PAGE切成小块 ●用100mM NH4HCO3/30%ACN 脱色 ●在胶内进行 DTT, IAA ●在NH4HCO3溶液体系中加入酶，在胶内进行酶解 ●用60% ACN/0.1% TFA 从胶中抽提生成的肽段 ii.FASP: Filter aided sample preparation
●采用滤膜装置进行溶液置换（10K, 20K, 30K） ●使用尿素可以更有效的除去溶液体系中的去垢剂（如SDS） ●最后置换至NH4HCO3 or TEAB 溶液体系进行蛋白质酶切（pH 在8.0左 右） ●酶解完成后收集滤膜的流穿组分得到肽段 原理: 蛋白质不能通过滤膜，而酶解生成的肽段则可以通过。丙酮沉淀是另一 种去除去垢剂的方法，从而可进行溶液内酶解。 iii.蛋白酶的选择： 最为常用的蛋白酶: Trypsin（保持胰酶处于低温，并且保存在酸性环境中，以防止胰酶自身酶解） ●特异的切断C端为Arg, Lys的肽键（若Arg, Lys后紧跟Proline, 酶切效 率降低） ●生成的肽段平均长度为9个氨基酸 ●胰酶酶解生成的肽段至少为2+价，易于离子化 其他一些蛋白酶，酶切位点的特异性可在搜库软件中查找。 六、肽段水平的预分级或翻译后修饰的富集 七、肽段除盐 (非常重要) 蛋白质谱分析对样品的要求： ?无盐：少量挥发性盐不影响（如100mM以下碳酸氢铵）（充分脱盐） ?无聚合物：如PEG（避免使用国产耗材、避免手套等接触样品） ?无表面活性剂：如SDS（前处理过程中避免使用） ?无沉淀或颗粒：（充分离心、过滤）
印刷厂样品制作管理程序.doc
样品制作管理程序 1.0目的 为了规范样品制作、检验、确认、保管及使用，从而提高样品阶段各项工作效率满足市场需求。 2.0适用范围 适用于我司新项目样品阶段管理 3.0定义 工程资料：图纸、样板、色板、菲林、电子图、样单等。 4.0职责 4.1业务部提供客户打样信息，下发样品打样通知。负责样品在客户端跟踪确认情况， 并反馈确认信息。 4.2工程部负责工程资料输出，样品打样过程跟进，问题处理、样品确认及新物料、新工 艺导入。 4.3品质部负责样品品质检验，封样品会签等。 4.4采购部负责新物料的采购及跟进工作。 4.5打样组负责样品制作，样品制作总结等。 5.0 程序内容 （流程图见第 3 页）
工程部市场部 客户 相关部门 开始 打样准备打样需求 出工程资料 物料采购 N 样品制作 N Y 通过是否 品质检验工程确认 客户确认样品制作管理程 Y 保管使用发样品通过是否 封样、分 发样品结束 封样、分 5.1 样品制作
5.1.1客户有新项目需求时由业务传达需求信息，并提供相关资料（具体资料依《产品 实现控制程序》内容所示，并提供《产品制作需求单》给工程部。 5.1.2工程部接到市场打样信息后，由主管分配项目，工程师根据资料排查物料，如为 常规库存物料直接下工程资料给生产打样，如为特殊物料需要采购请购开发。 5.1.3工程师严格依客户要求及设计规范进行资料输出，必要时及时与客户或业务联络， 确保技术要求完整性，同进将打样信息统计于《打样反馈跟踪表》。 5.1.4资料完成经主管批准后可下发，特殊情况可下发临时文件，但事后及时补发。（每 款项目资料输出平均在 4 小时内完成） 5.1.5采购部根据工程师要求对特殊物料进行采购，并及时跟进物料到位情况 5.2 样品检验及送样 5.2.1 品质人员除在每款项目打样过程进行巡检外，还要对样品出样最终确认或测试， 检验结果记录在《出货检测报告》中。 5.2.2 样品完成后，工程师应对每款样品再次确认，对品质反馈的问题做判定。对不符 合要求的样品及时要求重新制作，OK的样品交业务部。同时，需在留样的样品上 做好标识（注明日期、名称、效果等），以便后期复制样板及追朔。 5.2.3 对于客户要求的或特殊性需做可靠性测试的由工程安排品质进行，并提交可靠性 测试报告，补发给客户。 5.2.4 每款产品送样时需做《样品承认书》，对于临时打样可不用；《样品承认书》一 般按客户的要求附带相关资料及份数，未有说明的依以下基本要求来定： A、样品承认书封面，需工程主管审批 B、产品检验标准 C、产品图纸 ( 可附我司或客户图档） D、产品检验报告 E、相关试验记录报告 F、一式四份 5.3样品确认 5.3.1业务部将样品送于客户后，及时跟进并反馈结果。符合要求的需要求客户回签《样 品承认书》及样品，对不符合要求工程分析原因，如需重新打样的由业务重发《产 品制作需求单》，在单上注明原由。 5.3.2工程部在送完样后也需跟进客户确认结果，必须要进行技术沟通及协调。 5.4样品保管及使用
样品控制程序
打星号（☆）的管理层需审批本文件。 总经理 ☆ 管理者代表 生产运营中 心 人事行政部 财务部 市场营销 文件修订履历 版次 修订内容摘要 制定/修订部门 制定/修订人 审核人 审批人 生效日期 A1 新制定 品质部 2014-10-1 制订部门/人：品质部 审核人： 生效日期：2014-10-01 分发部门及数量：市场营销部/生产运营中心/财务部/人事行政部各1份。共4份 文件控制印记：
1. 目的： 对公司所有的样品稿（包括客户定稿、成品留样、客户提供样品稿等）进行管理，更好的为产品加工提供准确样本，确保这些样品稿在生产运作中完整无缺的返回档案室。 2. 范围： 适用于为公司生产提供各种信息的样品稿。 3. 职责： 3.1品质部：公司各种样品稿的制作、确认、收集与整理，确保样品稿的完整、齐全； 3.2业务部：负责客户样品的接收，确认； 3.3生产部：负责样品在车间的流传管理，并返回品质部。 4. 定义 样品稿：所有为生产和加工提供各种信息的各种载体。 5. 程序 5.1样品稿的来源 a. 客户直接提供的原稿； b. 经我公司打样、制作后客户确认的样品稿； c. 我公司品质部留的成品样及相关的反映产品信息的样品稿； d. 产品首批印刷时经客户或本公司人员（机长、QC、车间主管等）确认的色样。 5.2样品稿档案的建立 a. 客户直接提供的原稿档案的建立：客户提供的原稿在原稿返回到档案室时，档案管理员 开始依管理表格建立产品档案，保存所有的原稿及其他相关的产品资料；如果客户要求 返回其原稿的，则档案管理员转交业务员返回客户，其他样品稿存档； b. 经我公司打样后客户确认的样品稿档案的建立：由我公司打样经客户确认后合格的样品 稿，由业务员第一时间交到档案室存档，并由档案管理员在样品稿上盖样品稿确认章， 并依次建立产品的初步档案，业务下单时依工作程序5.3.2执行； c. 品质部负责留样产品的收集，与《生产施工单》一起由包装组长统一于第二天上班时间 交档案管理员，档案管理员依据是否重新建立档案或补充档案进行档案管理。 5.3样品的制作： 5.3.1客户直接提供原稿，由我公司排版出菲林的，则校对员根据客户的原稿进行校对，
新产品样品打样流程
样品打样流程 版 本：A0 页 码：第1页,共2页 流程 部门 所用记录 事项说明 Y NG Y NG OK 需求单位 业务 业务 工程部 工程部 样板组 品保 业务 内部需求用样品制作单,客户用客户的方式;相关附件 样品制作通知单 样品制作通知单 样品图纸(1:1型版) ﹑打样进度表 BOM ﹑产品规格书表﹑生产作业指导书﹑打样进度表 BOM 样品检验报告 成本分析表 样品清单 客户提出用电话﹑E-mail ﹑传真或客户自己的格式 如是新客户和新产品时, 打样由工程部样板组进行，其他情况则不进行. 工程部上应注明不同打样阶段时的样品性质和数量(原样﹑初样﹑确认样和大货样) 工程部确认打样过程中的各项需求(物料﹑设备)和加工难度;如与业务对于打样有分歧,最终由副总裁决. 工程部在完成打样准备后需将打样进度回复业务,业务依此跟进打样进度 品质部须根据客户要求制定IQC 、IPQC 和OQC 的检验依据,必要时请工程协助 根据《样品制作通知单》制作,将相关材料状况填入《制样书》中，异常情况须及时通知业务人员。项目工程师在订单正式生产前参照样板组的手工BOM 制作正式BOM 和SOP. 样品测试合格后业务将样品送交客户时按客户要求附送相应资料. (接上页) 打样需求(内部提出和客户提出) 评估 制作打样单 制作评估 打样准备 样品制作 样品检验 样品交付 和送样、留样
样品打样流程版本：A0 页码：第1页,共2页流程部门所用记录事项说明 NG Y 客户、业务 业务业务 工程部封样卡 制样书、内部联 络单 客户用电话﹑E-mail﹑传真或客户自己的格式通知 业务样品确认结果.如不合格时确定是否需重新打样 只要客户通知打样终止，业务须要求相关部门停止 打样。 只要客户要求发生变更，业务须以重新制作制样书, 要求相关部门作出相应变更并确认变更所需时间.如 因内部原因不能完成打样，工程部需用内部联络单 通知业务，由业务与客户沟通。 当样品获得客户确认后，工程部须将客户原始图 纸、规格要求、BOM表存档备用。样品交由工程部 保管.客户下订单大货生产时,转交生管制作正式文 件,由文控人员按《文件和资料控制程序》的要求进 行发行. 客人评估 打新终止和 变更 资料归档 封样
蛋白质制备及含量测定(凯氏定氮法)
实验六蛋白质制备及含量测定—— 微量凯氏（Mirco-Kjeldahl）定氮法 一、实验目的要求 1、了解蛋白质提取的一般方法和原理 2、了解蛋白质含量测定的常用方法 3、学习微量凯氏定氮法的原理 4、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化、蒸馏、滴定、含氮量的计算及蛋白质含量的换算等。 二、实验原理 1、蛋白质的提取与制备 蛋白质的提取与制备方法与生物材料的类型及蛋白质的存在部位有关。如果是胞内蛋白，首先必须要进行细胞破碎。细胞破碎的方法与细胞的类型有关，包括物理破碎（研磨、超声波等）、化学破碎（化学溶剂处理）、酶法破碎等。如果是胞外蛋白，可以根据相应蛋白质的性质进行提取分离纯化。 如果待提取的蛋白质是具有生物活性的蛋白质如酶，则在样品处理、提取及分离纯化过程中需注意防止蛋白质的变形失活，如在低温下操作、选择适当的缓冲体系等。 2、蛋白质含量测定 蛋白质含量测定的方法很多，如：紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法（Bradford法）、Folin酚法、微量凯氏定氮法等。 3、凯氏定氮 生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，如蛋白质的含氮量约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定，通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于具有测定准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。其原理如下： （1）消化：有机物与浓硫酸共热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点。这一步约需2～3h，视样品的性质而定。 天然的含氮有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水；蛋白质分解，而有机氮则变成氨（无机氮），并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。 但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。甘氨酸的消化过程可表示如下： NH2-CH2 -COOH + 3H2SO4→NH3 + 2CO2↑+ 3SO2↑+ 4H2O 2 NH 3 + H2SO4→(NH4)2 SO4 或2 NH2-CH2 -COOH + 7H2SO4→(NH4)2 SO4 + 4CO2↑+ 6 SO2↑+ 8H2O （2）加碱蒸馏： 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一
样品制作控制程序
1 目的 建立文件化的程序，规范样品制作确认工作流程，用于我方生产和客户验收核对一致的实物标准，以确保提供客户满意的产品，同时减少制作差错，降低损耗，提高工作效率。 2适用范围 适用于本公司样品的制作及确认。 3 定义 客户承认：依客户作业方式，以下三种情况之一视为客户已予以承认合格： a)在本公司零件承认书上签核； b)于本公司绘制的图面上或样品上签核； c)直接下订单。 4 职责和权限 4.1 营销部负责客户信息、资料(如图纸、样板)的收集整理、样品制作申请单的编制，与客 户沟通协调及送样承认。 4.2 工程部负责样品制作、工艺资料的记录整理。 4.3 生产部协助工程部执行打样生产，并负责临时人员的派遣。 4.4 PMC负责原辅材料的请购、采购。 4.5 品管部负责样品检验。 5 工作程序： 5.1 样品制作控制流程图（见附件1） 6 作业内容： 6.2.1 打样资料的接收与评审 营销部在接到客户打样通知时，要与客户沟通清楚产品的要求，先自己初审，再组 织工程部、生产部进行评审，确定客户方案后再下达样品制作申请，避免在打样过程中 频繁改动方案。 6.2.2客户资料或样品的管理，参照【客户财产控制程序】作业； 6.2.3 填制【样品制作申请单】 6.2.2.1 营销部依据已评审通过的打样资料填制【样品制作申请单】，详细将客户要 求记录清楚，包括用料、数量、完成日期和其它特殊要求等；经过签批后发 放给相关部门；
6.2.2.2 对于在打样过程中或样板送检后，客户提出更改方案的情况，营销部必须 重新下达【样品制作申请单】，后附之前版本单据，重新评审和签批，并收 回之前发放的单据。 6.2.4 工程部收到申请单后，即着手安排样品制作。需要其它部门协助的，开立【工程样 品生产制作单】，要求相关部门提供协助。 6.2.5材料申购 PMC部收到【工程样品生产制作单】，如需请购原材料，即安排请购、采购作业。如 不能确定交期时，应反馈给工程部和营销部知悉。 6.2.6打样 6.2.6.1工程部收到原材料入库信息时，即着手领料，并安排机台、人员和相关资料； 6.2.6.2依据打样情况，工程部需每天更新进度状况，知会营销部； 6.2.6.3由于异常情况造成不能按时交货的情况，工程部通知营销部与客户沟通协商 处理； 6.2.6.4样品制作完成，贴上样品标签，即交于品管部依据6.2.7条要求进行作业。 6.2.7样品检测 6.2. 7.1品管部收到样品，与【工程样品生产制作单】上的要求进行比对。 6.2. 7.2并按客户要求对样品的性能进行测试，提供【样品测试报告】。 6.2. 7.3如有需要，工程部依据以上情况，编制零件承认书，连同样品一并交于营销 部。 6.2.8 样品承认 6.2.8.1营销部将样品交与客户签收，并跟进客户的承认情况，记录于【送样记录追 踪表】内，依据“承认”的定义，定期更新后知会相关部门； 6.2.8.2客户确认不合格时，由营销部与客户沟通是否停止或重新打样。如有最新要 求，则按照本文件重新执行。 6.2.8.3 营销部将签回的零件承认书、样品及图面资料，转交工程部存档实施管制， 并作为生产和品检的生产对照标准资料。 7 相关文件 7.1【工程部作业指导书】 7.2【客户财产控制程序】