肝硬化动物模型具体方法及步骤
肝硬化动物模型具体方法及步骤原型物种人
来源胆总管结扎法（缩窄）诱发肝硬化
模式动物品系日本大耳白兔，健康，雌雄不限，体重为1.5-2.5kg。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期14-16 weeks
建模方法家兔麻醉，于十二指肠距离胃幽门约3cm处分离出总胆管。在游离总胆管后，取一直径为1mm左右的钢针，水平放置于肝外胆管，6-0丝线结扎。结扎完成后，退出钢针，止血，缝合，给予抗生素注射护理。
存活兔于结扎14周后处死，观察其胆道系统变化情况。结扎前及结扎术后根据兔存活情况于1、2、4、11周经耳中央动脉抽血1.5mL测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）。
胆总管自狭窄以上呈不同程度扩张，有的呈现串珠样扩张，但无包裹性胆石沉积，此类肝纤维化程度较重。术后第1周，ALT、AST、TBIL、DBIL明显升高，第2周，ALT、AST、TP、ALB下降，TBIL、DBIL降至正常。
常用疾病动物模型
常用疾病动物模型 上海丰核可以为广大客户提供各种疾病动物模型定制服务，同时提供相关疾病模型的药物敏感性实验分析服务。 客户只需要提供疾病模型的用途及建模方法的选择，我们会根据客户的具体要求量身定做各种动物模型服务。
小鼠或裸 鼠 加贴近实际（八）心血管疾病模型 1. 动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+维生素D喂养）兔高脂、高胆固醇饲喂兔造模，成 膜后血脂变化显著，为伴高血脂 症的动脉粥样硬化 4月血管组织病 理切片染色 2. 主动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+主动脉球囊损伤）兔此模型用大球囊损伤加高脂饲 养方法成功建立兔主动脉粥样 硬化狭窄的动物模型，为相关基 础研究提供可靠模型。 2月动物实验模型病理切片展示 一、CCl4诱导的肝脏纤维化 简介：肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应，是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。CCl4为一种选择性肝毒性药物，其进入机体后在肝内活化成自由基，如三氯甲基自由基，后者可直接损伤质膜，启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞的模型结构等，造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。 动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模，小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化，中央静脉之间形成了纤维桥接。（Masson染色） 二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型
简述：CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一，其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢，产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，引起肝细胞膜的通透性增加，可溶性酶的大量渗出，最终导致肝细胞死亡，并引发肝脏衰竭。根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型，其中给药剂量和给药方法是其技术关键。对于复制急性肝衰竭动物模型，往往采用大剂量一次性灌胃或腹腔注射给药。 图. (A) CCl4注射后0.5 d的HE染色表明CXCL14过表达增加了肝脏组织的嗜酸性变性面积(在照片中用虚线标记)(p < 0.05)。 (B) 1.5天组织样本的HE染色表明CXCL14过表达造成了比对照组更大面积的细胞坏死(p < 0.05)。 (C)同时还造成了中央静脉周围肝细胞中明显的脂肪滴积累。图中P和C分别表示动物模型的门静脉和中央静脉。KU指凯氏活性单位。 细胞凋亡检测结果 TUNEL标记没有显示CXCL14免疫中和小鼠和对照小鼠在凋亡细胞数量上的差异。C0, C1和C2分别是对照组0 d，1 d,和2 d样本，T1
2型糖尿病大鼠模型研究概况
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化档
肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化 作者：乔伟1,2，鲁建国1，王青1，李鹏超1 作者单位：(1. 第四军医大学唐都医院普外科，陕西西安710038;2. 西安市铁路中心医院普外科，陕西西安710054) 【摘要】目的通过建立大鼠肝硬化模型，了解肝硬化形成过程中门静脉血流动力学的变化。 方法雄性健康SD大鼠100只随机等分为5组：4个实验组(80只，每组20只)采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同时饮用酒精溶液进行诱导;对照组(20只)给予普通饮水和饲料。 分别于2、4、7、10周后观察肝脏的组织病理学改变及门静脉血流动力学变化。结果肝硬化过程中肝细胞经历变性、坏死、纤维组织增生及假小叶的形成;血流动力学检测指标发生 相应变化，平均动脉压(MAP)表现为逐渐下降，门静脉压力(PVP)、下腔静脉压(IVCP)及门静脉阻力(PVR)表现为逐渐升高，门静脉血流量(PVF)表现为先升高后下降，内脏血管阻力 (SVR)表现为先下降后升高。结论本方法可建立稳定的肝硬化门脉高压症模型，且适于大批量制作;在大鼠肝硬化门脉高压形成过程中门静脉血流动力学及肝组织病理学均发生了变 化，可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。 【关键词】肝硬化;门脉高压;组织病理学;血流动力学;大鼠 Histopathological and hemodynamic changes of rats with liver cirrhosisQIAO Wei1,2, LU Jian guo1, WANG Qing1, LI Peng chao1 (1. Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi an 710038; 2. Department of General Surgery, Xi an Railway Center Hospital, Xi an 710054, China)ABSTRACT: Objective To investigate the hemodynamic changes during the progression of portal hypertension (PHT) by establishing a model of liver cirrhosis in rats. Methods Totally 100 healthy male SD rats were assigned to 5 groups randomly (1 control group and 4 experimental groups with 20 rats in each group). Animal model of cirrhosis was established by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and drinking alcohol. Rats in control group were given water and forage. The changes in the portal hemodynamics during the pathological process of liver tissues were observed after 2, 4, 7 and 10 weeks. Results During the formation of experimental cirrhosis, the hepatocytes of rats underwent 4 processes: degeneration, necrosis, fibrosis and pseudolobular proliferation. The hemodynamic changes were observed: the mean arterial pressure declined gradually after injection, but the portal venous pressure, the inferior vena cava pressure and the portal vascular resistance increased slowly. The portal venous flow reduced after ascending whereas the splanchnic vascular resistance increased after descending. Conclusion This method can establish a
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型_叶春华
·论著·四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型 叶春华 刘浔阳 (中南大学湘雅三医院普外科,湖南 长沙 410013) [摘要]【目的】探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加以评价,为下一步探索肝硬化门脉 高压症治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。【方法】90只雄性SD大鼠随机分为两组:实验组(70只)采用四 氯化碳(CCl4)+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导,诱导期间CCl4浓度在一定范围内逐步增加,并用食用白酒 替代医用乙醇溶液;对照组(20只)给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。同时采用一系列的检查方 法加以评估。【结果】实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡率12.86%。实验结束时,按照成模标准, 造模成功大鼠共61只,均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成,成模率87.14%。实验组门静脉压力比对 照组明显增高(P<0.05);血清总胆红素、谷丙转氨酶及谷草转氨酶较正常对照组明显升高(P<0.05),而 血清白蛋白较之正常对照组明显降低(P<0.05)。对照组20只全部存活。【结论】该方法可形成稳定的肝 硬化门脉高压症模型,可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。此模型制作周期短(仅需9周),成模率高, 死亡率低,具有简便、快捷、高效的优点,适于大批量制作。 [关键词] 肝硬化,实验性; 疾病模型,动物; 大鼠; 四氯化碳 Study on Method of Inducing Hepatic Cirrhosis Model in Rats by Carbon Tetrachloride Y E Chun-hua, LIU X un-yang(Department o f General Surgery,the T hird X iangy a Hosp ital,Central South University,Changsha,410013,China) [Abstract]【Objective】T o dev elo p and evalua te an ideal means to induce cir rhotic model in rats for nex t study o n live r cir rhosis with po r tal hypertension trea tment.【M ethods】N inety male SD rats we re randomly di- vided into two gr oups,T he e xperiment g roup(n=70)wa s treated with CCl4,PBS and ea table alcoho l and the co ncentra tion of CCl4and eatable alcohol were increased stage by stag e in a ce rtain range during the ex peri- ment.T he co nt rol g roup(n=20)wa s trea ted w ith common drinking w ater and animal feeds,the f requency and do se w ere the same a s the experime nt g ro up,meanwhile evalua ted by a se ries of check methods.【Results】 Af te r being induced w ith above means,the ra t mor tality of the ex periment gr oup w as12.86%,and the fo rma- tion rate of liver cir rhosis false lobe was87.14%.T he po rtal v eno us pressure of the e xperiment g roup w as higher than the co ntrol g ro up(<0.05),ST B,G PT,G O T we re higher than the co ntro l g roup,but SA B de- crea sed(P<0.05).T he contro l g r oup w as all surv iv al.【Co nclusio n】T he pro cedure is fair ly stable and relia- ble,the model is useful for resea rch in liv er cir rhosis w ith po rtal hy pe rtension.T he cy cle time of inducing cir- rhosis model is shor t the mor ta lity is low. [Key words] liver cir rho sis,ex pe rimental; disesase models,animal; rats; carbon tetr achloride [中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7171(2005)05-0619-04 由于病毒性肝炎、酒精性肝病等原因造成的慢性肝病和肝硬化患者有增多的趋势,近十年来有关门脉高压症的研究成为消化学界的热点。本实验通 [作者简介] 叶春华(1967-),男,湖南安乡人,博士,主治医师,主要从事肝胆外科临床工作。 [收稿日期] 2005-04-01过腹腔内注射四氯化碳(CCl4)加饮用苯巴比妥钠和食用酒精,探讨建立一种理想的肝硬化模型的方法。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 90只Sprag ue-Daw ley鼠(简称SD大鼠),全部雄性,体重180～220g,普通大鼠饲
小鼠肝硬化模型制备研究进展
小鼠肝硬化模型制备研究进展 【摘要】目的以小鼠为例，介绍近年来肝硬化模型制作的研究进展。方法选取国内外近十几年来关于肝硬化模型的相关文献，对其进行整理、归纳和分析。结果就目前而言，主要有两大类建模方案：单因素诱导建模与复合因素诱导建模。结论虽然制作肝硬化模型的方法很多，但是符合人们预期的有效方法却较少，因此，要想制作出令人们满意的肝硬化模型，还有很长的路要走。 【关键词】小鼠肝硬化；模型制备；研究进展 【中图分类号】R657.3+1【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）09-005-01 肝硬化（hepatic cirrhosis，HC）是临床常见的慢性进行性肝病，主要由一种或多种疾病因长期或反复作用而形成的弥漫性肝损害。早期可能因为肝脏代偿功能较强从而无明显症状，后期则主要以肝功能损害和门脉高压为主要特征，并有多系统同时损坏，晚期则经常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症，并且肝硬化具有极高的死亡率[1]。然而，针对肝硬化者以疾病，目前医学界尚未完全明确其发病机制。为此，建立肝硬化模型，通过模型研究肝硬化的发病机制，进而探索肝硬化的预防与治疗手段已经成为我们亟待解决的问题。 引起肝硬化因素有很多，包括病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、工业毒物或药物、循环障碍和代谢障碍等等，综上所述，其中最主要的人们可能会因为自身平时的各种不良生活习惯以及恶劣的生活环境，从而引发人们的肝硬化疾病的发生。近年来，针对肝硬化的发病机制的相关研究已经陆续展开，主要是建立在以动物为模型的基础上。但是由于动物与人类之间仍存在巨大差异，我们完全可以想象到，若要完全模拟肝硬化的病理特点制备实验动物模型难度相当大。因此，为深入了解肝硬化的发病机制和特点，本文将以动物中的小鼠为例，综合近十几年来的已有相关研究，对肝硬化模型的制备方法进行整理、归纳和分析，以期为临床研究提供参考和依据。根据近十几年的文献综述，我们总结出了两种主要的肝硬化制作模型，分别是单因素诱导性肝硬化模型和多因素诱导性肝硬化模型，下面我们分别举例说明两种模型。 1 单因素诱导性肝硬化模型 1.1 四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型 以小鼠为例，四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型是最传统的制作方法，通常多采用30%-60%CCl4油剂皮下注射的方法，一般小鼠为1-3mL·kg（体重），每周两次[2]。此模型制作周期短（仅需9周），模型成功率高，死亡率低，具有简便、快捷、高效等优点，特别适于大批量制作。 1.2 化学致癌物诱导性肝硬化模型 长期使用低剂量致癌物也可能引起肝硬化。化学致癌药物诱发的效果比较稳定，但是由于这些化学致癌物本身的毒性很大、且易挥发，所以制作模型时需格外注意自身安全，必要时尽量隔离。 1.3 酒精性肝硬化模型 不良的生活习惯如长期酗酒是引起肝硬化的主要原因之一。针对这一原因，早期相关研究选择使用胃瘘管灌注酒精性液体饲料的方法建立了酒精性肝损伤动物模型，但因为动物的酒精摄取量难以控制，酒精法较少使用。目前的相关研究中大多采用液体食物，通过改变食物成
肝损伤动物模型的建立和应用
万方数据
万方数据
肝损伤动物模型的建立和应用 作者：王福根， 孙静霞 作者单位：浙江杭州市第六人民医院,杭州市,310014 刊名： 中国药房 英文刊名：CHINA PHARMACY 年，卷(期)：2006,17(9) 被引用次数：12次 参考文献(10条) 1.Xu JQ;Lee G;Wang HM Limited role for CXC chemokines in the pathogenesis of a-naphthylisothiocyanate-induced liver injury[外文期刊] 2004(03) 2.黄正明;杨新波;曹文斌化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究[期刊论文]-解放军药学学报 2005(01) 3.Ayoub SS;Botting RM;Goorha S Acetaminophen-induced hypothermia in mice is mediated by a prostaglandin endoperoxide synthase 1 gene-derived protein[外文期刊] 2004(30) 4.Yasuda M;Okabe T;Itoh J Differentiation of necrotic cell death with or without lysosomal activation:application of acute liver injury models induced by carbon tetrachloride(CCl4) and dimethylnitrosamine(DMN)[外文期刊] 2000(10) 5.Horn TL;Bhattacharjee A;Schook LB Altered hepatis mrna expression of apoptotic genes during dimethylnitrosamine exposure[外文期刊] 2000(02) 6.Wang T;Shankar K;Ronis M Potentiation of thioacetamide liver injury in diabetic rat is due to induced CYP2E1[外文期刊] 2000(02) 7.Kin WH;Hong F;Radaeva S Statl plays an essential role in LPS/ D-galactosanine-induced liver apoptosis and injury 2003(06) 8.Kaneko Y;Harada M;Kawano T Angmentation of Va14NKT cell-mediated cytotexicity by interleukin4 in an autocrine mechanism resulting in the development of concanavalina-indued hepatitis[外文期刊] 2000(01) 9.赵冬梅;刘耕陶双环醇对刀豆蛋白A所致小鼠肝细胞核DNA损伤保护作用[期刊论文]-中华医学杂志 2001(14) 10.邱英锋;缪晓辉;蔡雄卡介苗加脂多糖建立的大鼠急性免疫性肝损伤模型的研究[期刊论文]-西北国防医学杂志2004(05) 本文读者也读过(4条) 1.王志彬药物性肝损害的特点分析-附70例报告[期刊论文]-医学信息（下旬刊）2010,23(9) 2.吴玉强.邓家刚.钟正贤.杨兴.WU Yu-qiang.DENG Jia-gang.ZHONG Zheng-xian.YANG Xing铁包金提取物抗肝损伤作用的研究[期刊论文]-时珍国医国药2009,20(4) 3.禄保平.白娟.江若霞.Lu Baoping.Bai Juan.Jiang Ruoxia以常用中西药物建立药物性肝损伤动物模型的分析与探讨[期刊论文]-河南中医学院学报2008,23(4) 4.马丽娜.华碧春药物性肝损伤动物模型研究进展[期刊论文]-亚太传统医药2011,07(2) 引证文献(12条) 1.徐伟.宋倩倩.苗双.刘宁宁.马健.王振勇青蒿素对CCl4致犬急性肝损伤模型抗氧化指标的时效影响[期刊论文]-兽药与饲料添加剂 2009(4)
MSCS不同途径移植对肝硬化模型大鼠的治疗影响
MSCS不同途径移植对肝硬化模型大鼠的治疗影响 摘要】目的探讨骨髓间充质干细胞不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别，为临床干细胞移植提供依据。方法用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精 喂养的方法建立肝硬化大鼠模型,将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组、门静脉 移植组、肝动脉移植组、尾静脉移植组，构建对比实验，观察并评估。结果三种 不同的途径移植MSCS肝硬化模型到小鼠体内，四周后移植组较未移植组肝功能 明显改善，转氨酶明显降低，纤维化程度均明显改变，三种移植方式无明显统计 学差异。结论骨髓间充质干细胞MSCS移植肝细胞大鼠后，门静脉，肝动脉组， 尾静脉组移植MSCS数量均无统计学差异，对肝硬化的质量均有效，而且三种治 疗效果类似。 【关键词】大鼠骨髓间充质干细胞移植途径肝硬化 随着社会城镇化、老龄化的出现、器官组织病变以及细胞组织因素的增多患病的风险几 率增高，人体机能器官细胞内不断适应甚至损伤。肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由 一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显 症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道 出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。通过此类病情的发展将选 择有利的因素进行对肝硬化进行治疗，所以通过骨髓间充质干细胞(MESENCHYMAL Stem Cells，MSCS)不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别进行研究。成体干细胞具有多潜能分化的 作用,在肝硬化的微环境中可以转分化为肝细胞,或者与残存肝细胞融合,或者通过旁分泌的作用,改善肝功能。大量实验及临床已经证明,骨髓间充质干细胞移植治疗,可以减轻肝硬化程度, 改善肝脏功能。 实验材料与方法 1、1 实验材料 1、1、1 实验对象选取48只5日龄的健康大鼠，雌雄不限，重量200-220g之间，用于 分离成熟的肝细胞，由长沙医学院机能实验室提供。 1、1、2 实验仪器与试剂Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ)，四氯化碳分析纯，橄榄油分析纯，胰蛋 白酶，染色剂，一次性无菌注射剂，35 mm培养皿，培养液，培养箱，同型对照抗体，手术 显微镜一套等。 1.2 实验方法 1.2.1大鼠模型的构建取48只健康大鼠，分为两组正常组8只为对照组，肝硬化模型组 40只，用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化小鼠模型,4周之后，对大鼠肝脏进行病理学检查，将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植 组(n=8)、肝动脉移植组(n=8)、尾静脉移植组(n=8)。8周之后，将处死所有大鼠并取出肝脏。 1.2.2 MSCS的获取制备无菌条件下分别将四组门静脉、肝动脉、尾静脉等移植到肝细胞 悬液中，通过不同方法构建三种对比试验，提取健康SD小鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原 代培养骨髓MSCS,利用CM-DIL(活细胞染色剂)标记间充质干细胞，无菌条件获取股骨，去除 骨上肌肉组织，培养液反复冲洗收集细胞悬液，培养传代3次。,然后通过3种途径分别进行 移植，均需常规麻醉，备皮，消毒，铺巾，打开腹腔，用一次性注射器注射MSCS悬液。 1.2.3 病理学检查 HE染色切片观察，正常的大鼠肝脏，肝小叶清晰可见，形态正常。实 验组肝细胞有些脂肪病变，部分坏死并有炎症，肝小叶不清晰，肝细胞索杂乱，形成许多假 小叶，符合肝硬化诊断标准。实验组较正常组对比，转氨酶显著升高，血清蛋白明显降低， 肝纤维化严重，有明显伤害。MSCS移植后，肝细胞有所恢复，结构有所改善，肝细胞损伤 降低，三种途径对大鼠肝硬化有明显效果，但三种方式效果相似无明显区别 讨论 肝硬化（Cirrhosis Of Liver）是临床常见的慢性进行性肝病，是我国常见的主要死亡原因 之一。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织
消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子_的影响_戚忠玺
第11卷 第5期 2009 年 5 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 11No. 5 May，2009 肝硬化是临床常见的慢性进行性肝脏疾病，是由一种或多种病因长期或反复作用造成的弥散性肝脏损害，肝硬化腹水是肝硬化门脉高压征的主要临床表现。消臌软坚丸是我院治疗肝硬化腹水的制剂，临床研究显示对腹水具有良好效果[1]。为了进一步阐明其作用机理，本实验采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，然后给予药物治疗，以观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和血清和肝组织转化生长因子-α（TGF-α）的影响，以揭示其延缓肝硬化进程，治疗肝硬化腹水的作用机理。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1 实验动物 健康SD大鼠60只，体重（180±20）g，雌雄各半，由河南安阳华兴实验动物养殖场提供，动物合格证号：SCXK（豫）2004-0007。 1.1.2 实验用药 消臌软坚丸由河北中医肝病医院制剂室制备（该院自拟方，由黄芪30g，车前子30g，葶苈子15g，沉香6g，鳖甲30g等组成，课题组监制）。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。1.1.3 复方鳖甲软肝片（阳性药对照组）由内蒙 古福瑞制药有限责任公司提供，国药准字（2005）Z-71号。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。 1.1.4 主要试剂 转化生长因子-α（TGF-α）试剂盒（批号：20051202），购自解放军总医院科技开发中心放免所。 1.1.5 主要仪器722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂；1-15K型高速冷冻离心机，美国Sigma公司；HH-W21-600型电热恒温水箱，天津泰斯特仪器有限公司；LEICA RM2125型切片机，德国LEICA公司；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂。 1.2方法 1.2.1 模型制备60只大鼠均适应性喂养1周，随机分为造模组48只和正常组12只。参照文献[2]，48只造模组大鼠首次予皮下注射40% 四氯化碳（CCl4）花生油溶液0.5mL/100 g体重，以后每周2次皮下注射0.3mL/100g，共9周。造模开始前2 周均以20%猪油，0.5%胆固醇，79.5%玉米面混合饲料（由河北医科大学动物实验中心加工）喂养，第3~9 周 消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α的影响 戚忠玺1，耿兰书1，耿束华1，王少贤2，魏 萱2 （1.河北中医肝病医院，河北 正定 050800；2.河北医科大学中医学院，河北 石家庄 050091）摘 要：目的：观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α（TGF-α）的影响。方法：采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，以复方鳖甲软肝片为对照，观察消臌软坚丸对大鼠肝脏病理形态学和TGF-α的影响。结果：与正常组比较，模型组大鼠肝间质广泛纤维组织增生，将正常肝小叶分割成大小不等的肝细胞团（即假小叶形成），血清和肝组织TGF-α含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，高、低剂量组和对照组肝小叶结构亦受损，少量纤维组织增生，但未见形成间隔。血清和肝组织TGF-α含量明显下降（P<0.05或P<0.01）。结论：消臌软坚丸能显著改善肝硬化大鼠的肝脏病理组织学损害，同时可降低血清和肝组织TGF-α水平，具有显著的抗肝脏纤维化，阻断肝硬化进程的作用，对腹水的产生与消退也产生积极的影响。 关键词：消臌软坚丸；肝硬化；病理形态学；转化生长因子 中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-842X (2009)05- 0193- 02 Effect of Xiaoguruanjian Pill on Hepatic Pathological Histology and Blood Transforming Growth Factor of Hepatic Cirrhosis Rat QI Zhong-xi1，GENG Lan-shu1，GENG Shu-hua1，WANG Shao-xian2,WEI Xuan2 （1.HeBei Hepatopathy Hospital of TCM，Zhengding 050800，Hebei，China; 2.College of TCM,Hebei Medical University, Shijiazhuang 050091,Hebei，China） Abstract：Objective: To observe the effect of Xiaoguruanjian pill on liver Cirrhosis rats blood and liver transforming growth factor-α(TGF-α). Methods: reproduced the rats models of cirrhosis by adopting complex factors, compared with Fufangbiejiaruanganpian, the effect of Xiaoguruanjian Pill on hepatic pathology and TGF-αwere observed. Results: Compared with normal group, extensive fibrous tissue hyperplasia can be seen in hepatic mesenchyme of the model group, the liver pseudolobule formed,the contents of TGF-αin serum and liver were increased（P<0.01 or P<0.05）.Compared with model group, there were a few fibrous tissue hyperplasia in high-dosage group, low-dosage group and control group, no fibrotic septa formed. the contents of TGF-αin serum and liver were decreased（P<0.01 or P<0.05）. Conclusion: Xiaoguruanjian pill could obviously improve the cirrhosis rat pathology, decrease the contents of TGF-αin serum and liver, decrease or restrain the happening or development of ascites. Key words：Xiaoguruanjian pill;hepatic cirrhosis; pathology; transforming growth factor-α 收稿日期：2008-12-21 基金项目：河北省中医药管理局科学研究计划课题（2007150） 作者简介：戚忠玺（1972-），男，山东威海人，副主任医师，硕士，从事各种急慢性肝病的中西医研究。 193
大鼠肝硬化
大学答题纸 （20 11 —20 12 学年第1 学期） 课号：课程名称：医学动物实验学改卷教师： 学号：姓名：得分： 肝硬化大鼠的综述 【摘要】：肝硬化是严重威胁人类健康的常见疾病，任何破坏肝脏内环境稳定的过程，炎症、毒性损害、肝血流改变、先天性代谢障碍、化学物质和药物毒性、肝内循环紊乱和胆汁流动阻塞等都可导致肝硬化。大部分麻醉药在肝脏代谢，肝硬化对麻醉药及手术后苏醒影响较大，建立一个类似于人类肝硬化的动物模型是深入研究与肝硬化有关课题不可缺少的环节。因此，适宜的肝硬化动物模型是疾病研究的基础，对于评价疗效具有不可忽视的作用。本文以大鼠为肝硬化模型，从模型的优缺点、建立、临床研究方面加以综述。 【关键词】：肝硬化、动物模型、大鼠、临床研究 【正文】：肝硬化（liver cirrhosis）是一种常见的慢性肝病，可由一种或多种原因引起肝脏损害，肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。建立肝硬化大鼠模型不仅是研究肝硬化发病机制的重要基础，也是临床评价肝硬化诊断和治疗方法的有效手段。大鼠的肝硬化模型具有人类肝硬化的基本形态特征，其病理改变呈阶段性进展，且造模方法简单，模型形成率高，重现性好、死亡率低等特点。但同时大鼠动物模型因肝硬化病因的多样性、与人的种属差异等原因，在很多研究领域不能作为理想的实验对象。 现对目前常用的几种肝硬化大鼠的建立方法进行阐述： （一）化学损伤法 1. 四氯化碳法该法是最为常用的肝脏毒素，最早、最广泛用于实验性肝纤维化研究[1]。其作用机制是：在肝细胞内质网中，四氯化碳通过肝微粒体细胞色素P450氧化酶激活后，产生自由基—CCl3。—CCl3 与肝细胞内大分子发生共价结合，破坏肝细胞功能。此外—CCl3还可攻击膜上不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原，肝细胞从合成分泌Ⅲ型胶原变为合成分泌I型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化。 2. 乙醇法乙醇可通过多种途径损害肝脏的结构和功能，直接刺激胶原蛋白的合成，从而促进肝纤维化的发生，从而建立肝硬化模型[2]。乙醇直接损伤血管内皮，导致血小板聚积，大量细胞因子释放并相互作用，激活贮脂细胞变成纤维细胞，合成并分泌大量的胶原并沉积，引起肝纤维化甚至肝硬化。常用的乙醇法有腹腔注射、尾静脉注射、灌胃，8周末肝细胞变性坏死，贮脂细胞开始活化；12周末，形成轻度纤维化改变，贮脂细胞活化明显并分泌大量胶原。 3. 致癌物法常用的有二甲基亚硝胺、硫代乙酰胺等。二甲基亚硝胺是常见的致肝癌剂。它通过肝微粒体代谢，其中间产物与核酸、蛋白质等结合致肝细胞损伤，同时产生的活性甲基化产物使核酸、蛋白质甲基化导致肝坏死[1]。常用的造模方法是用1％二甲基亚硝胺按1mL／kg腹腔注射，每周前3d给药，每天1次，持续3周，第4周仅在周一给药1次，4周后大鼠肝硬化形成…。硫代乙酰胺在肝内代谢成硫氢化合物，与肝大分子物质结合，引起肝损伤，同时还能激活磷脂酶A，，引起肝细胞膜损害，肝细胞坏死。制模时可用3％硫代乙酰胺50mL／kg体质量腹腔注射，每天1次，8周成模。 4. 铁代谢法可给大鼠喂饲铁负荷饮食和肌内注射右旋糖苷铁，导致肝内铁堆积和Ito细胞内-I型胶原基因表达增强。长期铁负荷使大鼠线粒体氧化代谢减少，库普弗细胞铁负荷。许多证据表明，铁超负荷肝硬化沙鼠铁沉积Ito细胞，导致这些细胞胶原水平增高，而在给同样程度铁负荷的沙鼠予富维生素E饮食却可以完全预防肝硬化的发生，提示脂质过氧化参与铁负荷诱导肝硬化过程[3]。 5. D-半乳糖胺法半乳糖胺进人体内后可造成尿嘧啶核苷三磷酸及其他尿嘧啶核苷酸的消耗，
银杏叶提取物对大鼠肝硬化的治疗作用及其机制研究
银杏叶提取物对大鼠肝硬化的治疗作用及其机制研究 发表时间：2010-08-20T17:45:18.187Z 来源：《中国医药卫生》杂志2009年第3期供稿作者：高山 [导读] 研究银杏叶提取物（extract of ginkgo biloba，EGb）对大鼠肝硬化的影响并探讨其机制 高山郑州大学第三附属医院药剂科(郑州450052） 【摘要】目的研究银杏叶提取物（extract of ginkgo biloba，EGb）对大鼠肝硬化的影响并探讨其机制。方法用四氯化碳加高脂饮食法造成大鼠肝硬化模型，银杏叶片以20 mg/kg 、15mg/kg、10m g/kg的量给药30天，测定血清总蛋白（T-P）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的含量，计算白蛋白与球蛋白的比例（A/G）。TUNEL测肝细胞凋亡指数。结果与模型组相比，银杏叶提取物各组能显著降低ALT、AST、TBIL含量，增加白蛋白含量，提高白/球比例，显著降低血清HA、LN和PCⅢ水平；显著降低细胞凋亡指数。并具有剂量依赖性。结论银杏叶提取物对大鼠肝硬化具有保护作用，其机制可能是通过抗肝细胞凋亡来实现的。 【关键词】银杏叶提取物肝硬化肝细胞细胞凋亡 ［中图分类号］R931.74 ［文献标识码］A ［文章编号］1810－5734(2009)03-0004-03 银杏树叶的提取物（extract of ginkgo biloba，EGb）具有扩张血管，调节血脂，抑制血栓形成；改善记忆；清除自由基等多种药理作用。临床用于治疗心脑血管方面的疾病和癌症。已发现银杏叶提取物对肝纤维化、肝癌等具有一定的治疗作用 ［１-6］，临床上已有银杏叶提取物成功用于治疗失代偿期肝硬化的例子，本文主要研究银杏叶提取物——银杏叶片（每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内脂2.4mg）对大鼠肝硬化的作用，并进行初步的机制探讨。 1 材料与方法 1.1 试验材料： 实验动物：60只SD大鼠，体重180-220g，购自河南省实验动物中心。动物合格证号：SCXK（豫）2005-0001，动物房温度为 25±2℃，标准大鼠颗粒饲料饲养，自由饮水。 银杏叶片，扬子江药业集团生产，批号08011301。使用时用0.5%的CMC-Na混悬，配成不同浓度。 1. 2 主要试剂及仪器： 四氯化碳（CCl4）：郑州化学试剂二厂；羧甲基纤维素钠（CMC-Na）：上海浦东化学品有限公司，批号：20071026；透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）放免试剂盒均购自北京北方免疫试剂研究所；其它试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。BT2000全自动生化分析仪，意大利Vialicenza，Roneoo156。TUNEL 试剂盒, 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3 模型制备： 60只大鼠适应性饲养1周，随机分为造模组50只和正常组10只。采用复合造模方法复制大鼠肝硬化模型 ［７］ ，每周2次皮下注射四氯化碳，0.3ml/100g体重，共10周。造模开始第1-2周均以20%猪油、0.5%胆固醇、79.5%玉米面混合饲料喂养，第3-9周以0.5%胆固醇和99.5%玉米面混合饲料喂养。整个造模期间以30%乙醇作为饮料让大鼠自由饮用。正常组则以正常饲料和纯净水喂养。造模过程中死亡3只。实验10周末造模组随机抽取3只经肝组织病理切片确认造模成功后予以分组治疗。 将造模成功的44只大鼠随机分为4组，每组11只，即模型组、EGb 高、中、低剂量组，分别灌胃给予0.5%的CMC-Na及20m g/kg 、15mg/kg、10m g/kg的EGb。给药30天，给药过程中模型组死亡一只。给药结束后，大鼠禁食14小时，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血后处死动物，取肝脏。离心分离血清，全自动生化分析仪测定血清总蛋白（T-P）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）含量，计算白蛋白/球蛋白（A/G）比例；放免法测定血清中HA、LN、PCⅢ含量。肝细胞凋亡原位检测按照试剂盒说明书操作进行，凡满足下列条件之一者即确定为凋亡肝细胞：（1）出现凋亡小体；（2）核呈新月形；（3）核浓缩。每张切片选择5个具有代表性的高倍视野（400×），共计数500个肝细胞，取阳性细胞平均百分率作为凋亡指数（Apoptosis index，AI），即：凋亡指数=（5个高倍视野内阳性肝细胞数之和/500）×100%。 1.4 统计学处理： 所有数值以±S，利用SPSS11.0软件进行单因素方差分析、两两比较及相关性分析，p<0.05具有显著性差异，p<0.01具有极显著性差异。 2 结果 2.1 银杏叶片对肝硬化大鼠血清中ALT、AST、TBIL的影响： 肝硬化模型建立后，肝细胞受损，细胞中的酶释放进入血液中，导致血清中ALT、AST含量明显升高；同时，肝功能受损时，胆红素不能与葡萄糖醛酸结合进入胆汁而在血液中蓄积，引起血液中总胆红素水平升高。经EGb干预后，与模型组相比，银杏叶提取物高中低剂量组可明显降低血清中ALT、AST、TBIL的含量，并呈剂量依赖性。 2.2 银杏叶片对肝硬化大鼠血清中T-P、ALB、A/G的影响 肝硬化大鼠肝脏受损后，合成蛋白质的能力下降，从而导致T-P、ALB的量降低，同时肝细胞损伤时球蛋白生成增加，故A/G显著降低。经银杏叶提取物干预后，与模型组相比，银杏叶提取物各剂量组可显著升高T-P、ALB和A/G。 2.3 银杏叶提取物对肝纤维化大鼠血清中HA、LN、PCⅢ水平的影响 2.4 对凋亡指数的影响： 正常组肝组织中TUNEL染色阳性肝细胞较少见，多散在分布于中央静脉周围。模型组可见不同程度的TUNEL染色阳性肝细胞，发生凋亡的肝细胞常位于脂肪变严重以及炎症细胞浸润区域附近，随着脂肪肝程度以及肝细胞炎症、坏死的加重，其肝细胞凋亡指数明显增高。给予EGb后发现TUNEL染色阳性肝细胞减少，与模型组相比，EGb高、中剂量组肝细胞凋亡指数明显降低。 3 讨论 肝硬化是肝脏慢性反复损伤后肝脏细胞外基质（ECM）合成与降解之间平衡失调、细胞外基质过度沉积的结果。当肝细胞被破坏、细胞膜通透性增高及线粒体损伤时，AST和ALT被释放到血液中，使之明显升高，酶活性的高低与肝细胞受损的程度相一致；肝细胞受损时，