讲稿-12食用菌栽培实验指导

实验一母种培养基配制（4 学时）

一、实验目的掌握固化培养基的配制，学会棉塞的制作方法。分析有天然原料与无天然原料培养基在配制过程中的不同。

二、基本技能训练内容制备马铃薯滤液；融化琼脂；培养基的分装；棉塞的制作。

三、主要仪器设备与材料

天平、称量纸、牛角匙、精密pH 试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等；马铃薯、葡萄糖或蔗糖、麸皮、琼脂、水。

四、实验方法

1、配方（PDA）:马铃薯200g，葡萄糖20g,琼脂15~20g,自来水1000ml, pH自然。

2、制作方法

1）制滤液：马铃薯去皮和芽眼，切成0.5mm粗的长条，称取200g放入锅中，加水

1000ml, 将其煮沸后再文火煮20min。用双层纱布过滤，滤液用水定容至1000ml。

2）化琼脂：将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水不足水量）。

3）分装：通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶以不超过其容积的一半为宜）。管口或瓶口不要沾染培养基。

4）制棉塞：棉花以白色长绒的不脱脂棉花为宜。根据试管口大小取棉花，将其卷成棉塞，最好外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞长度约6~7cm，塞入试管2/3。要求外表光滑，外包的纱布无皱折，松紧适宜等。

5）包扎：管口堵入棉塞后7 或9 支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。

五、实验报告要求完成实验报告、详细记录培养基配制过程，并回答分装的技术要求有哪些？

实验二母种的转管与组织分离（2 学时）

一、实验目的清楚无菌操作要点，熟练操作母种转管、组织分离技术。能正确分析自己的接种结

果。

二、基本技能训练内容接种环境的处理；母种的转管；组织分离。

三、主要仪器设备与材料超净工作台、酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、

75%酒精、标签纸等；空白斜面培养基、平菇母种、平菇子实体等。

四、实验方法

1、接种环境的处理

超净工作台的消毒，用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20min 后使用。

2、母种的转管

1）手及菌种管的消毒

用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦手和菌种管表面，在酒精灯焰上略烧试管外的棉塞后，

立即将菌种管放入超净工作台内。

2）转管酒精棉球擦拭接种环。左手持菌种管和斜面管，两支试管口对齐于火焰上方。右手持接种环，并将其在灯焰上干热灭菌，用小指及无名指拔掉棉塞，使棉塞底部朝外。接种环冷却后伸入菌种管内取略豆粒大带有培养基的菌种块，迅速移人斜面培养基的中部，菌丝朝上。然后，将棉塞在火焰上烧一下，立即塞入试管口，旋紧棉塞。

接种环不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即贴标签，注明菌种名称及接种日期，再进行适温培养。

3、组织分离法此法是生产中最常用的方法，具有操作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种在培养基条件适宜的情况下，能保持原菌种的优良性状。

1）种菇消毒

在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体。

2）取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒大组织，放入斜面培养基

上。迅速塞上棉塞。

4、母种的培养

将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中，放于培养箱中适温培养。2~3 天后每天都要检查菌丝生长情况。及时挑拣污染试管（出现粘膜或杂色）。

5、注意事项

1）分离的母种一定纯化后再做出菇试验。

2）纯化菌丝长至斜面1/2 时，挑尖丝转管，培养成再生母种。出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。

3）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7~10 天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。

五、实验报告要求完成实验报告，详细记录转管接种和组织分离过程，分析接种成败的原因。

实验三原种、栽培种的培养基制备（4 学时）

一、实验目的能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作。

二、基本技能训练内容

培养料的配制；菌种瓶及菌种袋的分装。

三、主要仪器设备与材料

高压灭菌锅、菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋；材料木屑、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。

四、实验方法

1、配方与培养料配制

1）颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）

配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。

配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15~20min （熟而不烂，勿破皮），捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。

2）棉籽壳麦麸培养基

配方：木屑87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。

配制：将木屑、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边

翻拌至含水量达60%~65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。

2、分装

原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。

栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。

3、培养基的灭菌原种与栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。高压

蒸汽灭菌，

一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1C条件下，保持灭菌时间1~2h。若用常压灭菌，需保持最高温度10h 左右，闷1 天或1 晚。

五、实验报告要求：完成实验报告，详细记录原种、栽培种培养基的制备过程，分析母种、原种、栽培种培养料配方不同的原因。

实验四原种与栽培种的接种与培养（2 学时）

一、实验目的能用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。并通过培养观察，分析自己的接种

结果。

二、基本技能训练内容

原种的接种；栽培种的接种。接种环境的处理；母种的转管；组织分离。

三、主要仪器设备与材料超净工作台、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、消毒药品等；高压灭菌后的菌袋。

四、实验方法两菌种的生产过程基本相同，主要区别在于接种时取接的菌种不一样。

1、接种：灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中，待料温降至约30C, 进行抢温接种。

1 ）接原种

用接种耙取蚕豆大母种（连同培养基），放于瓶中培养料的孔口处（1 支母种约接5~8瓶原种）。斜面尖端及原来的母种块勿接入。

2）接栽培种用大镊子、接种铲或接种匙取枣大原种，放于瓶或袋中料面上（若两端扎活结的菌种袋，每端都要接入原种）。1 瓶原种约接60瓶或25袋栽培种。去弃表面老化菌丝及老种块。堵棉塞或用线绳扎袋口。贴标签，注明菌种名称和接种日期。

2、培养

1 ）接种后，将种瓶（袋）置于适温下培养。菌种瓶初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，再将其横放。菌种袋根据气温可单层或多层叠放。隔4~5 天转动或调换位置，以利于受温一致，并避免培养料水分的沉积。

2）常检查：及时去除出现杂色、粘液及菌种死亡的瓶或袋。

3）逐渐降温：当菌丝长至料深的1/2时，降温2~3C，以免料温升高，并有壮丝作用。

4）注意菌龄：原种约30~40 天、栽培种约20~30 天菌丝长满，再继续培养7~10 天是使用的最好菌龄。

五、实验报告要求完成实验报告，记录实验结果，并对出现的异常现象进行原因分析？

实验五平菇代料栽培管理技术（8 学时）、实验目的

能制作优质发酵料，快速正确的进行袋栽。正确处理发菌过程中的异常现象。

二、基本技能训练内容

制作发酵料；袋栽；排袋发菌利用课余时间进行观察和管理。