蛋白酶水解酪蛋白透明圈初筛方法的条件探索与应用效应

酪蛋白磷酸肽的药理作用

酪蛋白磷酸肽的药理作用 【摘要】酪蛋白磷酸肽具有促进钙、铁、锌的吸收、利用，增强精卵的结合等作用。近年来对其进行了深入研究发现它在增强机体免疫力，促肿瘤细胞凋亡方面有潜在的药理作用，通过对其作用机制的研究，将为其用于临床提供理论依据。 【Abstract】Casein protein phosphorylation peptide with the promotion of calcium,iron,zinc absorption,utilization and enhance the integration of sperm，In recent years their has conducted in-depth study found that it enhanced immunity,and promote apoptosis of tumor cells have the potential pharmacological effects,through the mechanism of its role will be to provide a theoretical basis for clinical. 【Key words】Casein Phospho peptides; Pharmacological effects 英文：Casein Phospho Peptides(CPP) 别名：酪蛋白磷肽 化学结构：CPP的活性中心是成串的磷酸丝氨酸和谷氨酸族，其基本结构可表示为-serp-serp-serp-glu-glu-，相对分子质量约2000~4000。 性状：乳白色或淡黄色粉末，有轻微的芳香气味。易溶于水，水溶液呈中性，在酸性条件下不易沉淀。有良好的热稳定性。 来源与结构：Nato[1]最早用酪蛋白喂养大鼠,在肠内容物中发现CPP。Nicholas等[ 2-3]用胰酶或胰蛋白酶水解酪蛋白,精制、纯化制备CCP。CPPs有α和β两种构型[4]，其主要功能区是αSI-(59-79)5P和β(1-25)4P，不同条件下制备的CPP 都含有相同的核心构:-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-(Ser:丝氨酸,Glu:谷氨酸,P:磷酸基)。此结构中磷酸丝氨酸残基［-Ser(P)-］成簇存在,在肠道pH弱碱性环境下带负电荷,可阻止消化酶的进一步作用,使CPP不会被进一步水解而在肠道中稳定存在。同时,-Ser(P)-对CPP 的功能发挥起重要作用。冯凤琴等[5]研究了CPP的纯度、CPP 中氮与磷摩尔比值(N∶P)与其功能的关系,发现N∶P 越小,CPP的肽链越短,磷酸基密度越大,CPP 纯度越高,促进钙吸收和利用的作用越强。 1 酪蛋白磷酸肽的药理功能 1．1 促进小肠对钙的吸收25-(OH)2VitD3可促进钙吸收,其吸收率取决于小肠内游离的钙离子浓度。人日常膳食中,谷类等植物性食物中含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分,它们在小肠下端pH 7~8 的环境下与钙结合成磷酸钙沉淀,因此影响钙离子的被动吸收。CPP[1] 能抑制磷酸钙沉淀的形成,使游离钙保持较高的浓度,促进钙离子的被动吸收,从另一个途径提高钙离子的吸收率。冯凤琴等[3]用pH-stat法观察实验室制得的CPP抑制磷酸钙沉淀的效果。结果发现0．11~0．12 g/L的CPP使磷酸钙沉淀的形成延缓5~40 min。相同条件下,不加

常用溶液配制方法

一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

酪蛋白水解物

酪蛋白水解物 一、中文名称：酪蛋白水解物 二、拉丁文名称/或英文名称：Lactium 三、主要成分：多肽 四、酪蛋白水解物（Lactium）的来源 酪蛋白水解物（Lactium）是以脱脂牛奶为原料，经过分离酪蛋白、水解、喷雾干燥等程序得到的一种酪蛋白水解产物。其典型化学成分为：蛋白质75%，脂肪1%，水分5%，灰分15%，乳糖1%。可溶解于水，无苦味，pH2-9时稳定，热稳定，可耐180℃高温50min。 酪蛋白水解后得到的αs1-Cn （f91-100），是一种含10个氨基酸的三维结构多肽，在Lactium中的典型含量为1.8%，其氨基酸序列为：Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg。 五、酪蛋白水解物（Lactium ）生产工艺流程图和简述 1.工艺流程图： 脱脂牛奶 酪蛋白分离 碱化 胰蛋白酶水解

酸化 热处理 巴氏杀菌 浓缩、喷雾干燥 过筛 包装 2. 工艺说明 1.）以脱脂牛奶为原料，沉淀分离酪蛋白 2.）使用氢氧化钠将其碱化到pH为7.5-8.5之间 3.）在40-55℃下用胰蛋白酶进行水解。得到的产物中，游离10肽在干物质中的含量最低为1.8%。 4.）用盐酸进行酸处理，将pH降到3.0- 5.0 5.）在90℃下热处理1.5分钟 6.) 85℃进行巴氏杀菌、浓缩，此步骤为关键控制点 7.）喷雾干燥（进风温度180-200℃），得到粉末产品。 8.）过筛得到粒度在1mm以下的均匀粉末，其中游离10肽的含量最低为1.8%。此过程为关键控制点。

3. 拟公告的生产工艺简述：以脱脂牛奶为原料，经过酪蛋白分离、水解、浓缩、喷雾干燥等工艺制成。 六、酪蛋白水解物（Lactium）对酸奶的促进作用 酸奶具有促进肠道蠕动与消化和机体物质的代谢，并具有提高人体免疫力、防衰老、抗肿瘤等作用。酸奶中的大量乳酸菌及乳酸代谢产物能调节人体肠道微生态平衡，达到补充营养、防病、治病和保健的目的。 将酪蛋白水解物(含蛋白质7.6%)以2%(w/w)添加到奶液中混合发酵,做空白样对照。研究了二者发酵过程中各发酵参数的变化,并对二者的质构进行了分析比较。研究结果表明:酪蛋白水解物能明显促进酸奶发酵;促发酵作用随所添加的水解物水解程度提高而增强;添加酪蛋白水解物改变了酸奶发酵过程中的 pH 下降速度,在发酵中期二者的 pH 下降速度之间存在最大差距;质构分析表明添加2%酪蛋白水解物对酸奶整体质构有所改善。 七、酪蛋白水解物（Lactium）的作用 1、增强记忆力 2、提高精神状态、集中注意力 3、提高睡眠质量下降 4、缓解压力 5、控制体重 6、美容养颜 八、酪蛋白水解物（Lactium）的适应人群 1、记忆力下降者 2、注意力不集中精神状态不佳者 3、失眠、睡眠质量下降者 4、工作、生活、学习压力大者 5、肥胖人群 6、需要美容养颜者 九、酪蛋白水解物（Lactium）的社会及经济效益 在现代社会，生活节奏加快，人们面对的各种各样的压力越来越大。由于个体差异，

溶液配制及浓度计算

化验分析数据处理及结果计算 本章教学目的： 1、了解分析化学常用计量单位。 2、掌握化学分析中常用的溶液浓度表示方法。 3、掌握分析化学计算基础。 4、掌握可疑值概念，分析数据的取舍方法4d、Q检验法、Grubbs法，它们的特点及相互关系。 5、理解平均值精密度的表示方法，平均值的置信区间。 教学重点与难点：溶液浓度表示方法；滴定分析结果计算；可疑数据的取舍。 教学内容： 第一节分析化学中的计量关系 一、法定计量单位 什么是法定计量单位？ 法定计量单位：由国家以法令形式规定使用或允许使用的计量单位。 我国的法定计量单位：以国际单位制单位为基础，结合我国的实际情况制定。 国际单位制SI—International System of Units 简单介绍SI基本单位。 二、分析化学中常用法定计量单位 1、物质的量：用符号n B表示，单位为摩尔（mol）。 规定：1mol是指系统中物质单元B的数目与0.012kg碳-12的原子数目(6.02×1023)相等。 物质基本单元：可以是原子、分子、离子、电子及其它粒子和这些粒子的特定组合。 例如：H2O为基本单元，则0.018kg水为1mol水。

H2SO4为基本单元，则0.098kg H2SO4为1mol。 1/2 H2SO4为基本单元，则0.098kg H2SO4为2mol 由此可见：相同质量的同一物质，由于所采用基本单元不同，其物质的量也不同。表示方法：1 mol H其质量为1.008g； 1 mol H2其质量为2.016g； 1 mol 1/2Na2CO3其质量为53.00g； 1 mol1/5 KMnO4其质量为31.60g。 2、质量（m）：单位为千克（kg）；克（g）；毫克（mg）；微克（μg）。 1kg = 1000g = 1×106mg = 1×109μg 3、体积（V）：单位为米3（m3） 分析化学中：升（L）；毫升（ml）；微升（μl）。 1m3 = 1000L = 1×106ml = 1×109μl 4、摩尔质量（M B）：单位为千克/摩（kg/mol），常用g/mol表示。 m M B= n B 介绍p185页表5-7，常用物质的摩尔质量。 5、摩尔体积（V m）：单位为m3/mol；常用L/mol。 理想气体：22.4L/mol 。 v V m= n B 6、密度（ρ）：kg/m3；g/cm3；g/ml。 7、元素的相对原子质量（Ar） 指元素的平均原子质量与12C原子质量的1/12之比。 8、物质的相对分子质量（Mr），即以前的分子量。 指物质的分子或特定单元平均质量与12C原子质量的1/12之比 三、分析化学计算基础 四、溶液浓度表示方法 1、物质的量浓度 物质的量浓度= 物质的量/混合物的体积

酪蛋白课程报告

生物技术学院 课程论文 课程名称：高级生物化学成绩： 教师签名：

酪蛋白研究进展综述 提纲：酪蛋白简介－酪蛋白亚基结构－酪蛋白酶特性－酪蛋白活性肽研究进展 摘要：酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，常见于哺乳动物及其乳汁中，如母牛、羊 以及人奶。酪蛋白对酸敏感，pH较低时会沉淀，因此本科生实验室常用其进行蛋 白质的沉淀反应。哺乳动物的主要蛋白是α-酪蛋白，然而人类乳汁中没有α-酪蛋 白，人乳中的酪蛋白主要是β-酪蛋白形式。对于人类幼儿而言，酪蛋白是氨基酸 的来源，但同时，它也是钙和磷的主要来源，同时，因为胃的酸性环境，酪蛋白还 能在胃中形成凝乳以便消化。本文综合中外文献，对酪蛋白进行了研究进展综述。 关键词：酪蛋白；蛋白亚基；活性肽 酪蛋白简介 在20℃，pH值为4.6时，牛乳中能沉淀下来一种呈酸性的蛋白质，我们将其称为酪蛋白。酪蛋白又名干酪素、乳酪素、酪朊，在牛奶中含量非常丰富。它是一种含磷的蛋白质，具有极高的营养价值，其中含有多种生物活性肽，因此它具有抗菌、降血压、抗氧化和促进双歧杆菌增殖等功能。 酪蛋白在母体蛋白质序列内是无活性的，通过体内或体外酶水解的方式释放出来后，它们即可作为具有类似激素活性的调节物质。这些产物可用作肽类药物、肽类试剂，主要用于科学试验和生化检测;也可用于活性肽功能性食品中，具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等功能。 酪蛋白的亚基结构 酪蛋白的分子质量约为20－25ku，由4类遗传变种组成，分别为αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和K-酪蛋白。其中，αs2-酪蛋白是牛乳中的主要酪蛋白，占总含量的38%；β-酪蛋白含量仅次于αs-酪蛋白，占总含量的35%，

常用标准溶液配制方法

常用标准溶液配制方法

1

2一般规定 本标准中所用的水，在没有注明其他要求时，应符合GB6682中三级水的标准。 本标准中所用试剂的纯度应在分析纯以上。 工作中所用的分析天平的砝码、滴定管、容量瓶及移液管均需定期校正。 本标准中标定时所用的基准试剂为容量分析工作基准试剂；制备标准溶液是所用的试剂为分析纯以上试剂。 本标准中所制备的标准溶液的浓度均指20c 时的浓度。在标定和使用时，如温度有差异，应只能附录A（补充件）补正。 “标定”或“比较”标准溶液浓度时，平行试验不得少于8次，两人各作4平行，每人4平行测定结果的极差与平均值之比不得大于0.1%。两人测定结果的差值与平均值之比不得大于0.1%，最终取两人测定结果的平均值。浓度值取四位有效数字。 本标准中凡规定用“标定”和“比较”两种方法测定浓度时，不得略去其中的任何一种，且两种方法测得的浓度值之差值与平均值之比不得大于0.2%，最终以标定结果为准。

制备的标准溶液与规定浓度之差不得超出规定浓度的+—5%。。 配制浓度等于或低于0.02mol/L 标准溶液时乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液除外，应于临用前将浓度高的标准溶液用煮沸并冷却的水稀释，必要时重新标定。 碘量法反应时，溶液的温度不能过高，一般在15~20c之间进行滴定。 滴定分析（容量分析）用标准溶液在常温（15~25）下，保存时间一般不得超过两个月。 3标准溶液的制备和标定 4.1 氢氧化钠标准溶液（使用期：2个月） c(NaOH) = 1 mol/L c(NaOH) =0.5 mol/L c(NaOH) =0.1 mol/L 4.1.1 配制 称取110g氢氧化钠，溶于100ml无二氧化碳的水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管吸下述规定体积的上层清夜，用无二氧化碳的水稀释至1000ml，摇匀。 c(NaOH) ，mol/L 氢氧化钠饱和溶

酪蛋白磷酸肽的概况

酪蛋白磷酸肽的概况 第一节：酪蛋白磷酸肽的基本概况 中文名称：酪蛋白磷酸肽 英文名称：Casein Phosphopeptides 钙是人体内含量最丰富的元素之一，对人体健康起着十分重要的作用，然而它也是最易缺乏的矿物质元素之一。当今世界上缺钙已成为一大营养问题，即使经济很发达的国家也未能幸免，在我国表现得尤为突出。据报道，我国老年人因缺钙引起的骨质疏松发病率高达30%-50%，儿童因缺钙引起的佝偻病高达40%，妊娠妇女缺钙比例也非常高，严重威胁着人们的健康。因此，补钙是众所需求。 现代研究已证实钙缺乏的主要原因并不是食物不足，而是由于吸收率低下。如何提高钙的吸收率，是人们长期以来一直在进行的研究。而今从牛奶中分离的一种生物活性肽——酪蛋白磷酸肽（CPP），由于具有很强的促钙吸收活性，正成为功能性食品添加剂的开发和研究热点。 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides），简称CPP，是以牛奶酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再对水解产物进行分离纯化而得到的含有簇磷酸丝氨酚的多肽。专家们认为，将钙和CPP应用于各类食品中，作为一种食品基料，可提高食品的附加值，使人们长期存在的钙摄取量不足的问题得以解决，有效地预防骨质疏松症和儿童缺钙症。 CPP具有促进成长期儿童骨骼和牙齿发育的作用，并能预防和改善骨质疏松症，促进骨折患者的康复，预防和改善缺铁性贫血；还具有抗龋齿作用。 CPP可添加于各类食品。包括饮料、烘烤食品、冷饮、乳制品、发酵食品、快餐食品、糖果、果酱、儿童咖喱饭、口香糖及保健品和调料中，可满足各种年龄段人群的需要。CPP还可用于动物饲料中，促进动物体外受精。纯CPP和高纯CPP可应用于制药工业，能进一步促进钙质吸收，防止矿物质流失。

胰蛋白酶活力测定

实验胰蛋白酶活力测定 一、原理 福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。 蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。 二、实验仪器 试管 7220分光光度计 恒温水浴锅 三、实验试剂 福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中) 0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml 10%三氯乙酸溶液 0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)： 0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再

加少量0. 2mol/L 磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml ，冷藏在(冰箱)里。 500ug/L 酪氨酸溶液 胰蛋白酶溶液(冰箱中) 四、实验步骤 标准曲线的制作：按下表加入试剂： 0.20.40.60.81.0蒸馏水 1.0 0.80.60.40.20500ug/L 酪氨酸溶液6 54321管号 各管中加0.5%酪素2ml ，于37℃水浴中反应15分钟，然后加入10%三氯乙酸3ml ，过滤除去沉淀，取清液1ml ，加入0.55mol/L 碳酸钠5ml ，再加入福林试剂1ml ，于37 ℃水浴中显色15分钟，测OD 680。 以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。 样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂

0 OD6801 1福林试剂B 5.0 5.0 0.55mol/L碳酸钠溶液 37水浴中显色15分钟1 1上清液 过滤3.0 3.0 10%三氯乙酸溶液1.0 0 2mg/ml胰酶溶液0 1.0 0. 2mol/L磷酸缓冲液 37水浴中酶解15分钟2.0 2.0 0.5%酪素溶液 备注2 1 管号 五、结果计算 酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。样品中含酶活力单位=A/15 ╳F A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数 F—酶液稀释倍数 原始数据：（注：7号为待测液） 液体编 号 0 1 2 3 4 5 7 分光光 度计值 0 0.057 0.172 0.201 0.255 0.373 0.919 分光光 度计值 0 0.057 0.173 0.194 0.263 0.386 0.928 分光光 度计值 0 0.068 0.174 0.194 0.271 0.391 0.934

实验室常用溶液的配制

实验室常用溶液的配制 1．30%丙烯酰胺溶液（100ml） 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃温度。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。 2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L） 【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。 【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml） 【配制方法】在0.8ml蒸馏水中溶解60mg ATP，用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水稀释1ml 【注意】分装成小份保存于-70℃ 4．10mol/L乙酸铵溶液（1L） 【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。在4°C 储存。 【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。 5．10%过硫酸铵溶液（10ml） 【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4℃保存数周。 6．1mol/L CaCl2溶液（200ml） 【配制方法】称取54g CaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200 ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。 【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器（0.45微米）过滤除菌，并在使用前冷却至0℃。 7．2.5mol/L CaCl2溶液（20ml） 【配制方法】称取13.5g CaCl2·6H2O并溶于15ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 8．脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液 【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种 dNTP的实际浓度。

溶液配制步骤

一．用容量瓶配制溶液所用仪器： 1、烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、托盘天平、分析天平、药匙（固体溶质使用）、移液管（液体溶质使用） 2、容量瓶 1.构造： 磨口、细颈、梨形平底 2.特点： ① 容量瓶上注明温度和容积。② 容量瓶颈部有刻度线。 3.使用范围：专门用来配制一定体积、一定物质的量浓度的溶液。 4.注意事项：① 使用前先检漏。 ② 不可装热或冷的液体。③ 不能用来溶解固体物质或存放液体或进行化学反应。 3、使用容量瓶六忌：一忌用容量瓶进行溶解（体积不准确），二忌直接往容量瓶倒液（会洒到外面）；三忌加水超过刻度线（浓度偏低）；四忌读数仰视或俯视（仰视浓度偏低，俯视浓度偏高）；五忌不洗涤玻璃棒和烧杯（浓度偏低）；六忌标准溶液存放于容量瓶（容量瓶是量器，不是容器）。 二．用容量瓶配制溶液的步骤： 全过程有计算，称量，溶解，冷却，转移，洗涤，定容，摇匀/装瓶八个步骤 八字方针：计，量，溶，冷，转，洗，定，摇 以0.1mol/LNaCO 3溶液500ml 为例说明溶液的配制过程 1.计算：NaCO 3物质的量＝0.1mol/L ×0.5L ＝0.05mol ，由NaCO 3摩尔质量106g/mol, 则NaCO 3质量＝0.05mol ×106g/mol=5.3g 2.称量：用分析天平称量5.300g ，注意托盘天平、分析天平的使用。 3.溶解：在烧杯中用100ml 蒸馏水使之完全溶解，并用玻璃棒搅拌（注意：应冷却，不可在容量瓶中溶解） 4.转移，洗涤：把溶解好的溶液移入500ml 容量瓶，，由于容量瓶瓶口较细，为避免溶液洒出，同时不要让溶液在刻度线上面沿瓶壁流下，用玻璃棒引流。为保证溶质尽可能全部转移到容量瓶中，应该用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒二、三次，并将每次洗涤后的溶液都注入到容量瓶中。轻轻振荡容量瓶，使溶液充分混合。（用玻璃棒引流） 5.定容：加水到接近刻度2-3厘米时，改用胶头滴管加蒸馏水到刻度，这个操作叫定容。。定容时要注意溶液凹液面的最低处和刻度线相切，眼睛视线与刻度线呈水平，不能俯视或仰视，否则都会造成误差 6.摇匀：定容后的溶液浓度不均匀，要把容量瓶瓶塞塞紧，用食指顶住瓶塞，用另一只手的手指托住瓶底，把容量瓶倒转和摇动多次，使溶液混合均匀。这个操作叫做摇匀。 7.贴上标签：把定容后的Na 2CO 3溶液摇匀。把配制好的溶液倒入试剂瓶中，盖上瓶塞，贴上标签。 问题：在配制溶液的过程中哪些操作可能引起溶液浓度的误差？ 三．过程分析： 根据 ，引起误差的原因就在“溶质n B ”和“溶液体积V ”是否准确，所以引起误差的可能有： 一. 固体药品的称量与液体药品的量取是否准确。 二. 溶于水放热或吸热的试剂，溶解后未冷却会引起溶液体积偏差，使所配溶液浓度出现误差。 c B == n B ￣ V

常用溶液的配制方法

常用溶剂的配制方法 1.磷酸缓冲液： 0.15M，pH=7.4磷酸缓冲液： KH2PO4：2.041g+100ml水K2HPO4·3H2O：10.3g+300mL水 两液混合即成400mL，0.15M，pH=7.4的磷酸缓冲液 0.2mol/L 不同pH的磷酸缓冲液：先配制0.2 mol/L的磷酸二氢钾溶液和0.2 mol/L的磷酸二氢钾溶液，然后按下表配制：

2.硼酸缓冲液 0.15M，pH=8.2硼酸缓冲液： 四硼酸钠溶液：2g+35 mL水硼酸溶液：3.246g硼酸+350 mL水 两液混合即成700 mL，0.15M，pH=8.2的硼酸缓冲液 0.2 mol/L（硼酸根），不同pH的硼酸缓冲液：先配制0.2 mol/L的硼酸溶液和0.05 mol/L的四硼酸钠溶液，然后按下表配制： 3.甘氨酸-盐酸缓冲液：0.2 mol/L 0.2 mol/L甘氨酸溶液（15.01g/L）

4.柠檬酸缓冲液：0.1mol/L C6H8O7·H2O:0.1mol/L 溶液为21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O：0.1mol/L溶液为29.41g/L

5.Tris-HCl缓冲液：0.1mol/L 100mL0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与一定量的0.1mol/L盐酸混匀，可得0.1mol/L，不同pH的缓冲液。 200mL 0.1M Tris（2.42g）加入0.1M HCl 24mL→pH=9，0.1M Tris-HCl buffer 6.醋酸缓冲液：0.2mol/L 0.2mol/L醋酸钠：27.22g三水醋酸钠（无水的为16.4g）+1L水 0.2mol/L醋酸：11.55mL冰醋酸+1L水

蛋白酶活力的测定

实验三蛋白酶活力的测定 一、目的 掌握用分光光度计法测定蛋白酶活力的原理与操作技术。 二、原理 蛋白酶水解酪蛋白，其产物酪氨酸能在碱性条件下使福林——酚试剂还原，生成鉬蓝与钨蓝，以比色法测定。 三、试剂及仪器 1．福林—酚试剂 称取50g钨酸钠(Na2WO4?2H2O)，12.5g钼酸钠(Na2MoO4?2H2O)，置入1000mL原底烧瓶中，加350mL水，25mL85%磷酸，50mL浓盐酸，文火微沸回流10h，取下回流冷凝器，加50g硫酸锂(Li2SO4)和25mL水，混匀后，加溴水脱色，直至溶液呈金黄色，再微沸15min，驱除残余的溴，冷却，用4号耐酸玻璃过滤器抽滤，滤液用水稀释至500mL。 使用时用2倍体积的水稀释。 2．0.4mol/L碳酸钠溶液：称取42.4g碳酸钠，用水溶解并定容至1000mL。 3．0.4mol/L三氯乙酸溶液：称取65.5g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。 4．2%酪蛋白溶液 称取2.00g酪蛋白(又名干酪素)，加约40mL水和2~3滴浓氨水，于沸水浴中加热溶解，冷却后，用pH7.2磷酸缓冲溶液稀释定容至100mL，贮存于冰箱中。 5．pH7.2磷酸缓冲液 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液：称取31.2g磷酸二氢钠(NaH2PO4?2H2O)，用水溶解稀释至1000mL； 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液：称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)，用水溶解稀释至1000mL； pH7.2磷酸缓冲溶液：取28mL 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液和72mL 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液，用水稀释至1000mL。 6．标准酪氨酸溶液： 准确称取0.1g DL-酪氨酸，加少量0.2mol/L盐酸溶液(取1.7mL浓盐酸，用水稀释至100mL)，加热溶解，用水定容至1000mL，每毫升含DL-酪氨酸100微克。 7．仪器：分光光度计、试管 四、操作步骤 1．标准曲线绘制 在上述各管中各取1mL，分别加入5mL 0.4mol/L碳酸钠溶液，1mL福林—酚试剂，于400C水浴显色20min，在680nm波长下测吸光度，绘制标准曲线，在标准曲线上求得吸光度为1时相当的酪氨酸μg数，即为K值。 2．酶液的制备

胰蛋白酶的动力学研究

实验三：胰蛋白酶的动力学研究 一.实验目的 1.掌握酶的米氏常数km值和Vmax的测定原理和方法。 2.了解底物浓度对酶促反应速率的影响。 二.实验原理 1.米氏方程：V=Vmax[S]/km+[S] V是反应初速度，[S]是底物浓度 2.采用双倒数作图法，对1/V=km/(Vmax[S])+1/Vmax作图： 3.本实验以酪蛋白为底物，来测定胰蛋白酶的km值 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： －NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。 三.试剂与仪器 1.0.5%的胰蛋白酶溶液，用无离子水溶解。 2.酪蛋白酶溶液：40g/L，30 g/L，25 g/L，20 g/L，15 g/L，10 g/L，5 g/L，2.5 g/L；用稀碱溶解。

3.0.25%的酚酞溶液：2.5g酚酞用50%的酒精溶解，定容至1L。其变色范围是8.0—10.0（无色红 色）。 4.中性甲醛溶液：75ml分析纯甲醛加15ml0.25%酚酞乙醇溶液，以0.01mol/lNAOH滴定至微红，密闭 存放于棕色玻璃瓶中。 四.操作步骤 1. 组号 1 2 3 4 5 6 7 8 2.准备：7个50ml的三角瓶（分别编号：0 6），分别加入2.5ml中性甲醛与1滴酚酞（如果所取 甲醛已是微红色，则不用加碱；若不是微红色，以0.01mol/lNAOH滴定至微红色）。7瓶溶液的颜色应当一致。 3.滴定空白：按照操作1中的组号分别在0号三角瓶中加入5ml相对应的酪蛋白底物，以0.01mol/l 标准的NAOH滴定到微红色，记录消耗NAOH的体积。 4.1个200ml的碘量瓶（带磨口塞三角瓶），加40ml操作1中的组号相对应的酪蛋白底物，记为V空白， 在37℃水浴恒温锅中水浴10min，胰蛋白酶溶液也要在37℃水浴恒温锅中水浴10min。 5.10min到点后，取4ml胰蛋白酶溶液加入到酪蛋白溶液中，充分混匀，立即取出5ml反应液加入1 号三角瓶中，计时开始（0时刻）。滴入2滴酚酞，用0.01mol/lNAOH滴定至微红色，记录体积V0min。 6.按照操作5的步骤，在保温2min，4min，6min，8min，10min后，分别取反应液加入到2——6号 三角瓶中，分别滴入2滴酚酞，并用0.01mol/lNAOH滴定至微红色，分别记录体积V2min、V4min、V6min、V8min、V10min。 五.结果与分析 1.

常用溶液配制方法题库1-2-10

常用溶液配制方法题 库1-2-10

问题： [单选,A1型题]配制100ml的0.2molL盐酸（36.46molL），已知市售盐酸的浓度为37%，比重1.19，所需盐酸的体积为（） A.1.66L B.1.66ml C.1.98ml D.1.98L E.1.66×10ml

问题： [单选,A1型题]以下关于当量的概念错误的是（） A.当量浓度是指1L溶液中所含溶质的Eq数（1ml溶液中所含溶质的mEq数）表示的浓度，表示为μ B.已知NaOH的分子量为40，计算NaOH当量为40 C.当量浓度的单位可以用1ml溶液中所含溶质的Eq数表示 D.当量的计算方法为分子量与阳离子的价数的比值 当量浓度是指1L溶液中所含溶质的Eq数（1ml溶液中所含溶质的mEq数）表示的浓度。表示为μ，其中体积和Eq数一一对应。

问题： [单选,A1型题]缓冲溶液能够对抗外来少量强酸强碱的原因，错误的是（） A.多元酸的酸式盐及其对应的次级盐，弱碱及其对应的盐，弱酸极其对应的盐所组成的缓冲溶液的作用机制相似 B.以醋酸-醋酸钠缓冲系为例，NaAc是缓冲溶液的抗酸成分 C.以醋酸-醋酸钠缓冲系为例，HAc是缓冲溶液的抗碱成分 D.缓冲作用是有一定限度的，一旦强酸、强碱量过大，缓冲溶液将丧失原有缓冲能力 E.起到缓冲作用的两种以上的组成成分都可以组成缓冲溶液 缓冲溶液可由下列三种成对的组分组成，它们分别是弱酸及其对应的盐，多元酸的酸式盐及其对应的次级盐，弱碱及其对应的盐。 (免费小游戏 https://www.360docs.net/doc/ac17038878.html,/)

问题： [单选,A1型题]制备75%乙醇，即将75ml纯乙醇加入25ml蒸馏水，因此其百分浓度可计为（） A.重量-重量百分浓度 B.重量-体积百分浓度 C.体积-体积百分浓度 D.体积-重量百分浓度 E.以上均可 百分浓度的标准定义是每100份溶液中所含溶质的份数，用符号（%）表示，其包括重量-重量（gg）即每100g溶液中所含溶质的克数，重量-体积（gml）即100ml溶液中所含溶质的克数，体积-体积百分浓度（mlml）即每100ml溶液中所含溶质的毫升数。其用公式表示为百分浓度=（溶质的份数／溶液的份数）×100%。

水解酪蛋白琼脂培养基配方

北京华越洋生物提供 QQ:1733351176 水解酪蛋白琼脂培养基,MHAmedium 用途：用于抗生素敏感试验 水解酪蛋白琼脂培养基 配方（每升）： 琼脂 17g 牛肉 300g(从中提取浸出粉) 可溶性淀粉 1.5g 酪蛋白水解物 17.5g 最终pH7.3±0.2 水解酪蛋白琼脂培养基使用方法： 1、 称取本品38g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,备用. 2、 试验菌液的制备：从TSA 平皿上挑取3-5个形态相似的菌落顶端部分接种MHB 或TSB 培养基.经36±1℃培养4-6小时后,比浊至0.5麦氏单位. 3、 接种：用无菌棉拭浸取比浊好的菌液,在管壁内轻轻转压除去过多菌液,然后再轻轻涂抹培养基,每一平皿涂抹三次.每次涂抹后均需将平皿转动60度,再行下一次涂抹.每一质控菌株涂抹三个平皿. 4、 贴片：接种后的平皿置室温片刻,待稍干后,用无菌镊子将抗生素纸片均匀贴布于平皿琼脂表面.各纸片间中心间距不得小于24mm,纸片距平皿边不得小于15mm.一旦纸片接触琼脂表面,即不可再移动,因此时药物已开始扩散. 5、 培养：纸片贴妥后,在15-30分钟内,将平皿翻过来置于36±1℃培养16—24h 后,观察结果.平皿培养时不宜堆放,以二个相叠为宜. 水解酪蛋白琼脂培养基 原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。 用法： 称取本品 42.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,待冷至 50℃， 倾入无菌平皿,备用。 质量控制： 在36±1℃培养18-24小时。 水解酪蛋白琼脂培养基用途:用于培养基原材料，提供细菌生长所需的生长因子。 技术指标 总氮 (8)

常用缓冲溶液的配制

常用缓冲溶液的配制方法1 ?甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L ） 2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L ） 24 Na2HPO4 ? 2H2O 分子量=178.05, 0.2 mol/L 溶液含35.01 克/升。 C4H2O7 ? H2O 分子量=210.14, 0.1 mol/L 溶液为21.01 克/升。

4 ①溶 液或浓盐酸调节，冰箱保存。 687 2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7 ? 2H2O:分子量294.12, 0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 6. Na2Ac H2O 分子量=136.09, 0.2 mol/L 溶液为27.22 克/升。

7 ?磷酸盐缓冲液 （1 2 4 2 Na2HPO4 12H2O 分子量=358.22 , 0.2 mol/L 溶液为71.64 克/升。 Na2HPO4 2H2O 分子量=156.03, 0.2 mol/L 溶液为31.21 克/升。（2）磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L ） Na2HPO4 2H2O 分子量=178.05, 1/15M 溶液为11.876 克/升。 KH 2PO4 分子量=136.09, 1/15M 溶液为9.078 克/升。 &磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M） 2 4

9. 10. Tris -盐酸缓冲液（0.05M , 25C） 50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100 毫升。 C H0CH2 NH2 分子量=121.14; 0.1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 11 硼砂Na2B4O7H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。硼酸H2BO3，分子量 =61.84,0.2M溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。

pH对热处理状态下κ-酪蛋白水解作用和凝乳酶凝胶脱脂乳作用的影响解读

pH对热处理状态下κ-酪蛋白水解作用和凝乳酶 凝胶脱脂乳作用的影响 Effect of pH at heat treatment on the hydrolysis of k-casein and the gelation of skim milk by chymosin 目录 2 2 4 4 4 4 4 5 5 5 8牛奶的pH重调，酪蛋白在胶体相和血清相之间的分布

摘要 脱脂牛奶是指牛奶在调整pH值在6.5和7.1之间,在90℃加热30分钟后的牛乳。热处理后,样本再次进行调整到自然pH（pH值为6.67），建立新的平衡。高浓度的变性乳清蛋白与在pH为6.5时加热过程中的酪蛋白胶束有关（约占加热30分钟后总数的70%—80%）。变性乳清蛋白的含量在加热的条件下随pH的升高而降低。所以分别在pH6.7、6.9、7.1加热30分钟后与酪蛋白胶束有关的变性乳清蛋白的含量为30%、20%、10%。在加热时pH的增加使越来越多的酪蛋白转入到血清相中。以κ-酪蛋白的损失和副-κ-酪蛋白的形成时间作为用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测牛奶样本凝乳酶处理的结果。无论pH值在加热或热处理应用中，κ-酪蛋白的损失和副-κ-酪蛋白的形成在常温或加热的样品中相似。检测用凝乳酶作用过的牛奶样品的胶凝化性能随时间的变化表明不管已变性的乳清蛋白是否与酪蛋白微胶粒或牛奶中的血清有关，经过热处理的奶的凝胶化时间显著增加，所形成的凝胶的牢固性显著减小。pH对热处理没有影响。这些结果表明，牛奶的热处理只对凝乳酶反应（酶相）的初级阶段有很小的影响。然而，热处理对本反应的第二阶段有显著影响，不管变性乳清蛋白是否和酪蛋白胶束或牛奶血清中不沉淀的聚集体有关，其效果是类似的。 关键词：牛奶；热处理；pH值；凝乳酶；酪蛋白胶束；凝胶。 1．简介 在牛的酪蛋白胶束中，κ-酪蛋白主要位于二硫键连接的聚合物的胶束表面。疏水的N末端区域与亲水的胶束相关联，带负电荷的C末端区域作为一个高度柔性的纤维在胶束表面突出。 这种结构使酪蛋白胶束的稳定性提高，因为柔性纤维提供了抗聚集的空间位阻和静电稳定。虽然酪蛋白非常稳定，但是他们可以通过某些方法破坏，如酸化至等电点，加入溶剂如乙醇或某些特定酶。 酪蛋白胶束酶的不稳定是奶酪制作过程的基础。传统上所用的酶提取物是凝乳酶，是从年轻的小牛的第四个胃获得，它包含了一些主要控制牛奶凝固的主要凝乳酶（EC3.4.23.4）。凝乳酶添加到牛奶中后发生的反应可被分为不同的步骤或阶段。第一阶段是酶水解κ-酪蛋白的酶促反应，形成二肽作为反应产物。是一种N末端为副-κ-酪蛋白与酪蛋白胶束保持缔合，而C-末端的糖巨肽（GMP），被释放到血清相中的肽。实际上，凝乳酶被酪蛋白胶束表面上的柔性纤维切割，降低了表面电荷作用，去除立体“毛发”层。这导致酪蛋白胶束的不稳定。第二阶段包括胶束聚集，当有足够的κ-酪蛋白被水解并且如果温度和钙离子的活性足够高，这个阶段就会发生。第二阶段导致凝胶的形成。一些报道称在第三阶段将进一步反应,其中步骤包括如脱水收缩作用,非特异性的蛋白水解作用和结构重组的凝胶网络。

胰蛋白酶活性测定

胰蛋白酶活性测定 在动物胰脏中，胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的。在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后，在小肠上腔有Ca2+的环境中，为肠激酶或胰蛋白酶所激活，其肽链 N -端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解，失去一个酸性6肽，其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶。 胰蛋白酶原分子量约为24 000，其等电点为pH8.9；胰蛋白酶的分子量约为23 400，其等电点为pH 10.8。 胰蛋白酶在pH3.0时最稳定，其浓溶液可贮存于冰箱（0℃以下）数周而活性无显著丧失。pH＜3时，胰蛋白酶易变性。 PH＞５时，胰蛋白酶易自溶。胰蛋白酶催化活性的最适pH为7.6～7.8。 重金属离子、有机磷化合物和反应产物都能抑制胰蛋白酶的活性。胰脏、卵清和大豆中也含有一些蛋白质对胰蛋白酶活性具有抑制作用。 [原理] 胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的肽键具有高度的专一性。此外，胰蛋白酶也能催化由碱性氨基酸的羧基所形成的酰胺键和酯键，有高度的专一性仍表现为对碱性氨基酸羧基一侧的选择对此等化学键的催化水解活性的敏感度为：酯键＞酰胺键＞肽键。因此，可以利用含有这些化学键中任一种键型的底物来研究胰蛋白酶的专一催化活性。 本实验方法一采用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯[（BAEE），N-benzoyl-L-arginine ethyl ester]作为底物. N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）在波长253nm下的紫外光吸收远远弱于N-苯甲酰-L-精氨酸[（BA），benzoyl-L-arginine]的紫外光吸收。在胰蛋白酶的催化下，BAEE随着酯键的水解，水解产物 BA逐渐增多，反应体系的紫外光吸收亦随之相应增加，以△A253nm计算胰蛋白酶的活性。 胰蛋白酶的BAEE单位定义为：以BAEE为底物，在一定反应条件下，每分钟使△A253nm增加