核酸染色剂
电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂：
1. 溴化乙锭(ethidium bromide, EB)最常用的核酸荧光染料，这种扁平分子可嵌入
核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。激发荧光的能量来源于
两个方面，一是核酸吸收波长为 260nm的紫外线后能将能量传送给溴化乙锭，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为 300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这
两方面的能量，最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。EB-DNA 复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需
洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO仲
1h或10mmol/L MgCI2中5min,使非结合的 EB褪色，这样可检查到 10ng的DNA羊品， EB也可用于检测单链 DNA或 RNA但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5卩g/ml的EB,染色可在电泳过程中进
行，能随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大
小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5卩g/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光易
分解，应于4 C避光保存。
2. 吖丫啶橙(acridine orange,AO ):吖丫啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外
线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1卩g 和0.05卩g。但吖丫啶橙的染色操作要求严格，应在22 C, 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液
(pH7.0 )中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂 4 C脱色过夜或22 C脱色1~2 小时。
3.银(Ag+)试剂：Ag+与核酸形成稳定复合物，然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒。AgNC )
3 等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链，双链DNA及 RNA都染成黑褐色。银染法的灵敏
度比EB染色高200倍左右，比亚甲蓝染色高100~1000倍，在小于0.5mm厚的凝胶中，
能检测出0.5ng的RNA,其缺点是专一性不强，能与蛋白质，去污剂反应也产生褐色，
而且对DNA的染色定量不准确。银与DNA稳定结合，对DNA有破坏作用，不适于DNA片
段回收的制备。
4. 亚甲蓝(methylene blue ): 可将RNA染成蓝色，但灵敏度不咼，而且操作时间长。
染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac ( pH8.3 ), 4C放置1~2h ,
用净水洗5-8h (反复换水)，带型肉眼可见，最低检测量为250ng。
5. Gold View I型核酸染色剂与溴化乙锭：Gold View是一种可代替溴化乙锭(EB的新
型DNA燃料，其灵敏度与 EB相当，使用方法与之完全相冋。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链 DNA成红色荧光。通过小鼠皮下注射实验，尚未发现Gold View有致癌作用，而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用Gold View代替EB不失为一种明
智的选择。
实验操作步骤：100mL溶胶液在微波炉中融化，冷却至60C左右(不烫手)后加入10vL
Gold View，轻轻摇匀后倒胶，待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。
注意事项：
1) 胶厚度不要超过0.5cm,胶太厚会影响检测灵敏度
2) 加入Gold View的琼脂样凝胶反复融化可能会对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不
明显。］
3) Gold View在pH 3.6-7.0 之间能更好的与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。
4) 由于Gold View产生绿色荧光，因此不适合于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像
系统保存图像。
5）含有Gold View的凝胶不适合于进行凝胶回收试验。要进行回收试验，请使用EB胶或supper Green I型核酸染色剂。
6）Gold View特别适合于大片段 DNA勺检测（大于1kb的片段，检测灵敏度与EB相当）；
当DNA片段小于1kb时，检测灵敏度低于 EB,特别是低于500bp的片段，Gold View I 型可能亮度很弱或者检测不到，如要检测小片段的 DNA请选用supper Green I型核酸
染色剂，该染色剂适合检测所有片段大小的DNA片段。
7）虽然尚未发现 Gold View有致癌作用，但由于 Gold View溶液酸性较强，一次对皮肤，眼睛会有一定的刺激，操作是应戴手套。
分子生物学常用荧光核酸染料
由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。这里的荧光核酸染料主要指能特异结合核酸并改变发光特性的化合物，DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料吧。除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂，它们能以非共价键的方式与DNA/RNA结合从而显示原位杂交中的细胞背景信息。根据它们能否穿透细胞膜进入活细胞体内，还可分为两大类：通透性核酸染料和非通透性核酸染料。生物通在此简单比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。 分子生物学常用荧光核酸染料 荧光核酸染料在分子生物学最常见的应用无疑是电泳凝胶染色，以及定量PCR。 EB EB（溴化乙锭）本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光。因其廉价且灵敏度高，一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染料。EB的使用非常简单方便，电泳结束后染色可获得最佳效果，也可以在制胶时加入进行前染。前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题。EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。虽说以前的实验室里总会有个别做起实验来“精神可嘉，行为可怕”的家伙，一时找不到手套他们敢徒手拿EB胶，但大多数人对EB还是“敬而远之”的，没事谁都不愿靠近实验室里跑胶、看胶那一块地方。偏偏对于搞分子生物学的人来说，跑胶就像吃饭一样平常，于是大家只能硬着头皮天天和EB打交道，盼望EB的替代品早点出现在实验室。生物通在此简单回顾一下这几年纷纷登场的EB替代品。 SYBR系列染料 说到EB的替代物，首先想到的是Invitrogen旗下Molecular Probes专利持有的SYBR系列。自1993年SYBR核酸染料推出以来，就因其灵敏度和易用性而迅速大受欢迎，成为明星产品之一。这一系列包括4种染料：SYBR Safe、SYBR Gold、SYBR Green I和SYBR Green II。
常用抗体标记荧光染料的特性及其应用
常用抗体标记荧光染料的特性及其应用 1、FITC：激发波长488nm，最大发射波长525nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪； 2）在流式细胞仪的FL1通道检测； 3）可用于荧光显微镜技术 4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。 2、Alexa Fluor 488：激发波长488nm，最大发射波长519nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪； 2）在流式细胞仪的FL1通道检测； 3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术； 4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4～10）。 3、Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪； 2）在流式细胞仪的FL2通道检测； 3）适用于荧光显微镜技术； 4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于P E。 4、Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪； 2）在流式细胞仪的FL4通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术； 4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。 5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。 5、PE：激发波长488nm，最大发射波长575nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪； 2）在流式细胞仪的FL2通道检测； 3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。 6、PE-TR：激发波长488nm，最大发射波长615nm。 1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测； 2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。 7、PE-Alexa Fluor 610：激发波长488nm，最大发射波长628nm。 1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测； 2）荧光强度高； 3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。 8、PE-Alexa Fluor 647：激发波长488nm，最大发射波长668nm。 1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测； 2）不易湮灭；
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性(SNP)
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性（SNP） 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，并且任何一种等位基因在群体中的频率不小于1%。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP是继RFLP 和STR后的第三代分子标记，具有数量多、分布广和遗传稳定等特点。它与许多疾病直接相关，是决定人类疾病易感性和药物反应差异的主要因素。因此，SNP分析对于群体遗传学、疾病相关基因的研究、新药研究、临床检验和分子诊断等领域有着重要作用。 荧光定量PCR中的SNP分析平台主要是基于等位基因特异性杂交原理，通过检测PCR过程中产生的荧光信号来区分等位基因，每检测一个SNP位点需要一对TaqMan探针(或分子信标)和一对位于检测位点的上下游引物。下面介绍一种新的基于荧光定量PCR 检测SNP位点的方法，它不需要设计特异性的TaqMan探针，只是通过溶解曲线的分析来区分等位基因，从而大大降低了检测成本。 该方法使用了两种不同的等位基因特异性正向引物，每个正向引物3′端的最后一个碱基对应于SNP位点的二等位基因，反向引物都一样，并使用荧光染料（SYBRGreenI）来检测PCR产物。纯合子基因组DNA只能被与其完全匹配的正向引物扩增，而杂合子基因组DNA能同时和两种正向引物结合扩增出两种PCR产物。 为了区分这两种扩增产物，我们在其中一个等位基因特异性引物的5′加一个20bp左右含GC重复序列。由于DNA的溶解温度主要与其片段长度和GC含量有关，经过修饰后的引物的长度和GC含量明显高于另一个等位基因特异引物，因此，使用这两种引物后的PCR扩增产物有着不同的Tm值。在PCR扩增结束后，运行一个溶解曲线程序，即让产物慢慢从60度升温到90度，从溶解曲线图上就可以分析出哪种等位基因参与了PCR扩增，由此也得到了相应的基因组的基因型。 补充一点： 1. 在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料掺入DNA 双链后荧光信号显著增强；当DNA变性时SYBR Green I染料释放出来，荧光急剧减少；随后在聚合延伸过程中引物退火并形成PCR产物，SYBR Green染料与双链产物结合，经检
核酸凝胶染色剂-GelRed
环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed&GelGreen-真正的EB替代者 水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成环境污染。 G elRedTM和GelGreenTM是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的，极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。 目前，大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。例如，EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，且染色后背景荧光信号较高（图1）。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I，且毒性依然较高(图3）。GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的GelRed，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。但与SYBR Gold 不同，GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的GelGreen可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。GelGreen 无论是在预制凝 胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。实际上，GelRed 和 GelGreen ，特别是GelRed非常稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。同样重要的是，GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green 提高了安全性。独立的测试服务公司（Litron Laboratories, Inc.）进行的标准艾姆斯氏测试结果表明，在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下，GelGreen没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。见图3。相反，SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)），因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。
GoldView Ⅰ型核酸染色剂使用说明
GoldViewⅠ型核酸染色剂使用说明 货号：G8140 规格：1.0ml（10000×） 保存：常温保存，有效期至少一年。 产品介绍： GoldViewⅠ是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验，尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用GoldViewⅠ代替EB不失为一种明智的选择。 使用方法： 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入10ul GoldViewⅠ核酸染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。 注意事项： 1、胶厚度宜不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。 2、加入GoldViewⅠ的琼脂糖凝胶反复融化可能对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。 3、GoldViewⅠ在pH3.6-7.0之间能更好地与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液。 4、由于GoldViewⅠ产生绿色荧光，因此不适于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。 5、含有GoldViewⅠ的凝胶不适于进行凝胶回收实验。要进行回收实验，请使用EB或
GoldViewⅡ型。 6、GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。如果检测小片段的DNA,请选用GoldViewⅡ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。 7、虽然尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，但由于GoldViewⅠ溶液酸性较强，因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。 应用特点： 高效：GoldViewⅠ可以检测50ng级的DNA或RNA片段。其激发波长有多处，其中两处最强：230nm和490nm。安全：尚未发现GoldViewⅠ有致癌作用，使用该试剂不用接触EB（溴化乙锭）等有害物质。 相关试剂： D1200琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) D10106×DNA Lodding Buffer T106050×TAE缓冲液 E1027EB清除剂
常用荧光染料的激发和发射波长
常用荧光染料的激发和发射波长 Fluorescent Dye （荧光染料）Excitation （激发波长， nm ） Emission （发射波长， nm ） Cy2 489 506 GFP(Red Shifted) 488 507 YO-PRO -1 491 509 YOYO -1 491 509 Calcein 494 517 FITC 494 518 FluorX 494 519 Alexa 488 490 520 Rhodamine 110 496 520 ABI,5-FAM 494 522 Oregon Green 500 503 522 Oregon Green 488 496 524 RlboGreen 500 525 Rhodamine Green 502 527 Rhodamine123 507 529 Magnesium Green 506 531 Calcium Green 506 533 TO-PRO -1 514 533 TOTO-1 514 533 ABI,JOE 520 548 BODIPY 530/550 530 550 Dil 549 565 BODIPYR 542 568 BODIPY558/568 558 568 BODIPY564/570 564 570 Cy3 550 570 Alexa 546 555 570 TRITC 547 572 Magnesium Orange 550 575 Phycoerythrin,R & B 565 575 Rhodamine Phalloidin 550 575 Calcium Orange 549 576 Pyronin Y 555 580 Rhodamine B 罗丹明555 580 ABI,TAMRA 560 582 Rhodamine Red 570 590 581 596
DNAGREEN核酸染料使用说明
DNAGREEN核酸染料使用说明 货号：G7140 规格：0.5ml(10000×) 保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。 注意：DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请按照说明书操作。 产品简介： 目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I（属于花氰类染料）虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率下降。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料，其特点如下： 1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。 2.灵敏。检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。 3.稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。 4.无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。 5.使用方法多样。既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。 6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。 7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。 8.可用于RNA染色(也呈绿色)。 9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察（需要将胶放在黑色背景下）。由于避
免了UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。 使用方法: 电泳中染色： 本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。 1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN，混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料（如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰）。在100mL琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10uL，否则背景增强。注意：一定要保证琼脂糖彻底熔化，尤其是在第一次熔化胶的时候，否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。 2.将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意：一定要使用不含SDS等去污剂的上样液，否则SDS会跟染料结合，极大地降低灵敏度。 3.上样后电泳，电泳参数同常规的电泳。 4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意：不要使用波长为260nm或360nm的UV，否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高，还可以直接在日光下直接观察（需要将胶放在黑色背景下），避免UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。 5.用配置了520-550nm滤光片（一般呈黄色或深黄色）的相机拍照。注意：不要使用与EB兼容的红色滤光片（它能阻挡520-550nm的光）。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。 6.后续Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。 电泳后染色： 本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的 染色处理，染料用量较大，不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
核酸染色剂
核酸染色剂 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
电泳后，核酸需经染色才能显色出带型，常用以下核酸染色剂： 1.（ethidium?bromide,?EB）最常用的核酸，这种扁平分子可嵌入核 酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。激发荧光的能量来源于两个方面，一是核酸吸收波长为260nm的紫外线后能将能量传送给，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这两方面的能量，最终激发EB发射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L?MgCl2中5min，使非结合的EB褪色，这样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。 在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB，染色可在电泳过程中进行，能随时观察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。但EB带正电荷，嵌入碱基后增加了核酸分子的刚性，使迁移率减慢，故不宜用于测定核酸分子量的大小，这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光易分解，应于4℃避光保存。 2.（acridine?orange,AO）：吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在 254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L（pH7.0）中避光浸
GelRed-核酸电泳用染料
GelRed核酸染料（10,000×水溶液） GelRed核酸染料特点 ● 无毒性：GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。 ● 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。 ● 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳 定，耐光性强。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30 分钟 且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。 ● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙 烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。 ●无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的 普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。 GelRed使用方法简介 1．胶染法（用法同EB）（推荐方法） （1）制胶时加入GelRed核酸染料。每50mL胶中加入5μL GelRed 核酸染料。 （2）按照常规方法进行电泳即可。 ◆注：此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。当染料稀释 在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时可以使用微波炉加热，从而与通常制备预制凝胶的方法相同。含有染料的预制凝胶可以成批制备，并可以长期保存直到使用。 2．泡染法 （1）按照常规方法进行电泳。 （2）用0.1M的NaCl水溶液按照3300﹕1的比例稀释GelRed浓缩液，混匀，制成3×GelRed染色溶液。（例如：在45mL水溶液中加入5mL 1M的NaCl溶液及15μL10,000× GelRed水溶液。） （3）将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色30分钟左右，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 ◆注：用泡染法染色时，染料用量较多。单次制备的染色溶液可重复使用3次左右。
常用染料的激发与发射
常用染料的激发与发射 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
常用荧光染料的激发和发射波长
荧光染料的使用 吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA和RNA 荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。 5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才
能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。 荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降， 这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
GoldView核酸染料
GoldenView 使 用 说 明 书 GoldenView? 核酸染料 概述 GoldenView?是一种可代替溴化乙锭（EB ）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldenV iew?与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB 相当，使用方法与之完全相同。在100ml 琼脂糖胶溶液中加入5-10μl GoldenV iew?即可。在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光，也可用于染RNA 。 使用方法 1. 将100ml 琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。 2. 加入5-10μl GoldenView （如果背景过高可以适当减少用量，如果敏感度过低，可以适当增加用量），轻轻摇匀，避免产生气泡。 3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。 4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。 注意事项 1. 胶厚度不宜超过0.5cm ，胶太厚会影响检测的灵敏度。 2. 加入GoldenView 的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。 3. 通过凝胶电泳回收DNA 片段时，建议使用GoldenV iew 染色，在自然光下切割DNA 条带，避免紫外线与EB 对目的DNA 产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。 4. 虽然未发现GoldenView 有致癌作用，但是各种核酸染料的致癌作用学术界一直存在争议，同时GoldenView 对皮肤、眼睛会有一定的刺激，为安全起见，我们强烈建议操作时依然应该每次带手套，不小心接触皮肤后应该立刻清洗，并妥善处理废弃物。 NOT FOR HUMAN OR DRUG USE
红色荧光核酸染料使用说明
红色荧光核酸染料使用说明 货号：E1020 规格：5ml（10mg/ml） 保存：室温避光储存，有效期至少1年。 产品说明： 红色荧光核酸染料是一种高度灵敏的荧光染色剂，常用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳后核酸染色。该染料与DNA结合后在紫外光透射仪激发下放射出橙红色荧光，可用Polaroid 底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。结合DNA染料的复合物荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的红色荧光核酸染料（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的DNA条带。 使用方法： 1、胶染：将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）放入微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手时）后加入5-10ul染料，轻轻摇匀后倒胶（避免产生气泡），待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫光灯下观察拍照（注：由于在该染料存在的情况下，线状DNA 的电泳迁移率约降低15%）。 2、泡染：琼脂糖凝胶电泳后，将胶浸没在含有染料（0.5ug/ml）的电泳缓冲液或去离子水中，室温下染色15-45min（取决于凝胶厚度）。脱色时用去离子水或者1mM的MgSO4溶液室温浸泡约10-30min可降低背景荧光（可选）。 注意事项： 1，本品为强烈的诱变剂，使用时请注意安全。 2，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关试剂：
T10505×TBE缓冲液 T106050×TAE缓冲液 D10106×DNA Lodding Buffe M1060D2000DNA Ladder G8140GoldView I型核酸染色剂(10000×) G8142GoldView‖型核酸染色剂(5000×) SY1020SYBR Green I(10000×) SY1040SYBR Green‖(10000×)
GoldView II核酸染料说明书
GoldView II核酸染料说明书 货号：G8142 规格：0.5ml(5000×) 保存：-20℃，短期4℃保存。 注意：本产品属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。第一次使用前请融化后离心再开封。产品简介： GoldView II是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB强5-10倍，使用方法与之完全相同。GoldView II 与核酸结合后，最大吸收峰为497nm，另外，其在254nm处也有一强吸收峰，发射波长为520nm，在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。 通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。 本产品为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。 使用方法: 胶染： 由于GoldView II敏感度比EB高数倍，使用时，请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释，上样1-10μl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。对于待检测样品，通常仅需1-2μl即可。如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。凝胶回收请选择点染方法。 1.将50ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。 2.冷却至不烫手时加入10-15μl GoldView II(不能少于10ul)，轻轻摇匀，避免产生气泡。 第1页，共2页
GoldView II核酸染料使用说明
GoldView II核酸染料使用说明 货号：G8142 规格：0.5ml(5000×) 保存：-20℃，短期4℃保存。 注意：GoldView II核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请严格按照说明书操作。第一次使用前请融化后离心再开封。 产品简介： GoldView II是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度比EB强5-10倍，使用方法与之完全相同。GoldView II与核酸结合后，最大吸收峰为497nm，另外，其在254nm处也有一强吸收峰，发射波长为520nm，在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。 通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。 本试剂为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。 使用方法: 胶染： 由于GoldView II敏感度比EB高数倍，使用时，请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释，上样1-10μl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。对于待检测样品，通常仅需1-2μl即可。如果浓度较高，也须作一定倍数稀释，否则会造成条带不整，影响迁移速率。凝胶回收请选择点染方法。
1.将50ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。 2.冷却至不烫手时加入10-15μl GoldView II(不能少于10ul)，轻轻摇匀，避免产生气泡。 3.倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。 4.电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰的照片。 点染： 染色效果不如胶染方法，但成本更低，同时适用于凝胶回收。 1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。 2.用3×Loading Buffer将本产品稀释500-1000倍，现用现配。 3.取稀释后的染料2μl与5μl样本混匀后上样即可。 泡染: 1.常规方法制备不含任何染料的琼脂糖凝胶。 2.上样,电泳后将胶放入经TAE稀释2000倍的染料中浸泡30分钟即可 注意事项: 1.胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。 2.虽然未发现GoldView II有致癌作用，但其由DMSO溶解，对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
常见核酸染料选择浅析
常见核酸染料选择浅析 （李路军河南农业职业学院植物科学系河南郑州450000） 摘要：由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料。除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂。下面比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。 关键词：核酸染料、EB、GeneFinder、Goldview、SYBER greenI、GelRed、GelGreen 引言： 作为生物体内的重要的大分子，核酸是研究生命现象与本质的物质基础，通过对它们的理化性质、复制与转录、表达与调控等的研究，可以了解生命有关的本质规律。因此，对核酸的研究具有及其重要的意义。但核酸肉眼不可见，对其的研究主要是借助一定的仪器来观察它的形态、大小、表达量，其中最常见的也是最简单的是琼脂糖凝胶电泳。EB(溴化乙锭)是实验室最常用的核酸染料，有着简单、快速、灵敏度高的特点，但是由于其有着强烈的致突变能力和中度致癌性，对实验者和周围环境都有着较大的危害。溴化乙锭(EB)是分子生物学实验室常用的一种核酸荧光染料。但是，由于EB是一种强烈的致癌物，因此，如何消除EB对实验室的污染，是分子生物学实验室安全所必须面对的一个难题。 A bstract：Because only needs the simple temperate physical method(illumination)to stimulate and the examination,the fluorescent dye studies the biology microcosm is when specially the nucleic acid one of most commonly used tracing tools.After DNA electrophoresis,examines the gelatin E B is the fluorescence nucleic acid dye which probably the most person knew very well. Except dyes the rubber,the fluorescence nucleic acid dye may also use in the fluorescence home position hybrid taking the common counterstain.Following compares in the molecular biology experiment and the cytology experiment the commonly used fluorescent dye. Key word:Nucleic acid dye,EB,GeneFinder,Goldview,SYBER greenI,GelRed,GelGreen Introduction：In the achievement organism's important macro-molecule,the nucleic acid is studies the biological phenomena and the essential material base,through to their physics and chemistry nature,the duplication and the duplication,the expression and the regulation and so on research,may understand the life related essence rule.Therefore,has and the vital significance to the nucleic acid research.But the nucleic acid naked eye is not obvious,is mainly draws support from certain instrument to its research to observe its shape,the size,the expression quantity,what most common is also the simple is the agarose gel electrophoresis.EB(bromination second grade spindle)is the laboratory most commonly used nucleic acid dye,has simply,fast,the sensitivity high characteristic,but because it has intense sends the sudden change ability and the moderate
Gold View I型核酸染色剂
Gold View I型核酸染色剂 目录号规格 G8140 1.0ml 产品介绍： Gold View 是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射试验，尚未发现Gold View有致癌作用，而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Gold View代替EB不失为一种明智的选择。 实验操作步骤： 100ml溶胶液在微波炉中融化，冷却至60℃左右（不烫手）后加入10vl Gold View，轻轻摇匀后倒胶，待胶完全凝固后上样电泳，电泳完毕在紫外灯下观察。 注意事项： 1. 胶厚度不要超过0.5cm，胶太厚会影响检测灵敏度 2. 加入Gold View的琼脂样凝胶反复融化可能会对DNA检测的灵敏度产生一定影响，但不明显 3. Gold View在PH 3.6-7.0之间能更好的与核酸结合，因此电泳时最好使用新鲜的电泳缓冲液 4. 由于Gold View产生绿色荧光，因此不适合于用一般单色胶卷拍照，可以使用凝胶成像系统保存图像。 5. 含有Gold View的凝胶不适合于进行凝胶回收试验。要进行回收试验，请使用EB 胶或SYBR Green I型核酸染色剂。 6. Gold View特别适合于大片段DNA的检测（大于1kb的片段，检测灵敏度与EB
相当）；当DNA片段小于1kb时，检测灵敏度低于EB，特别是低于500bp的片段，Gold ViewI 型可能亮度很弱或者检测不到，如要检测小片段的DNA，请选用SYBRGreen I型核酸染色剂，该染色剂适合检测所有片段大小的DNA片段。 7. 虽然尚未发现Gold View有致癌作用，但由于Gold View溶液酸性较强，因此对皮肤，眼睛会有一定的刺激，操作时应戴手套。 应用特点： 快速：整个操作过程可在几分钟内完成，方便使用 高效：Gold View可以检测50ng级的DNA或者RNA片段。其激发波长有多处，其中两处最强：230nm和490nm，客户可以调整紫外波长增强其荧光强度 方便：此试剂即开即用，使用方便 安全：尚未发现Gold View有致癌作用，使用该试剂不用接触EB（溴化乙锭）等有害物质。
GoodViewTM核酸染料使用说明
GoodViewTM核酸染料使用说明概述GoodViewTM是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoodViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。因此用Goodview代替EB不失为一种明智的选择。使用方法 1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。2. 加入5μl GoodView，轻轻摇匀，避免产生气泡。3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。保存：室温保存2年注意事项 1. 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。2. 加入GoodView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoodView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。4、未发现GoodView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。GoodView和EB灵敏度检测对比 1. GoodViewTM核酸染料检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA稀释成不同浓度进行检测）。GoldViewTM核酸染料用量：100ml琼脂糖胶溶液（浓度1%）微波炉中融化后加入5μl GoodViewTM染料2. EB核酸染料的检测检测模板：5～70ng λDNA（将λDNA 稀释成不同浓度进行检测）。EB用量：100ml琼脂糖胶溶液（浓度1%）微波炉中融化后加入5μl EB(浓度10mg/ml)，使EB工作的终浓度为0.5ng/μl。电泳结果显示灵敏度与EB相当
核酸染料
EB 溴化乙锭(EB)是一种荧光染料，这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。单链DNA、RNA分子常存在自身配对的双链区，也可以嵌入EB分子，但嵌入量少，因而，荧光较低，其最低检测量为0.1μg SYBR Green I SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。 1.在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。 2.在紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。 3.SYBR Green对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。 SYBR Green I I SYBR Green I I可以对RNA或单链的DNA进行染色。SYBR Green I IRNA染料并不是特异性的结合RNA或DNA单链，但是其对单链的结合效率是双链的约2倍，。 GoldView GoldView?是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldView?与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而且也可用于染RNA。 GoldViewⅠ特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段, GoldViewⅠ型可能亮度很弱或检测不到。如果检测小片段的DNA,请选用GoldView Ⅱ型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。