血清脂蛋白a比浊法测定
血清脂蛋白a比浊法测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
血清中LP(a) 抗原与试剂中相应抗体致敏颗粒相结合，发生凝集反应，引起浊度改变，该浊度的高低与脂蛋白（a）的含量成正比。
3 标本：
3.1 病人准备:应禁食12小时抽血.
3.2 类型：血清
3.3 标本存放留取标本后请尽快分离血清。在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天，-20℃保存至少可以稳定3个月。
3.4 标本运输室温条件下运输。
3.5 标本拒收标准细菌污染的不能做测定。
4 实验材料
4.1 试剂：宁波美康生物科技股份有限公司血清脂蛋白（a）
测定试剂盒（浙械注准20142400131）
4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
甘氨酸缓冲液pH7.0 0.05mol/L
试剂2（R2）：
牛血清白蛋白 3g/L
脂蛋白（a）抗体致敏颗粒 20～30ml
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，
可稳定至失效期。试剂不可冰冻。缓冲液（R1）和抗体试剂
（R2）可避光密封保存可稳定一年。打开后抗体试剂（R2）
稳定2个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，
或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使
用。
4.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂
4.2 校准品：建议使用宁波美康生物科技有限公司提供的脂蛋白（a）标准品进行全点校准操作。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以脂蛋白（a）复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mg/L报告
9 参考值范围
0～300mg/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值0-300mg/L
10 临床意义
增高：见于动脉粥样硬化性心脑血管病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、糖尿病、大动脉瘤及某些癌症等。
减低：见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物后。
11 操作性能
11.1 线性范围：50-800mg/L(r≥0.995)；
11.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000、ADVIA-2400批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
11.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对63个样品进行Apo B检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.08x-0.0512g/L；r=0.990。
11.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.003g/L。
11.5 病人结果可报告范围：50-800mg/L(r≥0.995)
12 超出范围结果处理
本法的检测范围为50-800mg/L(r≥0.995)对超出可报告范围的结果的处理：取0.1ml样品加0.5ml生理盐水，再测定，结果乘以6。
13 病危报警值的处理
无。
14 方法局限性
14.1 干扰物质：宁波美康公司的LPa试剂中抗体特异地只与人LPa发生免疫反应。当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤598 μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。试剂与ApoA1和ApoA2没有交叉反应。
14.2溶血标本可影响结果。
15 补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
16 参考文献
16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版。
血清脂蛋白a测定标准操作规程
血清脂蛋白a测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：组合项目申请：血脂测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮
酒。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。EDTANa2(1mg／mL)抗凝。 2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。 2.1.6 妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月查血才能反映基本血脂水平。 3 方法原理 人体中的Lpa与试剂中的抗体在缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，当反应液的浊度亦随之增加，与校准品对照，即可计算出未知标本中的Lpa的含量。 340nm 样本中LPa + 试剂中LPa抗体-----------------大分子免疫复合物 在340nm监测生成的复合物的浊度变化，与样本中LPa含量成正比 4 试剂及其他用品 4.1试剂：Lpa测定试剂盒(货号LP6192)，由北京利德曼生化技术有限公司出品。 4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定7 天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者试剂出现明显的粉红色，或空白吸光率>0.3时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4试剂盒主要成分：R1: Lpa缓冲液，0.9%氯化钠溶液,含0.095%的叠氮钠. R2:抗人Lpa抗体, 含0.095%的叠氮钠。 5 校准品与校准模式
免疫比浊法工艺模板
纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法） 主要生产工艺及反应体系的研究 一、实验目的 研究合适的纤维蛋白（原）降解产物的生产工艺和最佳反应体系。二、实验设计思想 纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）原理是样本中的FDP抗原与试剂中的抗体结合，形成抗原抗体复合物，产生吸光度变化，胶乳试剂可特异性的增大该吸光度的变化，增大试剂的灵敏度。该吸光度变化的高低与样本中的FDP的含量成正比，测定该吸光度，采用与校准品比较，即能得出样本FDP的含量。 三、主要仪器及试剂材料 1.D240全自动生化分析仪/雷杜420全自动生化分析仪 生产商:南京神州英诺华医疗科技有限公司/深圳雷杜生命科学股份有限公司 2.纤维蛋白（原）降解产物校准品 FDP含量：84μg/mL 生产商：上海捷门生物技术合作公司 批号：S2814-1 四、实验内容及程序 纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒主要生产工艺过程的研制及试剂盒反应体系的建立分为三个部分：生产工艺的研制、试剂盒组成的研制、试剂盒反应体系的建立。 产品拟定标准： 线性范围：在拟定线性范围内，相关系数r≥0.99； 准确度：测定已知溯源的FDP质控品，相对偏差（Bias%）≤±25%； 灵敏度：测定已知溯源的FDP质控品12次，结果CV≤20%； 精密度：测定已知溯源的FDP质控品20次，结果CV≤15%。 1.主要工艺描述
1.1原液的准备 购进商品化的高效价纤维蛋白（原）降解产物抗体致敏胶乳，将其稀释成合适的倍数，作为试剂2备用。选择合适的缓冲体系，加入一定量的增浊剂和稳定剂作为试剂1备用。 1.2原液的验证 购进有溯源的定值校准品，在生化分析仪上，将适量的校准品加入试剂1中，在适宜的条件下，和试剂2反应，根据校准品浓度和吸光度做剂量/响应曲线，得出一条持续上升的平滑曲线，即得到合格的原液。 2.反应体系的组成及其研究 2.1购进有溯源并标示有定值的校准品； FDP含量：84μg/ml 生产商：上海捷门生物技术合作有限公司 批号：? 2.2致敏胶乳的准备 抗体致敏胶乳：上海捷门生物技术合作有限公司提供 用实验室PBS缓冲液（0.1mol/L，PH=7.4）将其倍半稀释，分别稀释成：3.5倍、3倍2.5倍、2倍、1.5倍。用上述已准备好的不同稀释倍数FDP抗体致敏胶乳和稀释好的校准品在生化仪上进行操作。 2.2.1实验方法 2.2.2实验结果
血清总蛋白测定方法及临床意义
血清总蛋白测定方法及临床意义 1.测定方法血清总蛋白测定一般采用双缩脲比色法，它是目前首先推荐的蛋白质定量方法。此法的原理是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子（Cu2+）作用生成蓝紫色的化合物，这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量。此反应的优点是清、球蛋的反应性相近，操作简单，重复性好，干扰物质少，为首选的常规方法，其缺点是灵敏度较低。 2.临床意义血清总蛋白生理性波动。直立体位由于体液分布原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位稀。因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低3～ 5g／L。新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g／L。60岁以上的老年人约比成人低2g／L。血清总蛋白增高：（1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管。血液可发生浓缩，慢性肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的丢失，血浆也可出现浓缩现象。（2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，多发性骨髓瘤患者。血清总蛋白降低：（3）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。（4）摄人不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃肠道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如严重结核病，甲状腺功能亢进，恶性肿瘤等，均可造成血清蛋白浓度降低。（5）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾病综合征时大量蛋白尿，溃疡性结肠炎时肠道长期丢失一定量的蛋白质，这些病理改变均可使血清总蛋白浓度降低。
胶乳增强免疫比浊反应原理
胶乳增强免疫比浊反应原理： 免疫比浊反应原理： 当样本中的待测抗原与试剂中的特异性多克隆抗体相遇后，即可发生特异性的结合反应（一个抗原具有多个不同的抗原决定簇（反应位点），可以连接多个不同的对应位点抗体；而抗体具有两个相同的抗原结合位点，可以同时结合两个待测抗原；），从而形成网状的抗原-抗体分子复合物，引起溶液中浊度的变化，通过测试溶液中透射或散射的吸光度变化，从而确定样本中待测抗原的浓度； 胶乳增强免疫反应比浊原理： 基于免疫反应原理，和纳米颗粒的特殊效应（表面效应、量子尺寸效应、小尺寸效应、宏观量子隧道效应），不只可以检测样本中的完全抗原，也可以检测样本中的半抗原、抗体，从而引起浊度变化，此时浊度与空白样本的不同作为待测物浓度的检测依据。 免疫透射比浊法 原理： 可溶性抗原与相应抗体反应后形成的免疫复物，使介质浊度发生改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度（A 值）与免疫复合物量呈正相关。透射光强度和形成的免疫复合物呈反比。 优点：透射比浊法灵敏度比单扩高5-10倍，重复性好，结果准确，操作简便，且能用全自动或半全自动生化分析仪进行检测。 不足： ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原-抗体复合物分子应足够大（35-100nm)，分子太小则阻挡不了光线的通过；数量要足够多，如果数量太少，则溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。灵敏度较散射比浊法低； ③透射比浊测定在抗原-抗体反应的第二阶段，需在抗原抗体反应达到平衡后进行检测，耗时较长。 胶乳增强免疫比浊法 在一般的透射比浊法中，少量小分子免疫复合物极难形成浊度，要形成较大的免疫复合物，参与反应的抗原、抗体量应较大（浓度高），这无法满足高灵敏度检测项目的要求。胶乳增
载脂蛋白(a_)
脂蛋白（a）的测定及临床意义 脂蛋白（a）（lipoprottein（a））是脂蛋白大分子重要成员之一，也是目前脂蛋白研究的热点。挪威遗传学家Berg1936年首先发现并将其命名为［lipoprotein（a），Lp（a）］。1975年Dal-hen 等研究认为Lp（a）是动脉粥样硬化（AS）的危险因素。1987年Mclean 等研究Lp（a）中的Apo（a）与纤溶酶原（Plas-minogen，PLG）具有高度同源性。从而认为Lp（a）不仅是AS的危险因素，而且可能与纤溶系统有关。1988年国际Lp（a）会议将Lp（a）定为冠心病（CHD）独立危险因素。因此，引起人们对Lp（a）遗传学、代谢、功能以及与疾病的联系进行深入研究。 脂蛋白（a）的理化特征 1 Lp（a）的结构及组成 Lp（a）主要由蛋白质、类脂和糖类组成。是载脂蛋白A（Apo A）与载脂蛋白B（Bpo B）两部分以二硫键共价结合的一种LDL［1］。Lp（a）的核心部分为中性脂质和Apo B-100分子，其外围包绕着亲水性的Apo（a），两者以二硫键共价连接。其脂质部分与LDL的Apo B-100相同，不同之处是Lp（a）除Apo B-100外还含有Apo（a）。Apo（a）是Lp（a）大特征性糖蛋白成分，只要由特殊结构“Kringle”构成，Kringle是由3个二硫键组成的三套环境结构。
2 Lp（a）的特征（1）颗粒大小的多态性:LP（a）颗粒密度在LDL和HDL之间，约1.050～1.100。少量富含TG的Lp（a）密度<1.006。Apo（a）分子由高度糖化的单条肽链组成，含糖25%～40%，分子大小极不一致，分子量大小由250～838kD，呈分子量大小不等的多态性。Apo（a）这一多态性分子的基础，是基因中Kringle-4编码区结构重复数量差异所致。（2）Lp（a）的不均匀性:Lp（a）颗粒在个体内和个体间存在不均一性，主要表现在体积分子质量和水合密度都有较大差异。（3）与纤维蛋白溶酶原（PL）有高度同源性:人类的Apo（a）与PL极相似。在与血凝有关的纤溶系统的许多蛋白，都有Kringle结构，如凝血酶原、组织型血浆纤溶酶原激活剂（t-PA）、尿激酶、链激酶、凝血因子Ⅻ及纤维结合素等。在蛋白质及cDNA水平上显示高度顺序同源性，免疫化学研究也显示Apo（a）与）（PL）有交叉反应。PL和Apo（a）结构相似表现在Kringle-4区。两者的高度同源性决定了Lp（a）的生理作用。研究证明Apo（a）基因上的Kringle-4密码域数量与Apo（a）的异构体大小呈正相关，与血浆Lp（a）呈负相关。由于Kringle的结构与PL相似，推测Apo（a）可能结合到象PL受体或纤维蛋白那样的大分子上，再加之颗粒上带着胆固醇，结合到血管损失部位。因此，它不仅促进动脉粥样硬化的形成，也阻碍血管内凝血块的溶解。 研究表明，肝脏是合成Apo（a）的主要场所。LP（a）与LDL 不一样，并不是由VLDL转化而来，也不能转化为其它脂蛋白，系一类独立的脂蛋白。
血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定
血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定 1.实验原理 在pH值4.2时，白蛋白和溴甲酚绿染料结合产生蓝绿色复合物，在630nm处比色，颜色的深度与白蛋白浓度成正比。 pH4.2 白蛋白+溴甲酚绿--------------绿色化合物 2. 标本采集 2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周，在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定一个月，-20℃保存至少可以稳定3个月。 4. 标本运输室温条件下运输 5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料: 6.1 上海奥林巴斯白蛋白测定试剂盒 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。 6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。 6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。手工测定计算方法为： Au 白蛋白(g/L)= ×校准液浓度 As 12. 参考值范围 成人35～52g/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义：白蛋白是血浆中多种物质重要的结合与运输蛋白，并是维持血浆渗透压的主要组分。血清白蛋白可用于众多疾病的诊断。血清白蛋白升高通常见于脱
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳.
实验五血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 [原理]血清脂蛋白经饱和乙酰苏丹黑B染色后，以琼脂糖凝胶为载体，在pH8.6 巴比妥缓冲液中电泳分离，各种脂蛋白将分成不同区带。 [器材] 1.玻片 2.水平式电泳仪 [试剂] 1.0.5%琼脂糖（Agarose）溶液：称取0.5g琼脂糖，加巴比妥缓冲液100ml，盛于三角烧杯中，置沸水浴中煮沸溶解，备用。 2.新鲜血清（无溶血） 3.pH8.6、I=0.075 巴比妥缓冲液:称取15.4g巴比妥钠，2.76g巴比妥，0.292gEDTA，以水溶解后加至100ml，调pH至8.6，4℃保存。 4.苏丹黑B染色液：苏丹黑B 100mg，异丙醇10ml，混合。置37℃水浴使之充分溶解后，离心取上清液置室温备用。 [操作] 1. 制板 配制0.5%的琼脂糖或预先配好置4℃冰箱，用时置沸水溶解，再冷却到50℃～60℃，取约4ml琼脂糖迅速铺在玻璃片上，然后放上开槽器（注意：①开 槽放在中央，距一侧1.5cm处；②避免产生气泡），静置室温待凝固，把开槽器 小心取下，样品槽即制成。 2. 加样 取预染血清20 l加入样品槽（预染血清：血清0.2ml + 苏丹黑B染色液 0.02ml） 3. 电泳 将载有琼脂糖凝胶玻片（已加血清样品）放在电泳槽中，槽内倒入巴比妥缓 冲液，用四层纱布搭板，加样端接负极，电压120V，待最前端区带泳动至玻片 2/3处时可终止电泳，观察实验结果。 [参考值] 正常人血清脂蛋白可分出三条区带：
β脂蛋白（占55%，着色最深） 前β脂蛋白（占15%，着色最浅）α脂蛋白（占30～40%，着色居中）在原点处应无乳糜微粒可见
[LPa]脂蛋白a
动脉粥样硬化患者脂蛋白（a）与PLT, TG水平相关性探讨 祝辉，罗英，魏仕（孝感市第一人民医院检验科，湖北孝感432000） 摘要：目的探讨常见的动脉粥样硬化患者血清中的脂蛋白（a）[Lp(a)]和甘油三脂（TG）及其血小板（PLT）计数的相关性。方法251例患者和96例健康人分别测定脂蛋白（a），甘油三脂，血小板计数.。结果在冠心病组中[Lp(a)]与TG呈明显正相关(r=0.644, P<0.01) .中风患者组中[Lp(a)]与PLT呈明显正相关(r=0.647, P<0.01)。结论动脉粥样硬化患者[Lp(a)]，血小板计数，TG均显著高于与健康人. 关键词动脉粥样硬化; 脂蛋白（a）; PLT; TG 脂蛋白（a）是人血浆中的一类特殊的脂蛋白，其特点是一分子的载脂蛋白(apo)B以二硫键与apo（a）相连。我们发现动脉粥样硬化患者常伴有脂蛋白（a）的升高，同时伴有TG和PLT计数的升高，为探讨动脉粥样硬化患者脂蛋白（a）与PLT, TG水平相关性，我们对251例动脉粥样硬化患者和96例健康者的脂蛋白（a）与PLT, TG水平进行了研究，现报到如下。 1.研究对象与方法 1.1研究对象我院心内科确诊的动脉粥样硬化患者251例（冠心病患者98例，中风患者 99例，肾动脉硬化患者54例），其中男性151例，女性101例。年龄38-78岁，平均64岁。所有患者均排除结核，血液病，免疫系统疾病，无严重的肝肾功能损害及严重的急性感染。以健康无心血管病史的中老年人96例为健康人对照。其中男63例，女33例，年龄36-71岁，平均62岁。 1.2仪器与试剂日立-7080全自动生化分析仪（日本）Sysmex公司XT-1800i血细胞分 析仪（日本）.试剂盒来自上海科华生物工程股份公司，均在有效期内。 1.3检测指标和方法健康人对照组常规禁食12小时后采集肘静脉血4毫升;患者组取随 机静脉血4毫升，均分为2管，一管EDTA-K2抗凝，用于检测PLT计数，另一管肝素抗凝，用于检测[Lp(a)]与TG.. [Lp(a)]定量测定采用免疫比浊法，TG采用GPO-PAP法. 1.4统计学处理结果以x±s表示，用SPSS10.0统计软件分析。两组间比较用u检验，相 关采用直线相关分析。 2.结果 2.1脂蛋白（a）与PLT, TG水平比较见表1 2.2相关性分析在冠心病组中，脂蛋白（a）与PLT计数呈正相关关系(r=0.36, P<0.01)，[Lp(a)] 与TG 呈明显正相关关系(r=0.644, P<0.01). 中风组中脂蛋白（a）与PLT计数呈明显正相关关系(r=0.647, P<0.01)，[Lp(a)]与TG 呈正相关关系(r=0.44, P<0.01)。肾动脉硬化组中脂蛋白（a）与PLT计数呈正相关关系(r=0.45, P<0.01)，[Lp(a)]与TG 呈正相关关系(r=0.49, P<0.01)
体外诊断试剂胶乳比浊法学习.
胶乳免疫比浊法相关知识 很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅： 胶乳微球物理吸附： 反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。 带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。 反应步骤： 1.用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml； 2.用反应缓冲液系数胶乳微球到1%； 3.将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中，10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。室温搅拌孵育2hr； 4.离心或超滤，除去未结合蛋白； 5.将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。 注意事项： 1.最优蛋白标记量影响因素 1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值得增加； 2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用； 3）免疫反应：最近标记量由免疫反应需要决定。 2.胶乳微球中加入蛋白后，快速搅拌混合，利于反应均衡。反应体积是1ml时，可用移液器吸取蛋白加入微球中，并吹打数次。如果反应体积较大时，用烧杯，边搅拌边加入蛋白， 3.储存缓冲液和反应缓冲液不同时，抗体有脱落的可能； 4.表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落，所以应避免加入。 微球共价结合抗体方法： 一、一步法 1.准备50mM pH 6.0的reaction buffer，醋酸或MES buffer更合适 2.用reaction buffer溶解抗体，使其浓度为1mg/mL。 3.用reaction buffer 悬浮微球，使其浓度为1% w/v 4.边搅拌边将一倍体积的抗体溶液加入到10倍体积的微球悬液中，室温下持续搅拌20分钟 5.准备浓度为10mg/ml（52umol/mL）的EDC溶液，用前准备，现配现用。 6.将计算需求量的EDC溶液加入到上述微球悬液中。(Note 6). 7.室温下，立即调节pH (Note 7). 8.移除未结合的蛋白，并将包被微球用storage buffer重悬。(Note 3 and 4) B. 两步法 为了避免EDC将相邻微球之间的蛋白偶联导致微球聚集或者蛋白之间交流，两步法偶联抗体更合适。两步法中，在蛋白加入之前，多余的EDC被移除。两步法中，蛋白也可以使用更高pH的buffer来溶解，从蛋白的稳定性方面和加速蛋白和活化微球之间的交联速度方便考虑，是非常有利的。
《诊断学》 第二节 血清脂质和脂蛋白检测
第二节血清脂质和脂蛋白检 测 一、血清脂质检测 血清脂质包括胆固醇、三酰甘油、磷脂（phospholipid）和游离脂肪酸（free fattyacid，FFA）。血清脂质检测除了可作为脂质代谢紊乱及有关疾病的诊断指标外，还可协助诊断原发性胆汁性肝硬化、肾病综合征、肝硬化及吸收不良综合征等。 （一）总胆固醇测定 胆固醇（cholesterol，CHO）是脂质的组成成分之一。胆固醇中70％为胆固醇酯（cholesterol esterase，CE）、30％为游离胆固醇（free cholesterol，FC），总称为总胆固醇（total cholesterol，TC）。CHO检测的适应证有：①早期识别动脉粥样硬化的危险性。②使用降脂药物治疗后的监测。 【参考值】 ①合适水平：<5．20mmol／L。②边缘水平：5．23～5．69mmol／L。③升高：>5．72mmol／L。 【临床意义】 血清TC水平受年龄、家族、性别、遗传、饮食、精神等多种因素影响，且男性高于女性，体力劳动者低于脑力劳动者。因此，很难制定统一的参考值。根据CH0高低及其引起心、脑血管疾病的危险性分为合适水平（desirable）、边缘水
平（boar-denline）和升高（或减低）即危险水平（risk）。作为诊断指标，TC不特异，也不灵敏，只能作为某些疾病，特别是动脉粥样硬化的一种危险因素。因此，测定TC常作为动脉粥样硬化的预防、发病估计、疗效观察的参考指标。TC变化的临床意义见表4-7-5。肝脏病胆固醇变化的临床意义见第六章第一节。 （二）三酰甘油测定 三酰甘油（triglyceride，TG）是甘油和3个脂肪酸所形成的酯，又称为中性脂肪（neutral fat）。TG是机体恒定的供能来源，主要存在于β一脂蛋白和乳糜颗粒中，直接参与CHO 和CE的合成。TG也是动脉粥样硬化的危险因素之一。TG检测的适应证有：①早期识别动脉粥样硬化的危险性和高脂血症的分类。②对低脂饮食和药物治疗的监测。 【参考值】
[脂蛋白a的研究进展]脂蛋白a
[脂蛋白a的研究进展]脂蛋白a 脂蛋白(a)最早在1963年由挪威遗传学家Berg首先发现并命名，它是一种特殊的血浆脂蛋白。1972年Dalhen首先发现在冠心病患者的血浆脂蛋白中有一前B脂蛋白，并证实该区带Lp(a)。在1975年Dalhen等研究认为Lpa是动脉粥样硬化的危险因子。1978年，Mclean 等研究Lp(a)中的Apo(a)与纤溶酶原(PLG)具有高度同源性，从而认 为Lp(a)不仅是动脉粥样硬化的危险因素，而且可能与纤溶系统有关。由此可见人们对Lp(a)的研究历经漫长的过程，虽然其研究历史较长，但人们对Lp(a)的生理功能和致血栓性疾病的机理等许多方面还不十分清楚，因此关于Lp(a)的研究在目前来看依然具有很重要的意义及价值，而国内外实验室也依然对其进行着大量的研究以期探索出其在临床中的应用价值。本文就Lp(a)理化特性、临床意义及测定情况等作如下综述。 Lp(a)的分子结构 结构上，构成Lp(a)的核心部分为脂类及apoB-100分子，Lp(a)含有丰富的脂蛋白，这些中性脂类占据其核心结构。周围除具有含碳水化合物的高度亲水蛋白，称为载脂蛋白，除apo(a)外，还有载脂 蛋白B-100。Lp(a)颗粒含有的apo(a)和apo(b)呈1:1的摩尔比率。在Lp(a)颗粒内，apo(a)和apo(b)间以一个二硫键互相共价结合，它的大小和密度呈非均相性。故在个体内或个体间的颗粒大小变异大，
完全是因为apo(a)的独特性。从内在结构上apo(a)含有一个环饼区域和一个羧基端的蛋白水解酶区域，后者约有85%的氨基酸组成和纤溶酶原的蛋白水解酶区域相似。 Lp(a)的临床意义 Lp(a)在冠状动脉硬化及血栓形成中的意义：Lp(a)的特殊结构决定了它的临床意义。由于Lp(a)和纤溶酶原PLG结构上的同源性，故Lp(a)与凝血和纤溶系统有关， 在Miles等［4］进行的一项研究中，认为Lp(a)对于血栓形成起重要作用。他们研究发现，当动脉内皮细胞发生损伤时，Lp(a)通过其特有的apo(a)进入动脉壁，竞争性地结合血浆PLG受体，但由于apo(a)的蛋白酶区域无PLG酶活性，故不能像PLG那样形成纤溶酶水解纤维蛋白，结果形成Lp(a)-纤维蛋白复合物沉积于动脉壁，从而促进了血栓形成，并导致动脉壁硬化。 因此，其分析认为，Lp(a)干预纤溶过程的途径主要由以下方面：第一，竞争性抑制PLG激活。由于Lp(a)和PLG结构上的同源性，因此在受体结合上，可以干扰抑制PLG与纤维蛋白、细胞外基质、内皮细胞、单核细胞集血小板上的PLG受体相结合，形成不能溶解的 Lp(a)-纤维蛋白复合物，同时还抑制血小板血栓的溶解。第二，竞争
胶乳透射免疫比浊法-国家食品药品监督管理总局
附件 5 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法） 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册 申报资料的准备及撰写提供参考。 本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适 用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验 证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射 免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。 目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的 — 1 ——
免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等， 免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。 从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管 理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂 分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、 生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等 内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资 料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总 局公告2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如 下内容： 1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况 （1）胱抑素C的生物学特征、结构与功能、在体内正常和 病理状态下的代谢途径和存在形式。 胱抑素C（Cystatin C, CysC）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ—微量蛋白及γ—后球蛋白，广泛存在于各种组织的—— 2 —
脂蛋白(a)与相关疾病的关系及临床意义
脂蛋白（a）与相关疾病的关系及临床意义 【关键词】脂蛋白（a）;冠状动脉疾病;脑血管疾病;糖尿病 脂蛋白（a）（lipoprottein（a））是脂蛋白大分子重要成员之一，也是目前脂蛋白研究的热点。挪威遗传学家Berg1936年首先发现并将其命名为［lipoprotein（a），Lp（a）］。1975年Dal-hen等研究认为Lp（a）是动脉粥样硬化（AS）的危险因素。1987年Mclean 等研究Lp（a）中的Apo（a）与纤溶酶原（Plas-minogen，PLG）具有高度同源性。从而认为Lp（a）不仅是AS的危险因素，而且可能与纤溶系统有关。1988年国际Lp（a）会议将Lp（a）定为冠心病（CHD）独立危险因素。因此，引起人们对Lp（a）遗传学、代谢、功能以及与疾病的联系进行深入研究。本文对Lp（a）的特性与其相关疾病进行综述。 1脂蛋白（a）的理化特征 1.1Lp（a）的结构及组成Lp（a）主要由蛋白质、类脂和糖类组成。是载脂蛋白A （Apo A）与载脂蛋白B（Bpo B）两部分以二硫键共价结合的一种LDL［1］。Lp（a）的核心部分为中性脂质和Apo B-100分子，其外围包绕着亲水性的Apo（a），两者以二硫键共价连接。其脂质部分与LDL的Apo B-100相同，不同之处是Lp（a）除Apo B-100外还含有Apo（a）。Apo（a）是Lp（a）大特征性糖蛋白成分，只要由特殊结构“Kringle”构成，Kringle是由3个二硫键组成的三套环境结构。 1.2Lp（a）的特征（1）颗粒大小的多态性:LP（a）颗粒密度在LDL和HDL之间，约1.050～1.100。少量富含TG的Lp（a）密度<1.006。Apo（a）分子由高度糖化的单条肽链组成，含糖25%～40%，分子大小极不一致，分子量大小由250～838kD，呈分子量大小不等的多态性。Apo（a）这一多态性分子的基础，是基因中Kringle-4编码区结构重复数量差异所致。（2）Lp（a）的不均匀性:Lp（a）颗粒在个体内和个体间存在不均一性，主要表现在体积分子质量和水合密度都有较大差异。（3）与纤维蛋白溶酶原（PL）有高度同源性:人类的Apo（a）与PL极相似。在与血凝有关的纤溶系统的许多蛋白，都有Kringle结构，如凝血酶原、组织型血浆纤溶酶原激活剂（t-PA）、尿激酶、链激酶、凝血因子Ⅻ及纤维结合素等。在蛋白质及cDNA水平上显示高度顺序同源性，免疫化学研究也显示Apo（a）与）（PL）有交叉反应。PL和Apo（a）结构相似表现在Kringle-4区。两者的高度同源性决定了Lp（a）的生理作用。研究证明Apo（a）基因上的Kringle-4密码域数量与Apo（a）的异构体大小呈正相关，与血浆Lp（a）呈负相关。由于Kringle的结构与PL相似，推测Apo（a）可能结合到象PL受体或纤维蛋白那样的大分子上，再加之颗粒上带着胆固醇，结合到血管损失部位。因此，它不仅促进动脉粥样硬化的形成，也阻碍血管内凝血块的溶解［2］。 2Lp（a）的生理功能和致病机制
胶乳透射免疫比浊法
附件5 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法） 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。 本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。 目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的 —1 —
免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。 从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容： 1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况 （1）胱抑素C的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。 胱抑素C（Cystatin C, CysC）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ—微量蛋白及γ—后球蛋白，广泛存在于各种组织的—2 —
蛋白质含量测定方法汇总
实验七蛋白质含量测定 测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。 一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。 该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。 [操作步骤] 按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定：
取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。测定范围为1～10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 [试剂] 1．双缩脲试剂：取CuSO4·5H20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。棕色瓶中避光保存。长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。 2．标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10g/L的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1g/L的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH配制。 [器材] 1．试管：15×150mm 试管7只； 2．1ml，5ml移液管； 3．坐标纸； 4．721分光光度计。 [操作步骤]
造成血清脂蛋白高a偏高的原因
造成血清脂蛋白高a偏高的原因 由于现象生活水平的提高，很多人都非常的注重养生，大家都会定期的去医院进行体检，然而有一些人在体检的过程中发现，自身的各项指标都很正常，只是血清脂蛋白高a出现了偏高的现象，这让很多人都非常的困惑，不知道什么原因造成的，那么下面让我们来看看造成血清脂蛋白高a偏高的原因有哪些吧? 第一，造成血清脂蛋白高a偏高的原因。可能是饮食不当。在日常生活中如果饮食不当就会引起脂蛋白a不同幅度的上升, 在平常如果摄入了高脂肪,高糖,油腻辛辣刺激性的的食物,就会 引起脂蛋白a偏高。因为这消化比较困难,会加重肝脏的负担, 致使脂蛋白不能正常的转化。 第二，血清脂蛋白a偏高的原因可能是乱用药物。当患者发现机体内脂蛋白a偏高是,往往会求治心切,乱了阵脚,会乱投医,乱服用各种通过小道消息购买会来的药,到头来不但脂蛋白a没 有降,反而在持续的升高,长期的乱用药,药物在肝脏中会发生化 学反应,诱发一些疾病和中毒,会严重的损害肝功能。 第三，血清脂蛋白a偏高的原因可能是患有肝脏疾病。脂蛋白检查也是肝功能检查常见的一项事项,肝炎,急性活动性肝炎,
慢性肝炎,肝硬化,肝癌等肝脏疾病,是引起脂蛋白a偏高的主要 原因,患有肝脏疾病的患者,他们的肝脏受到不同程度的损害,肝 脏的合成、代谢等功能发生障碍,肝功能出现异常,直接的导致了脂蛋白a偏高。 造成血清脂蛋白高a偏高的原因，血清脂蛋白a的检查原理。用聚苯乙烯微量反应板为固相载体,以apo(a)单克隆抗体(McAb)包被,加入待测标本,使其中的apo(a)与圃相化的McAb结合,洗 涤除去未结合的标本中其他蛋白质,再加入酶标记的apo(a)McAb,与结合到固相抗体上的apo(a)作用,洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应,显色程度决定于结合在固相载 体上的apo(a)量。
血清载脂蛋白B检测操作规程
血清载脂蛋白B检测操作规程 1. 检测原理 APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。 3．试剂 3.1 试剂： 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下： 3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。 试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。 项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，2-8℃储存可稳定一周，参见校准血清说明书。 4．仪器 KONELAB 30型号仪器。 性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。 5．操作 样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6．计算 △A测定 C = ————×C0 △A标准 式中：c——测定血清载脂蛋白A1浓度，g/L； △A测定——标本管吸光度； △A标准——标准管吸光度； C O——校准血清中载脂蛋白浓度，g /L； △A ＝A2－A1 7．操作性能 7.1 精密度： 批内CV< 1.78，批间CV< 3.65。 7.2 准确度： 检测结果的相对不准确度≤±10%。