实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法
鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法
1．本次实验的目的和要求
掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2．实验内容或原理
某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。
3．需用的仪器或试剂等
动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。
器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清
4．实验步骤
(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。
(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。
（3）免疫机体抗体效价的测定：
3.鸡新城疫（ND）的HA和HI
（1）试验准备
①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。
② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。
③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。
每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。
④稀释液：为灭菌的生理盐水。
⑤红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，柠檬酸钠(SHOO)0.80克，柠檬酸(2H20)0.055克，氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。过滤分装，高压灭菌10分钟，放4℃冰箱保存。
(2)红细胞凝集试验(HA) 主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。
鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验现采用微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。
①首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴(0.05毫升)。
②用微量移液器取病毒抗原0.05毫升，加入第一孔，反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第二孔，在第二孔反复抽动6次后，吸出0.05毫升加入第三孔，如此连续稀释至第十一孔后吸出0.05毫升弃去。第12孔不加病毒液为红细胞空白对照。
判断：沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
如上例：病毒液的HA效价以出现完全凝集的抗原最大稀释度为准。HI试验时，病毒抗原液为0.05毫升内须含4个凝集单位，则应将原病毒液作成64／4=16倍的稀释液。
注意：+++为完全凝集++为部分凝集—为不凝集
(3)红细胞凝集抑制试验(HI试验)：新城疫病毒凝集红细胞的作用，能被特异性抗体抑制，因此，可用HI试验(简称血凝抑制试验)测定鸡血清中的HI抗体效价(滴度)，并可用标准血清，作新分离病毒的鉴定与未知病毒的诊断。
微量法：具体操作如下：
①用移液器向每孔加0.05毫升稀释液，十一孔加0.1毫升。
②用移液器吸取被检血清(或高免卵黄抗体)0.05毫升注入第一孔，抽放6次后，吸出0.05毫升，注入第二孔，如此连续稀释至第10孔，并从第十孔吸出0.05毫升弃去，血清稀释倍数依次为1：2～1024，11孔和12孔空白。
③每孔再加入已标定好的四单位病毒液0.05毫升，第十一孔为红细胞对照孔，不加病毒液。
④置振荡器上振荡1-2分钟，放18～22℃静置20分钟。
⑤每孔再加入0.7％红细胞悬浮液0.05毫升，放振荡器上振荡l-2分钟，置18-22℃，30-60分后判定结果。
⑥第十一孔为红细胞对照孔，第十二孔作为抗原对照孔。
结果观察：将反应板倾斜成45℃角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(log2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：64或HI效价为6(log2)。第十一孔仅含稀释液和红细胞为不凝集对照孔，第十二孔含稀释液，病毒液和红细胞为凝集对照孔。
结果分析如下：
①一般认为鸡的免疫临界水平为1：8(成年)或1：16(雏鸡)，但随地区不同而有差异。
②鸡血清的HI抗体效价高于1：16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1：16以下，须马上进行新城疫疫苗接种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平，应再提高。
③鸡群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价(1og2)的平均值表示的。
如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：
平均水平在4(log2)，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。
④大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％～0.5％，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2％。
⑤鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。
附注：
①采用HA试验对各生物药厂生产的新城疫疫苗产品有质量检测作用。
②采用HI试验对各厂家生产高免血清及卵黄抗体有质量检测作用。
实验二兔有机磷中毒的诊断和治疗
1、本次实验的目的和要求
掌握有机磷中毒的诊断要点
熟悉有机磷中毒的简易检验方法。
了解有机磷中毒的解毒原理和治疗措施。
2．实验内容或原理
1.阿托品（Atropinum）抗胆碱药
原理：通过阻止乙酰胆碱和受体的结合而产生抗胆碱作用。但有机磷中毒病畜对阿托品的耐受性较高，故需用常规剂量的2（牛）～4（羊）倍。
2.氯磷定（Pyraloximi Methyl-Chloriaum，PAM-CL或2-PAMCL）为胆碱酯酶复活剂。
原理：能与磷酰化胆碱酯酶中的有机磷结合，使胆碱酯酶释放并恢复其水解乙酰胆碱的活性；还能直接与有机磷结合为无毒物质排出体外。
3．需用的仪器或试剂等
动物：有机磷中毒病例，或用试验动物（猪或兔）做人工病例复制。
器材：测瞳尺、磁反应板、磁蒸发皿、乳钵、分液漏斗、分液漏斗架、离心机、培养皿、玻璃容器、量筒、棕色玻璃、玻棒、微量吸管、25ml滴管、注射器、针头、听诊器、体温计、定性滤纸、新华滤纸、试纸、纱布、脱脂棉、剪刀、解剖器械、载玻片、皮筯等。
药物试剂：氯仿、氯化乙酰胆碱、溴麝香草酚蓝、无水乙醇、干燥马血消化、饱和溴水、0.4mol/L氢氧化钠液，二氯甲烷、酒石酸、苯、三氯醋酸、无水硫酸钠、弗罗里矽士、丙硐、石油醚、蒸馏水、注射用水、精制敌百虫、0.5%硫酸阿托品、氯磷定、解磷定、双复磷、碘酊棉、酒精棉等。
4．实验步骤
一、诊断要点
（一）流行病学调查
（二）生前症状：主要为胆碱能神经受过量乙酰胆碱的作用所引起的过度兴奋现象。出现以下三类症候群。
1.草蕈碱样症状
2.烟碱样症状
3.中枢神经症状
（三）有机磷检验
1.检品的采取和处理
2.有机磷检验法
（1）酶化磷检验法
（2）B.T.B全血试纸片法
（四）病理变化
二、治疗措施
具体方法为：①静脉注射阿托品1/3量的2%溶液以迅速取得效果；②皮下注射阿托品2/3量的生理盐水溶液以取得持续效果；③分点皮下注射氯磷定或其他胆碱酯酶复活剂的生理盐水溶液。必要时重复使用。
1.阿托品（Atropinum）抗胆碱药。
2.氯磷定（Pyraloximi Methy Chloriaum，PAM-CL或2-PAMCL）为胆碱酯酶复活剂。
3.解磷定（Pyraloximi Methiodidum，PAM）胆碱酯酶复活剂。
4.双复磷（Toxogoninum，DM O-4）亦为胆碱酯酶复活剂。
5．教学方式
讲述与实验
6．考核要求
实验报告
7．实验报告要求
1.有机磷中毒的诊断要点有哪些？
2.治疗在机磷中毒的最好方案是什么？其理论基础何在？
实习三禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术（综合性）
（三个实验计9学时）
1．本次实验的目的和要求
（1）观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化
（2）掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法
2．实验内容或原理
根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法。
3．需用的仪器或试剂等
动物：鸡、小白鼠
器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。
药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、碳酸复红、瑞特氏染液、美蓝染液、棉拭子、接种环、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纤维二糖、绵子糖、菊糖、赤藓糖、戊五醇、M—肌醇、水杨苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、琼脂粉、酚红。
4．实验步骤
一、临床症状和病理变化
⒈症状
（1）急性症状:描述
（2）慢性症状:描述
⒉病理变化:描述
二、微生物学诊断
⒈抹片的制备
用镊子夹持病变组织肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。自然干燥。将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。
⒉革兰氏染色法
固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min→水洗+加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30s→水洗→吸干→镜检。巴氏杆菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，单个或成对存在，常有荚膜。
⒊其他染色法
甲醇固定，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。
⒋病原分离
（1）病料的采集：最急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶组织；对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插入组织或心血内取样。如果为活禽，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插入鼻裂中取样。
（2）培养基制备：马丁琼脂培养基（本实验中采用该培养基）、5％鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基。
（3）动物接种：如果病料污染严重，则可将0.2mL碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在24h～48h内死亡，可以从肝脏、心血中分离到巴氏杆菌。
（4）培养：将病料接种于马丁琼脂培养基在35℃～37℃下培养，经18h～24h培养后菌落直径为1mm～3mm，菌落呈散在、圆形，表面凸起呈奶滴状。
注意：如果病料未污染，（3）、（4）步骤可省略。
⒌病原鉴定
（1）培养特性：为兼性厌气菌，生长最适温度为35℃～37℃，经18h～24h培养后，菌落直径为l mm～3mm，呈散在的圆形凸起和奶油状，有荚膜菌落稍大。
（2）镜检：从菌落上挑取少量涂片，干燥，固定、染色、镜检同上。
（3）生化鉴定：
1．糖发酵试验：取纯培养物分别接种葡萄糖、单奶糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、鼠李糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验：取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚试剂，观察结果。
3．硫化氢试验：取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
4．对紫乳作用的观察：取纯培养物接种紫乳培养基，37℃培养2～3d，观察结果。
巴氏杆菌生化试验
注：+ 糖发酵试验中表示产酸不产气、其它试验中表示阳性；- 阴性。
⒍动物试验
1．取病料制成1:10乳剂，或用细菌的培养液。
2．取0.2～0.5ml皮下注射小白鼠，经24～48h动物死亡。置解剖盘内剖检观察其败血症变化，同时取心血、肝、脾组织涂片，分别进行美蓝染色或瑞氏染色、革兰氏染色，镜检可见大量两极浓染球杆状的巴氏杆菌，革兰氏染色阴性。
7. 结果判定：
依据病原分离培养特性、生化鉴定、动物接种试验可作出确切诊断。
5．教学方式
讲述与实践
6．考核要求
实验报告
7．实验报告要求
⒈禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化？
⒉疑似巴氏杆菌病的病鸡，如何进行微生物学诊断？
实验四止血、缝合、打结和绷带技术
1．本次实验的目的和要求
了解并掌握外科临床上常用的止血法、缝合法、打结法和绷带包扎法的操作要领及操作技术，以便能对家畜的损伤性疾病（如创伤、骨折等）采取必要的急救措施，以利于病畜的进一步合理治疗；同时也为进行某些小手术奠定基础。
2．实验内容或原理
3．需用的仪器或试剂等
动物：狗
器材：外科镊子、外科剪、持针钳、缝针、拆线剪、敷料钳、止血钳、止血带、灭菌纱布、脱脂棉、卷轴绷带、缝合线、细绳、竹片或薄木片等。
药品：肾上腺素溶液或麻黄素溶液。
4．实验步骤
一、止血法
1.指压止血法
2.填塞压迫止血法
3.钳压止血法
4.止血带止血法
5.结扎止血法
（1）单纯结扎止血法
（2）贯穿结扎止血法
6.药物止血法
二、打结法
三、缝合法
1.单纯缝合法
（1）结节缝合法
（2）减张缝合与圆枕缝合法
（3）钮孔状缝合法
（4）螺旋形缝合法
2.内翻缝合法
（1）间断内翻缝合法
（2）连续内翻缝合法
（3）袋口状缝合法
3.外翻缝合法
（1）间断外翻缝合法
（2）连续性外翻缝合法
四、绷带法
（一）卷轴绷带
1.环形绷带
2.螺旋绷带
3.蛇形绷带
4.折转绷带
5.交叉绷带
6.结节绷带（蹄绷带）
7.尾绷带
（二）结系绷带
（三）夹板绷带
5．教学方式
讲述与实践
6．考核要求
实验报告
7．实验报告要求
1.反复练习平结、外科结及三重结的打结方法，达到熟练程度。
2.自行练习单纯缝合法，并写出体会。
六、实验教材及主要参考资料
山西农业大学主编，《兽医学实习指导》，中国农业出版社，2003年
血凝与血凝抑制试验标准方法
血凝抑制（HI）试验操作规程 1.仪器、设备和试剂的准备 1.1仪器及设备 V型96孔血凝板、微量振荡器、低速台式离心机、含25μL的单道加样器、含25μL的 八道加样器、小圆底试管、吸管。 1.2抗原和试剂： 1.2.1相应HI抗原 1.2.2相应阳性血清 1.2.3生理盐水、阿氏液（血球保护液） 1.2.41%鸡红细胞悬液 1.2.4.1红细胞的采集从2-6月龄SPF公鸡翅静脉采集血液与等量的阿氏液混合（采集后 上下颠倒使血液和阿氏液混匀，防止凝血） 1.2.4.2红细胞的洗涤将于阿氏液混合的血液，分装于圆底试管中，以1000rpm离心5分 钟，吸弃阿氏液；加入适量生理盐水轻轻吸打将红细胞充分混合，以1500rpm离心5-10分 钟，吸弃上清液时，应注意吸弃红细胞表面的白细胞层，并应尽量吸净上清液。按上述步骤， 用生理盐水对红细胞进行洗涤三次，最后一次洗涤应1500rpm离心10分钟（确保红细胞的 压积）。 1.2.4.3吸弃上清液，将沉淀的红细胞吸取1ml，加入99ml生理盐水摇匀配制成1%的红细 胞悬液。（按照需要量配制） 1.2.4.41%红细胞悬液的标定对首次配制的红细胞悬液应进行标定，取配制好的红细胞悬 液60ml，自然沉降后，弃掉上部生理盐水50ml，混匀后装入刻度离心管中，1000rpm离心 5分钟，红细胞压积应为0.6ml 2．HI抗原工作液配制 2.1HI抗原血凝价测定 血凝试验： 1．取一块V型96孔板，按表1每孔加入生理盐水25ul，将HI抗原进行系列倍比稀 释，至11孔后吸取25ul弃去，第12孔为对照，稀释后每孔再加入25ul生理盐水，最后每 孔加入1%鸡红细胞悬液25ul，微量振荡器中速摇匀，置于室温（20—25℃），20~30分钟后 判定结果，以能使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数作为判定终点。 表1病毒血凝试验 孔号：123456789101112滴度：1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048对照 生理盐水252525252525252525252525抗原(病毒)2525252525252525252525弃去生理盐水252525252525252525252525红细胞悬液252525252525252525252525 轻轻振荡1-2min置于20~25℃静置20-25min后判定结果
病毒血凝和血凝抑制试验以新城疫为例
实践三病毒血凝和血凝抑制试验--（以新城疫为例）实践目的： 1．掌握血凝（HA）和血凝抑制(HI)试验的原理 2．掌握鸡新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法 实践原理： 某些病毒(如鸡新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与人或动物的红细胞发生凝集，此即为 病毒稀释倍数1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照生理盐水 病毒液 1％红细胞悬液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl # 表示100％完全凝集++ 表示50％凝集- 表示不凝集
表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。 能使100％红细胞凝集的病毒液的最高稀释倍数，称为该病毒液的红细胞凝集效价。如上例：病毒液的HA效价为1:128，HI试验时，病毒抗原液25微升内须含4个凝集单位，则应将原病毒液作成128/4＝32倍的稀释液。 生理盐水225μl 被检血清 4单位病毒液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl 振荡器上振荡1～2分钟，放37℃作用20分钟 1%红细胞悬液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl 振荡器上振荡1～2分钟，放137℃作用15分钟 结果例示-------++##-#注：- 表示不凝集、++ 表示部分凝集、# 表示完全凝集。
淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。 能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：128或HI效价为7(10g2)。 2．根据血凝价将新城疫病毒稀释成4个单位病毒液，每三位学生做一个血凝抑制试验，检测待检血清的血凝抑制效价，记录试验结果 3．回答问题： （1）病毒的血凝和血凝抑制试验的原理是什么？ （2）病毒血凝反应是抗原抗体反应吗，为什么？ （3）病毒血凝抑制反应是抗原抗体反应吗，为什么？
病毒的血凝及血凝抑制试验[医学参照]
病毒的血凝及血凝抑制试验 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性 设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI) 试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病 毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求] 掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。 [材料与试剂] 1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50μL定量移液器，滴头，微型振荡器。 2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。 3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。 [实验内容及操作方法] （一）血球凝集(HA)试验 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50μL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50μL 至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50μL；第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50μL，在振荡器上振荡，室温 下静置后观察结果（表4-1）。 表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：μL） 弃50
4. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。 (二) 血球凝集抑制(HI)试验 1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50μL生理盐水。 3. 第１孔加被检鸡血清50μL，吹吸混合均匀，吸50μL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50μL，稀释度分别为：1:２、1:4、1:8 ……；第12孔加新城疫阳性血清50μL，作为血清对照。 4. 自第1孔至12孔各加50μL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10min 。 5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50μL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果（表4-2）。 表4-2 病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：μL） 6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（++++），而血清
血凝抑制试验
血凝抑制试验 1 适用范围 本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。 本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 2 血凝试验 2.1 材料与试剂 2.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、高压灭菌器、刻度离心管、微量移液器及96孔V形微量血凝板。 2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。 2.2.3 1%鸡红细胞悬液。 2.2.4 阿氏液。 2.2.5 血凝抗原、被检血清。 2.2 操作程序 A. 取96孔V形微量血凝板，用微量移液器在第1孔~第12孔加25 μL生理盐水，共滴2排。每排的第1孔加入抗原25 μL，用微量移液器，从第1孔~第11孔对抗原作系列倍比稀释：即将第1孔的抗原与生理盐水用移液器反复吹吸3次后，吸出25 μL移至第2孔，再反复吹吸3次后，吸出25 μL移至第3孔，以此类推，直至第11孔。从第11孔中吸出25 μL弃去，此孔抗原的最终稀释度为1:211（即11 log2）。第12孔作为对照孔。 B. 每孔中加入25 μL生理盐水，再加入1%鸡红细胞悬液25 μL。 C. 将血凝板置于微量振荡器上500 r/min振荡1~2 min。 D.在室温18~25℃下静置20~40 min，或37 ℃静置15~20 min，或4 ℃静置60 min。红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果。 2.3 抗原血凝效价判定 A. 在反应时间内，对照孔的红细胞全部沉淀时，观察判读血凝结果。 对于使用V形孔微量血凝板进行的试验，将血凝板倾斜70°，观察沉淀于孔底的红细胞是否沿倾斜面向下呈线状流动（红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底），以出现全部凝集（红细胞无流动）的抗原最大稀释度为该抗原的血凝效价，该效价为1个血凝单位（HAU）。 3 血凝抑制试验 3.1 血清的处理 3.1.1 被检血清样品准备
血凝和血凝抑制试验
血凝和血凝抑制试验 一些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(Hemagglutination，HA)。正粘病毒和副粘病毒是最主要的红细胞凝集性病毒；其他病毒包括披膜病毒、细小病毒、某些肠道病毒和腺病毒等也有凝集红细胞的作用，但常要求比较严格的反应条件，例如一定的pH范围等。各种病毒的血凝素性质不尽相同。某些病毒可在很广的pH条件下呈现血凝作用，某些病毒则只在很窄的pH范围内才能凝集红细胞。某些病毒的血凝作用具有温度依赖性，也就是只在一定温度范围内才出现血凝现象；但另一些病毒却可在4℃、室温和37℃呈现同样的血凝作用。病毒凝集的红细胞种类，也随病毒种类而不同，例如某些病毒主要对人和禽的红细胞呈现凝集作用，另一些病毒则可凝集豚鼠或大鼠等的红细胞。 当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以封闭病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(HemagglutinationInhibition，HI)，也称为血凝抑制反应。血凝的原理因病毒而有所不同，如痘病毒对鸡红细胞发生凝集作用并非是病毒的本身，而是痘病毒的产物类脂蛋白的作用。而流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。病毒的血凝现象大致可以分为可逆转型、不可逆转性、凝集条件严格型三类。 血凝和血凝抑制试验有常量法和微量法两种，目前国内外广泛使用的都是微量法，各要素用量均为25ul，微量法省时、省料、高效。以下简要介绍本次试验的主要内容，详细内容参见各国标。 各实验室所采用的HA和HI试验程序不同，下面的例子是应用V型微量板进行的试验，两种方法反应总体积都为75ul，本试验所用试剂为如下： 1.生理盐水：用蒸馏水或去离子水配制成0.85％NaCl溶液，高 压灭菌备用。 2.红细胞悬液：采鸡血液，加于倍量的红细胞保存液-阿氏液中，置4℃普通冰箱保存，可用一个月。使用前，取红细胞悬液1份，用5～10倍量的生理盐水洗涤3次，直至上清无色透明。取沉淀红细胞，加生理盐水制备成1％红细胞悬液。
血凝血凝抑制试验说明书
鸡新城疫血凝与血凝抑制实验 鸡新城疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验 基本原理： 许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。器材及试剂: 待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液； 待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清； 生理盐水/PBS、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。 实验步骤 PBS的配制： 1%鸡红细胞的配制： （一）血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作： 1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照； 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。 4、室温静置10-30分，观察结果（见下表）。 5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。 （二）四单位检测： （三）血凝抑制试验（HI） 取一96孔板，按以下步骤操作： 1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。 2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。 3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀； 4、室温静置20min； 5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。
病毒血凝和血凝抑制试验--(以新城疫为例)
实践三 病毒血凝和血凝抑制试验--（以新城疫为例） 实践目的： 1．掌握血凝（HA ）和血凝抑制(HI)试验的原理 2．掌握鸡新城疫病毒血凝和血凝抑制试验的操作方法 实践原理： 某些病毒(如鸡新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与人或动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异性抗体（免疫血清）所抑制，即为红细胞凝集抑制试验。 实践内容： 1．红细胞凝集试验(HA 试验) 主要是测定病毒的红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病毒稀释倍数(抗原单位)。有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。 鸡新城疫病毒的HA 试验现采用微量法，在V 形微量反应板上进行。 (1)首先用微量移液器向每个孔加入稀释液即灭菌生理盐水一滴(25μl)。 (2)用微量移液器取病毒抗原液25μl 加入第1孔内，吸头浸于液体中缓慢吸吹几次使病毒与稀释液混合均匀，再吸取25μl 液体小心地移至第2孔，如此连续稀释至第11孔，第11孔吸取25μl 液体弃掉；病毒稀释倍数依为1:2～1:2048，第12孔为红细胞对照。 (3)再以微量移液器每孔加％红细胞悬浮液1滴(25μl)。 (4)在振荡器上振荡混匀约l ～2分钟，再置37℃作用15分钟后观察结果。 (5)每次测定样品都应同时做红细胞对照。 表1 鸡新城疫血凝效价(HA)的测定术式(微量法) 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒稀释倍数 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照 生理盐水 25 l 25l μ病毒液 25l l l l l 25l l l l l l μl 弃去 1％红细胞悬液 25μ l 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 25μl 感作 置振荡器上混匀1～2分钟，放37℃静置15分钟 # 表示100％完全凝集 ++ 表示50％凝集 - 表示不凝集
血凝血凝抑制试验总结
1、如果是马上要做实验，先把实验所需的抗原、标准阳性血清、阴性血清、待检血清取出 回温，如果待检血清已冷藏，可取出放入37℃恒温培养箱中回温，待血清析出后取出（时间大约看具体情况而定）。 2、试验准备阶段： a准备好清洗干净的血清离心管（要有刻度装血液）。 b采血：注射器内先加入一半体积的阿氏液（防止血液凝集，当所需红细胞较多时，加入注射器量程一半的阿氏液，当所需红细胞较少时，加入1.5 ml～2 ml的阿氏液）。 c 1%红细胞悬液的制备 采集至少3只SPF（无特定病原体）公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积的阿氏液混合，用PH 7.2、0.01 mol/L PBS液洗涤3次，每次去掉上层的清液后加入少量PBS用注射器反复抽吸使之混匀，再加至所要刻度，放入离心。每次均以1000 r/min离心10 min，洗涤后用PBS配成体积分数为1%的红细胞悬液，4℃保存备用（实际PBS液用1%的生理盐水代替）。 d所需1%红细胞悬液的体积≥4 HAU+1 ml（本例中为30 ml+1 ml=31 ml），否则配置的1%红细胞悬液不够用（理论计算为30.1 ml，取31 ml以防万一）。 e阿氏液（Alsevers）制备 葡萄糖 2.05 g 柠檬酸钠0.80 g 柠檬酸0.055g 氯化钠0.42 g 加蒸馏水至100 ml，散热溶解后调PH值至6.1, 69 kPa高压灭菌15 min，4℃保存备用。 3、血凝试验 目的：检测试验所用的标准抗原的血凝滴度，如检测结果血凝滴度为210 = 1024，表示标准抗原稀释1024倍仍能与红细胞发生凝集反应。 注意： 一瓶新的未使用的抗原（禽流感或新城疫为粉状），需要加入（用注射器）2ml的稀释液（0.9%生理盐水，一般瓶身上有标注加入的体积2ml） a反应板要同时做三排（每排12孔），原因：根据三排的多数结果来确定血凝滴度。例如：三个结果为：210、29、29，则本次试验标准抗原血凝滴度为29。 b加入1%的红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合1min，室温20℃～25℃下静置40 min，放4℃静置60 min。当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。 4、4 HAU抗原 例如：标准抗原血凝滴度为210 = 1024，则4 HAU抗原=（1：210）/4 = 1：256，稀释时，将1 ml的抗原加入到255 ml的PBS中即为4 HAU。 5、计算配置4 HAU所需稀释液体积V和标准抗原体积X 假设：待检血清100份每排12个孔（实际只需要11孔，但多计算一些，以防不够）每孔加入25 ul 4 HAU抗原体积= 25 ul×12×100 = 30000 ul = 30 ml 设标准抗原体积为X 则有： 1 ：256 = X ：30000 标准抗原体积X = 3000 / 256 = 117.1875 ul =0.117 ml 稀释液体积V = 30 - 0.117 = 29.883 ml 但实际量取时稀释液体积直接用30ml计算，因为0.117 ml数量很小，可以忽略不计。 6、血凝抑制试验 a红细胞在使用过程中应经常摇匀。
鸡新城疫血凝(HA)及血凝抑制(H1)试验
鸡新城疫血凝（HA）及血凝抑制(H1)试验 （一）目的意义： 1.掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI）的基本方法； 2.了解HA与HI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。 (二)基本原理： 许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。 血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。 （三）器材及试剂: 待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液； 待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清； 生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。 （四）实验步骤： 一、血凝试验（HA）取96孔板，按以下步骤操作： 1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul 为红细胞对照； 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。 4、室温静置10-30分，观察结果（见下表）。
5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。 二、血凝抑制试验（HI） 取一96孔板，按以下步骤操作： 1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4 个单位血凝素的稀释 度。 2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入 50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔，依次 稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。 3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min 混匀；
血凝抑制实验报告
血凝抑制实验报告 【导语】实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。以下是文库小编整理的血凝抑制实验报告，供大家借鉴！ 【篇一】血凝抑制实验报告 禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。 一、血凝试验操作程序 1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μLPBS液。 2、吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。 3、从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL 加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25μL。第三排孔至第四排孔同上操作。 4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL1%的鸡红细胞悬液。 5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30min 观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。 6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒稀释倍数为1个血凝单位（HAU） 二、血凝抑制试验操作程序 1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4） 2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25μLPBS。 3、在第1孔加入25μL被检血清，充分混匀后移出25μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25μL。 4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。 5、在第1~12孔各加入25μL4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30min。 6、每孔加入25μL1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。 7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。 三、试验过程中的注意事项
血凝抑制实验报告三篇
血凝抑制实验报告三篇 ——WORD文档，下载后可编辑修改—— 禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。 一、血凝试验操作程序 1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。 2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。 3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。第三排孔至第四排孔同上操作。 4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。 5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU） 二、血凝抑制试验操作程序 1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4） 2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。 3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。 4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。 5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。 6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。 7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。 三、试验过程中的注意事项 1样品的保存及试验前处理 1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧
血凝抑制实验报告
血凝抑制实验报告 【篇一】血凝抑制实验报告 禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。 一、血凝试验操作程序 1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25μLPBS液。 2、吸取25μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。 3、从第1孔吸取25μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25μL。第三排孔至第四排孔同上操作。 4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25μL1%的鸡红细胞悬液。 5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温
（20-25℃）静置30min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。 6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒稀释倍数为1个血凝单位（HAU） 二、血凝抑制试验操作程序 1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4） 2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25μLPBS。 3、在第1孔加入25μL被检血清，充分混匀后移出25μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25μL。 4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。 5、在第1~12孔各加入25μL4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30min。 6、每孔加入25μL1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。 7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的稀释倍数判为该血