华南农业大学植物生物技术复习题

1、基因工程的应用

1）大规模生产生物分子（新产品）

2）设计、构建新物种（育种）

3）搜寻、分离和鉴定生物体尤其是人体内的遗传资源（基因功能、表达调控、基因组学等研究）

2 简述基因重组的操作程序:分—获取目的基因和载体

接—目的基因与载体的连接

转—重组DNA导入宿主细胞

筛—重组DNA的筛选与鉴定

3 获取目的基因的主要途经有哪些？

1）制备基因组DNA 2）制备cDNA 3）聚合酶链反应4）人工合成基因

4 筛选重组DNA分子的方法有哪些？

1）平板筛选:插入失活, 蓝－白筛选

2）限制酶切图谱筛选

3）PCR筛选重组体

4）原位杂交技术

5 植物基因转移的方法有哪些？并举例说明植物基因转移的原理。

1)农杆菌介导法

2)以原生质体或细胞（组织）作为受体的直接基因转移:如基因枪法（particle bombardment，简称PB）、聚乙二醇法（PEG）、电击（EP，electroporation）、脂质体（Lip，Lome）、磷酸钙－DNA共沉淀（Ca－P）、微注射（Mi ，Microinjection）、超声波法（Ulstrasonication）

3)种质系统介导基因转化：如花粉管通道法、生殖细胞浸泡法和胚囊、子房注射法。

6 利用农杆菌进行植物基因转移时，T-DNA是如何被整合到植物细胞染色体上的？

Ti质粒分子受到信号分子(受伤植物产生酚类物质,如烟草组织产生的乙酰丁香酮)的激活作用之后，virD基因编码的一种核酸内切酶，先在T-DNA的RB序列中的第3和第4碱基之间切开一个单链缺口，随后在T-DNA同一条链的LB序列中切出第二个单链缺口。

T-DNA便以单链形式释放出来，并在RB序列的引导下定向地转移到寄主植物细胞。

在有关的植物细胞酶体系的催化作用下，合成互补链形成双链形式的T-DNA分子。在一系列酶的参与下整合进植物基因组。这种整合是一种非正常重组。

7 举例说明农杆菌介导植物基因转移的过程。

农杆菌基因转化可分为三大部分研究工作，即受体系统的建立、Ti质粒转化载体的构建及目的基因的转化。

8 农杆菌介导植物基因转移有何优点？

①该转化系统是利用天然的转化载体系统，成功率高，效果好。

②在所有的转化系统中，农杆菌Ti质粒转化系统是机理研究得最清楚的，方法最成熟，应用也最广泛，

③Ti质粒的T-DNA区可以容纳相当大的DNA片段插入，目前已把长达50kb的异源DNA序列通过T-DNA完整地转移到植物细胞中。

9 利用基因枪进行植物基因转有何优缺点？

优点：（1）无宿主限制。可以对任何基因型材料进行转化研究；靶受体几乎包括所有具有潜在分化能力的组织或细胞。（2）易于操作。

缺点：如转化频率低、嵌合体较多、结果的重复性差，转化的外源基因以多拷贝居多，易导致基因沉默，实验成本较高等。

10 如何确定获得的转化苗是真实的转基因物株？

●报告基因的表达检测鉴定转移的目的基因、选择标记基因是否表达。