新资源食品：鼠李糖乳杆菌
鼠李糖乳杆菌（菌株号R0011）
【CN109811031A】一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910162463.0 (22)申请日 2019.03.05 (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大学南路88号 申请人 丹阳市康力乳制品有限公司 (72)发明人 顾瑞霞 张玉律 张臣臣 黄玉军 陈霞 陈大卫 印伯星 管玉新 张兆俊 (74)专利代理机构 扬州苏中专利事务所(普通 合伙) 32222 代理人 沈志海 (51)Int.Cl. C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法(57)摘要一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法，属于微生物发酵及食品加工领域，利用生长曲线对本实验室保藏的12株鼠李糖乳杆菌进行区分，严格限定菌株传代时间，对12株菌进行3次传代，使菌株的生长状态稳定，利用自动生长曲线分析仪在600nm波长处测定12株菌在不同碳源条件下的光密度值，连续测定48小时，采用主成分分析法对测得的生长曲线进行分析，综合考虑3种碳源，鉴定方法科学，原理清晰，与现有的核糖体分型技术操作流程相比，本发明操作流程为菌株纯化-同步-生长曲线测定-分析，操作简单，成本较低，建立了快捷可靠的株水平上的鼠李糖乳杆菌区 分手段。权利要求书1页 说明书7页 附图2页CN 109811031 A 2019.05.28 C N 109811031 A
权 利 要 求 书1/1页CN 109811031 A 1.一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法如下： (1)鼠李糖乳杆菌培养 利用生长曲线对12株鼠李糖乳杆菌进行区分，无菌条件下，将12株菌的菌粉接种于MRS 肉汤培养基，37℃培养24小时，将复苏的菌液在MRS固体培养基上划线纯化； (2)鼠李糖乳杆菌形态观察 将纯化的菌落转接至MRS培养基，37℃培养24小时，收集1mL菌液，6000g离心5分钟，用纯净水重悬菌体；吸取10μL至载玻片，固定制片，染色，在光学显微镜100倍油镜下观察菌体形态； (3)鼠李糖乳杆菌生长曲线测定 严格限定菌株传代时间，对12株菌进行3次传代，使菌株的生长状态稳定，将活化的菌液按3％的接种量接种到不同碳源的MRS肉汤培养基中，混匀后用移液枪精确吸取300μL至蜂窝培养板，每株菌做三个平行样，然后放入微生物自动生长曲线分析仪，参数设置为37℃培养48h，每隔15min读取一次数据，重复试验5次； (4)鼠李糖乳杆菌生长曲线比较 选取所有测定的时间点及其对应的OD600nm值，利用SIMCA 14.1软件进行分类主成分分析，考察不同菌株之间的生长情况的差异，采用分类PCA的方法对各个菌株所有时间点的OD600nm值进行处理，将每一株鼠李糖乳杆菌分为一类，共12类，直观考察各组之间的相似和差异情况，样本与所选模型的相似度>0.05，记为“×”，相似度<0.05，记为“√”； (4-1)葡萄糖作碳源，PCA分类法的比较 在葡萄糖作碳源时，PCA分类法的效果较差，151m和hsryfm1301相似度高，BG和F相似度高，Bm01和F、grx19、LV1、SP1相似度高，CRL1505和F相似度高，F和grx19、hsryfm1301、LV1相似度高，grx19和LV1、SP1相似度高，LV1和SP1相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为5个类型； (4-2)乳糖作碳源，PCA分类法的比较 在乳糖作碳源时，Bm01和F、LV1相似度高，F和grx10、grx19、LV1相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为9个类型； (4-3)蔗糖作碳源，PCA分类法的比较 在蔗糖作碳源时，只有151m和hsryfm1301相似度高，BG和grx10相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为10个类型； (5)鼠李糖乳杆菌菌株的区分 葡萄糖是大多数乳酸菌的偏爱碳源，因而葡萄糖对菌株的区分能力不佳，乳糖和蔗糖的区分能力较好，综合三种碳源下，在试验进行的12株鼠李糖乳杆菌菌株中，均可利用生长曲线数据进行区分。 2
丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌体外混合培养对肠道致病菌的影响
丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌体外混合培养对肠道致病菌的影响 [摘要] 本试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养对肠道中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌4种致病菌的影响。结果表明：丁酸梭菌对这4种菌均有明显的抑制作用，可使其菌落数下降3～5个数量级；鼠李糖乳杆菌可降低产气荚膜梭菌、沙门氏菌菌落数；丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养可使4种致病菌菌落数均下降3～4个数量级。由此可见，两种菌混合培养对 4 种病原微生物的抑制无协同作用。 [关键词] 丁酸梭菌；鼠李糖乳杆菌；混合培养；肠道致病菌 [Abstract] This experiment was conducted to study the effects of the mixed culture of Clostridium butyricum and Lac- tobacillus rhamnosus on intestinal pathogens，including Salmonella gallinarum，Staphylococcus aureus，Clostridium perfrin- gens and Escherichia coli.The results showed that：the Clostridium butyricum significantly inhibited the number of these four types of bacteria and made them down 3 ～ 5 orders of magnitude；Lactobacillus rhamnosus reduced Clostridium per- fringens，Salmonella gallinarum colonies；the mixed culture of Clostridium butyricum and Lactobacillus rhamnosus made four kinds of bacteria down 3 ～ 4 orders of magnitude.The results indicated that the mixed culture of strains had no syner- gistic inhibition effect on the four kinds of pathogenic microorganisms. [Key words] Clostridium butyricum；Lactobacillus rhamnosus；mixed culture；enteric pathogens 丁酸梭菌属于梭菌属，是一种专性厌氧的革 兰氏阳性芽孢杆菌，其广泛分布于土壤，也能从 健康动物的肠道中分离出来。丁酸梭菌适合动物 的肠道厌氧环境（呼慧娟等，2011），可以控制消 化道紊乱（张晓阳等，2012），有效抑制有害菌（曹 广添等，2012）。鼠李糖乳杆菌属于乳杆菌，具有 较强的酸及胆碱耐受能力（王玉华等，2008），有 抑制有害菌的作用（吴光伟和韩建春，2009），具 有抗氧化活性，并且可以影响机体免疫功能。目 前丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌均被广泛用作饲料 添加剂，本试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌 联合培养对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、沙 门氏菌、大肠杆菌的抑制作用，为微生物制剂联 和使用提供理论依据。 1 材料与方法
益生菌动物双杆菌BB-12、嗜酸乳杆菌LA-5和鼠李糖乳杆菌LGG对孕产妇影响的临床性研究
研究综述： 益生菌动物双杆菌BB-12、嗜酸乳杆菌LA-5和鼠李糖乳杆菌 LGG对孕产妇影响的临床性研究 研究领域：代谢状况 研究类型：人类研究 益生菌菌株：LGG和BB-12 Aaltonen, et al. Impact of maternal diet during pregnancy and breastfeeding on infant metabolic programming: a prospective randomized controlled study. Eur.J.Clin.Nutr. 2010 研究目的：评价怀孕和哺乳期妇女的饮食情况和饮食咨询对婴幼儿代谢状况的影响。 研究方法：随机选取256个怀孕3个月以内的孕妇，分成一个空白对照组和两个饮食咨询组（饮食/益生菌和饮食/空白对照组）。双盲随机分配两种益生菌（LGG 和BB-12）或空白组（咨询对象是大量的饱和脂肪和低纤维饮食）。通过记录3天的饮食情况来重复评价孕产妇在怀孕期间和产后的饮食。测定194个6个月大的健康婴儿的代谢标志物，血清中32-33裂解的和完整的胰岛素原，人瘦素与脂联素的比值，皮褶厚度和腰围。这些指标值高就标明代谢状况差。 研究结果：与空白对照组（n=17/63, 27.0%）相比，益生菌饮食咨询组（n=6/62, 9.7%）或空白对照饮食咨询组（n=7/69, 10.1%）中32-33裂解胰岛素原高的婴幼儿的比例较低。在婴幼儿中，裂解胰岛素原高的同时，皮褶厚度和腰围较大，人瘦素与脂联素的比值也较高。对于怀孕期间孕妇的饮食，最高和最低脂肪摄入量会增加婴幼儿患高裂解胰岛素原的风险，而奶油的摄入和婴幼儿的腰围是相关的。与用奶粉喂养的婴幼儿相比，母乳喂养的婴幼儿患高裂解胰岛素原和高人瘦素与脂联素比值的风险较低。 研究结论：怀孕和哺乳期间孕产妇饮食的改善有利于婴儿代谢健康。高裂解胰岛素原反映了婴幼儿体内代谢状况很差，这可以通过早期的饮食咨询来改善。 研究领域：特应性疾病 研究类型：人类研究 益生菌菌株：BB-12,LGG和LA-5 Dotterud, et al. Probiotics in pregnant women to prevent allergic disease: a randomized, double-blind trial.Br.J.Dermatol. 2010 研究背景：之前的报道暗示给母亲和有患特应性疾病的小孩吃某种益生菌可以将2岁时患特应性疾病（AD）的机率降低一半。 研究目的：检测通过让孕妇吃益生菌是否可以预防2岁前的婴幼儿的特应性过敏或过敏性疾病。 研究方法：在一项对婴幼儿随机的双盲试验中，妇女从36个月的怀孕期到前3个月的哺乳期收到了含益生菌的牛奶或空白对照。益生菌牛奶含有鼠李糖乳杆菌LGG，嗜酸乳酸杆菌LA-5和动物双歧杆菌BB-12。判断得了发痒的皮疹超过四周的小孩是否是AD。在两岁时，评价所有小孩的特应性过敏性，AD，哮喘