一株丝状真菌的分类鉴定与特性研究
一株丝状真菌的分类鉴定与特性研究
生物系王凡
指导老师赵文婧韩建荣
摘要；运用载片观察法和菌落平板培养法对本实验室分离到的丝状真菌Mars进行了培养观察，并与标准菌球孢白僵菌（Beauveria bassiana）3.4428进行比较，初步鉴定Mars可能属于白僵菌属(Beauveria)。采用明胶琼脂平板法测定了Mars和3.4428的胞外蛋白酶，结果表明Mars的胞外蛋白酶酶活略小于3.4428。另外，实验测定了Mars和3.4428的产孢量，发现Mars的产孢量小于3.4428。并进行了室内感染松毛虫毒力的比较，结果显示3.4428的毒力强于Mars。
关键词：丝状真菌；观察鉴定；胞外蛋白酶；产孢量
本实验室分离到一株丝状真菌Mars，它在Mas培养基上能产生明显的溶钙圈，在牛奶培养基中培养能导致酸凝，并且使培养基由白色变为紫红色。该菌株在多种培养基上培养都没有发现有性孢子，初步鉴定是一种半知菌。本实验对该菌株进行了形态观察，并与购于中科院的标准菌株球孢白僵菌（Beauveria bassiana）3.4428相对比，以确定该菌株的准确分类地位。另外，根据球孢白僵菌所具有的一些生理生化特征，本实验对Mars的产孢量，胞外蛋白酶的活力及毒力等特性进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1供试菌株
Mars菌株，保存在PDA斜面上，由山西大学微生物实验室提供。
标准菌株球孢白僵菌（Beauveria bassiana）3.4428购于中国科学院北京微生物研究所，保存在查氏斜面上。
1.2 试剂
Hgcl2，吐温-100，磷酸缓冲溶液等。
1.3仪器
高压蒸气灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱，电子显微镜，电子天平等。
1.4 培养基
共使用下列培养基[1~2]：马铃薯培养基（PDA），添加了蛋白胨的马铃薯培养基（PPDA），查氏培养基（CA培养基），明胶琼脂培养基：平板由1﹪的明胶和1.5﹪的琼脂配成。
1.5实验方法
1.5.1固体平板培养法
从PDA斜面和CA斜面上分别挑取少量孢子接种到PDA、CA、PPDA平板上，25℃黑暗培养观察菌落形态。
1.5.2载片观察法[1]
将圆形滤纸铺于培养皿的底部，其上放一U形玻棒及盖玻片和载玻片各一片，盖好培养皿盖，灭菌；用无菌玻棒直接蘸取已融化的固体培养基滴于培养皿中载玻片的中央；用接种环取少量孢子接种于载玻片上培养基小块的四周，加上盖玻片，并略向下轻压；为防止培养过程中培养基干燥，可于培养皿中的滤纸圆片上滴加无菌的20%甘油液3-4毫升，盖好皿盖；将盖好的培养皿置适宜的温度下培养，定期取出，观察显微结构。
1.5.3胞外蛋白酶的测定（使用明胶琼脂平板法[3]）
平板由1﹪的明胶和1.5﹪的琼脂配成，各待试菌株配成1×108孢子/mL的孢子悬液，用微量取样器取25μL点滴在平板中央。每待试菌株6次重复，25℃黑暗培养三天，用15%的HgCl2（溶于2mol/L的盐酸）溶液处理,待菌落周围显现清晰的透明环后，倒去HgCl2，用直尺测量纵横两个方向的透明环直径和菌落直径，以透明环和菌落直径平均值之比作为胞外蛋白酶产酶量的指标。
1.5.4产孢量的测定[4]
分别将Mars和3.4428接种于PDA培养基、PPDA培养基、CA培养基上，25℃黑暗培养10d后，每个处理设置3个重复，在菌落核心至1/2处用直径为4.5mm打孔器打孔取样,置入盛有10mL 0.1﹪吐温水的500mL三角瓶中，手摇震动10-15min。用两层纱布过滤后得孢子悬液，用无菌滴管滴一滴于血细胞计数板上，小心加放盖玻片，避免产生气泡，在显微镜下直接计数。从血细胞计数板上每个小方格（体积1/5，000，000mL）中的孢子数可进一步计算出3个重复单位面积产孢量的平均值。计算公式如下：
样品孢子数/mm2=A／5×25×104×稀释倍数∕15.9
1.5.4毒力测定[4]
配制2×108个/mL,2×107个/mL的两种不同浓度的孢子悬液，挑取大小均匀、健康活泼的供试松毛虫虫体，取新鲜的松针孢子液中浸5—10s，取出停留2—3s，连同供试虫（100头）一并放入干净玻璃制养虫缸（直径10cm，高15cm）中，用白纱窗布罩住缸口，每个处理设三次重复，空白对照不喷任何物质，注意喷洒前先将菌液摇匀，后置入恒温培养箱中在25℃下黑暗培养，处理后3d更换新鲜松针，以后每2d更换1次松针，并在培养箱中放入湿棉花以保持湿度，至少保证湿度在75%左右，每2d定时检查幼虫的死亡情况，同时拣出死虫，PDA平板保湿培养以确诊死因。在除去虫粪，计算校正死亡率，并求死亡中时LT50。
2 结果与分析
2.1 载片观察法结果及分析
将接有Mars与3.4428孢子的载玻片培养7d后，从培养箱中取出，将载玻片直接置于显微镜上观察。具体形态特征[5－9]描述如下：
Mars：营养菌丝无色，粗1.2~3.0μm，分生孢子梗多着生于营养菌丝上，产孢细胞常浓密簇生于菌丝或泡囊上，有时可多达十几个，极少数单生，产孢细胞基部多为球形，近球形，少柱形，个别产孢细胞基部特化为较长的细丝。颈部明显延长成粗1μm，长达14μm的产孢轴。轴上具小齿突，呈膝状弯曲（“之”字形弯曲），培养后期，在低倍镜下常见球型的密集孢子头（由泡囊，产孢细胞和分生孢子组成），分生孢子透明，光滑，多为亚卵型和椭圆型。（见图1、图2）。
Beauveria bassiana 3.4428：营养菌丝无色，粗1.2~3.0μm,分生孢子梗多着生于营养菌丝上，产孢细胞常簇生于菌丝或泡囊上，最多可达7个，少数单生，产孢细胞基部多为球形，近球形，少柱形，产孢轴较长，可达17μm。轴上具小齿突，呈膝状弯曲（“之”字形弯曲），培养后期，在低倍镜下常见球型的密集孢子头（由泡囊，产孢细胞和分生孢子组成），分生孢子透明，光滑，多为亚卵型和椭圆型，个别为长柱型。（见图3、图4）。
图 1 Mars菌株的产孢结构（×40）图2 Mars菌株的产孢结构（×10）
图3球孢白僵3.4428 的产孢结构（×40）图4球孢白僵菌3.4428的产孢结构（×10）
通过实验观察，虽然Mars和 3.4428在显微结构上有很大的相似性，但二者之间仍有细微差别。详见表1。
表1 Mars与3.4428的异同
Mars 可见密集的
孢子头大多数浓密簇生，多达十几个,极少数单
生，产孢轴“之”字形结构弯曲幅度
较大，偶在短,的产孢轴顶端可发出不孕
的细长的产孢丝.
分生孢子透明光滑，多为球形、亚卵
形，个别为长柱形.
3.4 428 可见较密集
的孢子头
大多数簇生，最多达七个，少数单生，产
孢轴“之”字形结构弯曲幅度较小.
分生孢子透明，光滑，多为球形、亚卵
形
.
2.2 固体平板培养观察[10]结果
接种后的平板培养7d后，从培养箱中取出，观察菌落形态由表2可以看出在不同的培养基上Mars与3.4428的菌落形态比较相似，这两种菌在PPDA培养基上的菌落形态都有褶皱，呈辐射状分支，在PDA和CA培养基上菌落都无褶皱。所不同的是Mars的菌落形态呈绒毛状，在PPDA培养基上基质色泽为墨绿色；3.4428的菌落形态呈毛毡状。（详见表2）。
表2 25℃培养7天的菌落形态
菌株培养基菌落质地菌落色泽基质色泽
Mars 3.4428
PPDA
PDA
CA
PPDA
PDA
CA
致密绒毛状，有褶皱，
呈辐射状分支
致密绒毛状，无褶皱
稀疏绒毛状，无褶皱
毛毡状，有褶皱，呈辐
射状分支
毛毡状，无褶皱
毛毡状，无褶皱
白色
乳白色
乳白色
乳白色
乳白色
白色
墨绿色
淡黄色
淡黄色
黄色
淡黄色
橙黄色
2.3不同培养基上的产孢量结果
通过测定Mars与 3.4428在3种不同培养基上的产孢量，可以看出Mars的产孢量低于3.4428。所用的三种培养基中Mars在PDA培养基上的产孢量最大，而3.4428在PPDA上的产孢量最大。（具体数值见表3）。
表3 不同培养基上的产孢量及平均值
菌株培养基产孢量（×106／mm2）
1 2 3
平均值
Mars 3.4428PPDA
PDA
CA
PPDA
PDA
CA
1.48 1.54 1.76
3.11 2.39 2.99
3.68 2.36 2.01
8.05 7.89 8.08
6.70 4.66 3.62
3.93
4.21 4.84
1.59
2.83
2.68
8.01
4.99
4.33
2.4胞外蛋白酶的结果
利用明胶琼脂培养法测定了Mars和3.4428的胞外蛋白酶产量，结果表明Mars的胞外蛋白酶产量略低于3.4428。（具体数值见表4）。
表4 Mars和3.4428的胞外蛋白酶产量比值及平均值。
菌株
胞外蛋白酶产量比值
1 2 3 4 5 6
平均值
3.4428 Mars 2.06 2.13 1.94 2.03 1.95 2.99
1.83
2.00 2.02 2.08 2.13 1.77
2.10
1.97
2.5毒力测定结果
表5不同种类和不同浓度百僵菌对油松毛虫的室内感染死亡情况
菌株浓度（个/ml）试虫
（头）
不同时间幼虫的校正死亡率%
2d 4d 6d 8d 10d
Mars 3.44282×107
2×108
2×107
2×108
100
100
100
100
2 28 40 47 65
5 31 47 63 79
3 35 51 68 82
6 41 54 7
7 96
表6不同种类和不同浓度百僵菌对油松毛虫的室内感染死亡情况
菌株浓度
（个/ml）回归方程(Y=a+bX) 相关系数（R）死亡中时
LT50
显著性检验
Mars 3.4428
2×107
2×108
2×107
2×108
Y=0.826X-0.227
Y=1.013X-0.275
Y=1.090X-0.302
Y=1.213X-0.321
0.985
0.984
0.994
0.979
7.59
5.96
5.45
4.75
***
**
**
*
注：X=lgd(天数) Y=校正死亡率
结果表明，浓度是影响白僵菌分生孢子萌发、菌丝生长速度及白僵菌致病力的重要因素。松毛虫经两种菌、两种浓度悬液感染10d后，校正死亡率分别为65%、79%、82%、96%，经Duncon检验发现，2×108个/mL的孢子液的使用效果和2×107个/mL孢子的使用效果比较差异性显著。将校正死亡率转换为死亡几率，死亡时间转换成时间的对数，求出回归方程（见表6）。不同菌株和不同浓度的孢子液处理松毛虫的LT50值分别为7.59、5.96、5.45、4.75d，说明油松毛虫幼虫的死亡中时（死亡率达50%的天数）随浓度的降低而升高，分析其原因可能是孢子浓度低，对虫体的入侵能力下降。另外，Mars菌株和3.4428菌株的相同浓度对幼虫感染死亡率也不同。标准菌株3.4428的毒力（对松毛虫的致死力）强于Mars菌株。当然感染效果可能不仅受浓度因素和菌株因素影响还与环境因素和虫体间相互感染有关。
3讨论
真菌分类主要基于形态特征（显微特征，菌落形态）和生理生化指标来研究，这种分类方法在分类史上仍占有很重要的地位[11]。
载片培养法是观察各种菌株的显微特征的一种有效方法，这种方法既可以保持真菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物且培养物不易染菌。在本实验中，我们用了标准菌株球孢白僵菌3.4428与Mars菌株进行对比，根据菌落形态与显微特征，初步推断Mars是球孢白僵菌菌种下的一个菌株。
球孢白僵菌属于半知菌亚门（Deteromycotina）、丝孢纲（Hyphomycetes）、丝孢目（Hyphomycetales）、从梗孢科（Moniliaceac）、白僵菌属（Beauveria）是一种虫生真菌[11]，主要寄生在鳞翅目、半翅目、膜翅目等多种昆虫和多种壁虱上。在生物防治中受到人们的极大重视。迄今已发现，白僵菌会产生多种类型的代谢产物，包括毒素类，水解酶类有机酸类[13]。这些生理生化特征为菌种的分类鉴定提供了重要的依据。本实验由于实验条件的限制，只测定了Mars的胞外蛋白酶产量，产孢量及毒力等一些基本的生理生化特征，并与标准菌株球孢白僵菌做了对比，结果表明Mars也具有这些生理生化特征，结合菌落形态与显微特征的观察结果，初步鉴定Mars属于球孢白僵菌属。
实验中发现将Mars和3.4428分别接种在牛奶培养基上摇床振荡培养数天后，Mars可使培养基发酵变酸，且培养基颜色由白色变成紫红色,，虽然标准菌3.4428也能使培养基变酸，但不能使培养基变色。但由于时间关系，目前这项实验仍在进行中。
致谢：
本论文是在山西大学生命科学与技术学院韩建荣教授的悉心指导下完成的。在完成论文的过程
中，山西大学生命科学学院的康曼师姐、王丽同学以及山西大学生命科学学院微生物生理实验室的其
他同学都给予了我大量的指导和帮助，在此我对他们表示衷心的感谢！
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Taxonomy Identified of a Strain of Unknown Filamentous Fungus and Analysis of Its Characteristic
Abstract: A strain of filamentous fungus named Mars was cultured and examined by slid-glass-watching method and colony plating method in the lab. It was also compared with the standard strain of Beauveria bassiana3.4428.Based on the observation above, Mars was preliminary identified to Beauveria bassiana. Extracellular protease of Mars’and 3.4428’s were examined by the glutin-argar plate method. The results showed that the extracellular protease activities of Mars, was rarely less than that of 3.4428,s. In another experiment, Mars’ and 3.4428，s numbers of the spore were precisely compared. Their toxicity was measured by infecting the pine caterpillar .The outcome showed that the 3.4428,s number of the spore and toxicity was more and stronger.
Key words:Filamentous Fungus; observing and identifying; extracellular protease; number of the spore
最新植物病源真菌种类
植物病源真菌种类 一、鞭毛菌亚门真菌 1、卵菌纲： （1）霜霉目：霜霉科：霜霉属、假霜霉属、单轴霉属、指梗霉属、盘梗霉属腐霉科：腐霉属、疫霉属、指疫霉属 白锈科：白锈属霜疫霉科：霜疫霉属 （2）水霉属、水霉属、绵霉属 （3）水节霉目 （4）链壶菌目 2、根肿菌纲：根肿菌目：根肿菌属 3、壶菌纲： （1）壶菌目：节壶菌属（2）肋壶菌目 （3）芽枝菌目 （4）单毛菌目 4、丝壶菌纲 二、接合菌亚门真菌： 1、接合菌纲： （1）毛霉目：毛霉属、根霉属、笄霉属、梨头霉属 （2）虫霉目（3）捕虫霉目
2、毛菌纲 三、子囊菌亚门真菌： 1、半子囊菌纲： （1）外囊菌目：外囊菌属（2）内孢霉目 （3）原囊菌目 2、不整囊菌纲： 散囊菌目：青霉属、曲霉属 3、核菌纲： （1）白粉菌目：白粉菌属、布氏白粉菌属、单丝壳属、叉丝壳属、钩丝壳属、球针壳属、叉丝单囊壳属 （2）球壳目：长喙壳属、小丛壳属、顶囊壳属、日规壳属、黑痣菌属、间座壳属、赤霉属、麦角菌属、黑腐皮壳属、隐球丛赤壳属 （3）小煤炱目：小煤炱属 （4）冠囊菌目 4、腔菌纲： （1）多腔菌目：多腔菌属、痂囊腔菌属 （2）座囊菌目：球座菌属、球腔菌属、亚球壳属 （3）格孢腔目：黑星菌属、格孢腔菌属、核腔菌属、旋孢腔菌属 5、盘菌纲：（1）星裂菌目：斑痣盘菌属、散斑壳属 （2）揉膜菌目：核盘菌属、链核盘菌属
（3）梭绒盘菌目 （4）瘿果盘菌目 （5）块菌目 （6）盘菌目 （7）厚顶盘菌目 6、虫囊菌纲 四、担子菌亚门真菌： 1、冬孢菌纲： （1）锈菌目：柄锈菌属、胶锈菌属、层锈菌属、栅锈菌属、疣双胞锈菌属、单胞锈菌属、多胞锈菌属 （2）黑粉菌目：黑粉菌属、轴黑粉菌属、条黑粉菌属、叶黑粉菌属、腥黑粉菌属、尾孢黑粉菌属、实球黑粉菌属 2、层菌纲： 有隔担子菌亚纲：（1）银耳目 （2）木耳目：卷担菌属 （3）隔担菌目：隔担耳属 无隔担子菌亚纲： （1）外担菌目：外担菌属
几种真菌的分离与鉴定教学文案
常见真菌的分离与鉴定 病原真菌的一般特性 真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。 一、基本性状 （一）形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha）真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。 2．孢子生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。 （1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。
真菌分类学
假丝酵母属分类研究进展 郭成栓 摘要：概述了假丝酵母属的建立和定义的演变以及分类进展，并介绍了在假丝酵母属分类中常用的一些方法。 关键词：假丝酵母；分类 酵母菌的分类发展非常迅速，从1952年的第一本酵母分类专著问世以来，到1984年又酵母分类专著第三版，酵母菌属的数量已由1952年的26属增加到56属，种的数量由160种增加到600种左右。1984年后属、种数量又有所增加。鉴定的常规方法与新技术也都有发展。假丝酵母属(Candida Berkhout)是酵母菌中最大的一个属，现包括200多种，约占目前已知酵母菌总种数的三分之一[1]。由于假丝酵母的经济重要性及其在整个酵母菌中占的比重，对该属的分类研究作为其他各方面研究的基础，一直是一个颇为活跃的领域。研究手段不断改进，分类系统不断更新。假丝酵母属的常规分类主要依赖于形态和生理特征。由于酵母菌主要以单细胞形式存在、可供考察的形态特征很有限，故其种级水平上的分类，主要以对糖类化合物的发酵和对碳、氮源化合物的同化能力。对外源维生素的依赖性和不同温度下的生长能力等生理学特性为依据。然而，这些特征所表现的均是表型性状，难以反映种间的亲缘关系。在常规分类所测试的30—40项生理生化性状中，许多种间往往只存在一两项区别。而研究表明，有些生理生化性状常常是由单个可变基因控制的，因而是不稳定的。所以在常规分类中对只有一两项生理生化性状差异的相似种做出精确鉴定往往是困难的。目前假丝酵母分类除了细胞形态和行为水平的研究外，也发展了细胞水平，蛋白质水平与基因组水平的研究。借助各种技术的适当运用，对假丝酵母的亲缘关系有了更深入的了解。近10多年来该属的定义已经过两次重大修订[2]。下面对该属的分类研究进展及分类方法作一介绍。 1假丝酵母属的建立及其定义的演变 假丝酵母属是1923年建立的[3]，Yarrow和Meyer把球拟酵母属(Torulopsis Berlese)与假丝酵母属合二为一，把前者变为后者的异名，对假丝酵母属的定义作了较大的修订，使这样一个本来就不自然的类群更加异源化，在同一属内包括了子囊菌和担子菌两类酵母的无性型。因此随后就有人依靠下述分类技术的进步对假丝酵母属进行了清理工作。 1)用透射电镜对酵母菌细胞壁的超微结构进行观察的结果发现担子菌酵母的细胞壁为多层结构，而子囊菌酵母的细胞壁则为双层结构．担子菌酵母为全壁芽殖型，而子囊菌酵母则为内壁芽殖型。 2)在细胞壁水解产物单糖组成上。子囊菌酵母与担子菌酵母也有明显差异，子囊菌酵母以甘露糖占优势，不含鼠李糖，岩藻糖和木糖；担子菌酵母则可分为两类：一类含有木糖及少量的甘露糖，另一类含有岩藻糖和／或鼠李糖及相当数量的甘露糖。 3)子囊菌酵母与担子菌酵母在细胞壁超微结构及其水解物单糖组成上的差异，与DBB(Diazonium Blue B Salt)颜色反应和尿素酶试验具有很好的对应性，前者均为阴性而后者均为阳性。这样，子囊菌酵母与担子菌酵母就可以通过简单的颜色反应而区别开来。 Weijman等主要根据上述相关性特征对假丝酵母属进行了重新定义，把假丝
真菌分类学讲义第一章菌物的基本概念
主讲教师：林英任博士教授 林英任，1951年11月生，男，汉族，安徽金寨人，中共党员，博士。1974年毕业于安徽农学院林学系，并留校任教。1998年于东北林业大学研究生部毕业，获博士学位。历任安徽农学院助教、讲师、副教授。现任安徽农业大学教授，森林保护学、微生物学专业博士生导师。兼任中国菌物学会理事，《菌物研究》期刊编委，安徽省植物病理学会常务理事。获省首届青年科技奖，被遴选为省高校中青年学科带头人培养对象，省首批跨世纪学术和技术带头人，享受省政府特殊津贴。 林英任教授主要从事林木病理学、菌物学的教学与科研工作。主讲“森林（经济林、园林植物）病理学”、“林病流行与治理”、“高级菌物学”、“拉丁文”等课程。指导硕士、博士研究生多名。先后主持“中国真菌志·斑痣盘菌目卷研编”、”斑痣盘菌科及相关类群分子系统学研究”等国家自然科学基金项目4项和“安徽盘菌资源及其经济重要性研究”等省级科研项目10余项。在国内外学术刊物上发表论文60余篇，主要有“中国斑痣盘菌目分类研究”、“盘菌纲一新属——新齿裂菌属”、“国内新见的木本药用植物病害”、“中华猕猴桃病害及其防治”等。合著《牯牛降科学考察集》、《果树常见病虫害防治》等。曾获国家农业科技推广奖、省自然科学二等奖、省科技进步三等奖（2项）、省高校科技进步一等奖和校“九五”科技先进个人一等奖。 课程内容 《高级菌物分类学》以Ainsworth et al.（1973）的分类体系为基本框架，同时参考Hawksworth et al.（1995）和Kirk et al.（2001）的有关分类主张，系统讲授鞭毛菌、接合菌、子囊菌、担子菌和半知菌亚门及其下属各分类阶元的分类地位和鉴别特征。此外对菌物的一般性状、植物病原菌的治理和病菌、害虫天敌及食药用菌的开发利用等情况作简要介绍。旨在学生为识别、发掘、利用和改造菌物打下良好基础。 适用学科专业 森林保护学、微生物学专业研究生。 学分及学时 2.5学分，合50学时。 教学环节 理论讲授：30学时；
川芎内生真菌的分离与鉴定
川芎内生真菌的分离与鉴定 汪杨丽，严铸云，郭晓恒，宋杰，陈新，万德光 成都中医药大学药学院中药材标准化实验室，四川成都 (610075） E-mail：wangyangli27@https://www.360docs.net/doc/b217438102.html, 摘要：目的：探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法：采用平板分离法分离川芎的内生真菌，采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果：从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株，经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论：不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异，推测川芎的道地性可能和川芎内生真菌种群有关。 关键词：川芎，内生真菌，分离鉴定 川芎为伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效，是著名的川产道地药材。四川都江、彭州为川芎的主要产区。此外，云南丽江、甘肃庄浪和华亭、江西等地也产，分别称“云芎”、“西芎”、“抚芎”[1～3]。有关不同产地及不同品种川芎的化学成分品质、药理、药效的研究报道较多[4]，但至今未见从川芎根茎分离内生真菌及其内生真菌种群多样性的研究报道。根据内生真菌和植物互惠共生的关系[5，6]，本文对不同产地及不同品种的川芎进行内生真菌的分离，探讨川芎在特定生境中的微生物群落结构的特征。 1. 材料与方法 1.1材料 1.1.1植物来源（见表1） 1.1.2 培养基 PDA培养基[7]（马铃薯葡糖糖培养基）＋青链霉素混合液[8]（用于分离）；PDA 培养基；促孢培养基（KH2PO41g、KNO31g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、淀粉0.2g、葡萄糖 0.2g、蔗糖 0.2g、琼脂15～20g、蒸馏水 1000ml、PH自然)。 表1 各种川芎的样品情况 药材名原植物部位采集地采集时间 川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 根茎四川彭州敖平2006.5.20 川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川都江堰石羊2006.5.22 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川彭州小鱼2006.7.24 山川芎L. chuanxiong Hort. 根茎四川汶川水磨2006.8.10 西芎L. sinense Oliv. 根茎甘肃平凉市华亭马峡2006.9.14 云芎L. chuanxiong Hort. cv. Jinxiong根茎云南丽江泸沽湖2006.8.17注：以上品种经成都中医药大学严铸云副教授鉴定 1.2方法 1.2.1. 内生真菌的分离先去掉新鲜川芎的须根，用自来水将川芎根茎表面洗净，用5%的NaClO溶液浸泡5min，用自来水反复的漂洗，稍干后切成适宜大小的小块，在无菌的条件下，用75％酒精中浸泡5 min，用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干，然后用无菌刀片将表皮削去，分别切成5 mm×5 mm×1 mm的小块种植于PDA培养基内，每个培养皿中放7小块，每个样品6个培养皿，置28℃恒温箱中培养3～15d，观察到培养基上从各植物组织块内部向周围
最新重要植物病原真菌分类检索表
重要植物病原真菌分类检索表鞭毛菌亚门真菌 1. 根肿菌纲(Plasmodiophoromycetes戸根肿菌属(Plasmodiophora)f芸薑根肿菌(Plasmodiophora brasicae：弓I起十字花科根肿病 2. 壶菌纲(Chytridiomycetes)—节壶菌属(Physoderma)—玉蜀黍节壶菌(P. maydis):玉米褐斑病 3. 丝壶菌纲(Hyphochytridiomycetes) 无 4. 卵菌纲(Oomycetes) 4.1 水霉目( Saprolegniales) a1水霉属(Saprolegnia—寄生水霉(S. parasitica：引起鱼类水霉病 a2绵霉属(Achlya)—稻绵霉(A. oryzae):引起水稻烂秧病 4.2霜霉目( Peronosporales) 4.2.1 腐霉科( Pythiaceae) a1腐霉属(Pythium)—瓜果腐霉(P. aphanidermatum ):西葫芦绵腐病a2 疫霉属( Phytophthora )—致病疫霉( P. infestans )：马铃薯晚疫病 4.2. 2 霜疫霉科(Peronophthoraceae —霜疫霉属(Peronophthora —荔枝霜疫霉(P. litchii),为害荔枝花序和果实引起霜霉病。 4.2. 3 霜霉科( Peronosporacea)e a1霜霉属(Peronospora)—寄生霜霉(Peronospora parasitica十字花科植物霜霉病 a2 假霜霉属(Pseudoperonospora) a3 单轴霉属(Plasmopara) a4 盘梗霉属(Bremia) a5指梗霉属(Sclerospora)—禾(谷生)指梗霉(S. graminicola)谷子白发病 4.2. 4 白锈科(Albuginaceae)—白锈属(Albugo)—白锈菌(A. candida)十字花科、旋花科等植物白锈病。 接合菌亚门真菌
真菌分类表
真菌分类表 维基百科，自由的百科全书 （重定向自真菌分類表） 真菌分类表，本列表使用NCBI所公告之真菌分類表[1]為準。 以前的分類學家將真菌和细菌都列為植物，称为菌类植物，但他们和植物相当不同，都是异养生物，现在的分类法倾向将它们独立在动物和植物之外，各自单独分为一个界。 目录 [隐藏]
? 1 子囊菌门（Ascomycota） o 1.1 外囊菌亚门（Taphrinomycotina） ? 1.1.1 粒毛盘菌纲（Neolectomycetes） ? 1.1.2 肺孢子菌纲 (Pneumocystidomycetes) ? 1.1.3 裂殖酵母纲 (Schizosaccharomycetes) ? 1.1.4 外囊菌纲 (Taphrinomycetes) o 1.2 盘菌亚门 (Pezizomycotina) ? 1.2.1 星裂菌纲 (Arthoniomycetes) ? 1.2.2 刺盾炱纲 (Chaetothyriomycetes) ? 1.2.3 座囊菌纲 (Dothideomycetes) ? 1.2.4 散囊菌綱 (Eurotiomycetes) ? 1.2.5 虫囊菌綱 (Laboulbeniomycetes) ? 1.2.6 茶渍纲 (Lecanoromycetes) ? 1.2.6.1 微孢衣亚纲 (Acarosporomycetidae) ? 1.2.6.2 茶渍亚纲 (Lecanoromycetidae) ? 1.2.6.3 厚顶盘菌亚纲 (Ostropomycetidae)? 1.2.7 锤舌菌纲 (Leotiomycetes) ? 1.2.8 李基那地衣纲 (Lichinomycetes) ? 1.2.9 圆盘菌纲 (Orbiliomycetes) ? 1.2.10 盘菌纲 (Pezizomycetes) ? 1.2.11 粪壳菌纲 (Sordariomycetes) ? 1.2.11.1 肉座菌亚纲 (Hypocreomycetidae) ? 1.2.11.2 粪壳菌亚纲 (Sordariomycetidae) ? 1.2.11.3 炭角菌亚纲 (Xylariomycetidae) o 1.3 酵母菌亚门 (Saccharomycotina) ? 1.3.1 酵母纲 (Saccharomycetes) ? 2 担子菌门 (Basidiomycota) o 2.1 异担子菌纲 (Heterobasidiomycetes) ? 2.1.1 异担子菌亚纲 (Heterobasidiomycetidae) ? 2.1.2 银耳亚纲 (Tremellomycetidae) o 2.2 同担子菌纲 (Homobasidiomycetes) o 2.3 锈菌纲 (Urediniomycetes) ? 2.3.1 亚纲 (Agaricostilbomycetidae) ? 2.3.2 微球黑粉菌亚纲 (Microbotryomycetidae) ? 2.3.3 锈菌亚纲 (Urediniomycetidae) o 2.4 黑粉菌纲 (Ustilaginomycetes) ? 2.4.1 亚纲 (Entorrhizomycetidae) ? 2.4.2 外担子菌亚纲 (Exobasidiomycetidae) ? 2.4.3 黑粉菌亚纲 (Ustilaginomycetidae) ? 3 壶菌门 (Chytridiomycota) ? 4 球囊菌门 (Glomeromycota) o 4.1 球囊菌纲 (Glomeromycetes) ? 5 接合菌门 (Zygomycota)
系统辨识复习资料
1请叙述系统辨识的基本原理（方框图），步骤以及基本方法 定义：系统辨识就是从对系统进行观察和测量所获得的信息重提取系统数学模型的一种理论和方法。 辨识定义：辨识有三个要素——数据、模型类和准则。辨识就是按照一个准则在一组模型类中选择一个与数据拟合得最好的模型 辨识的三大要素：输入输出数据、模型类、等价准则 基本原理： 步骤：对一种给定的辨识方法，从实验设计到获得最终模型，一般要经历如下一些步骤：根据辨识的目的，利用先验知识，初步确定模型结构；采集数据；然后进行模型参数和结构辨识；最后经过验证获得最终模型。 基本方法：根据数学模型的形式：非参数辨识——经典辨识，脉冲响应、阶跃响应、频率响应、相关分析、谱分析法。参数辨识——现代辨识方法（最小二乘法等） 2随机语言的描述 白噪声是最简单的随机过程，均值为零，谱密度为非零常数的平稳随机过程。 白噪声过程（一系列不相关的随机变量组成的理想化随机过程） 相关函数： 谱密度： 白噪声序列，白噪声序列是白噪声过程的离散形式。如果序列 满足： 相关函数： 则称为白噪声序列。 谱密度： M 序列是最长线性移位寄存器序列，是伪随机二位式序列的一种形式。 M 序列的循环周期 M 序列的可加性：所有M 序列都具有移位可加性 辨识输入信号要求具有白噪声的统计特性 M 序列具有近似的白噪声性质，即 M 序列“净扰动”小，幅度、周期、易控制，实现简单。 3两种噪声模型的形式是什么 第一种含噪声的被辨识系统数学模型0011()()()()n n i i i i y k a y k i b u k i v k ===-+-+∑∑，式中,噪声序列v(k)通常假定为均值为零独立同分布的平稳随机序列,且与输入的序列u(k)彼此统计独立. 上式写成：0 ()()()T y k k v k ψθ=+。其中，()()()()()()()=1212T k y k y k y k n u k u k u k n ψ------????L L ，，，，，，， ) ()(2τδστ=W R +∞ <<∞-=ωσω2)(W S )}({k W Λ,2,1,0,)(2±±==l l R l W δσ2)()(σωω== ∑ ∞-∞=-l l j W W e l R S ???≠=≈+=?0 , 00,Const )()(1)(0ττττT M dt t M t M T R bit )12(-=P P N
微生物的分类与鉴定
第十章微生物的分类与鉴定 一、选择题 1.真菌的分类单元-门的词尾为（A ） 2.A、–mycota B、–mycetes C、–mycotina D、-mycetidae 3.下列传统分类指标中始终被用作微生物分类和鉴定的重要依据的是（A ） 4.A、形态学特征 B、生理特征 C、生态学特征 D、分子生物学特征 5.下列拉丁文哪个书写格式正确（ C ） 6.A、Fusarium oxysporium B、Aspergillus japonicus Saito 7. C、Bacillus amyloliquefaciens D、Clostridium Kluyveri 8.1978年，根据16S rRNA和18S rRNA的碱基序列将生物分为“三域”的科 学家是（D ） 9.A、Ainsworth B、Bergey C、Leedale D、Woese 10.1995年，Ainsworth分类系统把菌物列入真核生物域，将其分为3个界， 下面哪项不属于其中（ D ） 11.A、原生动物界 B、假菌界 C、真菌界 D、菌物界 12.有关菌株的说法，下列哪项说法不对（ B ） 13.A、菌株强调的是遗传型纯的谱系 B、菌株的名称不可随意确定 14.C、菌株与克隆相同，为一个物种内遗传多态性的客观反映 15.D、菌株实际上是某一微生物达到遗传型纯的标志， 二、是非题 1．微生物的种是微生物分类的基本单元，但是目前还没有一个公认的、明确的定义。（√） 2．两个微生物菌株具有相同G+C含量表明它们之间的亲缘关系一定很相近。（×）
3．亚种是进一步细分种时所用的单元，一般指除某一明显而稳定的特征外，其余鉴定特征都与模式种相同的种，其命名方法按“三名法”处 理。（√） 4．变种是亚种的同义词，在《国际细菌命名法规》中不主张使用。（√）5．在微生物分类中，DNA（G+C）mol%的比较只能做否定判断。（√）6．微生物DNA之间的同源性越高，说明它们之间亲缘关系就越近，反之亦然。（×） 7．菌株是一个物种内遗传多态性的客观反应，是遗传型纯的谱系，其名称可以随意确定。（√） 8．模式菌株是一个种的具体活标本。（√） 9．据科学家1992年估计，地球上生存的菌物约有150万种。（√）10．微生物自动化鉴定技术一般都是利用微生物的生理生化反应特性而设计的。（√） 11．细菌分子鉴定常用16S rRNA序列分析，而真菌分子鉴定常用ITS序列分析。（√） 12．所谓“模式菌株”通常是指一个细菌的种内最具代表性的菌株。（×）13．对微生物生理生化特征的比较也是对微生物基因组的间接比较，加上测定生理生化特征比直接分析基因组要容易得多，因此生理生化特征对于微生物的系统分类仍然是有意义的。（√） 14．现代微生物分类中，任何能稳定地反映微生物种类特征的资料，都有分类学意义，都可以作为分类鉴定的依据。（×） 15．DNA-DNA杂交主要用于种、属水平上的分类研究，而进行亲缘关系更远(属以上等级)分类单元的比较，则需进行DNA-rRNA杂交。（√）
一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定
一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定 摘要:从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,编号为WS-23883,其发酵提取物对多种植物病原真菌具有很强的抑制活性?对其产物进行提取精制及制备液相纯化,获得了纯度达90%以上的化合物?生测表明,在20 μg/mL浓度下该抗生素对多种植物病原真菌的抑制率达100%?根据活性产物紫外吸收光谱,可判断其为一多烯大环内酯类抗生素?质谱分析表明,活性化合物分子质量约667 u,据此判断其为一四烯大环内酯类抗生素? 关键词:多烯大环内酯;抗生素;化合物;纯化;鉴定 Isolation, Purification and Preliminary Identification of A Kind of Antibiotic with High Antifungal Activity Abstract: One actinomyces strain WS-23883 was isolated from soil sample collected in Wuzhishan Mountain area, Hainan province. The extraction of the fermentation broth was bioassayed with some plant disease pathogens; and it exhibited high antifungal activity. The compound with purity above 90% was obtained through macroporus resin column absorbtion method and preparative HPLC. The bioassay showed that the inhitition ratio was 100% at the concentrition of 20 μg/mL. The UV absorption spectrum and mass spectrum showed that the compound was atetraene macrolide antibiotic. Key words: polyene macrolide; antibiotic; compound; purification; characterization 从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,其发酵提取物对多种供试植物 病原真菌及某些腐生真菌具有很强的抑制活性?采用常规方法对该菌的发酵产物进行了提取精制,得到了纯度在90%以上的样品,从目标产物的紫外吸收光谱可判断其为一多烯类抗生素?HPLC-MS检测表明,活性产物分子离子峰为667,可以确定其分子质量约为667 u,综合分析后确定其为一四烯大环内酯类抗生素? 1材料与方法 1.1菌株 1.1.1抗生素产生菌编号为WS-23883,从海南五指山采集的土样中分离得到,由湖北省生物农药工程研究中心保存? 1.1.2生测指示菌番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)?小麦颖枯病菌(Septoria nodorum)?小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)?水稻纹枯病菌(Rhizoctonia
重要植物病原真菌分类检索表
重要植物病原真菌分类检索表 鞭毛菌亚门真菌 1.根肿菌纲(Plasmodiophoromycetes)→根肿菌属（Plasmodiophora）→芸薹根肿菌（Plasmodiophora brasicae）：引起十字花科根肿病 2.壶菌纲(Chytridiomycetes)→节壶菌属(Physoderma)→玉蜀黍节壶菌(P. maydis)：玉米褐斑病 3.丝壶菌纲(Hyphochytridiomycetes) 无 4.卵菌纲(Oomycetes) 4.1水霉目（Saprolegniales） a1水霉属（Saprolegnia）→寄生水霉（S. parasitica）：引起鱼类水霉病 a2绵霉属（Achlya）→稻绵霉（A. oryzae）：引起水稻烂秧病 4.2霜霉目（Peronosporales） 4.2.1腐霉科（Pythiaceae） a1腐霉属（Pythium）→瓜果腐霉（P. aphanidermatum）：西葫芦绵腐病a2疫霉属（Phytophthora）→致病疫霉（P. infestans）：马铃薯晚疫病4.2.2霜疫霉科（Peronophthoraceae）→霜疫霉属（Peronophthora）→荔枝霜疫霉（P. litchii），为害荔枝花序和果实引起霜霉病。 4.2.3霜霉科（Peronosporaceae） a1霜霉属(Peronospora) →寄生霜霉（Peronospora parasitica）十字花科植物霜霉病 a2假霜霉属(Pseudoperonospora) a3单轴霉属(Plasmopara) a4盘梗霉属(Bremia) a5指梗霉属(Sclerospora) →禾（谷生）指梗霉（S. graminicola）谷子白发病4.2.4白锈科（Albuginaceae）→白锈属（Albugo）→白锈菌（A. candida）十字花科、旋花科等植物白锈病。 接合菌亚门真菌 a1根霉属（Rhizopus）→匍枝根霉（R.stolonifer）特征：有匍匐丝和假根，
产纤维素酶真菌的分离和鉴定
产纤维素酶真菌的分离、筛选与鉴定 一、采样 地点：深圳大学杜鹃山深圳大学文科楼荔枝园深圳大学文山湖树丛 用具：灭菌信封小铁铲小刀分离培养基手套 采样的方法：取采样地点的表层土或地面15cm下的土样约10g，装入信封，立刻到实验室分离纯化 二、培养基： （1）马丁氏培养基：KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0.5g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、琼脂20.0 g、水1000ml，pH 自然。 （2）PDA培养基：PDA培养基：用于里氏木霉的固体培养，含20 %土豆浸出液，1 %葡萄糖，2 % Agar。20 %土豆浸出液作法如下：将土豆去皮切碎，每20 g土豆加水100 ml，置电炉上煮20分钟，用纱布过滤，定容。 （均需要加入抗生素100μg/ml） 产酶筛选培养基（CMC培养基）：羧甲基纤维素钠（CMC）20.0 g、蛋白胨5.0 g、酵母抽提物2.0 g、NaCl 5.0g、KH2PO4 1.0g、MgSO4·7H2O 0.2g、琼脂20g、蒸馏水1 000ml。 1%CMCNa底物溶液：1克CMCNa加热溶化于100ml pH值4.8，0.1mol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中。 0.lmol/L的柠檬酸一柠檬酸钠缓 0.1mol/L柠檬酸: 含柠檬酸·H2O 21.01克/1000毫升。 0.1mol/L的柠檬酸三钠: 含柠檬酸三钠·2H2O 29.4克/1000毫升。 0.1mol/L的柠檬酸40ml与0.1mol/L的柠檬酸三钠60.6ml混合即可。 刚果红染液：2% 刚果红溶液。 NaCl脱色液：2%氯化钠溶液。 三、实验方法 3.1 真菌菌株的分离 取土样方法如前所述。取1.0 g所采集的土样加入到装有9 ml无菌水的试管中，充分振荡混匀后，吸取上清液作一系列梯度稀释，10-1，10-2，10-3，将稀释液涂布在分离培养基（可选择查氏、马丁氏或PDA培养基的任两种，倒平板前加入100 μg/ml头孢菌素或链霉素等抗生素），于28℃下培养，待菌落成熟，形成孢子后（约需5-7 d）将单菌落上的少量孢子点种至纤维素酶产生菌筛选培养基（CMC平板）平板上( 用前加入适量抗生素来抑制细菌生长) , 28℃倒置恒温培养。培养5-7d后用刚果红染色、NaCl脱色后筛选菌落周围有明显透
真菌的分离培养和鉴定论文
内蒙古广播电视大学 “一村一名大学生计划”毕业作业作业题目真菌的分离培养和鉴定___ 教学点名称：包头广播电视大学_ 学员姓名：张瑞光__________ 学号：1015004452077___ 专业：畜牧兽医专科____ 入学时间：2010秋_________ 指导教师：杨瑞芳 _________
真菌的分离培养和鉴定 【摘要】：从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用沙堡琼脂培养基28℃培养2-3天，分离出几个真菌菌株。将分离株重新进行平板划线分离，挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养，经28℃培养2—3天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。观察到簇生在分生孢子梗的顶端的呈帚状分枝的分生孢子和有隔菌丝，可鉴定为青霉类菌；观察到分生孢子梗上呈轮状着生、具有3个分隔、弯曲的孢子，可鉴定为弯孢霉类菌；观察到单细胞的芽殖孢子，并通过进一步的酵母菌生理生化测定，可鉴定为酵母菌。 【关键词】：真菌；菌落；菌丝；孢子 1 前言 真菌一词来源于拉丁文的“蘑菇”，现在真菌这一名词的概念不仅包括蘑菇，而是代表着一个相当庞大的生物类群。什么是真菌呢？从生物学的观点来看，它们是一大类真核微生物，无根茎叶，不含叶绿素，不能利用无机物来制造食物，靠寄生或腐生生活，仅少数为单细胞，其余为多细胞，大多数真菌有分枝或不分枝的丝状体，能进行有性生殖和无性生殖。从形态上分为酵母菌、霉菌、担子菌。 其实，真菌并不像其看起来的这般抽象，在我们的日常生活中几乎到处都有它们的存在，我们每个人都有过接触和
不同程度的感性认识。例如酿酒、制馒头用的酵母；酒曲的曲种（曲霉和根霉）；做豆腐乳的毛霉和红曲霉；发酵饲料的黑曲霉；味美可口的蘑菇、木耳、银耳、猴头；作为中药的神曲、麦角、虫草、茯苓、灵芝；此外还有食品、衣物、用具等因潮湿而发生的霉；引起农作物病害的小麦锈病等等都是真菌。 真菌与细菌的大小、形态、结构及化学组成差异很大，单细胞个体比细菌大几倍至几十倍，具有细胞壁，但不含细菌细胞壁的肽聚糖。有些真菌因环境条件的改变而改变形态，称之为真菌的两相性，如假皮疽组织胞浆菌在动物机体呈酵母菌样。而在人工培养基上呈丝状。 真菌不仅种类多，数量大，而且分布极为广泛，与人类生产与生活有着极密切的利害关系。有些菌丝可引起人与畜禽疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接的危害人类健康。因此，了解真菌的培养方法，认识其形态十分重要。 近年来在真菌分类方面趋向于采用Anisworth&bisby 的《真菌学辞典》介绍的分类系统。该系统认为真菌不属于低等植物，而是属于单独成立的真菌界，界以下分为黏菌门和真菌门。真菌门再分为鞭毛菌亚门、接合菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门。本研究从自然界分离到几株真菌，并用真菌分类方法对其进行了鉴定。
真菌分类学(考点版)
蘑菇圈fairy ring ·“蘑菇圈”多数发生在草原或森林边缘地。 ·它的形成是由同种蘑菇菌丝体的生长繁殖而形成，通常是从一点出发，不断向四周辐射扩展，因此由外围新生菌丝所形成的子实体常呈圈状生长。 八界：细菌总界：1,真细菌界2,古细菌界 真核总界：3,原始动物界4,原生动物界5,植物界 6,动物界7,真菌界8,假菌界 真菌起源的三个学说指的什么？貌似还有菌幕 藻类起源说，原生动物起源说，独立起源说 目前，真正意义上的真菌，主要包括： 壶菌、接合菌、子囊菌、担子菌 毒菇的鉴定： 1.形状奇特，色泽鲜艳，盖上生刺、疣：柄上同时生有菌环和菌托。 2.气味恶臭，味道极辣，极苦，汁液混浊。 3.鸟不啄，鼠兽不食，虫不蛀。 4.与葱、蒜，银器，大米共煮时呈现乌黑色。 5.生于阴暗和潮湿污秽的地方。 1，虚心学习，认识自己周围可食的野菇和毒菇。不随便采集。 2，食用时，即便非常可口，第一次也要少吃些。个人体质不同，对毒素反映不相同。 3，禁止使用变质的蘑菇。 菌丝生长特点 ·顶端生长·无限生长，不断分枝·各部分都有潜在的生长能力。 菌丝的细胞壁可以增厚，但其直径生长时有限的，菌丝的长度是无限的。 隔膜类型：初生隔膜不定隔膜 初生隔膜类型：单孔型隔膜多孔型隔膜桶孔型隔膜 两型性：有时形成具有分枝的，有隔或无隔的菌丝体，有时形成近球形，卵圆形酵母状细胞，称此现象为两型性，通常Y←→M表示，两型现象在酵 母中最普遍。 假菌丝：在酵母的出芽繁殖过程中，芽体往往不与母体脱落而出芽，依次下去，许多酵母细胞首尾相接而形成假的菌丝链。 真菌吸器与寄生细胞相互作用有三种方式 (1)壁与壁并列：指吸器的壁与寄生细胞壁相互接触，为一种附着的关系，吸器并不穿透寄主细胞壁侵入寄主细胞内。 (2)吸器在寄主细胞内：吸器穿透寄主细胞壁进入寄主细胞内吸取养分，吸器
作物病原真菌分类
实用标准
常见杀菌剂类别及其特点—选择性杀菌剂（杀真菌剂） 由真菌引起作物病害种类最多、最普遍。人类对植物病原真菌研究的最早最详尽，所以，至 今专用于防治真菌性病害的杀菌剂种类也最多。 如何更容易记忆和使用这些种类繁多的杀菌剂，最好是首先认识常见作物病害的病原真菌类 别。再针对不同病害类别去选择适宜相当的药剂。比如，对于霜霉病、疫霉病和晚疫病等低 等真菌引起的病害，可以选用烯酰吗啉、霜霉威、瑞毒霉、霜脲氰等，而三唑类杀菌剂对炭 疽病、褐斑病、白粉病、锈病等半知菌、子囊菌或担子菌引起的病害有效。咯菌腈、嘧霉胺、 异菌脲等对灰霉病特效。 作物病原真菌分为低等真菌和高等真菌两大类，低等真菌是指鞭毛菌亚门和接合菌亚门，而 子囊菌、担子菌以及尚未发现其有性世代的半知菌三个亚门。详情见下表。 表 1，作物病原真菌分类
类别
亚门
属别
常见病害
1 根肿菌：其营养体为原质团， 整体产孢繁殖。无性孢子为薄壁
十字花科根肿 孢子囊中产生的游动孢子，有性
病 孢子为厚壁孢子囊中产生的休 眠包子。
2
粉痂菌：休眠包子聚集成多孔 马铃薯粉痂病
的海绵状圆球。
低等真菌
一、鞭毛菌：无性孢
子为带有鞭毛的能 3 霜霉菌：营养体为发达的菌丝
体，产生吸器伸入作物组织细胞
在水中游动的游动
内吸取养分。无性孢子为游动孢
孢子，有性孢子为厚
多种蔬菜、果树
子，有性孢子多为卵孢子。在被
垣孢子或卵孢子。
的霜霉病
害发病的作物叶片背面出现的
霜霉状物是病菌的菌丝体和游
动孢子囊。
文案大全
4 疫霉菌：菌丝体发达，无性孢 子为游动孢子，自然条件下很难疫霉根腐病、马 见到其卵孢子。其病征（病菌在铃薯、番茄等晚 被害作物体上表现的特征）是白疫病等。 色绵絮状物。
常见真菌的分离与鉴定
常见真菌的分离与鉴定 发表时间：2010-08-20 发表者：皮肤科 (访问人次：361) 作者：上海长征医院皮肤科徐红 2005年6月13～19日全国各地举行了第8届中国护足周，主题是“积极治疗足病，杜绝家庭传染”。 在中国,每2个人中就有1人罹患足病，其中成年人发病比例高达75%；超过60%的足病为真菌感染，其中足癣发病率为45.2%，甲真菌病(俗称甲癣)占15.5%；40%的足癣患者是被家人传染的；在真菌患者中只有23.8%寻求治疗，其中50%的患者症状稍有好转就不继续治疗。 真菌其实很常见，真菌就生活在我们身边。 病原真菌的一般特性 真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。 一、基本性状 （一）形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha）真菌在合适的环境中，由 孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状， 称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交 织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子
分离与菌种 鉴定
《高级微生物实验指导》 一、目标微生物的分离与鉴定 在无菌条件下取样品10 g加入100 mL无菌生理盐水，用均质机将组织破碎均匀。经充分震荡做成1:10的均匀稀释液。用1 mL的灭菌吸管吸取1:10稀释液，注入9 mL灭菌生理盐水的试管内，震荡试管混匀，按上述操作依次进行10倍递增稀释，选择3个适宜的稀释度，每个稀释度做2个平行，用灭菌涂布棒均匀涂布于冷却的细菌分离培养基（NA）和真菌分离培养基（PDA）表面，分别将细菌培养基和真菌培养基于30℃和28℃下恒温培养2-4d。待菌长出后，挑取不同形态菌落，纯化，挑取单菌落于PDA斜面上，培养并保存。 二、细菌与霉菌总DNA的提取（CTAB法） 1、菌株DNA的提取通用试剂 （1）CTAB抽提液：2%CTAB，1.4M NaCl，20mM EDTA，100mM Tris-HCl，pH8.0；（2）β-疏基乙醇 （3）PVP（聚乙烯吡咯烷酮） （4）石英砂 （5）Tris平衡酚 （6）氯仿：异戊醇（24:1） （7）异丙醇 （8）75%乙醇 （9）无水乙醇 2、菌株DNA的提取步骤 (1) 将已纯化的菌种，接种于相应的分离培养基平板上，28℃培养2d-4d。 (2) 用灭菌药勺或解剖刀从培养皿中刮取足量菌丝至1.5ml离心管中。 (3)加少量PVP、灭菌海砂和65℃水浴预热的200μl CTAB抽提液，用玻璃棒研磨至匀浆； (4)加入400ul预热CTAB抽提液，颠倒混匀后于65℃水浴1h；期间轻柔颠倒混匀2-3次。 (5)冷却至室温后，12000rpm离心10min，上清液移至另一离心管中； (6)加入1/2体积（约300ul）的Tris平衡酚及1/2体积（约300ul）的氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀。 (7)12000rpm离心10min，取上清液至另一离心管中； (8)重复（5）-（7）步2-3次，直到两相界面处无明显杂质； (9)加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀； (10)12000rpm离心10min，取上清液至另一离心管中； (11)向上清液中加入0.6倍体积的异丙醇，-20℃放置15min； (12)12000rpm离心10min，弃去上清液，加入70%乙醇500ul以悬浮沉淀；也可250ul 70%乙醇分两次悬浮沉淀； (13)12000rpm离心5min，弃上清，室温干燥；
真菌分类
真菌分类 1 子囊菌门（Ascomycota） 1.1 外囊菌亚门（Taphrinomycotina） 1.1.1 粒毛盘菌纲（Neolectomycetes） 1.1.2 肺孢子菌纲 (Pneumocystidomycetes) 1.1.3 裂殖酵母纲 (Schizosaccharomycetes) 1.1.4 外囊菌纲 (Taphrinomycetes) 1.2 盘菌亚门 (Pezizomycotina) 1.2.1 星裂菌纲 (Arthoniomycetes) 1.2.2 刺盾炱纲 (Chaetothyriomycetes) 1.2.3 座囊菌纲 (Dothideomycetes) 1.2.4 散囊菌纲 (Eurotiomycetes) 1.2.5 虫囊菌纲 (Laboulbeniomycetes) 1.2.6 茶渍纲 (Lecanoromycetes) 1.2.6.1 微孢衣亚纲 (Acarosporomycetidae) 1.2.6.2 茶渍亚纲 (Lecanoromycetidae) 1.2.6.3 厚顶盘菌亚纲 (Ostropomycetidae) 1.2.7 锤舌菌纲 (Leotiomycetes) 1.2.8 李基那地衣纲 (Lichinomycetes) 1.2.9 圆盘菌纲 (Orbiliomycetes) 1.2.10 盘菌纲 (Pezizomycetes) 1.2.11 粪壳菌纲 (Sordariomycetes) 1.2.11.1 肉座菌亚纲 (Hypocreomycetidae) 1.2.11.2 粪壳菌亚纲 (Sordariomycetidae) 1.2.11.3 炭角菌亚纲 (Xylariomycetidae) 1.3 酵母菌亚门 (Saccharomycotina) 1.3.1 酵母纲 (Saccharomycetes) 2 担子菌门 (Basidiomycota) 2.1 异担子菌纲 (Heterobasidiomycetes) 2.1.1 异担子菌亚纲 (Heterobasidiomycetidae) 2.1.2 银耳亚纲 (Tremellomycetidae) 2.2 同担子菌纲 (Homobasidiomycetes) 2.3 锈菌纲 (Urediniomycetes) 2.3.1 亚纲 (Agaricostilbomycetidae) 2.3.2 微球黑粉菌亚纲 (Microbotryomycetidae) 2.3.3 锈菌亚纲 (Urediniomycetidae) 2.4 黑粉菌纲 (Ustilaginomycetes) 2.4.1 亚纲 (Entorrhizomycetidae) 2.4.2 外担子菌亚纲 (Exobasidiomycetidae) 2.4.3 黑粉菌亚纲 (Ustilaginomycetidae) 3 壶菌门 (Chytridiomycota) 4 球囊菌门 (Glomeromycota)