临床微生物实验室血培养操作标准
临床微生物实验室血培养操作标准
1 范围
本标准规定了血培养标本临床微生物检验的技术要求。
本标准适用于开展血培养的临床微生物实验室。
2 术语
一套血培养：从同一穿刺点同时采集的血液标本，分别注入需氧和厌氧瓶；
静脉输液港：一种植入皮下，可长期留置在体内的静脉输液装置；
HACEK菌群：嗜沫嗜血杆菌、伴放线放线杆菌、人心杆菌、啮氏艾肯菌和金氏金菌；
血培养污染率：一般由凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌、芽孢杆菌、痤疮丙酸杆菌和微球菌等污染引起的阳性瓶占总送检瓶数的比例。
3 导言
人体血液中有很多物质，包括溶菌酶、白细胞、免疫球蛋白、补体等，可在几分钟内将入侵血流的微生物清除。当微生物感染超出人体免疫系统的防御能力时，人体不能将微生物局限于原始感染的部位，或在治疗中不能通过切除、引流等措施清除感染源，那这些微生物将侵入血液迅速繁殖形成菌血症或真菌血症。一过性菌血症常发生于对感染灶的外科处理、黏膜的创伤操作和易污染的外科手术，亦可发生于全身或局部感染的早期；间歇性菌血症常发生于腹腔等部位未能及时引流的脓肿；持续性菌血症常发生于感染性心内膜炎等血管内膜感染以及伤寒和波浪热的最初几周。菌血症是临床急症，应尽快采集血液进行培养。血培养是对入住急诊科、ICU患者、移植患者以及静脉插管患者的败血症进行早期诊断的一种方法，并根据阳性血培养病原菌的药物敏感性试验，可为临床医生提供最佳的抗菌药物治疗方案，对降低病死率有很大帮助，血培养对于临床诊断和预后评估也具有重要的意义。
4 血样采集和培养瓶接种
4.1 采血指证
可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可以考虑采集血培养：发热（≧38℃）或低温（≤36℃），寒战，白细胞计数增多（计数＞10.0×109 /L，特别有“核左移”时）或减少（计数＜3.0×109 /L），皮肤黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血压降低，C反应蛋白、降钙素原（PCT）、1，3-β-D-葡聚糖（G试验）升高及突然发生的急性呼吸、体温和生命体征改变。
4.2 采血时间及套数
4.2.1 采血时间
推荐在寒战或高热高峰前后采集，用抗菌药物之前采集。
4.2.2 血培养套数
应同时采集2~3套血培养，2~5d内无需重复采集血培养。只有在怀疑感染性心内膜炎或其他血管内感染（如导管相关性感染）时，才有必要间隔多次采集血培养。对于新生儿，采集一瓶儿童需氧瓶，建议同时做尿液和脑脊液培养。
4.3 采血量
成人每瓶采血量8~10ml，儿童1~5ml，但不应超过患儿总血量的1%。血液和肉汤之比1:5~1:10。新生儿0.5ml。
4.4 需氧瓶和厌氧瓶间的血标本分配
4.4.1 采血量充足的患者
推荐配套需氧瓶和厌氧瓶，将血液先注入厌氧瓶，后注入需氧瓶。
4.4.2 采血量不足的患者
应将充足血标本先注入需氧瓶，再将剩余血液注入厌氧瓶。有利于分离出真菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。
4.5 血培养采集程序
4.5.1 采集血培养标本之前首先做好手卫生。静脉穿刺点选定后，去除血培养瓶的塑料瓶帽，切勿打开金属封口和胶塞，使用70%异丙醇或75%乙醇消毒，自然干燥60s；
4.5.2在穿刺前或穿刺期间，防止静脉滑动，可戴无菌乳胶手套固定静脉；
4.5.3穿刺点皮肤消毒；
4.5.3.1三步法
1）75%酒精擦拭静脉穿刺部位，待干30s以上；
2）1%~2%碘酊作用30s或10%碘伏60s，从穿刺点向外画圈消毒至消毒区域达3cm以上；3）75%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用75%酒精消毒60s，待酒精挥发干燥后采血。穿刺点消毒后不可再接触。
4.5.3.2 一步法
：0.5%葡萄糖酸洗必泰作用30s（不适用于2个月以内的新生儿），或70%异丙醇消毒后自然干燥。
4.5.4 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，换针头），直接注入血培养瓶，不可将抗凝血注入商品化血培养瓶；
4.5.5 血液接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。
4.5.6完成工作后洗手。
5 血培养瓶运送
血培养瓶应尽快送至实验室孵育或上机，如果运送延迟，应在血液接种以后尽快35~37℃孵育，切勿冷藏或冷冻。如果病房没有孵育箱，血培养瓶应置于室温下，而非冷藏或冷冻。
6 血培养标本的接收与拒收标准
6.1 实验室工作人员在收到标本之后应观察血培养瓶生长的指示信号，如果指示剂有细菌生长，则应该进行涂片镜检。
6..2血培养瓶一般不予拒收，如发现以下情况：血培养瓶标识错误或没有标识，破碎，损坏，渗漏，凝血等情况，应及时与临床联系。
7实验室操作方法及流程
7.1 影响检出率的关键因素
7.1.1 培养基
胰酶消化的大豆肉汤（TSB）是应用最广泛的基础培养基，脑心浸液、哥伦比亚、布鲁氏硫醇疏基乙酸盐和添加蛋白胨肉汤也是常见的用于需氧菌和厌氧菌的培养基。Middlebrook肉汤可增强分支杆菌的复苏能力。
7.1.2添加剂
抗凝剂聚茴香脑磺酸钠（SPS），能中和溶菌酶，抑制吞噬作用，使部分氨基糖苷类失活，抑制部分补体串联。浓度为0.025~0.05%，有些浓度低到0.006%。SPS会抑制部分细菌生长，包括奈瑟菌属、厌氧消化链球菌、卡他莫拉菌和阴道加德纳菌。除了营养肉汤可稀释血液以及SPS可降血中抗生素对细菌的抑制作用外，某些血培养瓶中加入了抗生素和或吸附剂，如树脂。抗凝剂肝素、EDTA和柠檬酸盐对微生物有毒性，不能用于血培养瓶中。
7.1.3 孵育条件
7.1.3.1 温度：35~37℃孵育
7.1.3.2气体：出厂的血培养瓶中气压的气压低于大气压以保证能注入足量的血液。有些手动系统，培养瓶必须用针制造一个需氧的气体环境。厌氧瓶顶端的气体有二氧化碳和氮气。7.1.3.3 自动化血培养系统每间隔一定时间检测需氧和厌氧瓶中微生物的生长信号。当有阳性信号时进行处理（详见9：血培养阳性结果的处理和报告程序）。对于已经培养5d的阴性瓶不需要常规盲传或终点接种。
7.2 血培养方法
7.2.1手工血培养
7.2.1.1传统肉汤培养
需氧培养基：脑心浸液肉汤、哥伦比亚肉汤或胰酶消化大豆汤；微需氧或厌氧培养基；硫醇或硫基乙酸盐。苛养菌培养需添加溶血素、维生素K1。L型半胱氨酸。抗凝剂采用0.025~ 0.05%的SPS。推荐添加树脂中和抗菌药物。肉汤的体积为18~100ml。
7.2.1.2 双相培养基
同时含有琼脂和肉汤的血培养瓶，可用于成人或儿童患者的需氧菌、厌氧菌和分支杆菌培养。培养瓶需垂直孵育，同时观察肉汤和琼脂表面有无微生物生长。
7.2.1.3溶血离心法
溶血离心法是将微生物从溶解的血液中释放出来后，通过离心将其与血液成分分离，因浓度不同而聚集在收集管底层的一种血培养方法。从溶血离心管底层沉淀物转移至固体培养基进行孵育。
7.2.1.4 孵育时间：手工法推荐35~37℃孵育7d，一些缓慢生长的苛养菌（巴尔通体、李斯特菌属、布氏杆菌属和奴卡氏菌属）和双相真菌可能需要更长的孵育时间。手工法需要每天观察培养状态，如果无生长迹象后摇动再孵育。
7.2.1.5 检测的频率和转钟：手工法需每天或更频繁的观察微生物肉眼可见的生长，应特别注意孵育48h内的生长迹象。检测培养时需明亮的荧光或白炽灯，观察浊度、溶血、产气、表面菌落形成和血液颜色的改变，发现有微生物生长迹象进行涂片革兰染色和转钟，根据涂片结果选择培养基类型。
7.2.2 自动化培养
原理：通过电子感应器检测微生物生长代谢的CO2 浓度、监测其生长。
孵育时间：35~37℃孵育5d，包括布鲁菌属、嗜血杆菌属、放线菌属、心杆菌属、艾肯菌属、金氏杆菌属和营养变异性链球菌（乏氧菌属和颗粒链球菌属）也可以检测出来。某些缓慢生长的苛养菌（巴尔通体、李斯特菌属和奴卡菌属）和双相真菌可能要更长的孵育时间。血培养仪阳性报警后，立即进行涂片革兰染色和转种，根据镜检结果决定转种的培养基类型。对于已使用抗菌药物治疗的患者，建议采用含树脂等中和物质的培养瓶，可提高细菌的检出率、缩短检出时间。
7.2.3 真菌血液培养
7.2.3.1 危险人群
真菌血症与创伤性或消化道粘膜溃疡、广谱抗细菌药物的应用、静脉营养、中心静脉插管和免疫抑制剂使用有关。
血培养中最常分离的酵母菌，包括白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和新型隐球菌，其他念珠菌（如克柔念珠菌、葡萄牙念珠菌和季也蒙念珠菌）、糠秕马拉色菌、红酵母属和毛孢子菌属分离率较低。马内菲青霉是最常分离到的双相真菌。荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌、镰刀菌、赛多孢菌、外瓶霉、喙枝孢霉少见，多在AIDS、血液恶性肿瘤、骨髓及器官移植和其它严重的免疫缺陷疾病的患者中分离出。
7.2.3.2 培养条件
酵母菌在需氧瓶中易生长。摇动肉汤培养可提高酵母菌的检出率，对于全自动商品化血培养系统或手工培养系统孵育最初24h的机械摇动都可实现。多数酵母菌孵育2~5d可检测出，某些酵母菌（如光滑念珠菌和新型隐球菌）可能需要延长孵育时间。糠秕马拉色菌需要在培养基中添加油脂（如橄榄油）。如果怀疑双相真菌或丝状真菌感染，孵育时间可能需要延长至2~4周。
7.2.3.3 方法-手工检测法
真菌血症检测的手工血培养瓶包括：1）营养肉汤培养瓶，2）双相培养瓶，3）溶血离心
培养瓶。酵母菌应用这三种培养瓶都可检测出，但是双相真菌和丝状真菌只能用双相培养瓶和溶血离心培养瓶可靠检测。双相培养瓶在酵母菌，双相真菌和丝状真菌的培养中可以应用，其中双相真菌需孵育4周时间。双相培养瓶在孵育的最初24h内，应轻轻摇动。双相真菌和丝状真菌在溶血离心培养瓶中的检测时间要早于其他手工血培养系统，离心浓缩的血液沉淀物应接种到多种琼脂培养基，27~30℃和35~37℃同时孵育。
7.2.3.4 方法—自动化检测法
建议采用专用真菌血培养瓶，可提高酵母菌的检出率、缩短检出时间。
7.2.4 分枝杆菌血培养
7.2.4 .1危险人群
分支杆菌菌血症易发生在免疫抑制患者中，如AIDS、白血病、多发性骨髓瘤、接受高剂量类固醇激素或细胞毒性化疗和长期的血管置管的患者。
最高分离的是结核分枝杆菌和鸟分支杆菌复合体。其他缓慢生长分支杆菌，包括堪萨斯分枝杆菌、猿分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌和日内瓦分枝杆菌也已分离到。快生长分枝杆菌引起的菌血症（如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌）与长时间的留置中心静脉导管和人工植入物感染相关。
7.2.4.2 培养条件
分枝杆菌不是专性苛养菌，如果孵育时间延长，也能够在普通血培养肉汤中生长。血培养中分枝杆菌的最佳培养方式是在肉汤中添加脂肪酸（如不饱和脂肪酸）、白蛋白和CO2。分枝杆菌有些种（日内瓦分枝杆菌和嗜血分枝杆菌）生长是需氧添加剂（分枝杆菌生长素、溶血素、血红蛋白或柠檬酸铁胺）。由于分枝杆菌繁殖缓慢，所有培养应至少孵育4~6周。7.2.4.3 方法-手工检测法
血标本在接种前，必须通过溶血素释放细胞内的菌体。应使用含有抗凝剂的无菌管（如SPS、肝素和柠檬酸盐，但不能使用EDTA）或者溶血离心管收集。全血不能直接接种于不含溶血素的固体培养基或肉汤。用溶血离心管收集的血标本可接种在各种固体、肉汤或双相培养基上；但固体培养基上培养效果不如肉汤和双相系统。阳性标本在双相培养系统中生长速度慢于自动化培养系统。
7.2.4.4 方法-自动化检测法
自动化系统的培养基中添加了各种生长因子和抑制杂菌生长的抗菌药物。不同系统在检测时间上有差别。建议采用分枝杆菌专用血培养瓶，以提高阳性率。
8血培养安全防护
对所有标本操作都应采取生物安全防护措施，血培养中的病原菌可能通过呼吸道或直接接触污染实验室工作人员的皮肤、眼或者粘膜引起感染。另外，工作人员间接暴露于污染的物体表面或培养分离到的病原菌，有实验室获得感染风险，需要个人防护用品及生物安全柜等设备。
8.1实验室获得感染途径
针刺伤病毒感染、包括乙肝病毒、丙肝病毒和HIV；皮肤黏膜暴露是肝炎病毒和逆转录病毒感染的主要途径，而其它的主要途径是气溶胶或微滴。
8.2防护措施
8.2.1 洗手
洗手时预防实验室获得感染的关键要素。在戴手套前、摘手套后、工作结束后、离开实验室和进入清洁区时，都必须洗手。如直接接触血液或任何潜在的感染性物质后必须清洗暴露部位。
8.2.2 防护屏障
采集血培养时应戴手套，采集下一患者时须换手套。血液污染手套、有破损迹象或失去防
护作用时，必须及时更换。在接收和处理标本时，需要戴手套。
可能发生血液或者其他感染性物质喷溅的情况下，需要面部防护。
在没有安全柜的情况下，血培养操作和检验时需要穿防水、长袖、前面封闭的隔离服。存在任何可见污染时立即脱去。污染的隔离服必须作为生物危险垃圾丢弃或严格按流程清洗。离开实验室或去实验室内的清洁区时要脱去隔离服。
8.2.3 生物安全柜
在处理阳性血培养瓶时，须在Ⅱ级生物安全柜中进行。
8.2.4 灭菌、消毒和去污染
采集和处理血培养标本时可能会污染仪器设备及环境表面，实验室操作程序中必须包括如何防止和控制感染性物质溢洒。运送标本的人员必须经过培训，运送容器必须能够防止感染性物质溢洒和血培养瓶破损。
若溢洒的感染性物质可经呼吸道传播，溢洒处的房间必须关闭至少30分钟以使微滴沉降。在清理溢洒时必须穿戴合适的个人防护装备，包括防护服、手套和面罩。清理溢洒物中有碎玻璃或锐器时，须戴放刺伤的手套。气溶胶已经形成或呼吸道传播危险性高（如结核分枝杆菌）时，须佩戴N95口罩。地面大面积溢洒时须穿防水鞋。
根据溢洒物的量、类型、可能含有的传染性物质及其浓度和污染表面的类型，来制订实验室具体处理措施。一般需要包括以下要素：
●容器及吸收物质
●用水溶性清洁剂去除残留的溢洒物
●用快速医用消毒剂如自制的漂白剂稀释液冲洗表面污染。浓度和作用时间取决于污
染表面的类型。
●擦去消毒剂并用水擦洗
●表面干燥防止滑倒
●去污染用的材料、所有被污染且不能有效去污染的物质都必须处理
8.2.5 标准防范措施
所有实验室员工必须接受基本原理及标准防护措施的操作培训。相关的安全防护措施包括以下内容：
●尽可能减少注射器及锐器的使用
●必须使用注射器时，应避免回套针帽
●若用注射器采集血液，将血液直接注入血培养瓶，无需更换针头。注射器使用完毕
后，应将针头放入锐器桶，不可重复使用。
●使用后的注射器或者其他锐器如需转运，必须装入锐器桶内
8.2.6 实验室意外事故控制
在污染区域采取能使实验室人员暴露风险最小化的控制程序：禁止在污染区用嘴吹吸移液管、咬指甲、抽烟、饮食、摘戴隐形眼镜、手或者其他环境表面与眼、鼻、嘴接触等。
可能发生溢洒喷溅的操作，必须在生物安全柜中进行。
离心机推荐使用带有生物安全罩的转子或离心桶。尽可能采用螺口密封的塑料离心管，使用前仔细检查塑料离心管有无损坏的迹象。转子或离心桶及离心的样本应在生物安全柜中打开，因样本中可能含有经空气传播的病原体。在打开转子或离心桶前，检查内部离心管有无损坏。
8.2.7 呼吸防护
实验室人员暴露于经空气传播的高危险性物质中时必须进行呼吸防护，特别接触患感
微生物标准操作流程
目录 生物安全柜操作规程及维护 (3) 实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (6) 物体表面细菌监测 (8) 医护人员手指细菌监测 (9) 空气中细菌含量的监测 (10) 环境卫生学监测质控标准 (12) 使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (13) 一次性医疗用品微生物监测 (14) 紫外线消毒质量控制程序 (15) 污水的细菌监测(总大肠菌群) (16) 正确洗手的手法 (18)
生物安全柜操作规程及维护 1.目的： 为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。 2.原理： 通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。 3.工作条件： 环境温度：18－30℃相对湿度：<80% 安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。 环境必须有良好的通风设备。 4、操作步骤： 生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。具体操作步骤为： 4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。 4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。 4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。 4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。 4.5如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。 4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。 4.7 当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。
微生物实验室技术操作规范
实验室技术操作规范 一、无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 1．灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
微生物实验室现场检查
微生物实验室要求 微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验 室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、 检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告； 药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开 实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告， 造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经 计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。
药品微生物限度检验方法标准操作规程
标准操作规程 目的：建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。 范围：适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产区域，QC微生物限度检查室，洁净工作室等。 责任者：QC主任、化验员。 规程： 本规程引至《中国药典》2000年版。 1. 概述：微生物限度检查系指非规定灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。我公司QC设无菌操作室，用于微生物限度检查。无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。 2. 抽样：供试品应按批号随即抽样，一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍。抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应缺陷选用疑问的样品，但因机构损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。 3. 供试品的保存：供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。 4. 检查： 4.1. 使用设备：电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75％酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。 4.2. 检查的全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。使用设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法见本文附录二。除另有规定外，供试品制备成供试液后，均在均匀状态取样。制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。 标准操作规程
4.3. 培养：除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30－35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25－28℃，控制菌培养温度为36±1℃，检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位。 4.4. 复检 4.4.1. 菌数测定不合格者应复检，控制菌检查以一次检出为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。 4.4.2. 以复试项下不合格项目为准，作单项复试。复试需另取同批号样品，测定2次。 4.4.3. 复试报告，以3次测定结果的算术平均值报告。 4.5. 检验报告 4.5.1. 检验报告以1g、1ml或10cm2为单位。 4.5.2. 测定菌数报告，以每次测定结果全部平均值报告。 4.5.3. 控制菌按检验结果报告，如未检出控制菌时，报告为“按规定抽样检验结果未检出XX菌”，如抽样中任意一样品要检出控制菌时，报告为“按规定抽样，检出XX菌，不符合药品微生物限度标准。” 4.6. 培养基、试药及稀释剂的相关内容见本文件附录三。 4.7. 供试液的制备：按供试液的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制成供试液。 4.7.1. 供试品的取样及注意事项 供试品取样应有一定数量，以使检验结果具有代表性，正常的供试品一般每批应随机抽取两瓶或两盒以上的包装单位，检验时每次应分取两瓶(盒)以上的样品共10g或10ml。 供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁殖，以免影响检验结果，凡已将原包装启开，则无代表性应另取样。 供试品稀释后须在1－2小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死亡。 供试品稀释成供试液后，应在均匀状态下取样，凡因抑菌或不溶于水的剂型，其供试品应作特殊处理后进行检验。 4.7.2. 液体供试品：取供试品10ml，加入稀释剂90ml中，混匀，作为供试液。油剂可加适量 聚山梨酯80，混匀，吸取相当于10g或10ml供试品，标准操作规程 再稀释成100ml作为供试液；合剂（系指含王桨或蜂蜜者，下同）可用供试品作为供试液。 4.7.3. 固体、半固体或黏稠液供试品：称取供试品10g，置0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，用匀浆仪或其他适宜的方法混匀后作为供试液。在制备过程中，必要时可加适量聚山梨酯80，并适当加温，但不应超过45℃。 （1）非水溶性供试品：取供试品5g（5ml）加入含溶化的无菌司盘80 5g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃左右的0.9%无菌氯化钠溶
微生物实验室安全操作
微生物实验室的安全操作规程 1 实验室安全 1.1 微生物实验室的生物安全性 1.2 科室安全文档 （a）生物危害防护：实际操作规程见（《实验室生物安全通用要求》，中华人民共和国国家标准GB19489-2004。2004-01-05发布，2004-10-01实施。） （b）实验室安全：原则和措施见（《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》，中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。2002-12-03发布，2003-08-01实施。）1.3 应用： 以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。工作人员或访问人员必须遵守各项规定。 1.4 关于新规定或现行规定的修改案： 任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员，他们将建议科室主任考虑实施。 1.5 生物性危害 1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于： a.处理的传染性物质的本身： 按照传染性物质对个人和社区的潜在危险性以及经空气传播的可能性，其划分成不同等级。所采用的等级划分详见＂《实验室生物安全通用要求》＂；原则和措施（见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》）。 b.使用的设备和设施： 处理不同等级的传染性物质的要求在＂实验室安全＂中已规定。这些符合要求的设备都要承担重要临床工作，科室负责人必须保证中应污染物水平。 c.培训，特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。所有员工应该接受一定训练，能安全处理任何实验室可能碰到的物质，避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室，即使暴露事故在实验室，即使暴露事故发生也要会正确处理。 1.5.2 传染性物质的分类 1.5. 2.1分类系统
食品微生物检测实验室要求
自来水水池至少有两个，工作台，药品试剂柜，超净工作台（无菌室），灭菌锅，培养箱，冰箱，干燥箱，电子天平，显微镜，平皿，试管，三角瓶等玻璃器皿。这些都是必备基本设备，只要能摆放的下就可以。 一、微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求（一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。（二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 （三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。（四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，
由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。（4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。 （2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可
表面微生物测试标准操作规程
表面微生物测试标准操作规程（接触平皿法） 1．目的 建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本） 3．范围 本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。 4．责任 质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行 5．内容 洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置： 空调系统验证的结果 房间的大小和布局 房间的用途 与产品的距离 人流物流方向 如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小； 2.设备、管路等的复杂程度； 3.生产活动的重要性； 4.易受污染的部位等。 应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介 质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。 表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。 为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。 洁净区微生物测试频率和限度 日常监控一月一次 接触碟（55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏 45cfu/25cm2 。 洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）。 洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
微生物标准操作规程三10
摩根菌属检验标准操作规程 1．概述 摩根菌属只有1个种，即摩根摩根菌，又分为摩根亚种、塞氏亚种和生物群I。 2．标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3．鉴定 3.1 形态与染色革兰阴性杆菌。 3.2 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时呈灰白色菌落。在麦康凯琼脂平板上呈无色、半透明的菌落。 3.3 生化反应氧化酶试验阴性，发酵葡萄糖，不发酵甘露醇、乳糖、蔗糖，动力、脲酶和苯丙氨酸脱氨酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验为阳性，VP、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶试验均为阴性，TSI为K／A，IMViC+ + - -。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征麦康凯琼脂平板上形成无色的菌落，IMViC+ + - - ，脲酶、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性。 菌名吲哚赖氨酸动力（36℃）海藻糖甘油摩根摩根菌95 1 95 0 5 摩根摩根菌生物Ⅰ群100 100 0 0 100 摩根摩根菌塞氏亚种50 29 79 100 7 3.5 操作步骤 3.5.1 氧化酶试验参见《氧化酶试验标准操作规程》。 3.5.2 鉴定从麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4．药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100一$20最新版本文件。 5．质量控制 见《质量管理程序》。 6．检验结果解释与分析 摩根菌属的特征是枸橼酸盐和阿东醇试验阴性而鸟氨酸脱羧酶试验阳性。 7.临床意义 摩根摩根菌存在于人类、犬和其他哺乳动物及爬行动物的粪便中，是条件致病菌和继发感染菌，可引起呼吸道、泌尿道和伤口感染以及菌血症等，也是医源性感染的病原菌。
8.鉴定流程
微生物实验室的要求
微生物实验室的基本要求 实验室总体面积应在70平米以上，要求水、电供应充足，畅通，排污设施与安全措施齐备。 一、选址： 1. 实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道； 2. 实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离； 3. 实验室应选择在方便取样与检验，距离车间较近的工作场所。 二、结构和布局： 应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。 1. 办公室 2. 理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室） ②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器） 3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室； ③培养基制作室； ④洗涮消毒室； 一般布局要求如下： 1. 办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2. 细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜； f. 实验室围护结构采用彩钢板材料，表面光滑、耐腐蚀、防水，所有缝隙可靠密封，便于清洁消毒，且防震、防火； g. 墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜。 3. 无菌室：无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局： a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有工作台（中心与边台皆可），紫外灯距工作台面要小于1.5m； e. 微生物室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮，地面应光滑，并应有缓冲间，设双层传递窗传递物件； f.门窗应是不锈钢的； g．室内温度18～26℃，相对湿度为45～65%，室内必须保持整洁； h．墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜； i. 地面采用PVC材料，防渗漏、无接缝、光洁、防滑。 4. 培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品橱。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药橱分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用。 5. 洗涮消毒室：洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10平米。 为满足洗涮消毒的功能，洗涮消毒室应设有： a.1-2个洗涮池，洗涮池上下水网要畅通；
【实验室管理】食品微生物检测实验室操作要求
食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，那么，对食品微生物检测实验室操作要求有哪些？ 无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 无菌间使用要求 1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5～0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%～3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W 紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在
紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1.灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2.装放（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3.设备检查 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 4.灭菌处理
微生物实验室安全及操作规定
微生物实验室安全及操作规定 1目的：为规范微生物实验操作，确保操作安全有效，制定本规定。 2.适用范围：化验室的微生物检测。 3.要求： 3.1无菌室的门要随手关闭，以防外界微生物的进入。 3.2微生物室内应保持清洁，不得存放与实验室无关的物品。 3.3进入无菌室前要更换经过灭菌的专用工作衣.帽.鞋。 3.4无菌室内应备有体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液.体积分数为70~75%的酒精棉球，以便样品表面及意外污染消毒。 3.5无菌室内应备有镊子.剪刀.接种针.接种环，每次使用前后应在酒精灯火焰上灼烧至无菌。 3.6检验人员在操作过程中需严格按照要求进行操作，不得随意减少工序。 3.7无菌室禁止交谈，操作过程中不得用手触摸其它未消毒.灭菌的区域，与该工作无关人员不得随便出入无菌室。 3.8微生物（无菌室.缓冲间）每次使用前，用紫外灯照射30min，要每周检测一次室内空气清洁度，确保其符合实验条件。每周对微生物室进行至少一次2h以上紫外灯消毒。微生物室内的的菌种总数>5cfu/平皿时，需要对无菌室.缓冲间用85~95%乳酸熏蒸1h，熏蒸结束后（必要时可以将空间密闭整晚），用体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液或体积分数为70~75%的酒精棉彻底对洁净室.缓冲间及其内所有设备.物品进行清洗；后对无菌室.缓冲间进行半小时以上紫外线消毒，结束后，验证室内空气清洁度是否合格，仍不合格，则可加大乳酸熏蒸时间及紫外线灭菌时间。 3.9每次微生物试验紫外灯灭菌前，需将所用的吸头.剪刀.纱布等物品浸泡于消毒剂中。 3.10接种前所用的试管.平皿及培养基必须经消毒灭菌，打开包装未使用完毕的器皿，不能再继续使用，金属用具应高压灭菌或用酒精灯过火三次后方可使用。 3.11切忌用手直接接触标本及已灭菌的器材内部，打开瓶塞或管塞时，应夹持在手中适当位置，避免污染。使用完毕的吸管.三角瓶.样品等应及时撤离，不可随意放在洁净工作台内。 3.12微生物检验每批必须做空白.对照试验（菌落总数做1个盐水对照.1个琼脂对照，大肠菌群做单料.双料各1个琼脂空白培养，整个检验过程超净台内的环境空白），同时记录。当有菌生长时必须保留样品及时汇报，分析原因再做处理，如果空白试验不符合要求，微生物结果不能出具。 3.13每次微生物实验结束后，所有物品及时撤离无菌室，并用体积分数为0.1%的新洁尔灭溶液将超净台内清理干净，酒精灯、剪刀等物品上的样品擦拭干净，用体积分数为0.1%的新洁尔灭溶液浸手或以肥皂洗手，再用清水冲洗干净。 3.14凡要丢弃的培养物，必须进行妥善处理，培养霉菌的培养物和玻璃器皿要先高压灭菌、再洗刷干净，然后再进行灭菌处理。 3.15严格控制培养箱温度以及培养时间，对培养箱的温度每个班至少监控两次。 3.16每周进行消毒剂擦拭一次培养箱内金属孔架及内壁，再有平皿破碎的情况时必须马上进行清理消毒，防止污染。
手部微生物监测标准操作规程综述
一、适用范围 1．评价医务人员洗手、卫生手消毒、外科手消毒的效果。 2．怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时。 二、监测时机 在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 三、采集方法 i．被检人洗手或手消毒后，在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 2．被检人将双手伸出，五指并拢。 3。检查者取2支无菌棉拭子，并浸于含相应中和剂的无菌洗脱液中。 4．取_支棉拭子在一只手手指曲面，从指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面积约30cm2)， 并随之转动采样棉拭予；按同样方法用另一支棉拭予涂擦另一只手。 5．剪去操作者手接触部位，将2支棉拭子投入10ral含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立 即送检。 四、标本检测 (一)带菌量检测(平皿倾注法) 1．将采样管在混匀器上震荡20s或用力振打80次左右。 2．将无菌吸管分别吸取lmJ待检样品接种于2个直径为90mm无菌平皿中。 3．再加入已熔化的45-48℃的营养琼脂15．18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固。 4．将平皿置于(36±1)℃温箱培养48h，计数菌落数。 5．计算公式：细菌总数(cfu／cm2)=平板上菌落数×稀释倍数／60(cm2) (二)细菌种类鉴定 1．将无菌增菌肉汤培养液试管置于(36±1)℃温箱培养24-48h。 2．若无菌增菌肉汤培养液试管浑浊，应根据实际情况选择血平板、中国蓝平板、双S 平板、 麦康凯平板或各种商用快速筛选平板进行细菌接种。 3．接种后将平板置于(36±1)℃温箱培养24-48h，挑取可疑菌落进行微生物学鉴定，必要 时做药敏。 六、注意事项 1．结果判定：卫生手消毒后细菌总数应≤10cfu／cm2；外科手消毒细菌总数应≤5cfu／cm2。 2．应根据所用方法，选择含相应中和剂的无菌洗脱液。 3．倾注时温度必须控制在45-48℃，温度过高可致细菌死亡，过低则影响倾注效果。4，当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时，监测目的在于考察实际工作中医务人员手卫生状况，虽然同样在接触患者前或进行诊疗活动前采样，但医务人员不一定进行了手卫生。 5．当怀疑医院感染暴发或流行与手传播有关时目标微生物的监测只能定性不能定量。主要参考文献： 中华人民共和国消毒技术规范(2002年版) 医院感染管理办法(2006年)
微生物实验室操作规程
微生物实验室操作规程【SOP 】?细菌室工作守则（微生物室SOP 之一） ?细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP 之二） ?微生物实验室安全与防护（微生物室SOP 之三） ?细菌室内质控制度（微生物室SOP 之四） ?细菌室操作技术规范（微生物室SOP 之五） ?无菌间规章制度（微生物室SOP 之六） ?菌（毒种）管理办法（微生物室SOP 之七） ?细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP 之八）?标准菌株保存及使用（微生物室SOP 之九） ?细菌室内务管理规定（微生物室SOP 之十） ?标本采集及保存要求（微生物室SOP 之十一） ?室内质控失控处理程序（微生物室SOP 之十二） ?标本拒收标准（微生物室SOP 之十三） ?温度失控处理措施（微生物室SOP 之十四） ?超净工作台作业指导（微生物室SOP 之十五） ?标本的接种和移种法（微生物室SOP 之十六）
细菌室工作守则 （微生物室SOP之一） 1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000 高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。 10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、
微生物实验室操作规范及其仪器的使用
微生物实验室操作规程 1.工作人员加强有菌观念，无菌操作。 2.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 3.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 4.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 5.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 6.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 7.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 8.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于 3%来苏儿溶液中 5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用 1:1000高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 9.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用 3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 10.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。 11.所有微生物培养物，不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。 12.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。 13.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。 14.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。 15.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。 16.爱护仪器设备，遵守仪器使用规范，经常清洁，注意防尘和防潮。每天观察培养箱、冰箱、干燥箱的温度，并做好记录。 17.发出的微生物报告应认真复审，分析报告、评价报告。
微生物检验标准操作规程
1 目的 建立微生物限度检查的操作规程，为微生物检查人员提供正确的标准操作方法。 2 范围 适用于原辅材料、内包装材料、半成品、成品的微生物限度检查。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 简述: 微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物 污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体健康或传播疾病。能引起皮炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。 4.2 器皿、仪器及用具。 4.2.1 玻璃器皿： 250ml锥形瓶、250ml具塞三角烧瓶、研钵（陶瓷制，直径10-12cm）、培养皿（90mm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml 分度0.1）、注射器(20或30ml)、注射针头、载玻片、盖玻片、 玻璃消毒缸（带盖）。 4.2.2 用具：大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%-75%乙 醇溶液浸泡）,无菌衣、帽、口罩、手套灭菌，备用, 显微镜、放大镜（5-10倍）、实体显微镜、解剖针（尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体）、发丝针（由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后粘上加拿大树胶或油漆，即得。适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体）、小毛笔（即绘图毛笔。适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在笔毛之间）、载玻片、盖玻片、酒精灯、培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）、扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）。 4.2.3 仪器：匀浆仪、培养箱、鼓风干燥箱、台式灭菌器、恒温水浴锅、超净工
临床微生物室标准操作程序
遂昌县中医院 临床微生物室 标准操作程序 SOP
临床微生物室标准操作程序（SOP）目录 1.标本采集与送检原则标准操作程序----------------------WSW-SOP-1 2.血液及骨髓标本的采集标准操作程序——————————WSW-SOP-2 3.呼吸道标本留取标准操作程序—————————————WSW-SOP-3 4.尿液标本留取标准操作程序——————————————WSW-SOP-4 5.脓及创伤感染标本留取标准操作程序——————————WSW-SOP-5 6.生殖道分泌物标本采集标准操作程序——————————WSW-SOP-6 7.粪便标本采集标准操作程序——————————————WSW-SOP-7 8.穿刺液标本留取标准操作程序--------------------------WSW-SOP-8 9.脑脊液、胆汁标本采集标准操作程序——————————WSW-SOP-9 10.组织标本的采集标准操作程序—————————————WSW-SOP-10 11.静脉道管标本采集标准操作程序————————————WSW-SOP-11 12.眼、耳及乳突分泌物标本采集标准操作程序———————WSW-SOP-12 13.样本接收、核对、接种、培养标准操作程序———————WSW-SOP-13 14.菌株的纯化、鉴定、药敏流程标准操作程序———————WSW-SOP-14 15.普通MicroScan板接种培养流程标准操作程序——————WSW-SOP-15 16.判读普通革兰阳性板标准操作程序----------------------WSW-SOP-16 17.判读普通革兰阴性板标准操作程序----------------------WSW-SOP-17 18.普通Microscan 板报告标准操作程序--------------------WSW-SOP-18 19.常见标本培养结果解释标准操作程序--------------------WSW-SOP-19 20.KB法药敏试验标准操作程序----------------------------WSW-SOP-20 21.超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测标准操作程序——————WSW-SOP-21 22.β-内酰胺酶检测标准操作程序-------------------------WSW-SOP-22 23.革兰染色标准操作程序————————————————WSW-SOP-23 24.抗酸染色标准操作程序————————————————WSW-SOP-24 25.解脲/人型支原体培养标准操作程序---------------------WSW-S O P-25 26.AccuStep衣原体抗原检测标准操作程序------------------WSW-SOP-26 27.ATB FUNGUS2真菌药敏标准操作程序--------------------WSW-SOP-27 28.培养基的制备标准操作程序-----------------------------WSW-SOP-28 29.触酶试验标准操作程序---------------------------------WSW-SOP-29 30.氧化酶试验标准操作程序-------------------------------WSW-SOP-30 31.芽管试验标准操作程序---------------------------------WSW-SOP-31 32.临床微生物实验室安全标准操作程序---------------------WSW-SOP-32
微生物实验室的管理规范某
& 修订记录 修订次数修订日期修订容 Prepared by/编制者：R eviewed by/审阅者：Authorized by/批准者： ALTECH ALTECH ALTECH Date/日期Date/日期Date/日期SCMC SCMC SCMC Date/日期Date/日期Date/日期
1.0目的 确保微生物室有一个良好的环境，以便准确完成常规微生物分析实验，以对生产环境、设备的清洗消毒和人员卫生进行有效的监控。 2.0围 适合微生物实验室人员，环境卫生，设备，试剂、培养基及常规操作的各项要求及管理 3.0职责 3.1微生物品控员负责具体工作的执行。
3.2QA主任负责监督本文件的有效执行。 4.0程序 4.1人员 4.1.1微生物操作人员需要有相关的工作经验，并且具备微生物操作的基本技能，如铺平板，菌落计数，无菌操作等 4.1.2应确保微生物操作人员接受足够的微生物操作专业的培训，以保证其能独立的进行操作，准确的完成测试，并保持好记录 4.2环境 4.2.1微生物操作室配置超净工作台 4.2.2微生物操作室的墙壁，地板，天花板光滑平整无缝隙，易于清洁消毒 4.2.3工作区域里有方便使用电源，抽滤系统，便于取用培养基和实验用品 4.2.4有适当的通风条件，在空调处安装空气过滤器，确保空气质量达到10.000级，平时关闭门窗，尽量减少空气对流引起的扬尘 4.2.5微生物操作辅助区域有足够的空间处理样品，存放培养基，玻璃器皿和小型仪器设备；有空间安装固定的仪器设备（如培养箱，冰箱）等。工作区域要有充足的灯光，光强不小于3001um。实验室应保持整洁 4.2.6在进行实验前必须打开无菌室和超净工作台紫外线消毒30分钟，并且让超净工作台进入工作状态。实验室完成后及时整理和清洗台面 4.2.7实验室必须考虑实验室外环境污染的可能性，并进行有效的监控，监控的方法如下： 1.每周做一次空气的微生物测试或视实验室使用状况相应地增加测试频率。测试 方法参见空气的微生物测试 2.每天用粒子记数仪测定微生物室空气的尘埃粒子数，应达到10,000级，超过 标准时则需更换过滤器 3.每半年更换紫外线灯管，以确保紫外灯的杀菌效果 4.3卫生 4.3.1配备实验室专用服装、鞋，实验室工作服避免在实验室以外区域穿着，要定期更换，清洗，杀菌 4.3.2实验室人员要注意个人卫生，应形成经常洗手的习惯，手指甲要剪短，实验前用70%酒精消毒双手 4.3.3不得在微生物测试区域吸烟，吃，喝食品，不得在微生物室做与微生物实验无关的事情和实验
检验科微生物室sop文件检验科微生物实验室
检验科微生物室sop文件检验科微生物实验室检验科微生物室SOP文件检验科微生物实验室 作业指导书细菌室工作守则文件编号:LAB,SOP,JX001 细菌室工作守则 1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净;如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗;如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品(如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等)必须远离火源，妥善保存。 10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。 11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。
12.爱护仪器设备，经常清洁，注意防尘和防潮。 作业指导书细菌室消毒隔离措施文件编号:LAB,SOP,JX002 细菌室消毒隔离措施 1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯(最少半小时)进行空气消毒。 2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。 4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡(至少24小时以上)后清洗或丢弃。 5.所有微生物培养物(细菌、支原体、真菌等培养物)，不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。 6.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。 7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。 8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液(如5%石炭酸、3%来苏儿等)消毒30分钟以上，然后再清洗。如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，必要时根据实际情况服用有关药物。作业指导书微生物实验室安全与防护文件编 号:LAB,SOP,JX003 在工作区内禁止饮食，吸烟和存放食物及使用化妆品。 实验室里应保持整洁，不存放与工作无关的杂物。 工作台每天至少用消毒剂清洁一次，在溢渗传染物后要立即消毒、清洗; 进入无菌室必须穿工作服，戴口罩、帽子。 在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。