微生物学实验复习提纲
微生物学实验复习提纲
1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术）
2.光学显微镜又称“复式显微镜”，由哪两部分组成？显微镜的什么最为关键？为什么？
答：由机械装置和光学系统组成物镜的性能最为关键，因为它直接影响着显微镜的分辨率
3.油镜的放大倍数为多少？与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头间滴加什么？其什么作用？
答：10*100 需要滴加镜油增加照明亮度和增加显微镜的分辨率
4.影响显微镜分辨率的因素有哪些？（光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率）
5.油镜使用后应怎样处理？镜油擦拭的正确方法是怎样的？
答：用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯
6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却.
7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适？5~8套。
8.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm 长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。
9.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。
10.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。
11.简单染色的原理是什么？其主要操作步骤是什么？固定的作用是什么？染色过程中应注意哪些环节？答：原理及步骤健实验课本71页。固定作用：使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上12. 革兰氏染的原理及步骤是什么？革兰氏染色后的正确结果是什么颜色？
答：原理见实验课本82页步骤：初染、媒染、脱色、复染结果颜色：阳性：菌体保持原有的蓝紫色阴性：洗脱后菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色
13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？
答：（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；
（2）脱色，此环节最关键。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
（3）菌龄也影响染色结果。如阳性菌培养时间过长或已死亡及部分菌自行溶解了，会出现阴性反应。
14.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？
答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色2、平板菌落计数法
15.霉菌的直接制片观察法常用什么染色剂？此染液的优点是什么？
答：乳酸石碳酸棉蓝染液优点：石碳酸可以杀死菌体及孢子并可以防腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。
16.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？
答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。
放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。
酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。
霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。
17.为什么霉菌菌落的中央与边远、正面与反面在外形、颜色、构造等方面常有明显的差别？放线菌、细菌和酵母菌呢？（理解）
18.测量微生物大小的工具是什么？包括哪两部分？功能各是什么？
答：显微测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺，目镜测微尺测量细胞大小，镜台测微尺校正目镜测微尺每格的相对长度
19.如何校正目镜测微尺刻度？计算公式？更换不同放大倍数的目镜活物镜时，是否需要重新校正？
答：校正方法、公式见实验课本49页，需要重新校正
20.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？
答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基
21.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？
答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固
22.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？
答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、试验比较
用磷酸缓冲液和碳酸钙做调节剂
23.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？
答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3
24.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？
答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞
25.摆斜面的正确方法是什么？
答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。26.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？
答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气
27.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？
答：
28.牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基、马丁氏培养基、马铃薯（PDA）培养基、麦芽汁培养基或豆芽汁培养基分别培养什么微生物？
答：分别培养细菌、放线菌、真菌、
29.什么是选择性培养基？试分析教材P98酵母菌富集培养基和Ashby无氮培养基的选择原理。答：在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长
30.什么是鉴别性培养基？试以EMB培养基为例，分析其鉴别作用的原理。
答：用于鉴别不同类型微生物的培养基，微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化
31.蛋白胨称取时应怎样？为什么？溶解可溶性淀粉的正确方法是什么？高氏Ⅰ号培养基中0.001%FeSO4 7H2O配制的正确方法是什么？
答：称取时动作要迅速，因为其很容易吸湿。称取可溶性淀粉放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊
状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。先在100ml水中加入1gFeSO4 7H2O，配成0.01g\ml，再在1000ml培养基中加1ml的0.01g\ml的贮备液即可。
32.配制合成培养基加微量元素时最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？
答：
33.马丁氏培养基中孟加拉红、链霉素的作用是什么？链霉素应如何加入？
答：它们能够有效地抑制细菌和放线菌的生长。链霉素先用无菌水配成1%的溶液，然后在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml，使每毫升培养基中含链霉素30ug.
34.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基）
答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。
35.什么是灭菌？消毒？列表比较高温灭菌或消毒的各大方法的温度、时间、适用对象？答：灭菌：采用强烈的理化因素使物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。如高温。
消毒：采用较温和的理化因素，杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施。如75%酒精。
36.干热灭菌原理是什么？为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？
答：原理见课本175页。由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。
37.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？
答：1 干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。2 电热干燥箱内温度未降到70°C以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。3 物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。
38.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（压力上升之前需将锅内冷空气排尽）
39.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？
答：1 灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀
2 否则就会因为锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至烫伤操作者。
40.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？
答：0.1MPa,121°C，15~30min
41.对血清、噬菌体浓缩液、氨基酸溶液、维生素溶液、抗生素溶液能否进行高压蒸汽灭菌？应采用何种方法除菌为宜？
答：不能，采用微孔滤膜过滤除菌法为宜。
42.紫外线灭菌的原理及适用对象是什么？
答：原理：紫外线波长在200nm~300nm具有杀菌作用，其中265~266nm杀菌力最强。此波长的紫外线易
被细胞中核酸吸收，造成细胞损伤而杀菌。
适用对象：无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。
43.过滤除菌法的适用对象是什么？缺点是什么？
答：只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌，缺点是虑量有限。
44.微生物的平板分离纯化技术是哪位科学家发明的？答：德国人科赫
45.微生物分离纯化常用的方法有哪些？
答：划线法、单细胞挑取法、稀释平板法、选择培养基法
46.如果要从自然界中筛选能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？写出简明的实验方案。答：见老师上课第八章老师说的关于放线菌的分离方案。
47.如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为该如何做？
答：在培养基中加入少量青霉素
48.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到45～50左右才能倾入到装有菌液的皿内？
答：如果高于50会将菌体烫死，低于45培养基会凝固，不能倒平板。
49.在恒温箱中培养微生物时为何培养皿均需倒置？答：①防止培养基水分蒸发②防止冷凝水的流动造成平板表面的“交叉感染”，影响单个菌落的形成③防止外物掉在培养基上。
50.请设计分离筛选下列微生物菌种的试验方案（提示：包括采样、稀释液制备、培养基名称、培养温度、培养时间、分离纯化方法等）
（1）土壤中链霉素产生菌的分离、纯化
（2）啤酒泥或酒曲发酵窖泥中酵母菌的分离、纯化
（3）甜酒药曲或酿酒种曲中霉菌的分离、纯化
51.常用菌种保藏方法有哪些？有何优缺点？
答：①斜面保藏法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代
②石蜡油封藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。
③沙土管保藏法：将菌种置于土壤、细纱干燥材料上保藏。适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。
④真空冷冻干燥法：加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。
适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法之一。
⑤液氮超低温保藏法：将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（-196℃）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法之一。
52.A TCC采用菌种保藏的方法是什么？
答：冷冻干燥保藏法和液氮保藏法
53.常用于测定微生物数量的方法有哪些？
答：1 个体计数法：直接法：血球计数板法、涂片染色法；间接法：平板菌落数法，薄膜过滤计数法，比浊法。2 重量法3 生理指标法
54.什么是显微直接计数法？工具是什么？此方法的优缺点？缺点怎样克服？
答：指用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。工具：血细胞计数板、显微镜优点：直观、快速、操作简单缺点：所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数克服方法：综合活菌染色、微室培养以及加细胞分裂抑制剂等只计数活菌体
55.利用血球计数板计数时，如何计数？计算公式？
答：以25个中方格的计数板为例，设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1ml菌液中的总菌数=(A\5)*25*104
56.简述测定化学消毒剂的杀（抑）菌作用的滤纸片法。
答：见实验课本94页
57.某公司推出一种新型饮料，并声称是100％的纯天然产品，不含防腐剂，利用你所掌握的微生物学知识，试设计一个简单实验来初步判断此饮料是否含防腐剂。
58.根据深层琼脂培养的特征来判断好氧菌、微好氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌、耐氧厌氧菌。P103
59.什么是IMViC试验？硫化氢试验？作用是什么？各试验的原理是什么？结果是什么？答：见实验课本117页
60.我国卫生部门规定的饮用水标准是什么？答：1mL自来水中的细菌总数不可超过100个（37℃，培养24h），而1000mL自来水中的大肠菌群数则不能超过3个（37℃，培养24h）。
61.水中细菌总数和大肠菌群值各反映了什么？
62.水中细菌总数的测定的方法是什么？自来水、湖水采集的正确方法是什么？
63.水中大肠菌群的检测方法---多管发酵法的基本原理？包括哪3个部分？阳性和阴性判断的依据是什么？德汉氏小管起什么作用？溴甲酚紫起什么作用？
64.EMB培养基的鉴别大肠菌群原理是什么？EMB培养基含哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？（乳糖是碳源起选择作用，大肠菌群能利用，而很多其他细菌不能利用；蛋白胨是氮源；NaCl是无机盐；伊红和美蓝作为指示剂）大肠菌群在EMB培养基上的典型菌落特征是什么？
答：61~64题见实验课本205页
65.包括肠杆菌科的埃希氏菌属（Escherichia）、肠杆菌属（Enterobacter）、柠檬酸细菌属（Citrobacter）和克雷伯氏属（Klebsiella）。
66.影响微生物生长的主要因素有营养物质、水的活度、温度、_pH__和氧等。
67.细菌、放线菌、酵母菌、霉菌培养的温度一般为多少？培养时间？
68.名词解释：无菌技术/操作、分辨率、菌落、菌苔、简单染色法、革兰氏染色法、培养基、鉴别培养基、选择培养基、消毒、灭菌、纯培养、石炭酸系数、大肠菌群
革兰氏染色法：丹麦医生Gram于1884年创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。基本步骤是：结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色、复染剂复染。染色结果为蓝紫色的细菌为G+，红色的细菌为G-。
无菌技术/操作：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。
纯培养：在实验室条件下由一个细胞繁殖而产生的后代。
微生物学实验试题
第十一章微生物学实验试题 一、选择题 111818.革兰氏染色的关键操作步骤是： A. 结晶紫染色 B. 碘液固定 C. 酒精脱色 D. 复染 答:( ) 111819.放线菌印片染色的关键操作是： A. 印片时不能移动 B. 染色 C. 染色后不能吸干 D. A和C 答:( ) 111820.高氏培养基用来培养： A. 细菌 B. 真菌 C. 放线菌 答:( ) 111821.肉汤培养基用来培养: A. 酵母菌 B. 霉菌 C. 细菌 答:( ) 111822.无氮培养基用来培养: A. 自生固氮菌。 B. 硅酸盐细菌 C. 根瘤菌 D. A、B 均可培养 E. A、B、C 均可培养 答:( ) 111823.在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加: A. 二甲苯 B. 水 C. 香柏油 答:( ) 111824.常用的消毒酒精浓度为: A. 75% B. 50% C. 90% 答:( ) 111825.用甲醛进行空气熏蒸消毒的用量是: A. 20ml/M3 B. 6ml/M3 C. 1ml/M3 答:( ) 111826.实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是: A. 121℃/30min B. 115℃/30min C. 130℃/30min 答:( ) 111827.巴氏消毒的工艺条件是:
A. 62-63℃/30min B. 71-72℃/15min C. A.B. 均可 答:( ) 111828.半固体培养基的主要用途是: A. 检查细菌的运动性 B. 检查细菌的好氧性 C. A.B. 两项 答：( ) 111829.半固体培养基的琼脂加入量通常是: A. 1% B. 0.5% C. 0.1% 答:( )。 111830.使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是: A. 排冷气彻底 B. 保温时间适当 C. 灭菌完后排气不能太快 D. A-C 答:( )。 111831.目镜头上的“K”字母表示: A. 广视野目镜 B. 惠更斯目镜 C. 补偿目镜 答:( ) 111832.目镜头上的“P”字母表示: A. 平场目镜 B. 广视野目镜 C. 平场补偿目镜 答:( ) 111833.物镜头上的“PL”字母表示: A.正低相差物镜 B.正高相差物镜 C.负高相差物镜 答: ( ) 111834.物镜头上的“UVFL”字母表示。 A. 无荧光物镜 B. 照相物镜 C. 相差物镜 答:( ) 111835.镜头上标有“TC”字母的镜头是: A. 相差调整望远镜 B. 摄影目镜 C. 相差目镜 答:( ) 111836.“PA”表示: A. 马铃薯培养基 B. 高氏培养基 C. 肉汤培养基 答: ( ) 111837.无菌室空气灭菌常用方法是: A. 甲醛熏蒸 B. 紫外灯照射 C. 喷石炭酸
微生物学实验知识点总结与实践应用
微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或
环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于
微生物实验心得
微生物实验心得体会 这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。 第一节课老师给我们介绍了我们本学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养皿中倒入培养液后没有摇匀导致培养基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至40到50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。 好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在PH值为7时生长最适，在温度为37℃时生长最佳，紫外线会抑制其生长。 不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。
微生物学复习题-答案总结
微生物复习题 一、单选题 1．关于共生相关概念下列哪一个是错误的C A、互利共生是指两种生物在一起生活，相互依赖，双方互利 B、共生是指两种生物在一起生活的现象 C、共栖是指两种生物在一起生活，双方互不侵害互不受益 D、共栖、互利共生和寄生是根据两种共生生物之间的利害关系来分的 E、寄生指一种生物生活在另一种生物的体内或体表，获取营养并使对方受害2．用来测量细菌大小的单位是C A.厘米(cm) B.毫米(mm) C.微米(μm) D.纳米(nm) E.微微米(pm) 3．有完整细胞核的微生物是B A、细菌 B、真菌 C、放线菌 D、衣原体 E、支原体 4．正常微生物（菌）群是E A、无侵袭力的细菌 B、不产生毒素的细菌 C、健康人的致病菌 D、健康带菌者所携带的细菌 E、在人体内长期存在的有益或无害的细菌5．机体受病原菌侵入后不出现或仅出现不明显临床症状的感染过程称为C A、带菌者 B、局部感染 C、隐性感染 D、显性感染 E、潜在性感染6．下列哪种消毒灭菌方式不合适E A、空气—紫外线 B、牛奶—巴氏消毒法 C、接种环—烧灼法 D、皮肤—碘酒 E、血清—高压蒸气灭菌法 7．肉眼直接观察细菌有无动力常选用C A、液体培养基 B、固体斜面培养基 C、半固体培养基 D、固体平板培养基 E、选择培养基 8．革兰氏染色的步骤是C A、结晶紫-酒精-碘液-复红 B、复红-碘液-酒精-结晶紫 C、结晶紫-碘液-酒精-复红 D、复红-酒精-碘液-结晶紫 E、结晶紫-复红-酒精-碘液 9．哪一项不是细菌质粒的特点E A、化学性质是环状双链DNA B、可在细菌间转移 C、非细菌所必需的遗传物质 D、能自主复制 E、是细菌的特殊构造 10．在细菌生长曲线中菌数增加最快的是：B A、迟缓期 B、对数期 C、稳定期 D、衰亡期 E、全部生长过程 11．溶原性细菌是指A A、带有前噬菌体的细菌 B、带有R质粒的细菌 C、带有毒性噬菌体的细菌 D、带有F质粒的细菌 E、带有Col质粒的细菌 12. 关于原核细胞型病原生物的基因转移，下列陈述哪项正确D A、转化与转导具有相同的转移途径 B、接合是质粒转移的非自然方式 C、转化与接合的不同在于后者依靠F+菌，前者依靠温和噬菌体 D、转化是真核生物与原核生物共同拥有的基因转移方式 E、溶原性转换是由溶原性噬菌体引起的转化现象 13．细菌的遗传物质不包括C
2012基础生物学实验考试--微生物学复习资料
一．名词解释 1．微生物的纯培养物：由一种微生物组成的细胞群体，通常是由一个单细胞生长、繁殖所形成。 2．菌落：单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态的子细胞生长群体。 3. 灭菌：是指物体中包括芽孢在内的所有微生物都被杀死或消除。 4. 消毒：杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的措施，消毒可起到防止感 染或传播的作用。 5.无菌技术：在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或 其自身污染环境的技术。 6. 鉴别培养基：在培养基中加入能与特定微生物的代谢产物发生特征性化学反 应的化学物质，用于鉴别不同类型微生物。 7. 选择培养基：根据不同微生物的营养需求或对某种化学物质敏感性不同，在 培养基中加入相应营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长， 将所需微生物从复杂的微生物群体中选择分离出来。 8. 基础培养基：含有一般微生物生长所需基本营养物质的培养基。 9. 合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称为化学限 定培养基。 10. 平板划线法：用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量 随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。保温培养后，在固体培养 基表面得到生长分离的微生物菌落。 11. 稀释倒平板法：将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培 养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的 微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。 12．平板菌落计数法：将适当稀释的样品涂布于琼脂培养基表面，培养后活细胞能形成菌落，通过计算菌落数能知道样品中的活菌数，该方法称为平 板计数或菌落计数。 二．填空题（每空1分，共20分） 1. 用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：、、。
微生物学经典复习题有答案
第一章绪论 一、填空题 1．世界上第一个看见并描述微生物的人是荷兰商人安东?列文虎克，他的最大贡献不在商界，而是利用自制的____显微镜___发现了微生物世界。 2．微生物学发展的奠基者是法国的巴斯德，他对微生物学的建立和发展作出卓越的贡献，主要集中体现__彻底否定了“自生说”学说___、__免疫学--预防接种__和__证实发酵是由微生物引起的___；而被称为细菌学奠基者是_德__国的_____柯赫____,他也对微生物学建立和发展作出卓越贡献，主要集中体现____建立了细菌纯培养技术___和__提出了柯赫法则____. 3．微生物学发展史可分为5期，其分别为史前期、初创期、___奠基期____、______发展期和成熟期；我国人民在史前期期曾有过重大贡献，其为制曲酿酒技术。 4．微生物学与___数___、___理____、___化___、信息科学和技术科学进一步交叉、渗透和融合，至今已分化出一系列基础性学科和应用性学科,如化学微生物学、分析微生物学、生物生物工程学、微生物化学分类学和微生物信息学等。 5．微生物的五大共性是指体积小，面积大、吸收多，转化快、生长旺，繁殖快、适应性强，易变异、分布广、种类多 . 二、问答题: 1．“微生物对人类的重要性，你怎么强调都不过分。”试用具体事例来说明这句话的深刻意义. （从四个方面具体的事例来说明人类与微生物的关系。) (1) 物质和能量循环（2）人体生理屏障（3）提供必需物质 (4)现代生物技术等方面。2．简述科赫原则.(如何判定某种微生物是病原菌?） 3．微生物有哪五大共性?其中最基本的是哪一个？为什么？ 4．什么是微生物，微生物学?学习微生物学的任务是什么? 5．简述微生物对生命科学基础理论研究有何重大贡献？ 答案要点：1）微生物是生命科学研究的理想材料; 2）利用酵母菌细胞制剂进行酒精发酵研究，不但阐明了生物体内糖的复杂转化过程，且为近代生物化学领域的酶学奠定了基础； 3)比德尔（Beadle）用脉胞菌进行突变试验，阐明了基因和酶的关系，提出了“一个基因 一个酶”的假说,开创了生化遗传学新学科； 4）遗传的物质基础是用微生物证实的； 5）遗传密码的被揭露、中心法则的确定、基因对酶的调节控制在分子生物学的基本原理都与微生物学有密切关系； 6）遗传工程的主角：①作为遗传工程中表达DNA所携带的遗传性状的载体,今天依然以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌等微生物为主,基因工程药物的生产几乎都是微生物；②在基因工程的操作中用于切割DNA取得所需基因的“手术刀”的限制性内切酶都来自微生物；③基因的载体是病毒、噬菌体、质粒；④动植物细胞培养和发酵技术； 7）微生物技术向微生物科学的整个领域扩散。 第二章微生物细胞的结构与功能 一、填空 1．微生物包括的主要类群有原核微生物、真核微生物和非细胞生物。 2．细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状。 3．根据分裂方式及排列情况,球菌分有单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、和葡萄球菌等，螺旋菌又有螺旋体菌、螺旋状__和__弧状__，及其它形态的菌有星形、方形、柄杆状和异常形态. 4．细菌的一般构造有____细胞壁____、___细胞膜____、___细胞质____和___核区___等,特殊构造又有鞭毛、菌毛(或性菌毛）、荚膜和____芽孢___等。 5．引起细菌形成异常形态的主要原因是受环境条件的影响,比如培养时间、____培养温度和培养基的组成和浓度等。 6．细菌的染色方法有①__简单染色法____、②___鉴别染色法____、③___负染色法___，其中②又可分为革兰氏染色法、抗酸性染色法、芽孢染色法和姬姆萨染色法。
微生物学实验复习提纲教案资料
微生物学实验复习提纲 1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术） 2.细菌培养基的配制过程？ 答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面 3.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却. 4.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm 长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。 5.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 6.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 7.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？ 答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色2、平板菌落计数法 8.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？ 答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。 放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。 酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。 霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。 9.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？ 答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基 10.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固 11.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？ 答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、试验比较 用磷酸缓冲液和碳酸钙做调节剂 12.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？ 答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3 13.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？ 答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞 14.摆斜面的正确方法是什么？ 答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 15.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为
微生物学实验指导
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --
-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板
微生物学实验报告--第八周
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃ 24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素 2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃ 16—18h
3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意 :设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读： ①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用
③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2.K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间 16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
微生物学实验
微生物学实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天 平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒 压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零 取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是 无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基 四、实验内容
医学微生物学考试试卷(附答案)
医学微生物学考试试卷（A） (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科) 班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖 C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定 E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛(半固体) 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生（都是阳性） B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: A.10倍 B.100倍 C.400倍 D.900～1000倍 E.10000倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色
微生物学复习资料整理汇总
一、解释下列名词 1．伴胞晶体：少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁边形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体——δ内毒素,称为伴胞晶体（59） 2．菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，成为菌落。 3．选择培养基：用来将某种或某种微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，一直不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。（91） 4．革兰氏阳性菌：在革兰氏染色法里，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞膜内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。革兰氏阳性菌由于其细胞壁厚度大和肽聚糖网层次多和交联致密，故遇乙醇或丙酮酸脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇处理不会溶出缝隙，因此能吧结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。（49）革兰氏阳性菌细胞壁特点是厚度大、化学组分简单，一般只含90%肽聚糖和10%磷壁酸，从而与层次多、厚度地、成分复杂的革兰氏阴性菌的细胞壁有明显的差别。革兰氏阴性菌因含有LPS外膜，故比革兰氏阳性菌更能抵抗毒物和抗生素对其毒害。（40） 5．LPS:脂多糖，位于革兰氏阴性菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖类物质，由类脂、可信多糖和O-特异侧脸三部分组成。（43） 6．营养缺陷型：某些菌株发生突变（自然突变或人工诱变）后，失去合成某种（或某些）对该菌株生长必不可少的物质（通常是生长因子如氨基酸、维生素）的能力，必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖，这种突变型菌株成为营养缺陷性（85）(218) 7．氨基酸异养型生物：不能合成某些必须的氨基酸，必须从外源提供这些氨基酸才能成长，动物和部分异养微生物为氨基酸异养型生物。如乳酸细菌需要谷氨酸、天门冬氨酸、半胱氨酸、组氨酸、亮氨酸和脯氨酸等外源氨基酸才能生长。（baidu) （氨基酸自养型：能以无机氮为唯一氮源，合成氨基酸，进而转化为蛋白质及其他含氮有机物。 8．芽孢：某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或团圆性、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体（55） 9．鉴别培养基：用于鉴别微生物。在培养基中加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种带些产物，而这种带些产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可讲该种微生物与其他微生物区分开来（91） 10．PHB：聚-B-羟丁酸，直径为0.2~0.7um的小颗粒，是存在于许多细菌细胞质内属于类脂兴致的碳源类贮藏无。不溶于水，可溶于氯仿，可用尼罗蓝或苏丹黑染色。具有贮藏能量、碳源和降低细胞内渗透压的作用。（53） 11．糖被：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的胶状物质。（60）
食品微生物学实验技术思考题答案
食品微生物学实验技术思考题答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比. 2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察 答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。 答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。 6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节 7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌 8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对
环境工程微生物学试题
《环境工程微生物学》课程综合复习资料 一、填空题 1、我国大耜提出的六界分类系统为：、、、、、。 2、病毒的分类依据有多种,按照核酸分类，病毒可分为、。 3、细菌的原生质体包括，和三大部分。 4、根据古菌的生活习性和生理特性，古菌可分为、、三大类型。 5、在《伯杰氏系统细菌学手册》中，将古菌分为五大类群：、、、、。 6、放线菌的革兰氏染色反应：除为外，其余均为。 7、在废水生物处理中起重要作用的三种原生动物包括，和。作为指示生物，指示处理效果差的是和。 8、真菌中的、和在有机废水和有机固体废物的生物处理中都起着积极作用。 9、从化学组成来看，酶可分为和两类。 10、、、、四种元素是所有生物体的有机元素。 11、微生物最好的碳源是，尤其是、，它们最易被微生物吸收和利用。 12、环境工程微生物学中,根据形态特点，细菌可分为四种形态,即、、、。 13、按培养基组成物的性质不同，可把培养基分为、、。 14、好氧活性污泥的组成中，微生物成分主要是。 15、菌种复壮法有、、三种。 16、污水生物处理法很多，根据微生物与氧的关系分为和两类。 17、原生动物可划分为四个纲，即、、和。 18、在污废水生物处理中，原生动物和微型后生动物的作用体现在：、和。 19、现在普遍接受的五界分类系统为：、、、、。 20、部分细菌有特殊结构：、、、、和。 21、20世纪70年代开始在水平上研究生物的研究生物的进化和系统发育。沃斯以的相关性，将一类有别于细菌的、在特殊环境的单独列出，与细菌和真核生物并列于系统发育树中。 22、细胞质膜的化学组成包括、、。 23、微生物学家根据rRNA序列的不同，将所有细胞生物分为三大域，即、、。 24、根据专性宿主分类，病毒可分为、、、、、。
微生物学实验复习汇总
微生物学实验复习汇总 1.细菌培养基的配制过程？ 答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2） 2.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 3.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 4、培养基的种类及用途： 5、培养基中的营养物质：
答：①、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色②、平板菌落计数法 8、实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固 9.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约。铜或铁锅成份会对培养基成份造成干扰。 10、培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？ 答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3。高度不适宜易造成搁置斜面时污染棉塞及瓶口。 11.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？ 答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞
12.摆斜面的正确方法是什么？ 答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 13.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？ 答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气。 14.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？ 答：很明显，培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。如果不立即灭菌，那么，就会长菌。 15.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基） 答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。 16.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？ 答：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。 17.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？ 答：1 干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。 2 电热干燥箱内温度未降到70°C以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 3 物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。 18.高压蒸汽灭菌的关键技术是什么？（使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100 kPa)、温度(121 ℃)和灭菌时间(20 min)。 19.高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？ 答：①灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀。②否则就会因为锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至烫伤操作者。 20.对含糖（如葡萄糖或乳糖等）培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用大多压力、多长时间灭菌为宜？
微生物学实验
实验一实验室和人体表面微生物的检查 一实验目的 1 证明实验室环境与体表存在微生物 2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 3 体会无菌操作的重要性 二实验原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。 三、器材 1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板 2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。 四、操作步骤 1、写标签 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。 注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。 2、实验室细菌检查 （1）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。 （2）实验台 ①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。 ②取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞，并将空试管放在试管架上。 ③弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。 ④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围。 ⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下），立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。