污染控制微生物

简答题和实验题

1.为什么细菌常用碱性染料染色

因为细细菌的等电点较低，pH值大约在（2—5）之间。原生质体带（负）电易与阳离（碱性染料）结合。

2 .革兰氏染色的过程与机理。如何鉴别G+细菌G-细菌

过程；先用碱性染料结晶紫进行初染，再用碘液进行媒染，然后用酒精脱色，最后以复染液（沙黄或番红）进行复染。凡是能够固定结晶紫与碘的复合物而不被酒精脱色者为革兰氏阳性菌。凡是能够被酒精脱色，经复染着色菌体呈红色称革兰氏阴性菌。

机理；G+细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网状结构紧密，脂类含量低，当被酒精脱色时，引起细胞壁肽聚糖网状结构孔径缩小甚至关闭，阻止了不溶性结晶紫染料复合物浸试，故菌体仍是深紫色。G-细菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂类含量较高。当被酒精脱色，脂类物易溶解。细胞壁通透性增加，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故菌体呈现复染液红色。

3.细胞壁的生理功能

1) 细胞壁具有保护作用，维持细胞外形，保持细胞的完整性；2) 细胞壁具有一定的韧性和弹性，保持原生体，避免渗透压对细胞产生破坏作用；3) 细胞壁为鞭毛提供支点，支撑鞭毛的运动；4) 细胞壁具有多孔性，具有一定的屏障作用，允许水及一些化学物质通过，但对大分子物质有阻拦作用；5)细胞壁的化学组成，使之具有一定的抗原性、致病性以及对噬菌体的敏感性；

4.细胞膜的生理功能

1。细胞膜上特殊的渗透酶及载体蛋白能够选择性转运可溶性小分子化合物及无机物化合物控制营养物质进出细胞；2。转运电子和磷酸化作用，即呼吸作用的场所3.排出水溶性胞外酶，将大分子化合物水解为简单化合物而摄入细胞内；4，生物合成

5.荚膜的功能

1.对细菌保护作用，使细菌免受外界干燥的影响，保护致病细菌免受吞噬细胞的吞噬，增强对外界不良环境的抵抗力；

2.增强细菌侵染力；

3.荚膜作为细胞外贮藏物，当营养缺乏时作为碳源和能源被利用；

4.许多细菌可以通过荚膜或粘液层相互连接形成体积和密度较大的菌胶团；5堆积代谢物.

6.在细菌的分类鉴定中，判断细菌是否水解明胶

用明胶代替琼脂，用穿刺法接种，若细菌含有明胶酶则能水解明胶，并形成一定形态的液化区

7.为什么细菌表面总带负电

当溶液PH值比细菌等电点高时，氨基酸氨基发生电离受抑制，羧基电离使细菌带负电。当溶液PH值比细菌等电点低时，氨基酸羧基电离受抑制，氨基电离，使细菌带正电。一般培养染色血清的实验中，细菌多处于偏碱性，中性，偏酸性都比细菌等电点高，所以细菌表面总是带负电。

8.解释自养铁细菌的谁中含有大量Fe（0H）3

铁细菌营腐生生活，是一种化能自养型微生物，铁细菌能将细胞内所吸收的亚铁氧化为高铁，从而获得能量，但反应产生的能量很小，铁细菌为满足对能量的需求，必然要生成大量的高铁如Fe(OH)3，这种不溶性的铁化合物排出菌体后就沉淀下来，当输水管线中含有大量的Fe(OH)3时，就会降低输水管的输水能力。

10.藻类在给排水作用

①常使自来水产生异味或颜色或造成滤池堵塞②当水体富营养化时，使水体产生水华和赤潮，改变水的PH值使水带有臭味，并使含有剧毒③利用藻类进行废水处理，典型的是氧化塘处理系统，利用菌藻互生原理进行废水处理④藻类在水体复杂的自净过程中起重要作用，在污染的生物监测中指示生物可以反映污染程度

11.为什么池塘白天溶解氧高而晚上溶解氧低

因为在白天有充足的光照，池塘中的藻类能利用CO2合成细胞物质，同时放出氧气。而夜间无阳光时，藻类只能通过呼吸作用取得能量，吸收氧气同时放出CO2,所以在藻类很多的池塘DO很高，夜间急剧下降

12.病毒的基本特征

①无细胞结构，只有一种核酸，DNA或RNA②没有自身的酶合成机制，不具备独立代谢的酶系统，菌专性寄生③个体微小，能通过细菌过滤器，电子显微镜才能观察到④对抗生素不敏感，对干扰素才敏感⑤在活细胞外具有一般化学大分子特征，进入寄主后又具有生命特征

13.病毒的增殖过程

病毒的增殖过程包括吸附，侵入脱壳，生物合成，装配与释放。病毒吸附到菌体表面，将核酸注入到细胞内而外壳留在了细胞外。病毒的生物合成包括核酸的复制和蛋白质的合成。当病毒侵入到寄主细胞后，细胞的合成不再由细胞本身支配，而受病毒的遗传信息所决定，利用细胞的合成机构和机制，复制出病毒核酸，并合成了大量病毒蛋白质。新合成的核酸和蛋白质誊配出成熟的病毒颗粒并释放出有侵染力的病毒粒子。

14.水在有机体中的生理作用

1.水是微生物细胞的中药组成部分2机体内一系列生理生化反应都需要通过水来完成3.营养物质的吸收与代谢产物的分泌都是通过水来完成4.水的结潮高又是热的良好导体，因而有效吸收代谢过程中产生的热量，并将吸收的热量迅速的散发出去，避免细胞内的温度陡然升高，有效地控制细胞内温度

15.矿质元素的作用

1构成磁暴的组成成分2作为酶的组成部分维持酶的活性3调节细胞内的渗透压PH 值氧化还原电位4作为某些微生物的能源物质

16.新陈代谢的特点

1 是生物化学反应的一系列过程，反应步骤很多，但顺序性很强。有条不紊，环环相扣。2在混合的条件下，由多酶体系催化而成3.有灵活的自动调节能力

18.酶能够降低化学反应活化能阈的原因

酶催化某一反应时首先酶与底物形成中间产物（不稳定）称中间络合物，中间产物再分解成产物并释放原来酶。由于中间产物的形成课降低活化能阈，所以只需较低活化能，反应就能继续

19.底物浓度对酶促反应速度的影响

1在低的底物浓度时，底物浓度增加，反应速率也随之增加，并形成正比关系2较高时，增加底物浓度，速度增加不明显，并且不是正比关系。当底物浓度达到一定程度时，增加底物浓度，反应速度趋于稳定，并且不再受底物的浓度影响，此时底物的浓度为饱和浓度。

20.当底物浓度等于或大于饱和浓度后反应速率不再增加的原因

由于此时的酶的活化性中心全部被底物占据，酶分子发挥到最大能力

28.脂类物质代谢过程

不论在有氧还是在无氧的条件下，脂类在脂酶的作用下水解成甘油和脂肪酸进而分别生成丙酮酸和乙酰CoA，脂肪酸生成乙酰CoA是通过β-氧化完成.在有氧的条件下丙酮酸和乙酰CoA可进入三羧酸循环生成H2O和CO2.在无氧的条件。甘油分解生成的丙酮酸经发酵生成乙酸，乙醇和甲酸，脂肪酸经β-氧化生成乙酰CoA可转化为乙酸。这些产物可能在产甲烷菌的作用下生成甲烷和二氧化碳。

29.蛋白质的分解过程

蛋白质必须水解生成氨基酸进入细胞内，无论是在有氧还是无氧的条件下，氨基酸都可以通过脱氮作用分解成氨态氮。氨态氮可在有氧的条件下通过硝化作用被氧化成硝酸和亚硝酸。在缺氧条件硝酸盐可被硝酸盐还原菌还原成亚硝酸盐和氮气。

30.反硝化在废水处理中的作用（1对二沉池的影响2用以生物脱N）

在活性污泥中，如果废水中含氮有机物在好氧微生物作用下生成NO2-和NO3-,则含有大量NO2-和NO3-的处理后水由曝气池进入一沉池。若二次沉淀池缺氧且污泥在沉淀池停留时间较长或形成死泥区，则在反硝化细菌作用下可将NO2-和NO3-转化为氨气，产生的大量氨气附着在污泥上。气体上升使污泥杂质浮起影响水质。

31.代谢调节的生理意义

1代谢调节能够使复杂的代谢活动得到协调，能够使微生物及时获得代谢产物和停止生产过量的代谢产物2代谢是微生物与环境进行和能量的交换，外界环境不断发生变化，生物体也必须随之变化，这就要求对代谢进行调节

32酶合成诱导的机理（以乳糖为例）、

当乳糖不存在时，调节基因产生阻遏蛋白可与操纵基因结合从而组织了启动基因发出指令合成mRA，也就阻止合成利用乳糖的酶：当乳糖存在时，乳糖作为诱导物可与阻遏蛋白结合，并改变阻遏蛋白与操纵基因结合的构象，从而使阻遏蛋白不能与操纵因子结合启动因子发出合成mRA指令。并指导合成利用乳糖的酶。

33.酶合成阻遏的机理（组氨酸）

当组氨酸浓度过高时，在体系中它与tRNA首先生成his-tRNA复合体，称为辅阻遏物。

这种辅阻遏物与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白活化，迅速与操纵基因结合，从而阻止了启动基因发出指令合成mRNA，使组氨酸合成酶系不能被合成。一旦组氨酸浓度降低，辅阻遏物脱离阻遏蛋白，阻遏蛋白又失去活性，不能与操纵基因结合，组氨酸合成酶系又被合成出来。

34.为什么会出现二次生长曲线

细菌利用乳糖时必须通过β-半乳糖苷酶等将乳糖分解为简单的葡萄糖和β-半乳糖。

β-半乳糖苷酶是一种诱导酶，受乳糖操纵因子控制，分解葡萄糖的酶系统均为固有酶。当葡萄糖存在时，葡萄糖的代谢产物对由ATP生成cAMP所需的腺环化酶产生抑制作用，而对cAMP生成AMP所需的磷酸二酯酶起激活作用，导致细胞内cAMP水平很低。

即使此时存在乳糖操纵子的诱导物，但由于cAMP缺乏，因而足额了β-半乳糖苷酶等的合成，这时，大肠杆菌只能以葡萄糖作为唯一的碳源和能源，并进行生长繁殖。一旦葡萄糖被耗尽培养液中只有乳糖作为碳源和能源，此时，由于cAMP数量增加，乳糖操纵子启动，合成分解乳糖所需的酶，大肠杆菌将以乳糖作为底物，生物合成重新开始。

35.简述细菌纯培养的生长曲线

吸金的生长曲线包括迟缓期，对数期，稳定期，衰亡期。①当菌钟进入迟缓期后，细菌并不马上分裂，而是合成各种酶，并完善体内的酶系统和细胞的其他成分。此时，细胞的代谢活力很强，蛋白质和RNA含量增加，体积增大。在迟缓期末和对数期初期的细胞对热，化学物质等不良条件的抵抗力减弱。②对数期细菌的生长速度达到高潮，世代时间最短，细胞的代谢活性比较稳定，酶的代谢活性比较稳定，酶的活力也高，此时的细胞可作为研究工作的理想材料。③稳定期由于营养物质不断被消耗，有毒性的代谢产物不断积累，致使细菌分裂的速率降低，易形成菌胶团。④衰亡期环境边个更不适于微生物生长，细胞活力继续衰退，死亡率大于繁殖率。

37.叙述活性污泥的生长曲线

①对数生长起，微生物处在营养物质过剩的环境中，微生物以最大速率氧化分解废水中的有机物，并合成新的细胞物质，微生物迅速增长。由于微生物具有很高的能量水平，因而不能形成良好的活性污泥絮凝体②减速生长期；由于减速生长期营养物质减少，微生物活动能力降低，菌胶团细菌之间易于相互粘附，活性污泥絮体开始形成。减速生长末期活性污泥不但具有一定的氧化有机物的能力，而且还具有良好的沉降性能。③内源呼吸期；

营养物质耗尽，所以活性污泥微生物靠内源呼吸维持生命活动。由于能量水平过低，絮凝体形成速率增加，吸附有机物的能力显著，但污泥活性降低。

38.在废水生物处理过程中，为什么将活性污泥控制在减速生长末期和内源呼吸初期

①如果维持微生物在对数生长期，微生物繁殖速度快，活力强，处理废水能力强，但由于不易絮凝和沉降，并且微生物处于对数期，则需要充足的营养物质，这就使废水中有机物浓度要求很高，则处理过的废水中所含有机物浓度也很高，难以达到排放标准②若将微生物维持在内源呼吸末期，此时处理过的废水中所含有机物浓度相对来说固然很低，但由于微生物氧化分解有机物能力很差，所需反应时间很长，所以为获得较强的和吸附有机物的能力，又有沉降性能的活性污泥，应将活性污泥控制在减速生长末期和内源呼吸初期。

39.为什么湿热灭菌比干热灭菌效力高

①菌体在有水的情况下，蛋白质容易凝固。含水率越高，蛋白质凝固所需温度越低。

②热蒸汽的穿透力大可使被灭菌的物品内部温度迅速上升③湿热的蒸气含有潜能，与被灭菌的物体接触时凝成水，放出潜能，能迅速提高被灭菌物体的温度。

40.为什么冷冻保存菌种时必须将菌体温度迅速降低到冰点下

如果温度逐渐下降，就可以造成菌体死亡。因为温度逐渐低于冰点以时，细胞内的水分转变成冰的结晶，引起细胞脱水，并且冰的结晶可以对细胞结构特别是细胞膜产生物理损伤。若采取快速冷冻，则细胞内形成的冰晶体积小，对细胞的损害也小。

41.PH值对微生物生命活动的影响

①引起细胞膜电荷的变化，从而影响了微生物对营养物质的吸收；②影响代谢过程中酶的活性；③改变生长环境中营养物质的可给性以及有害物质的毒性。

42.兼性塘和好氧塘中PH的变化

在兼性塘和好氧塘中常因CO2含量改变引起昼夜的PH值改变。水生植物的光合作用在白昼强烈，由于CO2消耗使PH值升高；而在夜间光合作用停止，微生物及藻类进行呼吸作用产生大量CO2使PH值降低。

43.简述碳素循环

绿色植物和微生物通过光合作用，固定自然界中的CO2，合成有机碳化物，进而转化成各种有机物；植物和微生物通过呼吸作用获得能量，同时放出CO2。动物以植物和微生物为食，并且呼吸作用中释放出CO2。当动物、植物和微生物等有机碳被微生物分解时，产生大量CO2，完成整个碳循环。

44.简述氮素循环

①空气中的分子氮被自由生活的微生物固定成NH3并转化为有机氮化物或被微生物与植物联合作用转化为供植物直接利用的形式。②植物及微生物体内氮化物为动物食用，转化为动物蛋白。③当植物和微生物尸体及排泄物等有机氮化物（以蛋白质为主）被生物分解后，以氨的星期释放出来，供植物利用或被氧化成硝酸盐被植物吸收或被进一步还原为气态氮返回自然界完成真个循环。

整个过程包括固氮作用、氨化作用、硝化作用、反硝化作用。

45.简述硫素循环

①自然界中的六合硫化物，经微生物氧化成SO42-;② SO42-被植物和微生物同化还原成有机硫化物，组成细胞质；动物食用植物和微生物，将其转变成动物体的有机硫化物；③当动、植物和微生物尸体中的有机硫化物被微生物分解时，H2S和S的形态返回自然界，完成硫循环过程。

46.简述磷素循环

①有机磷转化成溶解性无机磷（有机磷矿化）②不溶性无机磷变成溶解性无机磷（磷的有效化）③溶解性无机磷变成有机磷（磷的同化）。

47.为什么选用大肠杆菌群作为检验水的卫生指标的菌群

①大肠杆菌生理习性与肠道病原菌类似，而且它们在外界的生存时间基本一致；②大肠杆菌在粪便中的数量较多；③检验技术比较简单。

48.如何用发酵法来对大肠杆菌群的测定

①初步发酵试验。本实验是将水样置于糖类液体培养基中，在一定温度下，经一定时间培养后，观察有无酸和气体产生，即有无发酵而初步确定大肠菌群的存在。②平板分离。这一阶段的检验主要是根据大肠杆菌群在特殊固体培养基上形成典型菌落，革兰氏染色阴性和不生芽孢的特性来进行的。在此阶段，可先将上一试验产酸产气的菌种移植于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基表面。这一步骤可阻止厌氧芽孢杆菌的生长，培养基所含染料物质也有抑制许多其他细菌生长繁殖的作用。经过培养，如果出现典型的大肠杆菌菌落，则可以认为有此类细菌存在。为了进一步确定，应进行革兰氏染色检验，可将大肠杆菌群与呈革兰氏阳性的好氧芽孢杆菌区别开来。③复发酵试验。将可疑菌落再移植到糖类培养基中，观察它是否产酸产气，最后确定有无大肠菌群存在。

49.如何用滤膜发来对大肠菌群的测定

①将滤膜装在过滤器上。用抽滤法过滤定量水样，将细菌截留在滤膜表面。②将此滤膜没有细菌的一面贴在品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝固体培养基上，以培育和获得单个菌落。根据典型菌落特征即可测得大肠菌群数。③为了进一步确证，可将滤膜上符合大肠菌群特征的菌落进行革兰氏染色，然后镜检。④将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌的菌落接种到含糖培养基中，根据产气与否来判断有无大肠菌群存在。

50.如何用噬菌体感染实验来证明DNA是遗传物质

由于在蛋白质分子中只含有硫而不含磷，而DNA分子中则只含有磷而不含硫，故可用35S和32P去分别标记T

噬菌体，然后用它去感染其寄主大肠杆菌。经短时间保温接触后,T2

2

完成了吸附和侵入过程。然后把它们放在组织捣碎器中强烈搅拌，以使吸附在菌体外的T2蛋白质外壳均匀散布在培养液中，然后离心沉淀，使大肠菌沉淀，再分别测定沉淀物和上清液中的同位素标记。结果发现，几乎全部的32P都和大肠杆菌一起出现在沉淀物中，而几乎全部35S都留在上清液中。这就有力的说明亲代蛋白质外壳的确没有进入菌体并参与子代噬菌体的增殖。可是，最终从大肠杆菌中释放出来的确是一群完整的成熟的噬菌体颗粒。由此可见，决定遗传性的物质不是蛋白质，而是核酸-----DNA或RNA。

51.简述DNA的复制过程

DNA的复制过程首先是DNA的双链从一端打开，分离成两条单链，然后以每条单链为模板，通过碱基配对逐渐建立起完全互补的一套核苷酸单位，新连接上的多核苷酸链与原有的多核苷酸链重新形成新的双螺旋DNA。

52.原生质体融合的优点

①克服种属间杂交的“不育性”，可以进行远缘杂交。由于用酶解除去细胞壁，因此，即使相同接合型的真菌或不同种属间的微生物，皆可发生原生质体融合，产生重组子。②基因重组频率高，重组类型多。原生质体融合时，由于聚乙二醇(PEG)起促融合的作用，使细胞相互聚集，可以提高基因重组率。原生质体融合后，两个亲株的整套基因组(包括细胞核、细胞质)相互接触，发生多位点的交换，从而产生各种各样的基因组合，获得多种类型的重组子。③可将由其他育种方法获得的优良性状，经原生质体融合而组合到一个菌株中。④存在着两个以上亲株同时参与融合，可形成多种性状的融合子。

53.原生质体融合的步骤

①选择亲本。选择两个具有育种价值并带有选择性遗传标记的菌株作为亲本。②制备原生质体。经溶菌酶除去细胞壁，释放出原生质体，并置高渗液中维持其稳定。③。促融合。聚乙二醇加入到原生质体以促进融合。聚乙二醇为一种表面活性剂，能强制性的促进

原生质体融合。在有Ca2+ 、Mg2+离子存在时，更能促进融合。④原生质体再生。原生质体已失去细胞壁，虽有生物活性，但在普通培养基上不生长，必须涂布在再生培养基上，使之再生。⑤检出融合子。利用选择培养基上的遗传标记，确定是否为融合子。⑥融合子筛选。产生的融合子中可能有杂合双倍体和单倍重组体不同的类型，前者性能不稳定，要选出性能稳定的单倍重组体，反复筛选出生产性能良好的融合子。

54，诱变育种的步骤

诱变育种：就是利用物理、化学等因素，诱发基因突变，并从中筛选出具有某一优良性状的突变体，一般包括以下主要步骤：①出发菌株的选择；②诱变剂的选择；③诱变剂量的选择；④突变体的筛选。

55.基因工程的基本操作步骤

①目的基因获取②载体的选择③目的基因与载体DNA的体外重组④重组DNA分子进入受体细胞⑤筛选优秀菌种⑥将目的基因克隆到表达载体上。

56.载体因具备的条件

①载体是一个有自我复制能力的复制子②载体能在受体细胞内大量增殖，即有较高的复制率③载体上最好只有一个限制性内切酶的切口，使目的基因能固定地整合到载体DNA的一定位置上④载体上必须有一种选择性遗传标志，以便及时把少量“工程菌”或“工程细胞”选择出来。

57废水生物处理的作用原理及其作用

通过微生物酶的作用，将废水中的污染物氧化分解。在好氧条件下污染物最终被分解成CO2、H2S、N2、H2和H2O以及有机酸和醇等。

①絮凝作用。废水进入生物反应池后，废水中的产荚膜细菌可分泌出粘液物质，并相互粘连形成菌胶团。菌胶团又粘连在一起，絮凝成活性污泥或粘附在载体上形成生物膜。

②吸附作用。细菌表面一般带有负电荷，而水中有机物颗粒常带正电荷，所以它们之间有很大的吸引作用。

③氧化作用。被活性污泥和生物膜吸附的大分子有机质，在微生物胞外酶的作用下，水解为可溶性的有机小分子物质，然后透过细胞膜进入微生物细胞内。这些被吸收到细胞内的物质，作为微生物的营养物质，经过一系列生化反应途径，被氧化为无机物CO2和H2O等，并释放能量；与此同时，微生物利用氧化过程中产生的一些中间产物和呼吸作用释放的能量，合成细胞物质。

④沉淀作用。活性污泥，特别是生物膜具有良好的沉降性能，使泥水分离，澄清水排走，污泥沉降至池底，这是废水生化处理必须经过的步骤，也是非常重要的步骤。

58 好氧和厌氧处理这题看不清啊啊啊啊啊(╯‵□′)╯︵┻━┻

59生物滤池的工作原理

废水通过布水器均匀地分布在滤池表面，沿滤料空隙自上而下流动。在供氧充足的条件下，好氧微生物在滤料表面迅速繁殖，这些微生物又进一步吸附废水中呈悬浮、胶体和溶解状态的有机物质，并随着有机物被分解的同时，微生物也不断增长和繁殖，使生物膜厚度不断增加。当生物膜上的微生物老化或死亡，滤池中由于某些蝇类的幼虫活动以及在水流的冲刷下，生物膜将从滤料表面上脱落下来，然后随废水流出池外。

60叙述水体自净形成的四个连续污染带

①多污带亦称多污水域，此带多处在废水排放口，水质浑浊，多呈暗灰色，COD、BOD5浓度很高，DO趋于零，有强烈的H2S气味，其细菌数量大，种类多。②α－中污带（有机污染较为严重，溶解氧略有回升，多为耐污性生物种类，）③β－中污带（中等程度的有机污染区域，溶解氧较高，有多种藻类和原生动物，有鱼类出现）；④寡污带：溶解氧恢复正常或达饱和，水质透明，细菌数量少，藻类种类和数量多。

61厌氧生物处理的处理机理

厌氧处理废水是在无氧条件下进行的，是由厌氧微生物作用的结果。厌氧微生物在活动中不需要氧，有氧还会抑制或杀死这些微生物。这类微生物分为两大类群，即发酵细菌和产甲烷菌。废水中的有机物在这些微生物的联合作用下，通过酸性发酵阶段和产甲烷阶段，最终被转化成CH4、CO2等气体，同时使废水得到净化。

酸性发酵阶段是微生物在分解有机物过程中产生大量的有机酸，主要是挥发性脂肪酸和醇，使发酵环境中PH值下降，呈酸性。产甲烷阶段是微生物在这一阶段中，分解第一阶段产生的有机酸和醇，通过无氧呼吸产生CH4、CO2、H2S等，使发酵环境中PH值上升。

62原生动物在废水处理中的作用

①促进菌胶团絮凝作用②吞噬游离细菌和微小颗粒③分解代谢废水中的有机物④作为指示生物

63为什么产甲烷菌生长缓慢

能够利用的底物很少，仅有CO2、H2、乙酸、甲酸、甲醇和甲胺这些简单物质。这些物质转化为CH4所释放的能量很少，因而为生物合成所提供的能量亦少，使生物的生长繁殖速率很低，世代时间很长。

64如何分离产甲烷菌

①在完全无氧的条件下制备培养基，可消除培养基中的溶解氧②往培养基里加还原剂---树脂天青。既是还原剂又是指示剂，可把培养基里残留的溶解氧去除。在有氧条件下呈紫色或粉红色，无氧时呈无色③在无氧条件下分装试管。可用CO2、N2、H2来驱除空气。④滚管采用无菌注射器接种后，让试管滚动，目的是让培养基凝固在试管壁上，增加产甲烷细菌的生长面积，使甲烷细菌能够充分与氢气和二氧化碳接触。

65阐述非甲烷细菌和甲烷细菌的相互关系

①非产甲烷细菌为产甲烷细菌提供生长繁殖的底物②非产甲烷细菌为产甲烷细菌创造了适宜的氧化还原电位③非产甲烷细菌为产甲烷细菌清除了有毒物质④产甲烷细菌为非产甲烷细菌的生化反应解除了反馈抑制⑤非产甲烷细菌和产甲烷细菌共同维持环境中的适宜pH值

66比较废水中厌氧生物处理与好氧生物处理

与好氧生物处理法相比，厌氧处理有以下优点①厌氧生物处理废水可直接处理高浓度的有机废水、耗能低、运行费用少，②污泥产率低。好氧生物处理废水微生物繁殖速度快，剩余污泥生成率高，而厌氧法处理废水时，厌氧菌世代时间长，剩余污泥很低③需要附加的营养物少④厌氧法处理废水可回收沼气

67如何测定藻类生产潜在能力（AGP）

是以利比希最低定律为基础的一种测定方法，用以测定藻类生产的潜在能力。该法是在废水、自然水或处理后排出水的水样接种特定藻类，一般接种蓝细菌、绿藻和硅藻，然后置于一定的照度和温度条件下培养，使藻类生长达到稳定期。最后用测定藻类细胞数或干重的方法来决定藻类在某种水体的增殖量。

68厌氧生物处理的原理

69以活性污泥法为例，叙述废水生物处理的基本原理

70革兰氏染色操作步骤

1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。

2 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3 固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），

放置待冷后，进行染色。

4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。

5 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6 媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。

7 水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

8 脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。