真菌毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法

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来源：《食品安全导刊》2017年第08期

一种真菌可以产生多种不同的真菌毒素，不同的真菌亦可产生相同的真菌毒素。目前已知能产生真菌毒素的真菌有150余种，产生的真菌毒素约有300种，其中包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮以及其衍生物类毒素、A型单端孢霉烯族、B型单端孢霉烯族等。一般真菌的生长和繁殖都需要一定的温、湿度条件，最适宜生长温度一般为20～30℃。当真菌处

于干燥、低温或与其他真菌竞争的应激情况时，就会产生霉菌毒素，由于真菌生长有一定的地域性，因此，不同区域占优势的真菌毒素种类也不同。

真菌毒素的分类

主要的真菌毒素有以下几种：

DON（呕吐毒素）

DON主要以玉米污染最为严重，其次为小麦麸，小麦及菜棉籽粕中的检出率显著低于前者。抽样检测中配合饲料检出率100%，仔猪配合饲料超标率46%，肉大鸡配合饲料未见超标，并且禽类对DON耐受性较强，而猪较敏感，仔猪尤为如此。

AFT（黄曲霉毒素）

蛋白原料易受到霉菌的感染，如花生、大豆、棉籽粕、苜蓿草等。花生极易感染黄曲霉菌，因此在使用花生麸时应严格检测其中黄曲霉毒素的含量。另外，玉米中也较易感染黄曲霉毒素。

在全国内抽样的1000份饲料中，黄曲霉毒素B1含量由高到低依次为棉粕、家禽配合饲料、菜粕、玉米、仔猪配合饲料、麦麸、豆粕、鱼粉和小麦。我国饲料普遍受到黄曲霉毒素

B1的污染，其含量在不同区域和饲料种类间存在差异。

ZEN（玉米赤霉烯酮）

玉米赤霉烯酮对畜禽的毒副作用主要表现为雌性激素亢进，能引起猪和牛的不孕或流产。猪对霉菌毒素敏感，特别是哺乳或哺乳仔猪。在所有家畜中，猪对ZEN最为敏感，饲料中含有1mg/kg以上的ZEN就足以引起猪的雌激素中毒症，玉米赤霉烯酮主要污染玉米，也可污染小麦、大麦、燕麦和小米等。

中国药典2010年版《细菌内毒素检查法》

中国药典2010年版《细菌内毒素检查法》 ——凝胶法凝胶法凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。鲎试剂灵敏度复核试验在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃恒温器中，保温60分钟±2分钟。将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc). λc=1g-1(∑X/4)

式中 X为反应终点浓度的对数值（1g）。反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。当λc在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。干扰试验按表1制备溶液A、B、C和D，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C 的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。按下式计算系列溶液C和B的反应终点浓度的几何平均值（Es和Et）。 Es= 1g-1(∑Xs/4) Et= 1g-1(∑Xt/4) 式中，Xs、Xt分别为系列溶液C和溶液B的反应终点浓度的对数值（1g）。当Es在0.5λ—2λ(包括0.5λ和2λ)及Et在0.5Es—2Es (包括0.5Es 和2Es)时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD 的稀释倍数下对试验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。表1 凝胶法干扰试验溶液的制备

细菌内毒素检查

细菌内毒素检查 1、实验原理 2、实验试剂 3、试验器具 4、检查方法概述 5、供试品溶液的制备 6、内毒素限值的确定 7、最大有效稀释倍数（MVD）的确定 8、鲎试剂灵敏度复核 9、干扰试验 10、供试品的细菌内毒素检查 1、实验原理：利用鲎试剂与微量内毒素产生凝聚反应的现象，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 2、实验试剂： ①鲎试剂：从海洋无脊椎动物“鲎”的蓝色血液中提取的变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥精制的生物制剂。鲎试剂的生物活性以其能检出细菌内毒素的最低有效浓度表示，即鲎试剂的灵敏度，单位为EU/ml。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 ②细菌内毒素国家标准品：系自大肠埃希菌提取精制得到的内毒素，用于标定细菌内毒素工作标准品和标定，仲裁鲎试剂灵敏度。 ③细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 ④细菌内毒素检查用水：指内毒素含量少于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005 EU/ml （用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。 3、实验器具：刻度吸管、凝聚管（10×75mm）、三角瓶、小试管（10×100mm）、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管帽、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀砂轮。耐热器皿常用干热灭菌法（250℃，30分钟以上）去除，塑料用具应选用无内毒素并且对试验无干扰的器械（目前多为无热源的一次性用品）。 4、检验方法概述 ①凝胶法：限量法、半限量法 ②光度测定法：浊度法（终点浊度法和动态浊度法）、显色基质法（终点浊度法和动态浊度法）凝胶法：最简单、经济、应用广泛、中国药典的“仲裁”方法，对干扰相对不敏感，较光度测定法不灵敏。 5、供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸取制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节PH值。 6、内毒素限值的确定一般按公式：L≡K／M 式中： L为供试品的细菌内毒素限量，以EU／ml，EU／mg、或EU／U（活性单位）表示。

真菌的常规检验法

真菌的常规检验法实验室检查： ?标本采集分离培养 ?直接镜检生化反应 ?染色镜检免疫学试验一、临床标本的采集 ?1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。 2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。 ?3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4．脓汁及渗出物。二、检验方法（一）标本直接检查法

不染色标本检查染色标本检查（二）培养检查（三）鉴定 ①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等） ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。微生物学检查步骤：取患部标本

（毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化 →镜检（观察菌丝和孢子）直接镜检的意义 ①有诊断意义，如浅部真菌病等； ②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种, 如假丝酵母菌的厚膜孢子等； ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。直接镜检的局限性： ①阴性结果不能排除真菌感染； ②有假阳性结果。因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。 2. 染色标本检查 ?（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。 ?（2）乳酸酚棉蓝染色

?（3）糖原染色： ?又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。为真菌染色最常用的方法之一。 ?（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色 ?（5）粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ?（6）荧光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。（二）培养检查法 ?本法可确定菌种，辅助直接检查的不足。 ①菌落性质：酵母菌还是霉菌； ②菌落大小：致病性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大； ③菌落颜色：病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；

真菌毒素分析

真菌毒素分析一般固体食品多选用浸渍、洗脱、索氏回流方法等，将样品和提取液混合后搅拌30～40min，或快速搅拌3min；液体食品则多选用液液分配的方法。从动物组织中提取真菌毒素时，为了降低动物蛋白质对实验结果的干扰，同时为使与某些蛋白质结合的毒素(如赭曲霉毒素A，ochratoxin A，OTA)有效释放出来，在提取溶剂系统中可适当加入一些蛋白水解酶以提高回收率。必须对样品提取液进行分离纯化，在确保不损失待测毒素的前提下除去干扰杂质，以保证测定结果的准确度。通常是将提取的有机溶剂经石油醚或正己烷处理，以除去脂质和杂质。但这一方法较为烦琐，且效果也不尽如人意。柱色谱法是最常用的净化方法，其具体方法虽因样品不同而有所差异，但其基本操作是相同的。真菌毒素含量的检测方法一直是制约真菌毒素与人类疾病研究进展的关键。真菌毒素含量的检测方法通常分为三类：①理化检测方法，包括层析、气相色谱、液相色谱、气(液)质联用等；②生物学检测方法，包括皮肤毒性实验、致呕吐实验、种子发芽实验等；③免疫化学检测方法，利用抗原抗体反应的原理进行真菌毒素检测，目前较为常用的是酶联免疫吸附试验(EusA)。三类方法中以免疫化学检测法灵敏度最高，但因需要特殊的抗体而受限制。真菌毒素的分析目前最常用的方法是理化检测方法，分析过程一般分为以下几个步骤。一、提取从样品中提取真菌毒素回收率的高低对于检测结果的准确性影响很大。食品基质严重影响真菌毒素的提取。食品基质不同，所采用的提取方法和溶剂系统各异。一般固体食品多选用浸渍、洗脱、索氏回流方法等，将样品和提取液混合后搅拌30～40min，或快速搅拌3min；液体食品则多选用液液分配的方法。从动物组织中提取真菌毒素时，为了降低动物蛋白质对实验结果的干扰，同时为使与某些蛋白质结合的毒素(如赭曲霉毒素A，ochratoxin A，OTA)有效释放出来，在提取溶剂系统中可适当加入一些蛋白水解酶以提高回收率。在食品和农产品基质中提取真菌毒素所选择的溶剂取决于待测毒素种类(一种还是多种)、毒素性质、毒素在提取溶剂中的溶解度、提取溶剂的毒性和价格、非测定成分(杂质)在提取溶剂中的分配系数等。一般选用毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统。常用的真菌毒素提取溶剂包括甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙腈和水的一种或多种不同配比的混合物。评价一种溶剂系统提取效果优劣的依据是回收率和提取时间，优良的溶剂系统应是毒素回收率高、干扰杂质少、提取时间短。如将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxvnialenol，DON)标准品添加到饲料中，用乙腈水(21：4，体积比)充分混合搅拌3min即可将毒素几乎全部提取出来，而要从天然污染的饲料中提取相当量的该毒素则需要16min，因此确定检测方法的回收率时应以天然污染的样品为基

细菌内毒素检查法---------------操作规程

******有限公司标准操作规程目的建立细菌内毒素检查操作规程，保证检测结果的准确性。适用范围所有原料、成品的细菌内毒素检查。责任人 QC检验员内容 1 简述 1.1 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌毒素的限量是否符合规定的一种方法。 1.2 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法。供试品检测时可使用其中任何一种方法。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 1.3 本规范适用于凝胶法检查。凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。 1.4 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示 1.5 细菌内毒素国家标准品(NSE)系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 1.6 细菌内毒素工作标准品(WSE)系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 1.7 凝胶法细菌内毒素检查用水(BET水)系指内毒素含量小于0.015Eu/ml灭菌注射用水。光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005Eu/ml。 1.8 鲎试剂灵敏度复核试验在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素

******有限公司标准操作规程的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度,用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 1.9 供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和生产工艺或试验环境有变化，鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。 1.10 检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则试验结果无效。 2实验材料及用具 2.1 天平供试品称量用，感量为0.1mg以下。 2.2 电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能维持250℃以上至少一小时。 2.3 恒温水浴箱或适宜的恒温器，应能在37土1℃保持一小时。 2.4 水银温度计或酒精温度计，精度在1℃以下。 2.5 旋涡混合器 2.6 鲎试剂(应具有国家主管部门的批准文号)及细菌内毒素检查用水(符合规定)。2.7 细菌内毒素国家标准品(NSE)，细菌内毒素工作标准品(WSE)，除另有规定外应由中国药品生物制品检定所统一发放。 2.8 实验用具移液管(或刻度吸管，定量移液器)、凝集管(103 75mm)、三角瓶、小试管(163100mm)、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管帽、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮所用玻璃器皿须经250℃干烤至少1小时。塑料用具应使用其它适宜的除细菌内毒素方法。 2.9 试剂 75%乙醇、蒸馏水、5%重铬酸钾硫酸洗液。 3 操作方法 3.1 试验准备 3.1.1 洗液的配制配制铬酸洗液或其他适宜的细菌内毒素灭活剂。 3.1.2 玻璃器皿的洗涤将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并空干水分后置洗液中浸泡4小时，取出将洗液滤干，用自来水将残余的洗液洗净，再用新鲜蒸馏水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中，迅速置烤箱中。

真菌检测方法

分离培养：无菌采取病料接种马铃薯琼脂培养基中，置37℃恒温箱中培养24小时，长成绒毛样菌丝，未见其它细菌生长。经48小时培养长成白色菌落。72小时菌落呈纽扣状，由中心向外周逐渐变深，转变成灰白色、灰绿色。取培养物镜检可见大量球形的分生孢子。通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部真菌，包括皮肤癣菌、孢子丝菌、念珠菌、曲霉菌、隐球菌、组织胞浆菌等。而霉菌多为细胞真菌的一种，也为深部感染真菌，包括烟曲菌、黄曲菌、黑曲菌、土曲菌等，常发生于免疫力低下的患者，引起全身播散性感然，影响预后。培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。在日常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长,孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌,将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。特别是对干燥食品、高糖食品、淹渍食品等,更有必要同时采用M40Y或DG18。由于霉菌中很多种类不会产生有毒的霉菌毒素,危害较小,而有的菌株即使污染数量不多,但其产生的霉菌毒素却危害较大,因此仅作霉菌计数并不能全面反映其危害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判断被污染食品的安全程度。为此,国外有些研究者设计出各类选择性培养基,可以识别产毒的霉菌。如AFPA培养基(配方:酵母提取汁20g,蛋白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于分离黄曲霉毒素产生菌高污染率的食品。产黄曲霉毒素的菌株黄曲霉和寄生曲霉在AFPA上30℃培养2~3天就形成背面有亮橙黄色的特征性菌落,非常容易识别。有人利用该培养基分离黄曲霉高污染食品花生、玉米等,取得了满意的结果。因此,针对不同样品,有目的地设计出相应的选择性培养基,以筛选污染菌中的危险菌群,将是一个值得探索的方向。 2接种方式接种方式主要有倾注法和涂布法两种。目前国际方法中采用倾注法,但近来国际上有不少学者认为霉菌计数采用涂布法更合适。Beuchat和Matsuda等人分别对这两种方法作了大

中华人民共和国国家标准细菌内毒素检测方法

医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法中华人民共和国国家标准 GB/T14233.2—93 1993-03-16发布一、定义及适用范围:本法系列用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中内毒素限量是否符合规定的一种方法。用以代替家兔法对供试品进行热原初试。本法仅适用于一次性使用输液器、输血器。其他产品可参照使用。二、主要设备:超净工作台、电热干燥箱、恒温水浴。三、试剂 1、细菌内毒素国家标准品：用于仲裁鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。 2、细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。 3、鲎试剂：灵敏度为0.25EU/ml，规格为0.5ml。 4、无热原水：内毒素含量小于0.05EU/ml。四、试验前准备 1、器具除热原:与试验液接触的所有器具均应除热原。玻璃器具置电热干燥箱内250℃干烤至少60min；塑料器具置30%双氧水中浸泡 4h，再用无热原水冲洗后于60℃烘干备用。 2、鲎试剂灵敏度测定（1）试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度，应符合规定。（2）灵敏度测定：根据标示的灵敏度范围，将细菌内毒素工作标准品用无热原水以1→2等比稀释，选择能出现阳性和阴性结果的4个连续稀释液。取同一批号鲎试剂若干支，分别按标示量

加入无热原水溶解为鲎试剂溶解液。取10mm×75mm试管若干支，分别加入0.1ml鲎试剂溶解液，加入内毒素稀释液0.1ml，每一稀释液平行操作4管，轻轻振动试管混匀内容物，封闭管口，置37±1℃恒温水浴中保温60±2min观察结果。最高浓度的4管应均为阳性，最低浓度的4管应为阴性。五、试验方法 1、供试品数量 :同一批号至少3个单位供试品。 2、浸提介质:无热原水。 3、供试液制备:在无菌条件下，每套输液器内腔注入10ml，输血器内腔注入15ml浸提介质，反复荡洗5次后两端密封，置37±1℃恒温箱中保温2h，取出后将供试液汇集至一无热原具塞玻璃容器内。供试液贮存应不超过2h。 4、试验步骤:将鲎试剂和细菌内毒素工作标准品分别按标示量加入无热原水溶解。细菌内毒素工作标准品逐次稀释至0.5Eu/ml，供作阳性对热。取10mm×75mm试管6支，其中供试品管2支各加入0.1ml 内毒素工作标准品稀释液，阴性对照管2支各加入0.1ml无热原水，阳性对照管2支各加入0.1ml内毒素工作标准品稀释液，再逐一加入0.1ml鲎试剂溶解液。轻轻混匀试管内容物，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中保温60±2min，轻轻取出，观察结果。 5、结果判定 1)、将试管缓慢倒转180°，管内容物呈坚实凝胶者为阳性，记录为（+），不呈凝胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性，记录为（-）。

微生物总数检测方法(真菌)

微生物总数检测方法（真菌）一、检测用培养基配方与培养条件 1.培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基）配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升。 2. 培养条件：25℃-30℃；时间：72-96小时。二、检测与计数方法 1. 梯度稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3—5滴，分散剂可以是吐温，OP—80，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。 2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每一个稀释度瓶种应放有适量的玻璃珠，以保证菌液分布均匀）。 3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。 4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。 5. 菌落计数以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数： nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：

细菌内毒素检查标准操作规程..

细菌内毒素检查标准操作规程 1 简述 1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 1.2 供试品细菌毒素限值的确定。（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值： L=K/M 式中 L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。 K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂， K=0.2EU/kg/h。 M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。 1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算： MV D=C?L/λ L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml 或U/ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。

中药中真菌毒素测定指导原则

中药中真菌毒素测定指导原则真菌毒素（mycotoxin）是真菌产生的次级代谢产物。某些中药在种植、储存等过程中易产生一些真菌毒素，如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和展青霉素等，对人体具有毒性，有必要加强相关真菌毒费的控制。本指导原则用于中药中真菌毒素的测定。基本原则 ―、中药中真菌毒素的分类真菌毒素是由各种各样的真菌菌核所产生的。曲霉属、镰刀菌属和青霉属包括了绝大多数的产毒真菌。与曲霉属相关的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A等；与镰刀菌属相关的真菌毒素主要包括玉米赤霉烯酮、T-2毒素、呕吐毒素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）和伏马毒素等；与青霉属相关的真菌毒素主要包括展青霉素和桔青霉素等。二、监控品种由于各类真菌毒素的发生毒性的机理不同，容易受污染的对象也有所不同。因此，应选取容易受污染的中药品种进行相应毒素检测方法的开发。粮谷类、种子类、油性成分多的品种应注意黄曲霉毒素的检测；与粮谷类有类似基质的中药材应注意赭曲霉毒素、呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的检测，如淡豆豉、薏苡仁、白扁豆等；酸性果实类中药应注意展青霉素的检测，如枸杞子、乌梅、酸枣仁等。处方中含有易污染的药材以及生粉投料的中成药品种应注意相关真菌毒素的检测。三、测定方法目前真菌毒素的检测方法有薄层色谱法、酶联免疫测定法、胶体金免疫层析法、高效液相色谱法和液相色谱质谱联用法等。薄层色谱法主要用于初筛，酶联吸附免疫法适宜大批样品集中检测，胶体金免疫层析方法适合现场单个或少数样

品即时检测。高效液相色谱法专属性较强，重现性较好，假阳性率较低。液相色谱质谱联用法可以实现多成分同时检测，解决色谱分离不完全及假阳性的情况。本指导原则主要提供了高效液相色谱法和液相色谱质谱联用法的参考方法。在建立中药中真菌毒素的测定方法时，应符合药品质量标准分柝方法验证指导原则（通则9101）。四、限值拟定真菌毒素的限量可结合毒性数据、国内外相关行业的限度标准以及中药的用法用量进行拟定。基本内容 ―、高效液相色谱法高效液相色谱法较多应用于单一成分真菌毒素的分析或者同种类真菌毒素的多成分分析。 1.色谱条件与系统适用性试验应根据待测真菌毒素的理化性质选择适宜的固定相和流动相，多成分测定时可采用流动相梯度洗脱，以达到良好分离效果。固定相常用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，可根据情况选择小粒径或较长的色谱柱以提高分离度。常用的流动相为不同比例的甲醇-水溶液和乙腈-水溶液，以荧光检测器或者二极管阵列检测器进行测定。如赭曲霉毒素A可以乙腈-2%冰醋酸溶液（49：51）为流动相，荧光检测器检测（激发波长333nm，发射波长477mn）进行测定；呕吐毒素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）可以甲醇-水（20 ： 80）为流动相，紫外检测器（检测波长为220nm）进行测定；玉米赤霉烯酮可以乙腈-水（50： 50）为流动相，荧光检测器（激发波长232nm，发射波长460nm）进行测定。 2.对照品溶液的制备应根据各种真菌毒素的理化性质，以保证溶解性和稳定性为原则，选择合适的溶剂溶解并配制合适的浓度作为贮备液。常用的溶剂为甲醇、乙腈。对照品贮备液一般可于冰箱冷藏保存1～3个月。

【CN110007043A】谷物中9种真菌毒素的检测方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910337234.8 (22)申请日 2019.04.25 (71)申请人江苏省农业科学院地址 210014 江苏省南京市玄武区钟灵街 50号 (72)发明人俞明正　史建荣　董飞　王淑芳　张笑　赫丹　徐剑宏　 (74)专利代理机构北京国昊天诚知识产权代理有限公司 11315 代理人吴家伟 (51)Int.Cl. G01N 30/88(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称谷物中9种真菌毒素的检测方法 (57)摘要本发明公开了一种谷物中9种真菌毒素的检测方法，包括以下步骤：取谷物样品，粉碎后过筛，得到谷物样品粉末；将乙腈与水混匀后作为提取液加入到谷物样品粉末中，涡旋提取后离心，收集上清液；取上清液注入EP管中，涡旋振荡后离心，将上层清液吸出后用氮气吹干，吹干后的残渣溶解后过滤，收集滤液，作为待测样品提纯液；将待测样品提纯液注入液相色谱仪，采用液相色谱-质谱联用进行检测。本发明提出一种简单、快速、准确的粮谷中真菌毒素的一次性快速筛查检测技术，成本低、萃取速度快、操作简便、灵敏度低、回收率好、稳定性强，为明确粮谷中真菌毒素的污染及控制、保障粮谷质量安全奠定了技术基础。权利要求书1页说明书7页附图2页CN 110007043 A 2019.07.12 C N 110007043 A

权　利　要　求　书1/1页CN 110007043 A 1.谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取谷物样品，粉碎后过筛，得到谷物样品粉末； (2)将乙腈与水混匀后作为提取液加入到所述谷物样品粉末中，涡旋提取后离心，收集上清液； (3)取所述上清液注入EP管中，涡旋振荡后离心，将上层清液吸出后用氮气吹干，吹干后的残渣溶解后过滤，收集滤液，作为待测样品提纯液； (4)将所述待测样品提纯液注入液相色谱仪，采用液相色谱-质谱联用进行检测。 2.如权利要求1所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中液相色谱-质谱联用进行检测的方法包括：色谱条件：色谱柱：C18，流动相A：5mmol/L醋酸铵水溶液，流动相B：甲醇，流动相梯度程序：初始流动相为10％流动相B，保持1min，1min至3min，升到35％流动相B，3-5min升到90％流动相B，5-11min维持90％流动相B，11.01min回到初始流动相，共15min；质谱条件：离子化方式：电喷雾电离子源；扫描方式：多反应监测模式；离子源温度500℃；雾化气50psi；辅助气50psi；气帘气35psi；喷雾电压：5500V、4500；碰撞室射出电压：10V、-6V。 3.如权利要求2所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述电喷雾电离子源包括ESI+和ESI-。 4.如权利要求3所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)取上清液2mL注入含有分散固相萃取净化填料的4mL EP管中。 5.如权利要求4所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述分散固相萃取净化填料为硫酸镁0.2g，氯化钠0.1g，柠檬酸钠0.1g，C180.1g。 6.如权利要求5所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中以2500r/min，涡旋振荡5min，然后5000r/min离心5min。 7.如权利要求6所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中以2500r/min，涡旋振荡1min，然后5000r/min离心5min。 8.如权利要求7所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述粉末过2.00mm孔筛。 9.如权利要求8所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)将乙腈与水以80:20的体积比混合，然后按照体积质量比4:1加入所述谷物样品粉末中。 10.如权利要求9所述的谷物中9种真菌毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中吹干后的残渣，溶解于含0.1％甲酸的50％甲醇水溶液中，然后用0.22μm的滤膜过滤。 2

药典三部(2015版)-通则-1143细菌内毒素检查法

1143 细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。本试验操作过程应防止内毒素的污染。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器皿，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0～8.0的范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲溶液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公

中国药典版《细菌内毒素检查法》.pdf

中国药典XXXX年版《细菌内毒素检查法》 ——凝胶法凝胶法凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。鲎试剂灵敏度复核试验在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃恒温器中，保温60分钟±2分钟。将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc). λc=1g-1(∑X/4)

真菌检验

1、什么是真菌？真菌为真核细胞型微生物，属于真菌界。具有典型的细胞核，不具有叶绿素，以腐生和寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质和纤维素，有完善的细胞器，能进行有性生殖和（或）无性繁殖。真菌在自然界分布极为广泛，约有20余万种，大多对人无害，仅有约150种对人和动物致病。 2、真菌的基本结构是什么？真菌的基本结构为菌丝和孢子，菌丝为微细的管状结构，具有细胞壁，细胞膜，细胞浆和细胞核，分枝或不分枝，分隔或不分隔，有粗有细，着色或不着色。一般致病真菌的菌丝较细而且分隔。孢子是真菌的繁殖器官，也是抵抗不良环境的结构，类似于高等植物的种子，是真菌分类坚定的最主要依据。 3、引起人和动物感染的真菌分为哪两类？引起人和动物感染的真菌分为病原性真菌和条件致病菌两大类。病原性真菌本身具致病性，而条件致病菌一般不具致病性，只有在一定条件下，即机体免疫力降低时才致病。 4、引起真菌病的常见诱因有哪些？长期使用广谱抗生素，皮质激素和免疫抑制剂，代谢障碍，血液病，尿毒症，慢性消耗性疾病，外伤，大手术，器官移植，静脉高营养，导插管，放化疗及爱滋病等都是重要的诱因。 5、真菌生长的特点？真菌在生长过程中有从中心向四周等距离生长形成圆形菌落的倾向。也正因为这一特点使体股癣的皮肤损害表现为环行或多环行。 6、实验室检查真菌包括什么？实验室检查主要包括真菌直接检查和真菌培养。 7 、真菌直接检查的意义？（1）直接检查阳性有诊断意义，一般可确定有真菌感染，但阴性不能排除诊断。（2）根据直接检查所见的真菌镜下形态可确定少数病原菌的种，如新型隐球菌，花斑癣菌等。有些可确定属，如念珠菌属等。（3）直接检查所见的真菌形态，代表该菌在组织内的形态即组织象。（4）真菌镜下形态有时可提示该菌的活动性，如念珠菌出现真菌丝和假菌丝，皮肤癣菌的菌丝肥大粗长多分枝，胞浆浓都表示该菌处于活跃状态。 8 、真菌培养的目的是什么？

多种真菌毒素的检测方法分析

多种真菌毒素的检测方法分析摘要：真菌毒素作为产毒细菌的代谢物质，它大量出现在粮谷及饲料当中，产毒真菌具有分布广的特点。现代农业技术和食品加工工艺虽然较为先进，然而真菌却还是会在作物的生长、储存以及加工中造成危害，并且这些危害往往是不可避免的。在适当的温度和湿度条件下，产毒真菌就将会在食用坚果、油料种子、谷物等粮食作物中繁殖与生长。与此同时，这些真菌真毒也可能会由于畜禽食用含有真菌毒素的实物而进入到其蛋和乳中，进而进入到食物链当中。真菌毒素拥有致癌性、毒性、致畸性等危害，能够引发人畜肾中毒、肝中毒以及生殖异常，因而对其进行检测也就变得十分必需了。关键词：真菌毒素;检测方法;分析真菌毒素也被学者们称之为毒菌毒素，它是产毒真菌的代谢物，它广泛存在于饲料和粮谷中，一旦人畜食用了被真菌毒素污染过的粮食、饲料，极有可能会出现癌症、肝中毒等严重后果，所以这也是人畜健康和生命的重要威胁之一。从一份分析报告中的数据我们可以大致了解到，世界上大约四分之一的谷类作物都受到了真菌毒素不同程度的污染，每年因此造成的经济损失也已达到数十亿美元。所以，对粮谷、饲料和畜牧产品造成最大危害的问题之一便是真菌毒素污染的问题。以下笔者将结合自身多年实践工作经验，并通过本文，针对多种真菌毒素的检测方法进行分析。 1 生物鉴定检测方法这种检测方法主要是运用真菌毒素可影响家禽、微生物以及水生动物等生物的细胞来检测真菌毒素是否真正存在，其专一性较差、灵敏度低，通常情况下仅作为化学分析方法的佐证。同时，它的优势在于检测物质无需高纯度，一般用于定性。一共包含十种：（1）植物实验;（2）饲喂实验动物试验;（3）鳟鱼试验;（4）鸡胚试验;（5）鸭胚试验;（6）荧光反应;（7）组织培养检测法;（8）对微生物遗传因子影响试验;（9）细菌发光试验;（10）抑菌试验。 2 化学分析法化学分析法又被称之为薄层色谱法，它主要应用于分离、分析黄曲霉毒素的检测过程中，是最早、最广的检测技术。为能有效提升薄层色谱的分辨率，部分样品黄曲霉素检测往往都是应用高效薄层层析方法，当薄层分析仪出现之后，高效薄层层析法和薄层色谱法可以实现自动化定量定性，最小黄曲霉毒素量将无需利用目测，分析的速度将得到极大提升，同时结果也将变得更精准。Otta等把光度计和高压薄层色谱法相结合，并对10个样品中黄曲毒素B1、B2、G1、G2情况进行分析，很多食品中均可以实现检测，利用高压薄层色谱法把样品进行分离和提纯，通过光度计实现定量，完成了低耗、有效、快速定量多种食品中的AFT，同时薄层色谱法在镰刀菌毒方面也有大量运用。TLC分离效率及其检测精度伴随高效薄层色谱法和薄层扫描仪的应用与发展得到了相应的提升，进而在真

细菌内毒素检查验证方案

细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06 起草人：审核人：批准人：

批准日期：年月日

目录 1 概述 1 2 验证目的及范围 1 3 验证小组人员组成及职责 1 4 验证依据 2 5 验证前准备 2 6 验证的实施 2 7 偏差处理 5 8 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 5 10 再验证及周期 5 11 验证文件及归档 5 12 附件 5

1 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。 2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。 3.验证小组人员组成及职责： 3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。 3.2 验证小组组成及职责列表

4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法 5.验证前准备 5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。 6 验证的实施 6.1实验材料及用具 6.1.1电子天平 6.1.2. 电热干燥箱

真菌(1-3)-D葡聚糖检测反应机理

真菌(1-3)- -D葡聚糖检测反应机理目前临床上随着广谱抗生素、各类免疫抑制剂、移植插管等新技术的不断发展应用，其真菌感染尤其是深部真菌感染出现明显上升趋势,而作为临床诊断的细菌培养其阳性率很低，且检测周期长，不能适应临床治疗诊断的要求，因此迫切需要快速、准确的检测方法.因此对血液中的早期(1-3)- -D葡聚糖快速定量检测，将对临床对症治疗具有很深的现实意义。人体血浆中(1-3)- -D葡聚糖快速检测对早期诊断深部真菌感染具有重要的参考价值。该试验的基本原理是试剂中含凝固酶原及凝固蛋白原的冷冻干燥品.在适宜条件下，微量(1-3)- -D葡聚糖能激活试剂中的凝固酶原产生凝集反应，通过测定凝集反应过程中的浊度变化从而定量检测血浆中(1-3)- '-D葡聚糖含量? 内毒素定量检测的反应机理细菌内毒素作为革兰阴性菌细胞壁外层中的脂多糖成份(LPS),具有多种的生物活性，微量的内毒素进入机体将会出现发热、血压降低、寒战、引起DIC、内毒素败血症等一系列临床反应，因此对血液中的早期内毒素快速定量检测，将对临床对症治疗具有很深的现实意义。人体血浆中内毒素检测对分别诊断革兰阴性杆菌感染具有重要的参考价值。反应试剂中含凝固酶原及凝固蛋白原的冷冻干燥品.在适宜条件下，微量革蓝氏阴性菌内毒素能激活试剂中的凝固酶原产生凝集反应形成凝胶,通过测定在形成凝胶过程中的浊度变化从而定量检测血浆中革蓝氏阴性菌内毒素.

一、检测体液内毒素的临床意义由革兰氏阴性菌所引起的内毒素血症及脓毒血症是目前临床上的主要死亡原因之一。在各类抗生素杀灭革兰氏阴性菌的同时，也会使后者释放出一定数量的内毒素，从而加重内毒素血症。早期诊断的细菌学培养需时长，而且由于抗生素的应用，其培养阳性率低。早期的数小时内作为临床上抢救感染性休克的关键，临床医师仅能根据临床特征与体征推断病源学而带有一定的盲目性，因此，早期体液中内毒素的正确、快速定量检测及相应的对症治疗就显得格外重要。过去的内毒素检测能定性而不能定量，而且个体差异和实验室间的误差较大，无法成为有价值的临床检验项目，北京金山川公司研制的MB-80 微生物快速动态检测系统能定量检测体液内毒素的含量，经国内多家单位使用现已在其他省市开始作为临床检验项目进行收费。该仪器检测内毒素具有结果稳定、检测快（ 1 小时）、重复性好、准确率高、不同的检测人员操作引起的误差小等优点。内毒素定量检测在重症病人、感染病人（如脑膜炎）以及其他有严重创伤等疾病的病人均有重要的临床意义，这使得内毒素研究一直是热点，但过去由于方法的限制，内毒素检测也是临床的难点。二、深部真菌检测的临床意义动态定量检测体液中真菌含量是应用MB-80 微生物快速动态检测系统进行的。该方法可以快速诊断用常规方法难以确诊的深部真菌