微生物反应器操作

微生物标准操作流程

目录生物安全柜操作规程及维护 (3) 实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (6) 物体表面细菌监测 (8) 医护人员手指细菌监测 (9) 空气中细菌含量的监测 (10) 环境卫生学监测质控标准 (12) 使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (13) 一次性医疗用品微生物监测 (14) 紫外线消毒质量控制程序 (15) 污水的细菌监测(总大肠菌群) (16) 正确洗手的手法 (18)

生物安全柜操作规程及维护 1.目的：为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。 2.原理：通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。 3.工作条件：环境温度：18－30℃相对湿度：<80% 安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。环境必须有良好的通风设备。 4、操作步骤：生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。具体操作步骤为： 4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。 4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。 4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。 4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。 4.5如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。 4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。 4.7 当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。

第四章微生物反应器操作习题

第四章微生物反应器操作 1．请用简图分别给出分批操作、流加操作和连续操作中反应器内培养液体积随时间的变化曲线。 2．用简图给出分批培养中初始基质浓度与最大菌体浓度之间的相互关系。 3．请给出分批培养、反复分批培养、流加培养、反复流加培养和连续培养中产物生成速率，并进行比较。 4. 何为连续培养的稳定状态？当0][][===dt P d dt S d dt dX 时，一定是稳定状态吗？ 5. 在微生物分批培养的诱导期中，细胞接种量X 0 ，生成的细胞量为X A 0 ，此间死亡细胞量为X DO ，已知A A f X X =00X 。生成的细胞在接种t l 时间后开始指数型繁殖， t l 以后的细胞量为X，请推导出的关系式。f A 分别等于0，0.2，0.4，0.6，0.8，并作图表示出。 )(l t f X =6.一定的培养体系中细胞以一定的比生长速率进行生长繁殖，如果计划流加新鲜培养基，同时保证细胞的生长速率不变，请问如何确定新鲜培养基的流加速度。 7. 试比较微生物分批培养与连续培养两种操作中的细胞生长速率。微生物的生长可采用Monod方程表达。 8. 面包酵母连续培养中，菌体浓度为10kg/m 3，菌体生成速度为10kg/h，求流加培养基中基质（乙醇）浓度及培养液的量。稀释率1.0=D h-1,Y X/S =0.5kg/kg （以细胞/基质计），可采用Monod 方程，已知μ max = 0.15h -1,K S = 0.05kg /m 3。 9．恒化器进行具有抑制作用的连续培养，比生长速率可由式S i i S C K C K S ++=)1(max μμ 给出，其中g g Y L g C L g K S X i S /1.0,/05.0,/0.1===（以细胞/ 基质计）， L g X L g C S /05.0,/0.100==,，求菌体的最大生产速率与相应的稀释率D max ，并与没有抑制时相比较。 10. 一种细菌连续（恒化器）培养中获得如下数据。μ 为比生长速率，S 为限制性基质浓度，若反应适用Monod 方程，求和。 11. 以碳源为限制基质的连续发酵过程中，有一位研究者在研究温度对细胞得率的影响时，发现当温度高于最适生长温度时，细胞得率下降。对此现象一般的解释是因为细胞内为维持细胞活力所消耗的能量增加的缘故。但是，有些研究者研究提出细胞得率在稳态下下降是因为细胞本身活力降低。这一解释也有道理，因为细胞的死亡率是温度的函数。（1）请你利用关于连续培养理论，解释上述温度对细胞得率影响的两种理由。（2）如何设计一些实验来证明在（1）中所导出的方程式的真实性？实验设计应包括实验步骤、所需的分析方法及

表面微生物测试标准操作规程

表面微生物测试标准操作规程（接触平皿法） 1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本） 3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。 4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行 5．内容洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的大小和布局房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小； 2.设备、管路等的复杂程度； 3.生产活动的重要性； 4.易受污染的部位等。应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。洁净区微生物测试频率和限度日常监控一月一次接触碟（55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏 45cfu/25cm2 。洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）。洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

(完整版)微生物的接种技术

微生物的接种技术 1 目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3 实验器材 3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5 操作步骤 5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。

右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2 液体接种法多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下：由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。 5.3 固体接种法普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。按所用菌种或种子菌来源不同可分为：用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。用固体种子接种固体料。包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。

发酵罐专利

名称：一种连续转鼓式黑曲霉菌株扩培固态发酵设备技术领域：本发明属于生物反应器技术领域，具体涉及一种转鼓式固态发酵设备，尤其适用于大批量的麸曲的生产。背景技术：（背景中应加入搜到的所有相关专利，并分析其优缺点）目前，各种有机酸，蛋白质，酒类产品的生产均采用微生物发酵，固态发酵具有设备简单，投资少，操作简便，能耗低，发酵周期短，下游处理工艺简单等优点，被广泛采用。但由于其发酵过程受到的影响因素很多（基质含水量、颗粒度、pH值、发酵温度、气相组成和通气速率等），且分析手段不尽完善，相关的研究比较缓慢。就固态麸曲的工业生产来说，大量麸曲的制备仍然采用传统的工艺：原种--斜面--茄子瓶--麸曲。这样一个发酵罐需要制备几百个三角瓶麸曲，麸曲菌种制备过程劳动量大，麸曲染菌几率高。本发明是一种麸曲菌种制备装置，能替代几百个三角瓶的扩培，实现菌种生产的标准化，保证产品的同批次同质性。发明内容：本发明的目的在与克服现有技术的不足，提供一种设计合理，操作方便，自动化程度高，能有效解决发酵罐散热，传质，灭菌困难，以及保证操作无菌等问题的固态发酵设备。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 1.一种固态发酵设备，其特征在于：包括发酵罐，主管路，驱动装置，热交换装置，蒸汽灭菌装置，无菌通风装置，支架，其中该接种管与发酵罐固接，接种管中设有球阀，避免杂菌的污染。该驱动装置固接于发酵罐的外侧，以提供发酵罐旋转的动力。该发酵罐的整体结构是双锥回转结构，当发酵罐旋转时，能较好的促进物料的混合，保证物料的均匀性。另外该发酵罐还制有用于保证发酵温度的分层夹套结构，用于接种的接种管，投入或排放物料的端部开口，用于观察其内部状态的一组视镜，用于取样的取样阀和用于排水，排气，排蒸汽的排放阀，和用于灭菌或通气的主管路。前所述的夹套的进出水管路是同轴管路，并采用旋转接头的方式与发酵罐相连接。另外，夹套里面设置分隔板，实现夹套的分层，从而避免夹套水循环的短路，并能充分的利用夹套的换热面积。夹套与热交换器连接，实现发酵罐的升温或降温，从而保证发酵的温度条件25-38℃。 2.而且，所述的发酵罐主体为一个两端为圆锥，中间为圆筒的固接结构。 3.而且，所述接种管1固接在发酵罐端部封头上，该接种管中制有球阀，且球阀通道大小正与接种管2尺寸配合，接种管的端部用带螺纹的塞头封口。 4.而且，所述夹套设置在发酵罐外部，中间有分隔板，且夹套进出水管路采用旋转接头与热交换器相连。 5.而且，所述驱动装置通过齿轮减速器和正反转调速器连接于前述发酵罐。 6.而且，所述发酵罐设备配有中央控制板，中央控制板与前述发酵罐，驱动装置，正反转减速器，水泵，蒸汽发生器，空气压缩机，质量流量控制器等连接。 7.而且，所述视镜为一组，共两个，开在发酵罐的锥形结构处，两侧各一个。 8.而且，所述热交换器a通过主管道与发酵罐内部相通，另一端接连与空气过滤器，质量流量控制计，空气压缩机构成无菌通风装置 9.而且，所述蒸汽灭菌装置，包括蒸汽发生器，蒸汽储气罐，通过主管路与发酵罐内部相通本发明上述技术方案后，其有益效果在于：通过旋转的方式来实现对物料的混合，且双锥的设计使得混料效果更好，能改善物料与物料，物料与空气的传质传热效果，进而保证了物料性质的均一性，使得发酵罐一次能够进行大批量的生产。再有，蒸汽灭菌，接种，发酵过程全部都在发酵罐内进行，避免了操作过程中的杂菌污染，其中接种采用液体接种的方式，劳动强度小，操作过程染菌几率小。配置的中央控制板能实时的控制发酵过程中发酵罐的转速，转动方向，以及发酵罐内温度，湿度，空气流量等条件，保证菌种处在最优化的环境条件下生长，从而最大程度的利用资源，提高生产效率，且实现了自动化生产。籍此，应用本

微生物实验室技术操作规范

实验室技术操作规范一、无菌操作要求食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 1．灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。

版药典表面微生物检测操作规程

1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。 2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。 3.责任：表面微生物检测员。 4.内容： 4.1基本概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 4.1.2表面微生物： 4.1.3表面微生物菌落数: 规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。 4.2测试原理: 本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用的仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养

72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。 4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定： 1.洁净区（室）的大小； 2.设备、管路等的复杂程度； 3.生产活动的重要性； 4.易受污染的部位等。应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求。表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。为避免干扰，宜在生产活动结束后取样。 4.3.3采样方法：洁净区表面微生物测试方法。 4.3.3.1接触平皿法：取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与设备直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面取样后，需要立即用75%酒精擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。收好的营养琼脂接触碟在32℃培养72小时。 4.3.3.2棉签擦拭法：

5微生物反应器操作

教学基本内容：讲授微生物反应器的操作方式，包括分批式操作、连续式操作、流加式操作。连续式操作的定义、数学模型，连续稳态操作条件，连续操作的优缺点，在生产上和科研中的应用；流加式操作的定义、数学模型，定流量流加、指数流加的概念，流加式操作的控制优化问题。分批式操作下微生物生长曲线。 5.1 微生物反应器操作基础 5.2连续式操作 5.3 流加式操作 5.4 分批式操作授课重点： 1. 三种基本操作方式的比较。 2. 单级连续式操作的数学模型，连续稳态操作条件，冲出现象。 3. 连续操作的优缺点及在生产上和科研领域的应用。 4 流加式操作的数学模型，指数流加和定流量流加的概念。 5. 流加操作的控制与优化。 6. 分批式操作下微生物的生长曲线。难点： 1. 连续式操作的数学模型。 2. 多级连续培养的数学模型。 3. 流加式操作的数学模型。本章主要教学要求： 1. 理解微生物反应器操作方式的概念。注意连续式操作、流加式操作和分批式操作的区别。 2. 理解和掌握连续式操作的数学模型及连续稳态操作条件。 3. 理解指数流加和定流量流加的区别。 4. 了解连续式操作的优缺点和应用。 5. 了解流加式操作的优化和控制。

5.1微生物反应器操作基础 5.1.1 微生物反应器操作方式分批式操作：是指基质一次性加入反应器内，在适宜条件下将微生物菌种接入，反应完成后将全部反应物料取出的操作方式。连续式操作：是指分批操作进行到一定阶段，一方面将基质连续不断地加入反应器内，另一方面又把反应物料连续不断的取出，使反应条件不随时间变化的操作方式。流加式操作：是指先将一定量基质加入反应器内，在适宜条件下将微生物菌种接入反应器中，反应开始，反应过程中将特定的限制性基质按照一定要求加入到反应器内，以控制限制性基质浓度保持一定，当反应终止时取出反应物料的操作方式。 V V V 图5－3连续式操作

2015年版微生物限度检验操作规程

2015 版微生物限度检验操作规程目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。内容概述：本检验操作规程依据中国药典2015 年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。微生物计数法一、计数方法 1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 袋)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表 1。菌液制备按表 1 规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含％(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含%(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉抱子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8 C,可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在2-8 C,在验证过的贮存期内使用。表 1 试验菌液的制备和使用阴性对照为确认试验条件是否符合要求,应进行对照试验,阴性对照试验应无菌生长。培养基适用性检查按照表1规定,接种不大于100cfu 的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板,置规定的条件下培养。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基管与对照培养基管比较,试验菌应生长良好。 5、计数方法适用性检查

第四章微生物反应器操作习题答案

第四章微生物反应器操作习题答案 4．答：连续培养的稳定状态，是指菌体的生长与反应液的排放、基质的流加与反应消耗及反应液排放、产物的生成与反应液排放达到了动态平衡，因此菌体浓度、基质浓度、产物浓度保持恒定，即，并不一定是稳定状态。如菌体因生长环境不利出现了死亡时，也满足，但不能说是稳定状态，此时是一种静止状态，而不是动态平衡。 5．解：诱导期结束时的菌体量： X = X0 + X AO □ X DO = X0 + f A X0 □ X DO = (1+ f A )X0-X DO 菌体在t l 时间后开始指数型繁殖，因此边界条件： t = t l , X = (1+ f A )X0 □ X DO 积分，得 X = [(1+ f A )X0 □ X DO ]exp[μ (t □ t l )]，如图所示。当f A = 0, X = (X0 □ X DO ) exp[μ (t □ t l )] ；当f A = 0.2, X = (1.2X0 □ X DO ) exp[μ (t □ t l )] 当f A = 0.4, X = (1.4X0 □ X DO ) exp[μ (t □ t l )] 当f A = 0.6, X = (1.6X0 □ X DO ) exp[μ (t □ t l )] 当f A = 0.8, X = (1.8X0 □ X DO ) exp[μ (t □ t l )]

6．答：设菌体生长比速为μ，菌体浓度为X，则菌体生长速率为μX。为保证菌体生长速率不变，应采取指数流加方式，控制稀释率D = μ ，此时流加操作可达到拟稳态，菌体生长速率DX = uX 。 7．答：微生物的生长可用莫诺方程表达，即分批培养中菌体生长速率连续培养中菌体生长速率：

微生物检验的基本操作技术

微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术 1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。 2、内容无菌操作技术主要包括两方面： 1）创造无菌的培养环境。包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等； 2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。 3、无菌操作原则 1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净； 2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等； 3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边； 4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒； 5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处； 6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。二、无菌操作的环境要求 1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；

微生物标准操作流程纲要.docx

目录生物安全柜操作规程及维护............................................................................错误 ! 未定义书签。实验室高压蒸气灭菌器操作程序....................................................................错误 ! 未定义书签。物体表面细菌监测. .............................................错误 ! 未定义书签。医护人员手指细菌监测. .........................................错误 ! 未定义书签。空气中细菌含量的监测. .........................................错误 ! 未定义书签。环境卫生学监测质控标准. .......................................错误 ! 未定义书签。使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序. .......................错误 ! 未定义书签。一次性医疗用品微生物监测. .....................................错误 ! 未定义书签。紫外线消毒质量控制程序. .......................................错误 ! 未定义书签。污水的细菌监测(总大肠菌群) . ..................................错误 ! 未定义书签。正确洗手的手法................................................错误 ! 未定义书签。

生物工程设备复习资料

生物工程设备复习资料 1、磁力除铁器的作用：利用磁性除去原料中的含铁杂质。 2、振动筛的结构、工作原理：P5图1-3。 3、常见精选机的类型及工作原理： ①碟片式精选机：在金属碟片的平面上制出许多袋形的凹孔，碟片在粮堆中运动时，短小的颗粒嵌入袋孔被带到较高的位置才会落下，把收集短粒的斜槽放在适当的位置上，就能将短粒分出来。 ②滚筒式精选机：袋孔开在筛转圆管的内表面，长粒大麦依靠进料位差和利用滚筒本身的倾斜度，沿滚筒长度方向流动由另一端流出，而短粒大麦嵌入袋孔的位置较深，被带到较高位置而落入中央槽之中有螺旋输送机送出。 4、机械粉碎的工作原理组要有以下几种：挤压粉碎、冲击粉碎、磨碎、劈碎、剪碎 5、①锤式粉碎机的主要结构和工作原理：主要结构：轴、转？、锤刀、栅栏、抽风机主要原理：轴转动带动安装在轴上的锤刀作圆周运动，从而锤碎筛面上的原料，筛面控制粉碎程度。进料筛板控制进料的粒度。 ②辊式粉碎机的主要结构和工作原理：主要结构：辊筒、传动装置、机架、滚动轴承等等主要原理：工作时，两个平行的辊筒相对旋转，物料由于辊筒对物料的摩擦作用而被托入两辊筒间的间隙中被粉碎。两辊式、四辊式、五辊式、六辊式粉碎机的原理类似。 ③球磨机的主要结构和工作原理：主要结构：筒体、端盖、轴承、齿圈主要原理：球磨机筒体内装有研磨体（一般为钢球，钢柱、钢棒或卵石的）。筒体回转时，其中的物料与研磨体在摩擦力作用下，贴在筒体壁上与筒体一起回转。当提升到一定高度后，由于重力作用，研磨体发生自由卸落或抛落现象，从而对筒内物料造成冲击、研磨和挤压，物料逐渐被粉碎。达到研磨要求后，将物料由筒内排出。 6、生物质原料混合设备的种类：回旋型混合机（水平圆筒形、V形、双锥形、立方体形）；固定型混合机（搅拌槽式、锥形、回转圆板式、流动式） 7、常见连续灭菌流程： ①连消塔-喷淋冷却流程：配好的培养基用泵打入连消塔与蒸汽直接混合，达到灭菌温度后进入维持罐，维持一定时间后经喷淋冷却器冷却至一定温度后进入发酵罐。主要设备：配料预热罐、连消塔、维持罐。P20图2-4 ②喷射加热-真空冷却连续灭菌流程：培养基（培养液）用泵打入喷射加热器，以较高的速度至喷嘴喷出，借高速流体的抽吸作用与蒸汽混合后进入管道维持器（维持管），经一定时间后通过一膨胀阀进入真空急骤蒸发室，因真空作用使水分急骤蒸发而冷却至70-80℃左右，再进入发酵罐冷却至接种温度。主要设备：喷射加热器、维持管、膨胀阀、真空急骤蒸发室。P21图2-5 ③板式换热器灭菌流程：采用了板式换热器作为培养液的加热和冷却器，培养液在设备中同时完成预热、灭菌及冷却过程。加热段使培养液的温度升高，经维持段保温一段时间，然后在板式换热器的水冷却段冷却，从而是培养液的预热、加热、灭菌及冷却过程可在同一设备内完成。P21图2-6 8、连续蒸煮糖化的工艺流程：P25图2-12 9、连续蒸煮糖化设备有罐式、管式和柱式三中形式。 10、糖蜜稀释器的主要结构形式：水平式、立式、错板式、胀缩式、变管径式、间歇式。 11、糖蜜原料的澄清方法：加酸通用处理法、加热加酸沉淀法、絮凝剂澄清处理法。 12、麦芽汁的制备流程？主要设备的结构及工作原理：糊化锅、糖化锅、过滤槽、麦汁煮沸锅、糖化醪过滤槽详见P37-41 13、固体培养基制备的主要设备有：粉碎设备、润水设备、混合设备、蒸煮灭菌设备、冷却设备等。（填空） 14一个良好的生物反应器应满足的要求：①结构严密，经得起蒸汽的反复灭菌，内壁光滑，耐腐蚀性好，以利于灭菌彻底和减小金属离子对生物反应的影响；②有良好的气、液、固接触和混合性能以及高效的热量、质量、动量传递性能；③在保持生物反应要求的前提下，降低能耗；④有良好的热量交换性能，以维持生物反应最适温度；⑤有可行的管道比例和仪表控制，适用于灭菌操作和自动化控制。 15、生物反应器的分类： ①按几何形状或结构特征来划分：釜式、管式、塔式、膜式；②按催化剂类型或培养对象分：酶促反应器、微生物培养发酵罐、植物细胞反应器、动物反应器；③按供氧分，有好氧和厌氧之别；④根据反应器所需的混合与能量

微生物标准操作规程一

连续加样移液器标准操作规程 1．目的规范连续加样移液器的操作规程，确保正确使用连续加样移液器。 2．授权操作人经培训并通过考核的检验科微生物实验室工作人员。 3．适用范围微生物实验室连续加样移液器。 4．工作环境相对湿度：10％～85％；运行温度：10～30℃。 5．操作程序 5.1 移液器针筒的选择和安装 5.1.1 根据移液体积，选择移液器针筒，将移液器针筒的活塞(内芯)推到最低端。 5.1.2 将移液器前下方的蓝色按钮推至最低端。 5.1.3 按住移液器下方左右两侧的蓝色按钮，将移液器针筒插入移液器主体，然后松开两个按钮，移液器上方显示窗显示数值即完成安装。 5.2 每次释放液量的调节旋转调节移液器顶部调节拨盘，显示框内显示的数字即为每次释放的液量。 5.3 吸液 5.3.1 右手握住移液器，左手拇指将移液器前面的蓝色按钮推至最低端。 5.3.2 把针筒吸头插入液体，左手将移液器前下方的蓝色按钮慢慢推至顶端，此时显示框内的数字闪动，表示尚不能准确度量释放的液量。 5.4 释放液体 5.4.1 右手拇指按一次移液器前上方的蓝色按钮，排空气泡，此时显示框内的数字不再闪动，表示已经能够准确度量释放的液量。 5.4.2 右手拇指按移液器前上方的蓝色按钮释放液体。每按一次释放的液量即为显示框显示的液量。连续释放直到显示框内显示的数字闪动，表示针筒内的液体已经不够下次释放，如需继续加样，应再次吸液。继续加样时，应将移液器前下方的蓝色按钮推至最低端排尽余液，再吸液。 5.5 移液器针筒的卸载 5.5.1 工作完毕，将移液器面前下方的蓝色按钮推至最低端，排尽余液，按住移液器下方左右两侧的蓝色按钮，卸下针筒。 5.5.2 松开两个按钮，移液器显示窗内显示的数值消失，即完

微生物基本操作规范样本

培养基制备培养基概念：是指以液体、半固体或固体形式，包括天然或合成成分，用于增进微生物繁殖或保持其活力物质构成。由于各类微生物对营养规定不同，培养目和检测需要不同，因而培养基种类诸多。咱们可依照某种原则，将种类繁多培养基划分为若干类型。培养基分类：按功能分类：基本培养基、营养培养基、鉴别培养基、选取培养基、特殊培养基。按物理性状分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。液体培养基：所配制培养基是液态，这种培养基被用来微生物增菌和生长状态观测。固体培养基和半固体培养基：在液体培养基中加入适量凝固剂制成成固体培养基和半固体培养基。惯用作凝固剂物质有琼脂。固体培养基琼脂用量1.5-2%，半固体培养基琼脂用量在0.5～1%之间。固体培养基用作微生物分离、鉴定、计数、保藏等。半固体培养基被用来观测微生物动力和保藏菌种。今天给人们展示一下各种培养基制备。培养基制备基本过程：调配成分、溶解、校正pH、分装、灭菌、质量检查和保存所需物品：试剂、锥形瓶、天平、量筒、微波炉、高压蒸汽灭菌器、玻璃试管、玻璃平板、接种工具。

（1）调配成分：在锥形瓶或大容量烧瓶中依次加入蒸馏水200ml，1％蛋白胨，0.5％NaCL，0.3％牛肉膏（g/v），精确称取各种成分，使其充分混合。[注意事项] 培养基调配溶解：先在锥形瓶底加入少量蒸馏水，再加入培养基成分，以防其粘在锥形瓶底部烧结。制备培养基时，除玻璃容器时，还可用铝锅，搪瓷桶，但不可用铁，铜等容器，以免铁和铜离子进入培养基（培养基中铁离子含量超过0.14mg/L时抑制细菌毒素产生，含铜量超过0.3mg/L时抑制细菌生长）。培养基中若需加入染料，胆盐，批示剂等，应在校正pH后加入。（2）溶解：将配制好混合物微波炉加热8min，使其完全溶解，补足失水。（3）校正PH：不同细菌需要在含不同pH培养基上生长，普通将培养基pH调至7.2～7.6。商品化试剂配制后可省略该环节，无需校正PH。依照所需培养基用途不同分别加入不同含量琼脂，制成半固体培养基和固体培养基。（4）分装：（液体培养基、半固体培养基和某些固体培养基分装可在灭菌钱也可在灭菌后） ①基本培养基：普通分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；

2015年版微生物限度检验操作规程完整

白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。表1 试验菌液的制备和使用 4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。 4.4培养基适用性检查按照表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 5、计数方法适用性检查 5.1供试品制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采用适宜的方法制备供试液。制备时若需加温应加热均匀且温度不得超过45℃。供试液从制备到加入检验用培养基不得超过1小时。 5.1.1成品、辅料供试液的制备取供试品，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或PH7.2磷酸盐缓冲溶液，或胰酪大豆胨液体培养基或稀释制成1:10供试液，若需要，调节供试液PH至6-8，必要时用同一稀释液将供试液进一步10倍稀释系列。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 5.1.2内包装膜、袋：取供试品100cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH7.2

微生物实验操作基本要求

食品卫生微生物检验实验室操作要求核心提示：食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。一、无菌操作要求 1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。