亚细胞器的分离方法
产品说明书
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亚细胞器的分离方法
亚细胞器的分离方法是细胞生物学研究中重要方法。它一般是研究某一特定的细胞器的
超微结构，生化组成及特定功能的前提和基础。
在体外功能研究中，分离纯化得到的亚细胞器是否具有生物学的活性是实验设计的关
键。
贝博生物基于生物学活性的需求，开了了一系列的亚细胞器分离的产品：
亚细胞结构提取试剂盒
BB-3601 BestBio 贝博生物 线粒体提取试剂盒
BB-36011 BestBio 贝博生物 细胞线粒体提取试剂盒
BB-36012 BestBio 贝博生物 组织线粒体提取试剂盒
BB-3602 BestBio 贝博生物 细胞核提取试剂盒
BB-36021 BestBio 贝博生物 胞浆/胞核分离试剂盒
BB-36022 BestBio 贝博生物 组织胞浆/胞核分离试剂盒
BB-3603 BestBio 贝博生物 溶酶体提取试剂盒
BB-3604 BestBio 贝博生物 高尔基体提取试剂盒
BB-3605 BestBio 贝博生物 内质网提取试剂盒
BB-3606 BestBio 贝博生物 核糖体提取试剂盒
BB-36052 BestBio 贝博生物 植物内质网提取试剂盒
BB-3611 BestBio 贝博生物 植物线粒体提取试剂盒
BB-3612 BestBio 贝博生物 血小板线粒体提取试剂盒
BB-3622 BestBio 贝博生物 叶绿体提取试剂盒
BB-3631 BestBio 贝博生物 酵母线粒体提取试剂盒
BB-36112 BestBio 贝博生物 植物细胞核提取试剂盒
BB-36113 BestBio 贝博生物 微藻细胞核提取试剂盒
BB-3621 BestBio 贝博生物 植物原生质体制备试剂盒
BB-3630 BestBio 贝博生物 酵母原生质体制备试剂盒
细胞和细胞器及间质的分离
第一篇组成人体的细胞 第三章亚细胞结构的分离与鉴定 细胞山各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一日标的基本手段。一般认为，转速为10?25Kr/mm的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。U前超速离心机的最高转速可达lOOKr/min, 离心力超过500Kg。 第一节亚细胞结构分离的技术 分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆 (Homogenization)是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆 介质(即0?25moLZL蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液)研磨，使细胞被机械地研碎成为各种 亚细胞组分和包含物的混合物。 分离亚细胞组分的第一步是分级分离。它通过山低速到高速离心技术，使非均一混合体中的颗粒按其大小轻《分批沉降到离心管的不同部位，再分部收集, 即可得到各种亚细胞组分。山于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时是均匀分布于整个离心管中，故每级分离得到的第一次沉淀必然不是纯的最巫的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。分离亚细胞组分主要离心技术是差速离心和密度梯度离心。 差速离心(differential centrifugation)是在密度均一的介质中山低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核糖体。山于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，一般重复2?3次效果会好一些。通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心(density gradient centrifugation)是用一定的介质在离心管内 形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过? 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离乂可分为速度沉降和等密度沉降两种。密度梯度离心常用的介质为氯化锂，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不商；pH中性或易调为中性；浓度大时渗透圧不大；对细胞无毒。①速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于彼分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒(细胞或细器)在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离：②等密度沉降(isopycnic sedimentation)适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。 等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。再者，这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10、100倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。因此，这种方法适于分
油水分离器使用说明
油水分离器使用方法 油水分离器就是串联在机组进油管路中，将油和水分离开来的仪器，原理主要是根据水和燃油的密度差，利用重力沉降原理去除杂质和水份的分离器，内部还有扩散锥，滤网等分离元件。 Lees power 可针对不同地区油品以及客户要求在发电机组加装此装置，且确保机组出厂前每一个此装置都经过严格测试。下面为大家讲诉如何使用油水分离器。分两部分： 一、初次使用 二、排放完积水杯内的水或者杂质后的使用方法 首先，我们先来了解下油水分离器是如何串联在机组进油管路中的：（进油油路） 图一图二图三 使用方法： 一、初次使用（工具13#开口扳手，抹布适量） 用户在初次使用发电机组时，首先将底部油箱加满柴油后。 然后使用13#的开口扳手（图1），将（图2）红色圈内的柴油滤清器总成上的螺栓逆时针方向松开后（图4），在将（图5）中红色圈内手压油泵，向下压10-15下，将柴油滤清器内部的空气排出（伴随有少量柴油）。同时会发现（图6）油水分离器的积水杯中已经吸有油箱中的柴油。 图1图2 图3 图4 图5图6 图7 图8 持续按压图五圈内手压油泵，直至油水分离器积水杯中注满油，如图7；然后将图8柴油滤清器总成上的螺栓顺时针拧紧。图七图八此时方可开启机组 二、排放完积水杯内的水或去除杂质后的使用方法 （工具13#开口扳手，抹布适量） 机组长时间使用或者油品不纯净的情况下，油水分离器积水杯内积存大量水或者杂质。此时需要对油水分离器进行清理工作。操作如下： 先用13#的开可扳手将图9红色圈内的积水杯底的白色放水栓顺时针方向松开如图11，将水
排出后（如是杂质直接卸下放水栓）再逆时针将白色放水栓拧上（放水栓为塑料易损件，故而确保不漏油即可），至图12状。然后重复图1-图8动作将油水分离器积水杯内吸满油。方可再开启机组。注：无论在何时开启机组都请确认油水分离器积水杯内柴油是满的，方可开启机组。否则机组开启后会立刻报警。 图9图10图11图12
油水分离器使用说明书
油水分离器使用说明书 1 ．概述 舱底水分离器是在积累多年研制经验及吸取国外先进技术的基础上采用真空及微滤原理研制成功的新产品。可用于处理船舶舱底油污水，也适用于工矿企业、油库等含油污水处理，并能处理含乳化油浓度较高的油污水，性能符合国际海事组织规定的船舶含油污水排放标准及我国政府规定的船舶、工矿企业油污水排放标准，并符合国际海上环境保护委员会 IMO-MEPC107 ( 49 ）决议规范要求。本产品己获得中国船级社颁发的国际通用的型式认可证书。 本装置有下列特点： ( l ) 配套泵不直接吸入含油污水，因此避免了原含油污水的乳化，保证分离装置有较高的分离效果。 ( 2 )分离器中的第一级聚结分离元件能自动反冲洗，不会堵塞，长期使用不需要更换。 ( 3 ) 有良好的排油自动控制及配套泵的安全保护措施，根据油污水性质能自动控制一级处理排放或转入二级处理排放，以及处理不合格时自动关闭排出口不合格处理水返回机舱功能。操作简便，可靠性高，符合无人值班机舱要求。 ( 4）装置由一级分离器、二级分离器、螺杆泵（柱塞泵）、电气控制箱、油份浓度报警记录仪、粗／精滤器、三通转换阀（电磁转换阀）等组装在公共基座上，必要时也可以根据机舱位置将一级油水分离器和电气控制箱及二级乳化油分离器和油份浓度报警记录仪分开独立安装。 3 ．基本工作原理（型舱底水分离器系统原理图） 配套螺杆泵（柱塞泵）在一级分离装置排出口处抽吸处理后的排水过程中，使一级分离装置内产生真空，舱底水经粗过滤器和上部吸水／排油阀进入分离器内部扩散喷口，进行初步油水分离，大油滴浮至顶部，含有小颗粒油滴的污水向下进入特制的聚结器，在内部进行聚结分离，形成较大油滴，上浮至顶部集油室。一级处理后的污水则向下经分离器底部排出，流向底部进水三通阀（电磁阀），进入单螺杆泵（柱塞泵）吸入口，从泵的排出口流出再经过排水三通阀，一、二级转换三通阀（常开、常闭电磁阀）和一级排水截止止回阀排向舷外。 当一级分离器排出的水不合格时，油份报警记录仪发出信号，转换三通阀（常开、常闭电磁阀）动作，一级排放水进入二级乳化油分离器继续进行微滤分离处理。合格的排放水经二级排水三通阀（二级排水截止止回阀）排向舷外，每隔三十分钟再回复至一级分离器处理，恢复上述处理工况。当二级乳化油分离器处理性能失效，二级排放不合格时，油份报警记录仪再次发出信号，回舱气动阀（回舱电磁阀）打开，处理水经此阀回舱底。 当处理工况为二级微滤分离时，二级分离器中上部的排污调节阀为常开式，一部分带有细小固体悬浮物的油污水通过此阀回舱底以减少微滤器堵塞阻力，排污调节阀的开启量，通过观察流量计调节至额定的l / 2排出水量。 分离后的污油在一级分离器的顶部集聚到一定程度时，油位检测器触发信号，气控型分离装置使一级处理电磁阀开启，压缩空气同时进入三只三通阀的顶部气缸，推动活塞向下，关闭常通口，打开常闭口，舱底水暂停进入分离器，分离后的水暂停排出。海水（清水）由进水三通阀的常闭口进入泵吸入口，从泵的出口再通过排水三通阀的常闭口进入分离器底部，逆向经过聚结器进行反冲洗，并使分离器内部由真空变成压力状态。集聚在顶部的污油通过上部吸水／排油三通阀的常闭口排向污油柜。 4 ．装置的主要配套件 4 .1 .电气控制箱 4 .1 .1 专用泵的启动，停止及一、二级自动转换原理（见图2电气原理接线图） 舱底水分离器专用泵组由三相交流电动机带动单螺杆泵（柱塞泵）将含油污水吸入舱底水分离器。 当舱底油污水被处理完或吸入过滤器被堵塞时，均能使专用泵停止工作，其电器工作原理为： 当污水舱内液位过低出现吸空现象时，真空度下降至大气压力，或当吸入滤器被堵塞时，分离器上部的真空度将急剧上升，在出现这二种情况时，真空度有明显变化，通过电接点真空表转换成电信号，当真空度过高时，实际真空度指针（黑色针）与高真空度接触指针（绿色指针调整至一0 . 05MPa ）接通，当真空度过低时，真空度指针与低真空度接触指针（红色指针调整至一0 . 01MPa ）接通，切断安装在电器控制箱内的交流接触器电源，使电动机停止工作。 4 .1 .2 污油温度自控原理 为使集油室中高粘度的油通畅地排出，并防止污油粘结在油位检测器上造成控制失灵，在油位检测器附近设置了电加热自控系统。 其工作原理为：利用装在集油室中的温度检测元件接收信号，通过电接点温度表的一根实际温度指针和另二根高、低温度调节指针转换成电信号，对电加热器加热温度实行自控。一般调整至35℃～45℃。 4 .1 .3 自动排油原理 油位是通过电阻式油位检测器检测，其工作原理如下： 在一级油水分离器顶部的集油室中装有高位、低位两根油位检测器，利用油位检测器在水和油中的导电率不同，从而在油位检测器与油水分离器壳体之间产生不同的电信号去控制一级处理电磁阀（排油电磁阀）通过压缩空气打开吸水／排油三通阀排油通道，达到自动排油的目的。 本控制箱还备有手动排油控制。（此时应将排油转换开关拨置手动位置，手动排油动作则自动排油不起作用）。 4 .1 .4 控制箱其它功能说明 (1)本控制箱设有至机舱集中控制台的控制触头，以提供集控台上的灯光，显示 舱底水分离器在工作状态。 (2)控制箱通过两个安装在精滤器和乳化油分离器上的电接点压力表提供超压报警灯以提醒操作员更换失效的滤芯或乳化油
免疫细胞的分离和保存技术
免疫细胞的分离和保存技术 用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。由于检测的目的和方法有同，分离细胞的需求和技术也异。有的仅需分离白细胞，有的则需分离单个核细胞（mononuclearcell），其中含淋巴细胞和单核细胞（monocyte），有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。分离细胞选用的方法应力求简便可行，并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。现用分离细胞群的原则，一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分，另一则按照各类细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。 一、白细胞的分离 （一）血液中红细胞与白细胞比例约600～1000:1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离。 本法是利用血细胞自然沉降率的分离法，采集血液后应及时抗凝，通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min 后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。 （二）聚合物加速沉淀法 本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使红细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。 二、外周血单个核细胞的分离 外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞密度较大，为1.090左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075～1.090，血小板为 1.030～1.035。为此利用一种密度介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液（分层液）做密度梯度离心，使一定密度的
亚细胞结构分离的技术
亚细胞结构分离的技术 分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆（Homogenization）是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液）研磨，使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。 分离亚细胞组分的第二步是分级分离。它通过由低速到高速离心技术，使非均一混合体中的颗粒按其大小轻重分批沉降到离心管的不同部位，再分部收集，即可得到各种亚细胞组分。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时是均匀分布于整个离心管中，故每级分离得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。分离亚细胞组分主要离心技术是差速离心和密度梯度离心。 差速离心（differential centrifugation）是在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核糖体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，一般重复2～3次效果会好一些。通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心（density gradient centrifugation）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降两种。 密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； pH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。 ①速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离； ②等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被 100分离组分的最大密度。再者，这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10 ~倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。 分离亚细胞组分的第三步是对分级分离得到的组分进行分析，以确认。常要的分析方法包括形态和功能鉴定。
1下图是植物细胞亚显微结构模式图
简 答 题 1．下图是植物细胞亚显微结构模式图，据图回答（括号内填标号，横线上填名称） （l ）该细胞有氧呼吸的主要场所是（ ） 。 （2）本细胞所特有，动物细胞不含有的细胞器是 （ ） ，它是绿色植物进行 的 场所。 （3）对吸收水分有重要作用的结构是（ ） ， 此细胞若发生质壁分离，它将明显 。 （4）细胞中含有少量的遗传物质并与能量转换有关的 细胞器是（ ） 和（ ） 。 （5）图中1的主要成分是 ，它对细 胞具有 作用。 （6）细胞中的DNA 分子主要存在于（ ） 中。 2．右图是一个研究光合作用过程的实验。实验前溶液中加入ADP 、磷酸盐、叶绿体等。实验时按图示控制条件进行。并不断测定有机物合成率，用此数据绘成曲线。请你用已学过的光合作用知识，解释曲线形成的原因。 ?AB 段 。 ?BC 段 。 ?CD 段 。 3．将长势相同的3盆麦苗分别置于无色玻璃罩内（如下图）。请据图回答： （l ）甲盆覆盖着绿色透明膜，乙盆覆盖着 品红色透明膜。一段时间后，与丙盆麦苗相比， 甲盆的长势 ，原因是 ；乙盆的长势 ，原因 是 。 （2）甲盆内浇足含18O 的水，乙盆内充满 含18O 的CO 2。一段时间后，甲盆罩壁上出现含 18O 的 ，它是 产生 的；甲盆罩内的空气中出现含18O 的 ，它是 产生的；乙的罩壁上出现含18O 的 ，它是 产生的；乙盆植物细胞里出现含18O 的 ，它是 作用的产物。 4．下图是绿色植物体内与能量有关的生理活动图解，请据图回答下列问题： （1）图中叶绿素将光能转变为化学能时，首先将能量贮存在（ ） 中，然后再贮存在C 6H 12O 6中。 时间
细胞培养的基本方法-细胞分离技术
细胞培养的基本方法-细胞分离技术 细胞分离技术 一、从原代组织中分离细胞将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机 械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短, 以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。 1. 胰蛋白酶（Trypsin） ?在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4mn小片，通过悬 浮在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清液。重复清洗2到3次。 ?将盛有组织碎片的容器置于冰上，去除残留的上清液。加入0.25 %溶解在无钙镁的平衡盐 溶液中的胰蛋白酶（100mg组织加入1ml胰蛋白酶）。 ?在4C孵育6到18小时，使几乎没有胰蛋白酶活性的酶尽可能渗透进去。 ?移弃组织碎片中的胰蛋白酶，在37C孵育包含残留胰蛋白酶的组织碎片20到30分钟。 ?在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基，要 加入大豆胰蛋白酶抑制剂。 ?通过无菌不锈钢丝网（100?200mm过滤，分散所有剩余组织。计数和接种细胞，进行培养。 2. 胶原酶（Collagenase） ?用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4mm」、片，用Hanks'平衡液（HBSS清洗组织碎片 几次。 ?加入胶原酶（50?200单位/ml，溶解在HBSS中）。 ?在37C孵育4到18小时。加入3mM CaCI2增加解离效率。 ?通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。 如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的胶原酶。 ?通过离心在HBSS中清洗悬液几次。 ?再一次在培养基中悬浮细胞，计数和接种细胞，进行培养。 3. Dis pase ?用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4mn小片，用不含钙镁的平衡盐溶液清洗组织碎片 几次。 ?加入Dispase （0.6?2.4单位/ml溶解在无钙镁的平衡盐溶液） ?在37C孵育20分钟到几个小时。 ?通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的
细胞器线粒体的分离与观察
细胞器线粒体的分离与观察 高熹1120152430（李安一） （北京理工大学生命学院16121501班） 摘要：差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。离心分离出细胞核与线粒体，进行染色，对细胞核和线粒体的形态进行观察并记录。 关键词：差速离心法；细胞核；线粒体；实验。 1 引言 差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。 线粒体是真核细胞特有的，司能量转换的重要细胞器。细胞种的能源物质——糖、脂肪、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸华生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体的结构和功能的研究通常是在离体线粒体上进行的。 制备线粒体用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法。在一给定的离心场中（对于所使用的离心机，就是选用一定的转速），球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一均匀悬浮介质中离心某一时间内，组织匀降中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉降的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可依次再分离。 悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意样品保持4，避免酶失活。 线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法。詹纳斯绿B（janus green B）是对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引而堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。 Giemsa染液为天青色素、伊红、次甲蓝的混合物，本染色液最适于血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色。染前用蛋白酶等进行处理，然后再用姬姆萨染液染色，在染色体上，可以出现不同浓淡的横纹样着色。姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。 2 实验器材及材料 2.1 实验材料 大鼠肝脏。
下图中a与b分别表示动物或植物的细胞亚显微结构模式图
下图中A与B分别表示动物或植物的细胞亚显微结构模式图：(请在括号中填数字代码,横线上填文字。) （1）[ ]图表示植物细胞,判断 的依据是：此细胞具有 [ ] ，[ ] 和。 （2）在A细胞中具有而在B细胞中 没有的细胞器是 [ ] ，它与B细胞的 有关。 (3) 图中[1] 的主要成分是 和。其结构特点是，功能特点是。 (4) 图中[2]的主要成分是和。 （5）[3] 是进行新陈代谢的场所。 （6）图中[4] 的片层结构薄膜和基质中含有所需要的酶。 （7）细胞内的“动力工厂”是[ ] ，是的主要场所。其内膜向内凹陷形成。 （8）[5] 的功能是，在植物有丝分裂时，则与的形成有关。 （9）运输蛋白质的通道的细胞器是[ ] （10）[11] 是的场所。 （11）[6] ，在有丝分裂过程中消失和重建。 （12）除[4]和[9]具有双层膜外，[ ] 也具有双层膜结构。（13）[12]是染色质，它是能被染成深色的物质，其主要成分是和。 （14）[10] 是物质进出细胞核的通道。 （15）若该细胞是西瓜果肉细胞，则糖类主要存在于中。
根据下图回答: （1）这是_细胞有丝分裂的一个细胞周期图，该细胞进行有丝分裂的顺序是。 （2）在上图中，细胞中含有姐妹染色单体的是_____，染色体数量增加一倍发生在______，DNA数量加倍发生在。 （3）图5的最大特点是完成和_。（4）假设该细胞中有6个染色体，经过10次细胞分裂后所形成的子细胞中，其染色体数为_ __。 （5）观察染色体形态和数目的最好时期在___时期,观察到细胞最多的时期是在___ 时期。 （6）图4中时期的染色体、染色单体和DNA数目之比为 （7）染色体出现是在时期。 （8）请描述图3中时期的特点。该时期染色体、染色单体和DNA数目之比为 （9）动物细胞在有丝分裂过程中，纺锤体是由_形成的，在有丝分裂末期，不出现_，而是__凹陷，把一个细胞分裂成两个子细胞。
原代细胞培养之--细胞分离技术
原代细胞培养之－－细胞分离技术 原代细胞的分离和制作 人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。不同比重的分层液的配制和具体分离方法详见淋巴细胞分离培养的章节。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。 （一）机械分散法 所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤（常用注射器钝端）使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。 （二）消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。 1、酶消化分离法 酶消化分离法常采用胰蛋白酶和胶原酶，其分离方法如下： （1）胰蛋白酶分散技术
实验二 细胞器的分离与提纯
实验二细胞器的分离与观察 一、教学目的与要求 1. 学习利用差速离心法分离动物细胞的细胞器。 2. 掌握细胞核与线粒体的染色方法和现象。 二、实验原理 线粒体（Mitochondria，MT）是真核细胞特有的，进行能量转换的重要细胞器，有“细胞动力工厂”之称。细胞中的能源物质——脂肪、糖、部分氨基酸在线粒体中进行最终的氧化，并通过耦联磷酸化生成A TP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 制备线粒体采用组织匀浆悬液介质中进行差速离心的方法。在给定的离心场中（对于所使用的离心机，就是选用一定的转速），球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在均匀悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次分离。 悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意使样品保持4℃，避免酶失活。 线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法。詹纳斯绿B（Janus green B）是对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。 三、实验用品 器材：冰箱、纱布、瓷研钵、高速冷冻离心机。 材料：新鲜的猪肝脏。 试剂：见PAGE 64 四、实验步骤 1. 制备猪肝细胞匀浆。实验前购买新鲜猪肝脏备用。 割取一小块肝组织，迅速用生理盐水洗净血水，用滤纸吸干。称取肝组织1g，剪碎，用预冷到0-4℃的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液洗涤数次。然后在0-4℃条件下，按每克肝加4ml 冷的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液将肝组织匀浆化，蔗糖溶液应分数次添加，匀浆用双层纱布过滤备用。注意尽可能先充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。 2. 差速离心。先将5ml 0.34mol/L缓冲蔗糖溶液放入离心管，然后沿管壁小心地加入5ml 肝匀浆使其覆盖于上层，用高速冷冻离心机进行差速离心。 3. 滤液经700×g离心10min，分离核和杂质沉淀。 4. 取上清液10 000×g离心10min，沉淀为线粒体。 5. 沉淀经再次洗涤、离心后，即可得到纯度较高的线粒体。 5. 分离物鉴定。
油水分离器使用时需要注意哪些事项
安装油水分离器时，污水进水口一定要比设备进水口高，因为不同型号的进水口高度不同，所以在安装的时候也要把握好设备安装的位置，不过不管怎么安装，要保证设备要在一条水平线上，还要在出水口处接通排污管，排油口也要用盆或者桶接着。那安装好之后，它在使用的时候需要注意哪些事项呢？ 1、设备可直接安装在含油污水流经的通道上，把污水出口对准油水分离机带格栅的进口即可，与其它设备可用管道连接。底部的排污管线可与污泥脱水装置连通，如未配污泥脱水装置可直接接入排污管。 2、油水分离时必须调正其水平位置，不得有误差。 3、第一次使用前，应先在装置内注满自来水，而后调节设备上调节板的位置，直到出油口只出油不出水为止。 4、调节板调正后，请不要随意乱动，否则将影响出水的水质。 5、应注意将进水口过滤网上的杂物倒掉，并清理干净。 6、应注意清理集油箱内的废油：先打开油箱下部排水阀，排掉一部分水，
而后把废油收集。请保持设备的外部整洁。 7、使用后，应将杂物筐每天提出挂油倒垃圾，并将水上浮油清除掉，箱体每2周清扫一次，将粘在隔板金属表面的油污用刀刮掉，底部垃圾要求清除干净。清理完毕恢复原状。 8、当油水分离机的出水、排水管堵塞时，将箱盖罩拿掉，因有臭气溢出，应快速清通，清通后将排水口迅速盖上。 9、在使用过程中应定期冲洗设备内部，一般每半月冲洗一次，或视情况而定。 10、每月至少彻底清理油水分离机的隔渣箱和隔油箱一次，清理箱里面的沉渣和油泥，并检查电控部分是否正常工作，清理完毕后必须将油水分离器注满清水。 11、污水进口处一定要安装隔渣网，一定要确保整个油水分离机在同一水
平线。 12、每天对隔渣箱和隔油箱清理若干次，以保证水流平缓畅通和提高隔油效果，在对油水分离机做清理之前请注意先关掉电源。 以上内容由河南上田泵业有限公司提供，如有不清楚的或者是购买需求，可致电咨询。
(生物科技行业类)灏洋生物向您介绍几种细胞的分离方法
灏洋生物向您介绍几种细胞的分离方法： 白细的胞分离：（加速红细胞沉降法） 加速红细胞沉降法利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状，从而加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纤维素等。 （1）试剂及配制 3%明胶（灏洋生物产）（粘度为25泊以上）：选取优质明胶，用生理盐水配成3%溶液，置沸水浴加热溶解，分装，高压蒸汽灭 菌8磅15-20min. 6%右旋糖酐（灏洋生物产）（分子量200-400KD）：用生理盐水配制。 操作方法分为2种。 第一种：①取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水溶液中，混匀或用3份血液与1份3%明胶溶液混匀；②将试管直立静置室温或37℃温箱中30-60min,利用明胶与红细胞的粘合作用，促使红细胞快速下沉，而白细胞留在明胶溶液中；③用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液，移入另一试管中；④按自然沉降法④-⑤操作。 第二种：①取1份右旋糖酐溶液加等量抗凝血，混匀；②按操作方法1的②-④操作。 外周血单个核细胞分离试剂：（聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法） 外周血中单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单核细胞比重为1.075左右。利用比重1.077左右的分层液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 1．试剂及配制 ⑴聚蔗糖泛影葡胺分层液（LTS1077）：（灏洋生物有成品供应），比重为1.077±0.001 ⑵台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100ml ,1500r/min离心15min,吸出上层液，即为4%水溶液。用前，1.8%氯化钠溶液1倍，即为2%台盼蓝染液。 2.操作方法 ⑴取静脉血放入抗凝管，摇允，用Ph7.2-7.6 Hank 液稀释血液1-2倍。 ⑵取LTS1077聚蔗糖-泛影葡胺分层液（灏洋生物产）3-4ml,放入15X150mm试管中。 ⑶用毛吸管吸取稀释血液，在离分层液上1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，稀释血液与分层液体积比例约为2：1。 ⑷用水平离心机以2000r/min离心30min,离心后管内容物分为三层，上层为血浆（内含血小板），中间层为分层液，底层为红细胞和多核白细胞。在上、中层液体界面处可见到乳白色浑浊的单个核细胞层。 ⑸用毛细吸管轻轻插到白膜层，沿试管壁周缘吸取界面层单个核细胞，移入另一试管中。 ⑹加5倍以上体积不含Ca2+、Mg2+Hank液，混匀，1500r/min离心10min,吸弃上清，重复洗涤2次。 ⑺末次离心后，吸尽上清。按每毫升血液标本加0.2ml含20%小牛血清Hank液重新混悬细胞。取1滴细胞悬液置血球计数板内计数。然后细胞浓度调节至2X106/ml ⑻细胞活力检测：取1滴细胞悬液加1滴2%台盼蓝染液混匀，加盖片，显微镜高倍镜检。活细胞不着色，折光强；死细胞被染成蓝色，体积略膨大。活细胞数应在95%以上。 3．注意事项 ⑴用稀释后的全血可是单个核细胞得率高，将稀释的血液叠加于分层液上时，一定要细心，动作要轻，避免冲散分层液面或与分层液混合而影响分离结果。 ⑵配制单个核细胞悬液所用的培养液要求等渗，具缓冲作用，并对细胞无毒性。 ⑶吸取单个核细胞时，应避免吸出过多上清液或分层液而导致血小板污染。 ⑷配制好的单个核细胞可放室温或0-4℃，后一条件较好，可减低细胞代谢活动。注意不要迅速改变其所出的温度，以免造成“温度”休克。 通用型细胞分离液（LTS1130）的比重的配方（灏洋生物产） 取比重LTS1077的人淋巴细胞分离液（灏洋生物产）3ml ,放入15X150mm试管中。 用PBS将肝素抗凝血稀释1-2倍后，将稀释全血加到LTS1077分离液上，稀释的血液：分离液约为2：1。 用水平离心机以1500r/min离心10min,离心后，单个核细胞位于血浆和分离液的界面层，红细胞和粒细胞沉淀在
植物细胞器的分离
植物细胞器的分离 一、叶绿体的分离： 1.实验原理： 采用差速离心法，利用不同颗粒的大小形状不同导致沉降速率不同，把叶绿体的颗粒沉降出来。 2.实验材料及试剂： 成熟的猪笼草、山梨醇、Tris、EDTA与β-巯基乙醇均为Amresco产品、细胞器分离缓冲液:300 mmol/L山梨醇, 50mmol/L Tris-HCl(pH为8.0), 5 mmol/L EDTA(pH 8.0), 0.1%β-巯基乙醇(临用前加入)。 3.实验器材： SG350C多功能食品料理机(上海天航电器有限公司) , GL21M高速冷冻离心机及配套的2号角转头(湘仪集团) 山梨醇：配制体积：100 mL，浓度：3 mol/L；分子量：182.17g/mol 需要称取质量g:=100 mL*3 mol/L*182.17g/mol=0.1L*3 mol/L*182.17g/mol=54.651g EDTA: 配置体积：100ml , 浓度：0.5mol/lL ,分子量：292.248g/mol m= 0.5mol/L *100mL *292.248g/mol =14.6124 g LEDTA : 配置体积:100ml 浓度：25mol/L ,分子量：292.248g/mol m=2.5mol/L*100mL * 292.248g/mol=73.062g 4.制备方法 4.1 叶绿体粗提物的制备 （1）. 取25 g叶片置于100 mL充分预冷的细胞器分离缓冲液中,用食品料理机匀浆2 min(5000r/min), （2）. 然后将匀浆液用4层纱布过滤于500ml烧杯, （3）. 滤液于4℃、700g在1000r/min离心10 min,
船用油水分离器原理及操作步骤
油水分离设备主要组成部分，包括控制箱，分离器(内有滤板、滤心等)，管路，专用配套泵，自动排油监控系统(排油电磁阀、加热器、压力表、温度表及探头等附属设备)，等。 检验依据是MARPOL73/78公约和2004国内航行海船法定检验技术规则。 任何部分的缺陷都会影响设备分离效果，所以总的要求是整体处于良好状态。 1检验控制箱 控制箱有泵浦电控箱、自动排油电控箱及排油监控系统电控箱等，有的是结合在一起，有的是分开的。 检查时，主要查看各电控箱能否对相关的用电设备正常供电及控制，有关指示灯能否亮。若电源指示灯不亮，则可能是总配电板或分配电板上油水分离设备电源开关未合闸，或电控箱内保险丝断了。 2检验分离器和管路 (1)检查分离器 查看分离器简体，确认： ·无严重锈蚀，无锈穿现象。 ·铭牌明显，标明的处理能力与证书相符。 ·查看筒体上取样口的龙头，畅通，开关自如。 (2)检查分离器的安装 安装要求是，任何情况下，都不会因虹吸作用而使分离器内水位下降，更不允许存在排空的可能。 具体衡量标准是： ·如果分离器安装在轻载水线以下，分离器的顶部要低于船舶轻载水线lm以上，或分离器排水管的舷外排出口高于分离器顶部1m以上： ·如果分离器安装在轻载水线以上，则排水管必须高于分离器顶部lm以上，并在排水管的最高点上设有透气管和透气阀。 (3)检查管路 查看有无不经油水分离器而直接排往舷外的旁通管路。若有，必须割除。若暂时不具备割除的条件，允许临时用盲板封死。 查看管路是否锈蚀严重，有无漏水现象。 3专用配套泵 (1)查看确认设有专用配套分离泵 泵的种类对油水分离器性能有显著影响。因为油水分离器的速率取决于油滴的直径，油滴直径的大小关系到分离效果，因此含油污水在进入油水分离器前就应尽可能防止其中的油滴破裂。这显然与供液泵的形式和排量密切相关。 船上的专用配套分离泵，一般为转速慢、行程小、口径大、能减小油水乳化的往复泵。 (2)查看泵的排量 泵的排量，根据IMO大会决议A．393(X)规定，必须小于或等于分离器额定处理能力的1．5倍。如果超过，应要求船方更换。 4检验排油监控系统 (1)检查报警功能 可通过试验，检查排油监控系统的报警功能，如：按动试验按钮；或无试验按钮而有试验孔时，打开试验孔盖，插入如毛刷之类的物体试验。 在船检做产品性能试验时(船上检查时一般不用)，可在油水分离器简体内充满水
常用的微生物分离纯化方法
(一)常用的微生物分离纯化方法 菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,分离纯化效果好,现分别简述如下 1.稀释混合倒平板法 平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中,冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。该法是先将待分离的含菌样品,用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法,稀释倍数要适当),然后分别取不同稀释液少许(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中,倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基,迅速旋摇,充分混匀。待琼脂凝固后,即成为可能含菌的琼脂平板。 于恒温箱中倒置培养一定时间后,在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。
挑取单一个菌落,一般再重复该法1-2次,结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。 图4混合倒平板操作法示意图图5涂布平板操作法示意图 2.稀释涂布平板法 采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固,不能充分混匀。
在微生物学研究中,更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基,先倒入无菌培养皿中,制成无菌平板。待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面,倒置温箱培养后挑取单个菌落。 另一种简单快速有效的涂布平板法,可省去含菌样品悬液的稀释,直接吸取经振荡分散的样品悬浮液l滴加入1号琼脂平板上,用一支三角形无菌玻璃涂棒均匀涂布,用此涂棒再连续涂布2号、3号、4号平板(连续涂布起逐渐稀释作用，涂布平板数视样品浓度而定),翻转此涂棒再涂布5号、6号平板,经适温倒置培养后挑取单个菌落。该法可称之为玻璃涂棒连续涂布分离法。 3.平板划线分离法 先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来。经培养后,可在平板表面形成分散的单
血细胞分离技术
第十八章血细胞分离技术 （Separation technique of the blood cell） 一、原理 在体外进行细胞免疫检测时，首先必须进行淋巴细胞的分离。分离淋巴细胞的 方法很多，但不管采用哪种方法，均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而且不 丧失活性，同时也要求分离技术简单、操作方便。 外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一，两类细胞的大小和密 度不同，其沉降速度也就不同。红细胞的自然沉降率较快，加入高分子量的聚合物，如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度离心法或二者 结合，可以将淋巴细胞从血液中分离出来。这种分离出的淋巴细胞一般包括单核细胞。除去单核细胞，可以利用单核细胞的吸附功能，如铁颗粒、玻璃面或尼龙网等，除去（或分离）单核细胞，从而提纯淋巴细胞。 二、采血 （一）材料与试剂 1．抗凝剂 （1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶 原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的 肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。 （2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成4％的溶液 备用。 · 1 ·
（3）阿氏液（Alsever液），配方如下： 枸橼酸钠（Na3C6H5O7·5H2O）0.80g 枸橼酸0.0325g 葡萄糖 2.05g 氯化钠0.42g H2O 加至100.00ml 混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。 阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。 2．针头根据不同动物和采血部位，采用不同型号的针头，用前必须灭菌或 消毒。 3．采血容器注射器或三角瓶等。 4．采血动物。 （二）操作方法 1．采血法各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳 静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断 腋下血管或剪断眼球采血。 2．抗凝采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实 验的要求和条件而定。最常用的方法如下： （1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血 液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻 摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽 取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。 （2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4％溶液，然后 按预采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。 采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。 （3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（根据采血量多少而定）清洗后，装入 采血容器中，灭菌后备用。采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中 滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。本法虽较麻烦，但对淋巴细胞的 活性影响最小，且可减少血小板的混杂。 （4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，边采边轻轻摇动 采血瓶，使之混匀。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。一般在4℃ 条件下，阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。 · 2 ·