结核病实验室要求
一、实验室生物安全
实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR 核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求。
实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，严格按照标准化、规范化的操作程序进行各项实验室操作。
菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。
废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应严格按照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。
（一）痰涂片镜检实验室基本要求
1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室内应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。
7.实验室应设置洗手池、洗眼器或喷淋设备。
8.实验室中的器具和实验台应坚固耐用，在实验台、生物安全操作柜和其他设备之间及下面，应留有足够空间，以便于清洁。
9.实验室中可开启的窗户应安装纱窗。
10.实验室应有适当的消毒设备。
11.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。
12.实验室应装备开展痰涂片检查所需要的仪器和设备。
（二）结核分枝杆菌培养实验室基本要求
1.满足国家生物安全二级的基本要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。
3.个人防护，在实验室工作时，应该穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。
4.实验室墙壁、天花板和地板应光滑、易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。
5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。
6.实验室的门应带锁并可自动关闭，应有可视窗。
7.实验室内应配备二级生物安全操作柜、高压蒸汽灭菌器，以及分离培养所需的设备等。
8.应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。
9.有可靠的电力供应和应急照明，必要时，重要设备如培养箱、生物安全操作柜、冰箱等应设备用电源。
10.实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。
11.应有足够的存储空间摆放物品，以方便使用，在实验室工作区域外还应留有供长期使用的存储空间。
（三）结核分枝杆菌抗结核药物敏感性试验实验室基本要求
结核分枝杆菌药物敏感性试验，要求在生物安全二级及以上环境中进行。二、全国各级结核病实验室的基本要求
（一）人力资源基本要求
1.数量要求（出乡镇级可以兼职外，其余均要求专职，“--”为不要求）
工作内容
乡镇区县地市省级国家涂片1（可兼职） 2 2 2 2 分离培养- 1 1 2 2 消毒+洗涮- - - 1 1 药敏、鉴定、菌库管理- - 1 2 3 培训、现场督导、盲法复检- - 2 2 6 实验室诊断新技术及实施性研究- - - 1 6 合计- 3 6 10 20 2.资质要求
各级结核病实验室人力资源资质要求
岗前培训在职培训
时间频度时间涂片及相应质量保证4天1次/年3天/次
培养及相应质量保证2周1次/年3天/次
药敏、鉴定及相应质量保证2周1次/年3天/次
（二）工作区面积基本要求
各级结核病实验室工作区面积要求
功能收集标
本登记
涂片
镜检
培养基
制备
储存室培养
药敏及
鉴定
分子生物
学检测
消毒
洗刷
培训/
会议室
面积
(m2)
3 15 15 10 15 25 30 10 20 注：除工作区外，还应设置独立于试验区以外的办公区。是否设立4℃冷库和37℃温室视具
体工作而定，不作为基本要求内容。
（三）实施、设备、材料、生物安全的基本要求
1.涂片实验室
涂片实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施一个独立房间，有上下水及电的供应，通风和照明良好，试剂柜，调节室内温度湿度的设备（不得使用风扇）
仪器双目光学显微镜（配油镜头），荧光显微镜（开张荧光涂片镜检），定时器
耗材痰盒，破片，竹签，染色架，破片干燥架，破片盒，加热棒，漏斗，废物缸，滤纸、显微镜镜油
试剂石碳酸复红（若自行配制染液，需苯酚（分析纯）和碱性复红（生物染色专用）），亚甲基蓝，盐酸酒精
生物安全实验室门能关闭、实验室能通风、生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、工作服、口罩、帽子、手套，实验室出口处有洗手池
质量控制阳性、阴性质控片，质控制度
2.分离培养实验室
培养实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施符合BSL-2要求、有上下水及电的供应，通风和照明良好，试剂柜，调节室内温度湿度的设备（不得使用风扇）
仪器培养箱、（液体培养设备）、普通冰箱、蒸汽凝固灭菌器（若自制培养基）、涡旋振荡器、定时器、天平、离心机
耗材痰盒、培养管及培养管架、移液管、废液（物）缸试剂氢氧化钠、蒸馏水、培养基
生物安全实验室门能自动关闭、Ⅱ级生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、防护服、N95口罩、帽、手套、实验室出口处有洗手池洗手池、洗眼器等
质量控制质控制度、质控记录
3.药敏试验、菌种鉴定实验室
药敏试验、菌种初步鉴定实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施符合BSL-2要求、上下水、供电、通风、照明、温度湿度调节（不得使用风扇）、计算机、局域网或传真设备
仪器培养箱、（液体培养设备）、普通冰箱（具备4℃冷藏、-20℃冷冻功能）、蒸汽凝固灭菌器（若自制培养基）、涡旋振荡器、定时器、天平、离心机、环形加热炉（灭菌接种环）、超低温冰柜（如果需要菌株长期保存）
耗材痰盒、培养管及培养管架、移液管、接种环、冻存管、废液（物）缸试剂氢氧化钠、蒸馏水、培养基、菌种鉴定所用试剂
生物安全门禁系统、实验室气流控制、Ⅱ级生物安全柜、高压灭菌器、紫外灯、消毒剂、防护服、N95口罩、帽、手套、洗手池、洗眼器等
质量控制质控制度、质控记录
4.分子生物学实验室
分子生物学实验室设施、设备、材料、生物安全的基本要求
房间及设施试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区，如使用全自动分析仪，区域可适当合并
仪器（一）试剂储存和准备区
冰箱、混匀器、微量加样器、紫外灯、离心管、吸头、手套、工作服等耗材。（二）标本制备区
冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、水浴箱或加热模块、微量加样器、超声波水浴仪（如需处理大分子DNA）、紫外灯、超净工作台、消耗品等。
（三）扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪、微量加样器、紫外灯、耗材等
(四)扩增产物分析区
专用仪器设备（视检验方法不同而定）、微量加样器、紫外灯、耗材等。
试剂相关检测试剂盒
生物安全各区域必须有明确的标记，各工作区域内的设备、物品专用。
进入各工作区域按照单一方向进行，即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。
实验室出口处有洗手池
质量控制空白对照、阳性对照、阴性对照所需的试剂或菌株质控制度
4、分子生物学实验室要求
试剂储存、准备区
8级
+20Pa
标本制备区
-20Pa
8级 微正压
缓冲间
-20Pa
8-9级 扩增区
-20Pa
8-9级扩增产物分析区
机房
假想平面PCR实验室布置图
假想平面PCR实验室布置图
试剂储存、准备区
8级 +20Pa
标本制备区
-20Pa
8级 -20Pa
8-9级 扩增区
-20Pa 8-9级扩增产物分析区缓冲间
缓冲间缓冲间缓冲间
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性， 1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行， 2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。 耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。 1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。 2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。 3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。 结核病的实验室诊断方法及评价 (一)标本的采集 1．痰标本采集新发病人应在抗结核药物治疗前留取痰标本。治疗中的病人应停药2～3天后留取痰标本。病人于清晨漱口后，留取3～5ml合格的痰标本(深咳后吐出的黏液痰、脓样痰、干酪样痰、褐色血样痰或含少量新鲜血液的血痰)，遇到唾液或口永，应重新留取。至少采集3次。WHO推荐的采集容器为国际通用的螺旋盖痰瓶、可密封塑料盒或蜡纸盒。痰容器上应标明病人姓名、编号、检查项目和容器序号。 2.胃冲洗液幼儿不会吐痰，常将痰液咽下，故可用清晨空腹胃洗出液，直接涂片染色或进行结核杆菌培养，连续作三次可提高培养阳性率。胃液结核杆菌检出率以浸润性肺结核和干酪性肺炎为最高，其次为粟粒型肺结核。胃液、痰液或其他分泌物中结核杆菌检查，有时对诊断有决定性意义。 3.支气管肺泡灌洗和支气管冲洗支气管肺泡灌洗和支气管冲洗液至少5ml并以无菌容器盛装，以用于检验。 4.病灶组织或干酷块等先用组织研磨器磨碎后再行涂片。 5．尿液留全量夜尿，静置4或5小时后，弃上清液，取沉淀部分尿液10ml，3000rpm．离心30min，取沉渣涂片。 6.体液或脑脊液无菌操作收集体液或脑脊液，放置冰箱或室温24h，待薄膜形成后
结核菌的实验室检测
结核菌的实验室检测 实验室检查是确诊结核病、选择治疗方案、评价治疗效果的重要依据，也是发现传染源，控制结核病流行的重要手段。目前，结核病常用的实验室检查主要包括：痰涂片检查、痰结核菌培养及药物敏感性试验、分子生物学检查等。 1.痰涂片检查 痰标本采集： 一般应采集3种痰标本： 即时痰：就诊即时咳出的痰 清晨痰：清晨深咳出的痰 夜间痰：就诊前夜间咳出的痰。 痰标本的要求： 痰标本采集的时间、痰标本质量好坏和是否在使用抗结核药等均直接影响结核菌的检出。痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本。痰量为3ml～5ml。晨痰涂片阳性率比较高。当患者痰少时，可采用高渗盐水超声雾化导痰。 痰涂片结果：包括：阳性、阴性 结果的意义： 涂片染色阳性只能说明抗酸杆菌存在，不能区分是结核菌还是非结核分枝杆菌。由于我国非结核分枝杆菌病较少，故检出抗酸杆菌对
诊断结核病有极重要的意义。直接涂片方法简单、快速，应作为常规检查方法。涂片阴性不能排除肺结核，连续检查3次以上,可提高其检出率。 2痰结核菌培养 确定诊断： 临床怀疑肺结核，但直接痰涂片结果为阴性，为进一步明确诊断，可进行痰培养。确定诊断的培养检查应采集2个合格的痰标本，即夜间痰和晨痰。 耐药监测： 以耐药监测为目的的培养，主要是为了获得分枝杆菌的纯培养物用于药敏试验，所以一般选用涂片阳性的标本进行培养。 药敏试验：这是了解抗结核药物是否对结核菌敏感、诊断耐药结核以及指导结核病治疗的有效手段。 痰培养结果：包括：阳性、阴性 痰结核菌培养的灵敏度高于痰涂片检查，可直接获得菌落，便于与非结核分枝杆菌鉴别。未进行抗结核治疗或停药48-72小时的肺结核患者可获得比较高的检出率。痰结核菌培养所需时间较长，一般需培养4-8周。
结核病临床实验室检测
结核病临床实验室检测 当前，我国结核病临床实验室检测的分类：光学检测、免疫学检测、分子生物学检测和微生物学检测，其中微生物学检测是结核病检测的金标准，也是我国疾控系统所采用的主要方法。 光学检测包括胸透和X光片，该方法主要是临床用于肺结核的筛查，发现肺部的阴影和继发性结核的病灶，是临床上用于检测继发性结核的主要方法，灵敏度和特异性都非常差。 免疫学检测包括细胞免疫和体液免疫，其中，细胞免疫是利用结核分支杆菌的特异性抗原对患者的免疫细胞进行刺激，致使患者的免疫细胞释放出γ-干扰素等细胞因子，再通过检测细胞因子的含量来间接的判断是否感染结核分枝杆菌，该方法是最近几年比较火的一个项目，特别是在一些综合性医院，因为该项目收费高，各医院开展的积极性也比较高；体液免疫就是利用结核分支杆菌特异性抗原（LAM、38KD、16KD等）来检测患者体液中的lgM或lgG，灵敏度和特异性大概都在70%左右，该方法在前几年比较流行，但现在因为WHO的文章的反驳，大部分临床医院已经放弃了这种方法，还有少量的单位在使用，主要用于临床的辅助诊断。 分子生物学检测包括结核病的临床诊断和结核分支杆菌的药敏检测，结核病的分子生物学诊断主要是通过PCR等方法来检测痰标本或胸腹水等中的DNA或RNA片段，该方法相较于传统的微生物学来说具有快速和灵敏度高的特点，缺点就是操作比较麻烦，对操作人员的要求较高。结核药敏的分子生物学检测就是检测结核分支杆菌耐药基因的突变位点，该方法也比较快速，但目前研究比较清楚的耐药基因突变位点仅限于一线抗生素中的利福平和异烟肼等仅有的几种药，而我国是一个结核分支杆菌耐药比较严重的国家，仅仅有一线抗生素还不能满足临床的需要。 微生物学检测包括染色、培养和药敏实验，微生物学检测是结核病临床检测的金标准。染色有抗酸染色和荧光染色两种，是目前我国结防系统进行结核病初期筛查的主要方法，该方法简单、快速费用低，但阳性率比较低，据统计我国根据染色法进行结核病的筛查阳性发现率还不到10%；培养法包括固体培养法和液体培养法，固体培养基分改良罗氏培养基和酸性罗氏培养基，两者的区别在于对标本的要求不同，改良罗氏培养基要求的是PH值中性的标本，酸性罗氏培养基要求接种碱性标本即痰标本经过消化后不经过中和直接接种，据临床统计固体培养的阳性率在10~15%之间，阳性报阳时间21~28天为多，临床收费在10~40元之间。液体培养是以7H9培养基为基础，添加生长因子和抑菌剂，目前市场上的液体培养基以进口的为主，辅以仪器，以BD、赛默飞世尔和梅里埃，国产试剂和仪器目前还没有，在进口仪器中以BD公司的MGIT960一家独大，在中国90%的疾控系统和临床单位都拥有该仪器，该仪器是以购买为主，不投放，价格在70万元左右，据临床统计液体培养的阳性率30~45%左右，平均报阳时间在14天左右，临床收费在100~180元之间。药敏实验目前在中国有绝对浓度法和比例法，该方法是以固体罗氏培养基为基础，分别添加一线或二线抗生素，比例法的平均出结果的时间在28天，该方法无法做结核一线抗生素中的吡嗪酰胺，液体药敏的出结果时间在7~14天，结核药敏的临床收费是按每种抗生素收费的，固体法每种药的收费在7~25元/种药物，液体全自动药敏的收费在90~120元/种药物。
最新结核病实验室要求资料
一、各级各类实验室职责 （一）结防机构结核病实验室 1、国家结核病参比实验室 在卫生部和中国疾病预防控制中心的领导下，国家结核病参比实验室负责全国结核病实验室工作的规划、质量控制和生物安全等技术管理，为各级提供技术支持和技术服务。 根据国家结核病控制规划的要求，组织全国结核病实验室的工作，参与国家有关技术政策的制定和组织实施。 制定和推行结核病细菌学检查技术标准、操作规程及规章制度。 建立可行的全国结核病实验室质量控制标准和质量保证系统，并负责组织实施，协调、检查各省（市、自治区）结核病实验室工作。 除常规的分枝杆菌检查项目外，还应承担其它结核病诊断新技术，新方法的实施和基础研究，承担分枝杆菌最终的菌种鉴定工作。 开展有关的实施性研究。 培训结核病实验室技术人员。 接受跨国参比实验室的质量控制。 2、省级结核病参比实验室 在国家结核病参比实验室的技术指导下，负责全省结核病实验室工作计划的制定和实施、培训、督导和质量控制等技术管理。 按照国家和省结核病控制规划的要求，在国家参比实验室的统一部署下，规划本省结核病实验室工作，指导省内各级结核病实验室工作并提供技术支持。 根据国家结核病实验室质量保证体系的要求，组织全省各级实验室痰涂片镜检的质量保证工作，按要求对所辖的地市、县级实验室进行督导和评估，指导地市级实验室对各县级实验室的盲法复检和现场评估。 对本省各级结核病实验室所用耗材、试剂的质量进行评估和核准，为全省统一提供抗酸染色试剂，为省内开展分离培养的实验室统一提供培养基。 按国家统一的标准化操作程序开展涂片镜检、分离培养、药物敏感性测定和分离株的初步鉴定，有条件的省参比实验室，可建立完整的分枝杆菌菌种鉴定体系。
结核病实验室要求
一、实验室生物安全 实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。 实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。 菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。 废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。 （一）痰涂片镜检实验室基本要求 1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。 3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。 4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。 5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。 6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。 7.实验室应设置洗手池、洗眼器或喷淋设备。 8.实验室中的器具和实验台应坚固耐用，在实验台、生物安全操作柜和其他设备之间及下面，应留有足够空间，以便于清洁。 9.实验室中可开启的窗户应安装纱窗。 10.实验室应有适当的消毒设备。 11.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。 12.实验室应装备开展痰涂片检查所需要的仪器和设备。 （二）结核分枝杆菌培养实验室基本要求 1.满足生物安全二级的基本要求。 2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。 3.个人防护，在实验室工作时，应该穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。 4.实验室墙壁、天花板和地板应光滑、易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒
结核病实验室检查
结核病实验室检查 一、结核病实验室检查（共100题） 1.菌株保藏至少保存（）管。 A、1 ； B、2 ； C、3； D 、4。 答案：B 2.非结核分枝杆菌病系由人结核分枝杆菌、（）和麻风分枝杆菌以外的非结核分枝杆菌感染造成的。 A、非洲分枝杆菌； B、耻垢结核分枝杆菌； C、牛结核分枝杆菌； D、堪萨斯结核分支杆菌； 答案：C 3.Runyon分类法将非结核分支杆菌分为四群，有光产色菌；暗产色菌；（）快生长菌。 A、慢生长菌； B、不产色菌； C、产色变化菌株； D、 NTM复合群。 答案： B 4.结核分枝杆菌菌种鉴定用的培养基是（）培养基和（）培养基。 A、对硝基苯甲酸;
B、亚碲酸; C、芳香硫酸脂酶; D、噻吩－2－羧酸肼。 答案 A、D 5.在药敏结果（）的状况下，判断为结核分枝杆菌复合群。 A、PNB长，TCH不长； B、 PNB不长，TCH不长； C、PNB长，TCH不长； D、 PNB不长，TCH长。 答案：D 6.利福平的耐药相关基因为（）。 7.A、rpoB ； B、 pncA ； C、 katG； D、 inhA 答案：A 7.乙胺丁醇的耐药相关基因为（）。 A、rpoB； B、 pncA ； C、 katG； D、 embB。 答案：D 8.结核抗体检测方法有哪几种（）多选题。
A、酶联免疫吸附试验（ELISA）； B、免疫渗滤试验（DIGFA）； C、免疫层析试验（DICA） D、免疫印迹试验。 答案：ABCD 9.结核抗体检测优点有哪些（）多选题。 A、简便、快速； B、灵敏； C、特异； D 、应用面广。 答案：ABCD 10.抗原进入人体后，体液中的抗原被体液中的抗体消灭，若侵入了细胞则抗体就无能为力了,只能被相应的免疫细胞消灭。前者称为（），后者称为（）多选题。 A.细胞免疫； B、特异免疫； C、非特异免疫； D、体液免疫。 答案：DA 11.前处理试剂的成分（）。 A、4%NaOH； B、 2%NaOH； C、 4%HCl； D、 2%HCl。 答案：A
结核病的实验室诊断技术
!!作者单位""&!!!"杭州(浙江省中西医结合医院结核病治疗中心 结核病的实验室诊断技术 李!锋!朱!敏 !!!摘!要"!由于结核菌耐药性增强(以及不少国家和地区忽视对结核病的控制(使得结核病再次成为一个严重的全球性公共卫生问题’随着免疫学&分子生物学技术的飞速发展(目前涌现出许多新型诊断技术’本文总结目前结核病实验室诊断技术(作一综述’ !关键词"!结核病% 实验室诊断!!结核病作为单因致死率最高的传染性疾病(目前疫情再次呈现上升趋势’其诊断主要依靠医生的临床经验并结合传统的结核菌检测和胸部f 线检查’由于胸部f 线的特异性不强(常给结核病的诊断和鉴别诊断带来很多干扰’结核病的实验室诊断技术近年来发展迅速(本文就其现状及展望作一概述(归纳起来大致有如下几个方面" J @C :?J :)O $也有实验室通过色谱)&* 或质谱)%*来鉴定分枝杆菌中特异性的物质(该法可从涂 片阴性的标本中检测出分枝杆菌(但需要特殊的设备且耗资巨大’I !免疫学检测 *细胞免疫学检测目前常用纯化蛋白衍生物 #) I C ;G ;>H )C :@>;
结核病实验室要求
结核病实验室要求 LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】
一、各级各类实验室职责 （一）结防机构结核病实验室 1、国家结核病参比实验室 在卫生部和中国疾病预防控制中心的领导下，国家结核病参比实验室负责全国结核病实验室工作的规划、质量控制和生物安全等技术管理，为各级提供技术支持和技术服务。 根据国家结核病控制规划的要求，组织全国结核病实验室的工作，参与国家有关技术政策的制定和组织实施。 制定和推行结核病细菌学检查技术标准、操作规程及规章制度。 建立可行的全国结核病实验室质量控制标准和质量保证系统，并负责组织实施，协调、检查各省（市、自治区）结核病实验室工作。 除常规的分枝杆菌检查项目外，还应承担其它结核病诊断新技术，新方法的实施和基础研究，承担分枝杆菌最终的菌种鉴定工作。 开展有关的实施性研究。 培训结核病实验室技术人员。 接受跨国参比实验室的质量控制。 2、省级结核病参比实验室 在国家结核病参比实验室的技术指导下，负责全省结核病实验室工作计划的制定和实施、培训、督导和质量控制等技术管理。 按照国家和省结核病控制规划的要求，在国家参比实验室的统一部署下，规划本省结核病实验室工作，指导省内各级结核病实验室工作并提供技术支持。 根据国家结核病实验室质量保证体系的要求，组织全省各级实验室痰涂片镜检的质量保证工作，按要求对所辖的地市、县级实验室进行督导和评估，指导地市级实验室对各县级实验室的盲法复检和现场评估。 对本省各级结核病实验室所用耗材、试剂的质量进行评估和核准，为全省统一提供抗酸染色试剂，为省内开展分离培养的实验室统一提供培养基。 按国家统一的标准化操作程序开展涂片镜检、分离培养、药物敏感性测定和分离株的初步鉴定，有条件的省参比实验室，可建立完整的分枝杆菌菌种鉴定体系。
结核病实验室基本建设要求
结核病实验室基本建设要求 结核病实验室的建设，包括新建、改建和扩建，必须遵守国家有关法律、法规和规定，以及适应和满足社会对结核病控制和卫生服务的需求。 一、选址要求 结核病实验室建设首先考虑生物安全、环境保护和建筑技术规范等规定和要求，同时要避开化学、生物、粉尘、噪声、震动、强电磁场等污染源及易燃易爆场所。 二、建设 设计和建造应符合国家和地方建设规划。参照《生物安全实验室建筑技术规范（GB 50346-2011)》和《实验室生物安全通用要求（GB 19489-2008)》保证实验室用房达到生物安全标准，要有单独的办公用房。 三、验收 参照GB/T37140-2018检验检测实验室技术要求验收规范，实验室设计时应保证对生物、化学、辐射和物理等危险源的防护水平控制在经过评估的可接受程度，防止危害环境。 四、实验室生物安全及基本要求 实验室环境安全：结核病实验室设计原则遵循《WS233-2017病原微生物实验室生物安全通用准则》中关于实验室设施和设备要求。按照《人间传染的病原微生物名录》，针对结核分枝杆菌的各项操作，应在生物安全二级或三级实验室中进行。 结核属于第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
二级生物安全实验室从事高志致病性病原微生物实验室活动除应满足《人间传染的病原微生物名录》对实验室防护级别的要求外还应向省级卫生和计生行政主管部门申请。 三级和四级生物安全实验室从事高致病性病原微生物实验活动，应取得国家卫生和计生行政主管部门颁发的《高致病性病原微生物实验室资格证书》。 五、实验室分区及其基本要求 标本登记不少于3m2，涂片镜检实验室不少于15m2，培养基制备不少于15m2，储存室不少于10m2，培养室不少于15m2，药敏及鉴定不少于25m2，分子生物学实验室不少于30m2，消毒洗刷不少于10m2，培训/会议室建议在20m2左右。流程：标本接受-涂片镜检-培养-药敏实验。实验室需要由良好的自然通风，必要时应配备通风换气设备。接种、分离及鉴定细菌等操作应在生物安全柜中进行。为防止在对结核分枝杆菌等传染性极强微生物检验时引起交叉污染，保护工作人员健康，实验室应至少划分为3个区。 （一）清洁区：包括办公室、休息室、实验数据处理等等。此区域禁止进行病原等污染标本的检测和相关试验活动。 （二）缓冲区：位于清洁区与操作区之间的缓冲地带，穿戴隔离衣，设置水源供工作人员洗手及紫外灯消毒用品等。此区域禁止进行病原等污染标本的检测和相关试验活动。 （三）污染区（操作区）：实验室的操作区是开展实验研究的核心区域，最基本的要求如下。 1、整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方，为了减少粉尘流动，防止交叉污染，操作区应与外界分开。实验室工作人员进入操作区应穿隔离衣、佩戴口罩、帽子及鞋套。实验室必须设洗手池，宜设置在靠近实验室的出口处和实验室的缓冲区处，洗手龙头应为自动感应式、长手柄式或脚踏式，备有洗手消毒皂液，必要时配备快速手消毒液。 2、门禁：实验室的门应有可视窗，并可自动关闭；如有可开启式窗户，应安装可防蚊虫的纱
肺结核的实验室及其他检查
一、结核菌检查痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。痰菌阳性说明病灶是开放性的（有传染性）。若排菌量多（每毫升10万条以上），直接涂片检查易呈阳性，为社会传染源。厚涂片法能提高发现率。荧光显微镜检查适用于大量标本快速检查。无痰或儿童不会咳嗽，可采用清晨的胃洗涤液查找结核菌。成人可用纤支镜检查或从冲洗液中查找结核菌。痰菌量较少（每毫升1万条以下），可用集菌法。培养法更为精确，除能了解结核菌有无生长繁殖能力，并可作药物敏感试验和菌型鉴定。结核菌生长缓慢，使用改良罗氏培养基，一般需4－8周始能报告。使用含14C的棕榈酸作碳源底物的7H12培养基测量细菌代谢过程中所产生14C的量，即可推算出标本中是否含有抗酸杆菌（BACTEC法），在5－7天即可报告，比一般培养法缩短了时间，且可作药物敏感试验和菌型鉴定，但缺点是标本可因污染而影响检查结果。将标本在体外用聚合酶链反应（PCP）方法，使所含微量结核菌DNA得到扩增，用电泳法检出。1条结核菌约含1fgDNa ，40条结核菌即可有阳性结果。此法不用体外预培养，特异性强，2天可出报告，快速、简便，还可以作菌型鉴定，但时有假阳性或假阴性。 二、影像学检查胸部X线检查不但可早期发现肺结核，而且可对病灶部位、范围、性质、发展情况和治疗效果作出判断，对决定治疗方案很有帮助。除荧光透视和X线摄片处，必要时还可采用点片或特殊体位（如前弓位）摄片、体层摄片及支气管造影等。摄片结合透视能提高诊断的准确性，可发现肋骨、纵隔、膈肌或心脏遮盖的细小病灶，并能观察心、肺、膈肌的动态。荧光缩影X线检查适用于集体肺部健康检查。肺结核的常见X线表现有：纤维钙化的硬结病灶（斑点、条索、结节状，密度较高，边缘清晰），浸润性病灶（云雾状、密度较淡、边缘模糊）干酪性病灶（密度较高、浓度不一）和空洞（有环形边界的透光区）。肺结核病灶一般在肺的上部、单侧或双侧，存在时间较长，常有多种性质不同的病灶混合存在和肺内播散迹象。胸部CT检查对于发现微小或隐蔽性病变，了解病变范围及组成，对于诊断是有帮助的。三、结核菌素（简称结素）试验旧结素（old tuberculin，OT）是从生长过结核菌的液体培养基中提练出来的结核菌代谢产物，主要含有结核蛋白。在人群中作普查时，可用1：2000的OT稀释液0.1ml（5IU），在左前臂屈侧作皮内注射，经48－72h 测量皮肤硬结直径，如小于5mm为阴性，5－9mm为弱阳性（提示结核菌感染或非结核性分支杆菌感染），10－19mm为阳性反应，20mm以上或局部发生水泡与坏死者为强阳性反应。结素的纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）为纯结素，不产生非特异性反应。PPD-PT23是由丹麦制造供应世界许多国家使用，已经取代OT.我国从人型结核菌制成PPD （PPD-C），又从卡介苗制成BCG-PPD，0.1ml为5IU，用于临床诊断，硬结平均直径≥5mm为阳性反应。结素试验除引起局部皮肤反应外，还可引起原有结核病灶和全身反应。临床诊断一般使用5IU，如无反应，可在一周后再用5IU皮试（产生结素增强效应），若仍为阴性，大多可除外结核感染。结素试验阳性反应仅表示结核感染，并不一定患病。我国城市成年居民的结核感染率在60％以上，故用5IU结素进行检查，其一般阳性结果意义不大。但如用高稀释度（1IU）作皮试呈强阳性者，常提示体内有活动性结核灶。结素试验对婴幼儿的诊断价值比成年人大，因为年龄越小，自然感染率越低；3岁以下强阳性反应者，应视为有新近感染的活动性结核病，须给予治疗。结素试验阴性反应除提示没有结核菌感染外，还见于以下情况。结核菌感染后需4－8小时有变态反应充分建立；在这变态反应前期，结素试验可为阴性。在应用糖皮质激素等免疫抑制剂者，或营养不良及麻疹、百日咳等病人，结素反应也可暂时消失。严重结核病和各种危重病人对结素无反应，或仅为弱阳性，这都是由于人体免疫力连同变态反应暂时受到抑制的结果；待病情好转，又会转为阳性反应。其他如淋巴细胞免疫系统缺陷（如淋巴瘤、白血病、结节病、艾滋病等）病人和老年人的结素反应也常为阴性。四、其他检查结核病人血象一般无异常。严重病例可有继发性贫血。急性粟粒型肺结核可有白细胞总数减低或类白血病反应。活动性肺结核的红细胞沉降率（简称血沉）可增快，但对诊断无特异性价值，血沉正常也不能排除活动性肺结核。病人无痰或痰
结核病实验室要求内容
、实验室生物安全 实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR 核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2 ）的环境中进行。实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求。 实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，严格按照标准化、规范化的操作程序进行各项实验室操作。 菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。 废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应严格按照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。 （一）痰涂片镜检实验室基本要求 1. 实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。 2. 准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任何人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。 3. 个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。 4. 实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。 5. 实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。 6. 实验室内应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。 7. 实验室应设置洗手池、洗眼器或喷淋设备。 8. 实验室中的器具和实验台应坚固耐用，在实验台、生物安全操作柜和其他设备之间