细胞生物学实验指导
实验一动物细胞的传代培养
一、实验目的
1、熟悉细胞培养过程中的无菌操作技术。
2、了解细胞传代培养的基本方法和主要操作步骤
二、实验原理
细胞培养(cell culture)是指从机体内取出某种组织或细胞，模拟机体内的生理条件使其在体外生存、生长和繁殖的过程。细胞的体外培养在细胞生物学和医学研究领域有着极为广泛的用途，这一技术已成为研究细胞生理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞工程等课题的一项不可缺少的手段。细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供大量的生物性状相同的细胞作为研究对象，便于人们在体外利用各种不同的方法从不同的角度研究细胞生命活动的规律。另外，利用细胞培养技术还可使人们较为方便地研究各种物理、化学和生物因素对细胞结构和功能的影响。
细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进行的首次培养。而传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到一定密度后，将其从原培养容器中取出，以1：2或其他比例转移到另一个或几个容器中所进行的再培养。传代培养可简称传代。在体外培养过程中，要使细胞能正常地生长、繁殖，需经常对其进行传代。传代的累积次数就是细胞的代数。
在从事细胞培养工作时常常会接触到细胞系(cell line)和细胞株(cell strain)这两个容易混淆的概念。一般认为，细胞系指通过原代培养并经传代后所形成的细胞群体，由于细胞系来源于原代培养，而原代培养物中所含的细胞种类较多，故一个细胞系往往由多个生物学性状不同的细胞群体所组成，而细胞株是利用单细胞分离培养法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中选择出的细胞群体，一个细胞株往往具有特殊的生物学性状或标记并可持续存在。
细胞培养是一种程序复杂、条件较多且要求严格的实验性工作。由于细胞在体外的生长、繁殖会受到温度、营养物质、酸碱度、渗透压及微生物等多种因素的显著影响，故细胞培养工作的各个环节如培养器皿清洗消毒、营养液配制和除菌、pH值调整、温度调节等操作都有严格的要求和规定，特别要注意无菌操作，这是细胞体外培养成败的关键。
三、实验材料
人肝癌细胞株HepG2
四、实验器材
CO2恒温培养箱、超净工作台、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、电热高压蒸汽消毒锅、细胞培养瓶、培养皿、吸管、除菌滤器、小烧杯、100mL玻璃试剂瓶、橡皮瓶塞、酒精灯、记号笔。
五、实验试剂
1．DMEM培养液：用天平称取DMEM培养基粉剂(质量依实验所需培养液的总量而定)倒入烧杯中，按说明书要求加入三蒸水、NaHCO3、谷氨酰胺，利用磁力搅拌器使加入的固体物完全溶解，然后加入适量浓度为20000单位/mL的青霉素和链霉素，使培养液中这两种抗菌素的浓度分别达到100单位/L。再按比例加入胎牛血清，使其在培养液中的含量达到20％，将溶液充分混匀，用5%的NaHCO3和1M的HCl 调培养液的pH值至7.0-7.2。最后采用孔径为0.22μm的针头式滤器过滤除菌。
2．PBS(不含钙镁，pH7.2)：分别称取NaCl 8.00g、KCl 0.20g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.20g，加三蒸水溶解并定容至1000mL。
3．D-Hanks液；
①D-Hanks原液：分别称取NaCl 80.0g、Na2HPO4.2H20 0.6g、KCl 4.0g、KH2PO4 0.6g、NaHC03 3.5g，加三蒸水溶解至l000mL。配制时要注意按顺序逐一加入溶解，应等前一种药品完全溶解后再加下一种药品，原液配好后应分装于250mL或500mL玻璃瓶中，高压灭菌，置冰箱内贮存。②D-Hanks工作液：取D-Hanks原液l00mL，加三蒸水896mL，再加0.5％的酚红溶液4mL混合均匀即成。
4．0.25％胰蛋白酶(pH7.2-7.6)：称取活性为1：250的胰蛋白酶0.25g，另准备D-Hanks工作液100mL。先用少量D-Hanks工作液将胰蛋白酶粉调成糊状，再将剩余的D-Hanks工作液全部加入，充分搅拌使酶充分溶解，必要时可将容器置于36℃恒温水浴箱中，直至酶液清亮，再用NaHCO3调pH至7.2-7.6。然后用玻璃滤器除菌，分装于灭菌后的EP管中，密封后置冰箱冷冻室(-18℃)中贮存。
六、实验方法
（一）实验过程中无菌操作的要求
1．培养用品的清洗消毒：实验中所需的玻璃器皿(如培养瓶、离心管、吸管、小瓶等)和器械(如剪刀、镊子等)应彻底清洗干净，干燥后用牛皮纸包好置高压蒸汽消毒锅中消毒灭菌(蒸汽压力为103kPa，20min)。而培养液、PBS液、胰蛋白酶液、PBS液等应利用抽滤法除菌。
将已消好毒的实验所需物品收集并清点好置于超净工作台内，避免实验开始后再从工作台外取物而受污染。为操作时方便，工作台内的用品应合理布局，原则是右手使用方便的用品放在右侧，左手使用方便的用品放在左侧，酒精灯放在中央。
2．超净工作台的消毒：超净工作台在使用前可用75％酒精纱布将其内部揩擦一变进行初步消毒，然后打开工作台内的紫外线灯照射消毒20-30min。照射杀菌完毕后关闭紫外线灯并同时打开风机，由于进入工作台内的空气是经过工作台上的除菌滤板过滤的，故工作台内是一个相对无菌的环境。
3．手的消毒：操作时双手及前臂要伸入超净工作台内，事先双手必须用肥皂刷洗干净，然后用75％的酒精棉球擦拭消毒。在夏季，手的刷洗和消毒应至肘部；在冬季，双手消毒后进入工作台前应戴上无菌的袖套。
4．操作过程中的消毒：在超净工作台中开始操作时首先应点燃酒精灯，此后的一切操作如打开或加盖瓶塞、安装吸管皮头、使用吸管、使用各种金属器械等均要经酒精灯的火焰烧灼或在火焰旁边进行操作。培养操作时，动作要准确教捷，不能用手触及器皿的消毒部分，如不慎触及，要用火焰消毒或更换。开盖的培养液或培养用瓶应尽量保持斜位放置或平放，以避免瓶口长时间直立而增加细菌污染的机会。吸取不同液体时应分别使用不同的吸管，不要混用以防扩大污染。
（二）细胞的传代培养
当培养瓶中的细胞已长成致密单层时即可进行传代培养，其操作步骤如下。
1．准备：
①将所需培养用具清洗消毒后放入超净工作台内并摆好，紫外线消毒30min。
②将已形成致密单层细胞的培养瓶从培养箱中取出放入超净工作台中。
③点燃酒精灯，在酒精灯旁将培养液倒入一小烧杯中。
2．消化：
①向培养瓶中加入消化液(0.25％的胰蛋白酶)500μL，轻摇培养瓶，使消化液湿润整个细胞单层，置室温下2-3min。
②翻转培养瓶使其底部朝上，用肉眼察看细胞单层，如细胞单层上出现空隙(约针孔大小)时即可倒去消化液；如果末见空隙，说明消化程度不够，可将消化时间稍延长；如果发现细胞已大片脱落，说明已消化过，在这种情况下不能倒出消化液，而应直接进入下步操作。
3．终止消化：往培养瓶中加入3.5mL培养液以终止胰蛋白酶的消化作用，用吸管吸取瓶中的培养液反复冲击瓶壁上的细胞，直至全部细胞被冲下，轻轻混匀制成细胞悬液。
4．计数：吸取少量细胞悬液于细胞计数器的小室中，光镜下计数，根据结果将细胞浓度调整至5×105/mL(细胞接种的密度亦可根据经验进行)。
5．传代：吸取2mL细胞悬液移入另一培养瓶中，原培养瓶中留下2mL细胞悬液(其余弃去)，并向每瓶中加入新培养液4mL，盖好瓶塞，轻轻摇匀后置37℃恒温箱中培养。
6．观察：传代后每天应对培养的细胞进行观察，若细胞贴壁存活则称为传了一代，如培养液变酸发黄要及时更换。
七、注意事项
在整个细胞体外培养过程中，要始终保持无菌的概念，在操作的众多环节中要注意消毒灭菌，努力做到最大限度的无菌，严防细菌的污染，否则将导致细胞培养的失败。
八、实验报告
写出细胞传代培养的实验记录。并记录传代培养后的贴壁细胞的生长情况。
九、思考
1．在细胞培养过程中，培养液的颜色为什么会变黄？
2．在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些？
实验二绿色荧光蛋白重组质粒的细胞转染
一、实验目的
1．了解细胞转染的实验原理
2．掌握细胞转染的方法
二、实验原理
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。一些传统的转染技术，如DEAE右旋糖苷法，磷酸钙法，电穿孔法，脂质体法各有利弊。
除上述传统方法外，近年来国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高。其中聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是一种多用途的转染试剂对各种贴壁细胞有较高的转染效率、也适用于转染悬浮细胞和原代细胞。可用于转染大分子DNA、小分子寡核苷酸和siRNA等。PEI是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常作为核心组成成分。
本研究即取传代培养后细胞融合率在70%-90%的HepG2细胞，将构建好的含有绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因标记的重组质粒，转染细胞并使细胞表达EGFP报告基因。
三、实验材料
体外培养的人肝癌HepG2细胞株。带有EGFP报告基因标记的质粒。四、实验试剂
无双抗的PBS缓冲液，无双抗15%血清DMEM，胰酶，无血清无双抗的DMEM培养液。
五、实验方法
细胞转染操作（以6孔板或35mm细胞培养皿为例）
1．待细胞长至75%密度时（此时效果为最佳），准备转染。
2．取A、B两个EP管，分别加入100μl无血清无双抗DMEM，A管中加入8μL PEI转染试剂，B管中加入4μgDNA，分别孵育5min。
3．将A、B混合（A加入B中），用移液枪吹打混匀，复合物孵育15min。
4．取待转染的细胞，弃掉旧的培养液，用无血清无双抗DMEM清洗细胞两次（注意清洗时动作要轻），每孔中补加1.8mL无血清无双抗DMEM。
5．将PEI-DNA复合物逐滴滴加到细胞表面，边滴加边轻晃细胞培养板。
6．4h后更换2mL含有血清的培养液。
7．24h后检测细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。
六、注意事项
转染实验的成败与众多因素的影响有关，包括细胞状态、血清选择、抗生素的加入、转染用质粒的启动子的选择、质粒提取的质量、试剂保存等等。
①细胞状态：对于体细胞系建议传代细胞传到第三代左右时就进行转染，取对数生长期状态良好的细胞。根据细胞类型和培养基类型，选择合适的稳定的培养温度、湿度和CO2浓度，整个实验过程需要严格的无菌操作，防止细胞污染。
②血清选择：选择质量稳定的血清。尽量在无血清条件下进行转染，转染效率会比较高。转染后换成新鲜的培养基进行细胞培养，可以有效提供细胞的存活率。
③抗生素的加入：在转染培养基、细胞铺板培养基、稳定转染时的选择性培养基中避免使用抗生素，否则转染效率会受到很大的影响。
七、实验报告
于转染后24h观察转染了表达绿色荧光蛋白质粒的细胞转染情况，对实验结果进行描述，并进行讨论。
实验三细胞内参基因的RT-PCR检测
一、实验目的
掌握RT-PCR实验技术的原理及操作
二、实验原理
GAPDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa。该酶基因为持家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，故被广泛用于RT-PCR、Western blot等实验操作的标准化内参。
本实验以人的肿瘤细胞株为研究材料，通过逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）的技术手段检测细胞中内参基因GAPDH的表达情况。RT-PCR的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。
三、实验材料
传代培养的人肝癌细胞株HepG2
四、实验器材
PCR仪，水浴锅，各种量程的移液枪，吸头，EP管，试剂瓶，量筒，容量瓶，试管架；冰块。
五、实验试剂
DEPC（焦炭酸二乙酯），氯仿，甲醇，乙醇，EDTA，TRIzol，琼脂糖。
反转录试剂盒试剂组成：M-MLV（反转录酶）Enzyme Mix，2×Reaction Mix，Oligo(dT)18。
PCR反应试剂盒组成：0.1U Taq Polymerase/μL，500μM dNTP，20mM Tris-HCl（pH8.3），100mM KCl，3mM MgCl2。
六、实验方法
（一）实验器具的处理与准备
1．塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）
先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC 水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压蒸汽灭菌一次（EP管）。
2．玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，锡纸包装烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡0.1%DEPC过夜，再烤干）。
（二）实验试剂的配制：
1．DEPC水：吸出1mLDEPC放在1000mL双蒸水中配成DEPC水，放在1000mL容量瓶中静置4h备用。2．75%乙醇：用无水乙醇与DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高压蒸汽灭菌30min以灭活其毒性）。
3．异丙醇：放入棕色瓶中。
4．氯仿：放入棕色瓶中。
5．上样缓冲液：0.25%溴酚蓝，30%甘油，6×缓冲液，4℃保存
6．1.0%琼脂糖凝胶的配制：1.0g琼脂糖100mL电泳缓冲液，微波炉中火30秒至沸腾，熔化的琼脂物冷却至60℃时加入10mg/mL溴化乙锭2.5μL，充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶膜中，在室温下放置30-45min后现进行电泳。
（三）实验具体流程
1．RNA提取
①用冰预冷PBS冲洗培养瓶中的细胞，每孔加入1mLTRIzol反复吹打充分裂解细胞并收集细胞于1.5mL 离心管中，室温静置5min；
②每管加入200μL氯仿，剧烈振荡15s，室温静置2-3min；
③于4℃，12000r/min离心15min，将上层水相转移至新离心管中，加入500uL异丙醇轻轻颠倒混匀，静置10min；
④于4℃，12000r/min离心10min，弃去上清，得到RNA沉淀；加入1mL 75%乙醇振摇以清洗沉淀；12000r/min离心10min，弃上清得沉淀物；
⑤干燥后，加适量DEPC水溶解沉淀，取少量用于RNA浓度和纯度的测定（于紫外分光光度仪下分别测定样品在260nm和280nm波长下的的吸光度并计算A260/A280比值，1.8-2.0为RNA纯度较好时的A260/A280比值）及RNA凝胶电泳鉴定，剩余RNA保存于-80℃冰箱用于RT-PCR的检测。
注意事项：
避免RNAase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC水溶液在37℃处理12小时，并高压灭菌30min后使用。2．反转录（本实验选用全式金First-Strand cDNA Synthesis SuperMix试剂盒）
反转录进行之前应该对RNA浓度进行计算，具体做法是：在RNA原液中取1μl稀释至250μl （RNase-free Water），测定样品的A260和A280的值，按公式RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（ng/μL）计算其浓度。
反转录具体操作方法如下：
①将各组分溶解，点甩离心，并置于冰上备用。
②根据以下表格配置反应体系，总体积为20μL
试剂加入体积
RNA Template 2μL（0.1ng-2μg）
Oligo(dT)181μL
2×Reaction Mix 10μL
Enzyme Mix 1μL
RNase-free Water 6μL
Total 20μL
③涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
④反应条件为42℃温浴30min；85℃，5min结束。
⑤反应结束后，若将逆转录产物置于-20℃，可长期保存。
3．PCR反应
PCR反应试剂盒为由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×，具有操作简快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。
① PCR反应体系
试剂20μL反应体系
模板1-2μL
Sense Primer (10μM)1μL
Anti sense Primer (10μM)1μL
2×Master Mix 10μL
RNase-Free水补水至20μL
② PCR反应条件
③结果检测：试剂盒中的产品已加入染料（蓝色）；反应结束后取5-20μl反应产物直接电泳检测结果，无需再使用上样缓冲液。
七、注意事项
①一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
②延伸时间根据所扩增的片段大小设定，试剂盒中所含的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/30s。
③可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
④注意避免有毒、有害试剂伤害自己和他人：氯仿、溴化乙锭（EB）、紫外线等。
⑤注意避免试剂污染。
⑥始终注意避免RNA酶的污染。
⑦保管好自己专用的试剂，公用试剂保管好，相互协调，注意实验室卫生。
八、实验报告:绘制PCR电泳检测结果，并进行讨论。
实验四细胞膜的渗透反应
一、实验目的
1．了解细胞膜对物质通透性的一般规律: 细胞膜的渗透性及各类物质进入红细胞的速度。
2．了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理
细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对某些溶质具有通透性，溶质可进入细胞内，导致膜内渗透压升高，胞外的水随之进入细胞内，发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞进度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化，判定红细胞对不同物质的通透性如何。
三、实验材料
鸡血
四、实验器材
50mL小烧杯、10mL移液管、试管（15mL）、试管架。
五、实验试剂
抗凝剂：肝素（5 μg/mL）
0.17M氯化钠0.17M氯化铵0.17M醋酸铵0.17M硝酸钠0.12M草酸铵0.12M硫酸钠0.32M葡萄糖
0.32M甘油0.32M乙醇0.32M丙酮
六、实验方法
（一）鸡红细胞悬液
以肝素液湿润5ml注射器内壁，推出多余的肝素液（针头内必须留下肝素液，不要进空气），取鸡的静脉血2mL左右。取50mL小烧杯一只，加一份鸡血和十份0.17M氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。
（二）低渗溶液
取试管一只加入10mL蒸馏水，然后再加入1mL稀释的鸡血，混匀，注意观察溶液的颜色变化，由不透明的红色逐渐澄清，红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。
（三）鸡红细胞的渗透性
1．取试管一只，加入0.17M氯化钠溶液10mL，再加入1mL稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？
2．取试管一只，加入0.17M氯化铵溶液10mL ，再加入1mL稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入1mL稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。
3．分别在下列八种等渗溶液中进行实验，步骤同2。
（1）0.17M醋酸铵（2）0.17M硝酸钠（3）0.12M草酸铵（4）0.12M硫酸钠（5）0.32M葡萄糖（6）0.32M甘油（7）0.32M乙醇（8）0.32M丙酮
七、注意事项
1．肝素用量要适宜，过少无抗凝作用，过多易导致溶血。
2．为了保证实验结果的精确性，应准确计时，并确定开始计时的标准和完全溶血的标准。
3．有的溶液不发生溶血，有的发生溶血时间比较长，可以将他们与对照组（氯化钠组）一起对比，如果发现有溶血现象但尚未完全溶血的说明该溶液可使血细胞发生溶血，只是时间未到，但是如果与对照无差别，说明它不会使血细胞溶血。
八、实验报告
将观察到的现象记录，并进行分析比较和讨论（填写表格）。
九、思考:
实验五中等纤维免疫荧光染色定位观察
一、实验目的
1.掌握细胞免疫荧光染色法的原理
2.了解荧光显微镜的使用方法
二、实验原理
真核生物细胞质中的骨架纤维，按其直径、组成成分及分布特征可分为微管、微丝和中等纤维三种骨架纤维。中等纤维具有组织特异性，不同类型细胞含有不同的中等纤维蛋白。其中，波形纤维蛋白（Vimentin）分子量约53KD，广泛存在于间充质细胞及中胚层来源的细胞中。波形蛋白一端与核膜相连，另一端与细胞表面处的桥粒或半桥粒相连，将细胞核和细胞器维持在特定的空间。
间接免疫荧光染色是观察细胞成分定位及其分布的一种特异性和灵敏度较高的方法，常用来观察细胞骨架及细胞外基质，其染色的基本原理为：间接免疫荧光染色法有两对抗原——抗体系统；第一对是欲测抗原及其相应未标记抗体(一抗)，第二对是免疫球蛋白及其相应标记荧光色素的抗免疫球蛋白抗体(二抗)，由于免疫球蛋白分子上有多个抗原决定簇，因而能结合多个荧光素标记的抗免疫球蛋白抗体分子。所以，间接免疫荧光染色法的灵敏度较高，是一种观察抗原定位及其分布的常用方法。
图1 间接免疫荧光染色原理
三、实验材料:体外培养的人肝癌HepG2细胞株。
四、实验器材
荧光显微镜，超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，冰箱，温箱，滴管，吸管，离心机，移液管，35mm培养皿，试管架，20μL微量加样器，湿盒，载玻片，盖玻片，滤纸。
五、实验试剂
PBS溶液pH7.2，甲醇，丙酮，PBS溶液，抗荧光淬灭剂DABCO，细胞核染料DAPI，封闭用马血清。
抗体：抗波形纤维蛋白抗体，荧光素标记的二抗。抗体使用前用PBS进行适当稀释。
六、实验方法
1．吸出细胞培养皿中的培养液，放入1mLPBS溶液清洗细胞，以洗去培养液。清洗后吸出PBS溶液。2．加入1mL冷甲醇，将细胞培养皿放入-20℃冰箱，放置l0min，使皿底的细胞得以固定。
3．吸去多余甲醇，放入PBS溶液清洗后，吸出多余PBS。向细胞培养皿中加入1mL 5%BSA （0.1%TritonX-100），于37℃下作用30min，即同时进行透膜和封闭（透膜可以抽提膜脂，在膜上打孔，使抗体能够进入细胞。封闭则为了增加抗体结合的特异性）。
4．直接用微量加样器滴加稀释好的100μL波形纤维蛋白一抗溶液（用5%BSA+0.1%TritonX-100混合溶液配置，按照1:100比例稀释），盖好湿盒，置于37℃温箱中温育30-60min。
6．取出盖玻片，滤纸吸去一抗液，用PBS溶液洗涤3次，每次5min，以吸去未结合的抗体。
7．滤纸吸去残留的PBS溶液，再次放入湿盒，加荧光素标记的二抗100μL（用5%BSA+0.1%TritonX-100混合溶液配置，按照1:50比例稀释），置于37℃温箱中避光温育30-60min。
8．用滤纸吸干二抗液，用PBS溶液洗涤3次，每次5min。
9．向细胞培养皿中滴加100μLDAPI，于室温下孵育2-4min。
10．用滤纸吸干DAPI，用PBS溶液洗涤3次，每次5min。
11．滴1滴封片剂（甘油：PBS=1：1）于细胞上。
12．于荧光显微镜下观察结果。
七、注意事项
1．制片后尽快观察，以免染色的荧光衰退
2．固定时需保持低温，以保持抗原的完整性。
3．所用试剂须新鲜配制。八、实验报告
对免疫荧光染色后细胞中中等纤维的分布情况进行描述，并进行讨论。
实验六叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的
通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
二、实验原理
叶绿体是植物细胞和真核藻类中进行光合作用的重要的细胞器。组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。本实验采用两种不同浓度的蔗糖溶液制成的不连续密度梯度，在离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部，此方法可以粗分或富集叶绿体。
叶绿体因为富含叶绿素a和叶绿素b而在光学显微镜下呈现绿色。叶绿素受在荧光显微镜激发光照射后可以直接发出火红色荧光，称为自发荧光（或直接荧光）。利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖玻片和无荧光封片剂。
三、实验材料:新鲜菠菜。
四、实验器材:离心机、研钵、天平、荧光显微镜、台式离心机、烧杯、量筒、滴管、刻度离心管、试管架、纱布、无荧光载片和盖玻片等。
五、实验试剂
匀浆介质（0.25mol/L蔗糖，0.05mol/LTris-HCl缓冲液，pH7.4），500g/L蔗糖溶液，150g/L蔗糖溶液。
六、实验方法
1．选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称2-3g，剪碎。
2．加入预冷到接近0℃的匀浆介质10mL，于置于冰上的研钵中快速捣碎。
3．将捣碎液用双层纱布过滤于烧杯中。
4．取1mL滤液移入1.5mL离心管中，500r/min，离心10min后，轻轻吸取上清溶液置于新的离心管中。弃去包含细胞碎片的沉淀部分。
5．在1.5mL离心管内依次加入500g/L蔗糖溶液和150g/L蔗糖溶液各0.4mL。注意先加入500g/L蔗糖溶液，后沿管壁缓缓注入150g/L蔗糖溶液，不能搅动500g/L蔗糖液面。密度梯度溶液制好后，可见到两种溶液界面处的折光有所不同。
6．在步骤5制备好的密度梯度溶液的最上层，沿离心管壁缓缓加注入步骤4获得的上清溶液，8000r/min，离心20min。
7．取出离心管，可见叶绿体在密度梯度溶液中间形成带。
8．取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。
七、注意事项:叶绿体样品制备结束后应尽快观察，以防止其失去活性，影响观察结果。
八、实验报告
分别对普通光镜和荧光显微镜下的叶绿体的颜色和形态进行描述，并对可能影响本实验结果的因素进行讨论。
九、思考题
1．在荧光显微镜下，观察叶绿体的自发荧光时，更换滤镜系统，叶绿体的颜色是否有变化？
2．为什么要在低温下对菠菜的叶肉细胞进行快速捣碎？
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导目录 一．显微镜的使用 实验一、几种光学显微镜的使用 实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备 二．细胞形态结构 实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用 实验四、细胞活体染色技术 实验五、植物细胞骨架光学显微观察 实验六、胞间连丝观察 三．细胞化学 实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应 实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应 实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白 实验十、多糖及过氧化酶的显示 实验十一、核仁组成区的银染显示与观察 四．细胞生理 实验十二、细胞膜的通透性 实验十三、细胞电泳 五．细胞和组织培养技术 实验十四、植物原生质体的分离和融合 实验十五、植物细胞的培养与观察 实验十六、动物细胞融合 实验十七、动物细胞的培养与观察 六．细胞化学成分的分离 实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离 实验十九、荧光的细胞化学测定 实验二十、细胞活力的鉴别 实验一几种光学显微镜的使用
一、实验目的 了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。 二、实验原理 (一)基本原理 一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点 各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜： 普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜： 暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜： 相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副
生物学实验原理与技术 教学大纲
生物学实验原理与技术教学大纲 10.1教学任务： 本课程由植物生物学、生理学、微生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、生物化学和分子生物学等方面相关的实验理论知识、实验技术和实验方法组成，是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课程，各部分内容在实验课开课前统一进行集中讲授，学生课后预习，为学生进行的实验操作奠定了理论基础。 10.2教学要求： 本课程是各门基础实验课程的前导课，涉及各个实验项目的原理与基本技术方法。因此，要求学生在实验前认真听教师讲解相关基础知识，积极思考、认真记录。课后认真复习、认真回答思考题，并参加每次实验前的预习测试。 10.3教学目的： 使实验课程与理论课程合理衔接，加强学生对实验的相关理论知识的理解与掌握，促进学生充分预习和对即将进行实验的基本技术和基本方法全面的理解。为学生进行的实验操作奠定理论基础。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 本课程是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课，涉及8门生物学基础实验课程的实验原理、技术和方法。具体内容包括显微镜技术、分离类胡萝卜素和叶绿素、提取叶绿体色素、观察叶绿素的荧光现象、观察光对叶绿素的破坏作用、测定种子发芽率、观察呼吸运动的调节、麻醉家兔、气管插管、制备蛙类坐骨神经腓肠肌标本、证实反射弧的完整性与反射活动的关系、验证心肌有效不应期较长的特征、观察蛙期前收缩与代偿间歇、钝性分离气管、无菌操作技术、微生物
简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术常规微生物涂片观察技术微生物培养技术、菌种保藏技术、无菌操作技术、微生物简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术、常规微生物涂片观察技术、微生物培养技术、菌种保藏技术、显微镜技术、观察胀泡的形成、鉴别纺锤体、鉴别姐妹染色单体、植物染色体制片技术、染色体臂形成、观察细胞内多糖的分布、观察细胞内DNA的分布、原代细胞培养、传代细胞培养、细胞的消化分散、观察细胞融合的现象、詹纳斯绿染色、PEG诱导鸡静脉血的化学融合、植物组织培养技术、制作石蜡切片及HE染色、核酸的乙醇沉淀、测定RNA含量、测定核酸含量、定磷法测定核酸的含量、地衣酚法测定RNA含量、预处理组织、匀浆组织、提取核酸、核酸核蛋白（RNP）苯酚分离、剥离凝胶板、自溶处理、超声破碎、制冰盐浴、目测酶活力、免疫小鼠、颈部皮下注射抗原、腹腔注射抗原、统计处理数据、梯度稀释血清、离心分离血清、摘眼球取血、测抗体效价、体外重组DNA、连接DNA片段、凝胶回收DNA、CaCl2法制备感受态、转化外源DNA、PCR扩增、DNA琼脂糖凝胶电泳、碱裂解法提取质粒、蓝白斑筛选、限制性内切酶使用等。 本课程还加入了安全环保及习惯教育内容。主要内容包括火灾预防与逃生常识，触电防护知识，烧烫伤处理方法，实验室有毒废弃物处理常识，实验动物尸体处理常识，实验习惯教育及实验室环保教育等。 12．开设实验项目 开设实验项目一览表
细胞生物学实验指导(植物版)
细胞生物学实验 实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。 通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。 该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器 普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。 二、材料 洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。 三、试剂 生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。 二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生
细胞生物学常用研究方法
Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。 将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。 扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。 免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。 核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信
(完整版)细胞生物学实验测试题
细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作） 原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 （滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯） 用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光； 另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。 原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化 铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如 下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片： （1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。 （2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。 （3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液） （4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。 （5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子） （6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来） （8）、制片观察。 结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。 对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活 性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧
细胞生物学实验指导(精)
细胞生物学实验指导 细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。 实验一普通显微镜及其使用（装片观察） 一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。 二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。 光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法 原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项： （1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。 （2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜
头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。 四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？ 实验二、细胞膜的渗透性 实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 实验原理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 实验用品 一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。 二、材料 羊血。 三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。 实验方法 一、羊血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透 明的红色液体，此即稀释的羊血。
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
细胞生物学发展简史
细胞生物学发展简史公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-
细胞生物学发展简史 一细胞的发现和细胞学说的建立 1665年，英国学者Robert Hooke用自制的显微镜观察栎树软木塞的薄切片，发现了其中有许多蜂窝状的小室，并将这些小室命名为cell。实际上当时看到的是植物细胞的细胞壁。此后，生物学家用cell一词描述生物体的基本结构单位，中文翻译为细胞。Hooke对有关细胞的首次描述见于1665年他的《显微图谱》中，因此人们认为细胞的发现是在1665年。 真正观察活细胞的是荷兰科学家Antony von Leeuwenhoek，他用设计较好的显微镜观察池塘水中的原生动物、蛙肠道内的原生动物、人类和哺乳动物的精子，并于1674年在观察鱼的红细胞时描述了细胞核的结构。 由以上可见，细胞生物学的基础建立于17世纪，并且Hooke和Leeuwenhoek两位科学家为此做出了重要贡献。 在Hooke发现细胞后的近170年中，人们用光学显微镜相继发现了一些不同类型的细胞，但对细胞的认识基本上没什么新的进展。直到19世纪30年代，显微镜制造技术有了明显的改进，分辨率提高到1μm以内；同时还由于切片机的制造成功，从而对细胞的观察有了许多新的进展，细胞核、核仁、细胞的原生质等被揭示，人们才真正认识到细胞的生物学意义。 1838~1839年，德国植物学家Scheleiden（1838年）和动物学家Schwann （1839年）总结前人的工作，综合了植物和动物组织中细胞的结构，提出了“细胞学说（cell theory）”，指出“一切生物，从单细胞生物到高等动、植物都是由细胞组成的；细胞是生物体结构和功能的基本单位”。后来德国科学家
细胞生物学实验指导书09年
实验一普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造 光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光源 2．显微镜观察
（1）低倍镜观察 （2）高倍镜观察 （3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理 观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。 五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 实验二胞间连丝的观察 一、实验目的 观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识． 二、实验原理 植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。 三、实验材料 红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片 四、实验步骤
(完整版)16考研厦大生科院初试第一,分享备考经验+复试环节
16考研厦大生科院初试第一，分享备考经验+复试环节 本人是华侨大学的，2016届考厦大生科院，是聚英厦大考研网的学员，今年以初试第一，复试第七名的成绩考进厦门大学生命科学院，广大研友的要求分享一下我的备考经验：包括初试经验分享（已更新），考研时间规划和所用书籍，包括初复试环节和复习注意事项，十分详尽，希望同学们做好笔记~ 环节一、初试 1.考研初试分数分配 初试科目： 英语：100 政治100 832生物化学：150 620细胞生物学150 厦大生科院近几年分数线： 2014年：322分2015年：310分2016年：310分 近几年生命科学院专业课压分比较严重，所以与厦大理科基本保持一致，而厦大理科线每年浮动小，如果没有重大改革，分数线不会有较大变化。总体来说，厦大生科院较之其他学院，虽然分数线比较低，但试卷题目难度大，而且招生特点是宁缺毋滥，近两年都收不满，都需要调剂，调剂的原则上要求考生是985/211的院校出身。 2.620细胞生物学的初试情况 2016年620试卷分数分配 选择题15题，30分；名词解释5题，30分；问答题2题，30分；英译汉3题，30分；实验题3题，30分。 其中选择题、名词解释、问答题最基础，但是以16年情况来看，出的偏题怪题比较多，这类题型主要来自中科院生物学的往年考研题，大家可以关注一下。而英译汉的题型要求熟记基本名词解释的英文，重点掌握关于癌症和癌细胞、生态系统。实验题基本上是厦大生命科学院常用的一些实验技术，重点掌握蛋白质与蛋白质之间的相互作用。另外2015年及之前每年都有考到RNA干扰，但2016年没考，该技术很可能会被基因编辑CRISPR所取代，16年复试有考，要重视这个动向。 关于初试的目标分数，建议至少要考到320分，因为如果初试分数太低，复试很容易被淘汰。由于厦大生科院专业课压分比较严重，主观题给的分数低，政治和英语的平均分最好都要过60,620分子生物细胞学和832生物化学平均要达到100分，这样总分加起来：60+60+100+100=320分，初试基本上没有问题。 在这里推荐一下聚英厦大的英语政治的暑期强化班和最后冲刺班，会邀请北京的大牛老师像陈正康、李海洋来讲课，一方面你可以把握一下考试重点在哪里，另一方面尤其是英语可以学到很多非常实用的应试技巧。专业课的话，推荐聚英官网的《620分子细胞生物学复习全书》和《620分子细胞生物学实验用书》，可以帮你梳理知识点，把握核心考点。 2017厦大生科院考研资料
细胞生物学实验指导
实验一显微镜的结构及使用 [实验目的] （一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。 （二）掌握显微镜的使用方法。 （三）了解显微镜的维护方法。 [实验原理] 虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。 [实验器材]擦镜纸字母装片羊毛交叉擦片普通光学显微镜二甲苯香柏油 三内容与方法： 普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2） （一）微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。1.机械部分： （1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。 （2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。 （3）镜臂：镜柱上方弯曲部分，是取用显微镜时握拿的部位。 （4）镜筒：在镜臂的上方倾斜的金属园筒，上端装有目镜、下端转折处装有棱镜，使光线转折450。其上有一固定螺钉将镜筒连接于镜臂上方。 （5）调节器：在镜柱两侧有大小两个螺旋，大螺旋为粗调节器，转动时能使载物台快速升降。调节范围较大，适于低倍镜调焦用。小螺旋为细调节器，转动是载物台仅缓慢升降，调节范围较小，适于调节物象的清晰度。此外，在右侧粗调节器内侧有一窄环，称粗调松紧调节轮，用以调节粗调节器的松紧度。向外转时偏紧，向内转时偏松。左侧粗调节器内侧有一粗调限位调节环凸柄，向上推紧时，镜台上的最高点被固定（这两个环一般不需调节）。（6）旋转盘：又称物镜转换器，安装在镜筒下端，为一可旋转的圆盘，上有4个圆孔，
生物学一级学科(专业)攻读硕士学位研究生培养方案
生物学一级学科（专业）攻读硕士学位研究生培养方案 （专业代码：） 一、培养目标 本学科培养的研究生，要热爱祖国，崇尚科学，诚实守信；应能较好地掌握辨证唯物主义的原理与方法，具有良好的科学素养和合作精神，学风严谨，谦虚、进取、敬业，有较强的事业心和社会责任感；具有健康的身体和心理素质。 本学科研究生应掌握扎实宽广的生物学基础理论和系统的各自相关的专业知识与实验科研技能，掌握一门外语（一般为英语）；具有从事科学研究工作或独立担负专门技术工作的能力。毕业后可从事生命学科及相关学科的科研、教学、环境保护及科技管理等方面的工作。 二、二级学科各专业及研究方向 1. 植物学 2. 动物学 3. 微生物学 4. 遗传学 5. 发育生物学 6. 细胞生物学 7. 生物化学与分子生物学 8. 海洋生物学 9. 生物物理学
三、学制与学习年限 全日制硕士研究生的学制为3年，在校学习期限为2-4年。3年制硕士研究生可申请提前毕业，最长提前时间不能超过一年。成绩优秀，提前完成论文、且在SCI刊物上发表与毕业论文有关的研究论文者，硕士论文经学位委员会指定的3人以上指导小组预答辩，推荐进行硕士论文答辩方可向学校申请。 四、培养方式 1．根据宽口径、厚基础的原则，本学科按生物学一级学科招收硕士研究生，按一级学科开设专业基础课程，在学生进入到实验室后，由导师或导师组对学生进行专业知识和专业技能的培训，完成相应的专业学习。 2．本学科鼓励开展硕士研究生的“三种经历”工作，即海外学习经历、第二校园经历和社会实践经历，在海外学习经历、第二校园经历中实行双导师合作培养。 五、应修总学分数 硕士生的课程学习一般为一年，应修总学分不少于30学分，其中必修课不少于22学分（含前沿讲座与社会实践），选修课不少于8学分；具体课程见课程设置一览表。 六、课程的类别及设置 硕士研究生课程分为必修课与选修课两大类，具体课程见课程设置一览表。 1、必修课22学分
细胞生物学实验
细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等
细胞生物学实验员招聘实验考试
细胞生物学实验 1 考核方式 平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试 2 考核内容 仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。 2.1仪器设备使用 本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机 一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。 生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统 2.2 开设实验 细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位 理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？） 蛋白质两性电解质性质 固绿染色特点 细胞内蛋白质酸碱性 10%福尔马林作用？ 5%三氯乙酸作用？ 染色异常的原因分析 实验成功需要注意事项？ 细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法 理解运用实验原理。 固定液有什么作用？ 热盐酸处理的作用？ Schiff试剂的有效成分是什么？ 漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？ 显示DNA时，根材料的哪部分最好？ 显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？ 一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个） 实验成功的关键是什么？ 细胞生理：细胞膜的通透性 理解运用实验原理。 能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？）从EXCEL制图。 三线表制作。 图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。 细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察 掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？ 差速离心。
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验 班级：生科142 姓名：旷江 学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞 华东理工大学 应用生物学系
摘要 本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。 关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构
Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur
(完整版)细胞生物学学习心得
细胞生物学学习体会 通过网络课程学习,有幸聆听到王金发教授对《细胞生物学》课程的讲授，使我不仅学到了细胞生物学专业新的知识与研究技术、方法,而且在教学方面也受益非浅。下面就我的学习谈一些体会。 一、全面学习了细胞生物学的专业知识 《细胞生物学》是一门包容量大、发展迅速的学科。内容涉及生物膜的结构与功能；内膜系统区室化形成及各种细胞器的结构与功能；细胞信号转导；细胞核、染色体以及基因表达；细胞骨架体系；细胞增殖及其调控；细胞分化、癌变及其调控；细胞的衰老与程序性死亡；细胞的起源与进化；细胞工程技术等多个方面。 (一)对细胞生物学的专业知识有了更深的认识。 1、细胞通讯方面 记得第一次听王老师的课就是讲授细胞的通讯，在多细胞生物中，细胞不是孤立存在的，而是生活在细胞社会中，它们必须协调一致，才能维持机体的正常生理机能，它们的协调是通过细胞通讯来完成的。细胞通讯是通过信号分子与受体的识别，从而在靶细胞内产生一系列反应的过程。信号分子有第一信使和第二信使之分，第二信使位于细胞内，由第一信使与受体识别后最先在胞内产生的，它主要与细胞内受体作用，所以受体也可分为表面受体和胞内受体。信号分子与受体的识别作用具有特异性。细胞信号传递所发生的反应有快速反应和慢速反应。快速反应是信号分子与受体作用后直接引起细胞内的一系列代谢反应；慢速反应则需要引起基因表达，再表现出各种代谢反应。细胞通讯过程是个复杂的过程，一个细胞的周围有上百种不同的信号分子，细胞要对这些信号分子进行分析，做出正确的反应。信号转换的研究在近年很热门，但进展缓慢，主要是因为信号转换的复杂性，不同信号的组合产生的效应是不一样的。 2、蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成是在核糖体上，有两种合成体系，一种是在细胞质中游离的核糖体上，另一种是在膜旁核糖体上合成，它们合成的蛋白质将分布到不同的部
细胞生物学实验教案大全
细胞生物学实验教案 【经典学习资料，收藏必备】
实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察 【实验目的】 在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。 【实验原理】 细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。 （自拍图） （a）（b） （c）（d） 图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体 【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯 【方法与步骤】
一、洋葱根尖切片细胞的观察 先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。 二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察 先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。 三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察 先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。 四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。 实验一、细胞的显微测量 【实验目的】 掌握显微测微计的基本原理及使用方法。 【实验原理】 细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针 （二）材料：血涂片 （三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液 【方法与步骤】