【CN109771322A】人干细胞因子皮肤修复组合物及其在护肤品中的应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910206718.9
(22)申请日 2019.03.19
(71)申请人 上海联衡生物科技有限公司
地址 201112 上海市闵行区联航路1188号
楼二楼G1室
(72)发明人 秦松辉
(74)专利代理机构 北京科家知识产权代理事务
所(普通合伙) 11427
代理人 陈娟
(51)Int.Cl.
A61K 8/64(2006.01)
A61K 8/9761(2017.01)
A61K 8/98(2006.01)
A61K 8/34(2006.01)
A61K 8/9789(2017.01)
A61Q 19/06(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)
(54)发明名称人干细胞因子皮肤修复组合物及其在护肤品中的应用(57)摘要本发明公开了一种人干细胞因子皮肤修复组合物及其在护肤品中的应用，所述人干细胞因子皮肤修复组合物由下述质量百分比的原料制备而成：人干细胞生长因子0.00001-0.00002％、复活草提取物40-50％，余量为燕窝提取物。本发明中细胞生长因子是皮肤护理的最佳活性成分，可以透过皮肤表层细胞阻碍而被深层皮肤细胞所吸收，有效激活基底层的、不再分化的原始干细胞，增强皮肤细胞的分裂增殖能力和新陈代谢功能；同时含有燕窝、复活草精华，安全、无刺激，兼具保湿、美白祛斑、抗皱功效，本发明原料温和安全，不损伤皮肤，制成的护肤品具有优异的抗氧化、保湿、渗透能力，有效清除皮肤中的自由基，能渗透至皮肤深层，从深层细胞起到修复、抗氧化、
补水锁水的效果。权利要求书1页 说明书10页CN 109771322 A 2019.05.21
C N 109771322
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109771322 A
1.一种人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，由下述质量百分比的原料制备而成：人干细胞生长因子0.00001-0.00002％、复活草提取物40-50％，余量为燕窝提取物。
2.根据权利要求1所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述复活草提取物的制备方法为：将复活草粉碎过10-50目筛，将粉碎后的复活草、体积分数为75-85％乙醇水溶液按质量比为1：(10-20)混合后超声提取30-60min，过滤，浓缩至含水量为5-10wt％，得到复活草提取物。
3.根据权利要求1所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述复活草提取物的制备方法为：将复活草粉碎过10-50目筛，将粉碎后的复活草投入超临界萃取装置的萃取釜中进行二氧化碳超临界萃取1-4h，得到超临界萃取物；将超临界萃取后的复活草、酚类抗氧化剂、体积分数为75-85％乙醇水溶液按质量比为1：(0.002-0.009)：(10-20)混合后超声提取30-60min，过滤，浓缩至含水量为5-10wt％，得到超声提取物；将超临界萃取物、超声提取物混合后得到复活草提取物。
4.根据权利要求3所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述超声提取的超声功率为200-500W、超声频率为30-50kHz。
5.根据权利要求3所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述二氧化碳超临界萃取的萃取温度为30-40℃、萃取压力为25-35MPa、二氧化碳流量为10-30kg/h、分离温度为28-32℃、分离压力为6-9MPa。
6.根据权利要求3所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述酚类抗氧化剂为蔓越莓多酚衍生物、核桃青皮酚类天然抗氧化剂中的至少一种。
7.根据权利要求1所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述燕窝提取物的制备方法为：将燕窝粉碎过40-100目筛，将粉碎后的燕窝、水按质量比为1：(5-15)混合以转速为100-300r/min搅拌2-4h，然后加入高压均质机中在压力为40-60MPa进行高压均质处理2-3次，每次处理时间为5-10min，得到均质处理液；将均质处理液先用500-1000目滤布过滤，然后用1000-10000Da的超滤膜超滤，得到滤液；将滤液在温度为-35～-55℃、真空度为10-50Pa真空冷冻干燥至含水量为5-10wt％，得到燕窝提取物。
8.根据权利要求1所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述燕窝提取物的制备方法为：将燕窝粉碎过40-100目筛，将粉碎后的燕窝、改性壳聚糖溶液按质量比为1：(5-15)混合以转速为100-300r/min搅拌2-4h，然后加入高压均质机中在压力为40-60MPa进行高压均质处理2-3次，每次处理时间为5-10min，得到均质处理液；将均质处理液先用500-1000目滤布过滤，然后用1000-10000Da的超滤膜超滤，得到滤液；将滤液在温度为-35～-55℃、真空度为10-50Pa真空冷冻干燥至含水量为5-10wt％，得到燕窝提取物。
9.根据权利要求8所述人干细胞因子皮肤修复组合物，其特征在于，所述改性壳聚糖溶液的制备方法是：将醋酸加入水中制成0.2-1.5wt％的醋酸溶液，将壳聚糖、醋酸溶液按质量比为1：(480-520)混合均匀，再加入醋酸溶液重量0.1-0.5％的纤维素酶、醋酸溶液重量0.01-0.05％柠檬酸钠在温度为50-60℃下以转速为50-150r/min搅拌2-5h，然后在85-90℃保温5-10min灭酶活，得到改性壳聚糖溶液。
10.权利要求1-9中任一项所述人干细胞因子皮肤修复组合物在护肤品中的应用。
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人肝细胞生长因子(HGF)elisa试剂盒使用说明书
人肝细胞生长因子(HGF)elisa试剂盒使用说明书 Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置 标准品稀释液：1.5ml×1瓶 酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96） 【人肝细胞生长因子(HGF) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算： 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 试剂盒组成： 封板膜:2片（48）/2片（96） 说明书:1份 密封袋:1个 标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存 样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肝细胞生长因子(HGF) 水平。用纯化的人肝细胞生长因子(HGF) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(HGF) ，再与HRP标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(HGF) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，
干细胞分泌因子
干细胞分泌因子五大功效以及他的运用 【干细胞分泌因子作用范围,造应症】 1.抗衰老美容治疗:衰老及亚健康导致的人体整体机能退化,再造肝脏,肾脏,心脏,肠胃,胰岛的脏器功能.修复皮肤损伤，调节肌体细胞线粒体功能，提高皮肤抗氧化能力、防辐射能力、抗过敏能力，内外整体年轻化。 2.内分泌,组织器官功能再生治疗:肝脏、肾脏、心脏、肠胃、胰岛功能再生。辅助治疗脂肪肝、肝硬化、肾炎、肾功能衰竭 3.神经系统再生修复治疗:帕金森病,老年痴呆,脑血管意外,脊髓外 伤的治疗和恢复. 4.造血及免疫功能再生治疗:抑制人体肿瘤细胞和防止肿瘤转移,扩散,造应血功能及免疫功能低下者,如肿瘤,放疗,化疗术后病人. 5.肌肉及骨骼修复再生治疗皮肤,肌肉(包括心肌),骨骼的修复再生。 【主要有以下干细胞的分泌因子】 造血干细胞分泌因子 皮肤干细胞分泌因子 神经干细胞分泌因子 肌肉干细胞分泌因子 脏器多能干细胞分泌因子 主要因子成分:
肝细胞生长因子（HGF）——促进肝实质细胞等各组织细胞的增殖。神经细胞生长因子（NGF）——促进神经细胞（知觉、交感神经节细胞）的增殖。 上皮细胞生长因子（EGF）——皮肤、肺、角膜、气管上皮细胞的增殖。 成纤维细胞生长因子（FGF）——促进人成纤维细胞、胶质细胞、血管内皮细胞的增殖。 胰岛素样生长因子（IGF）——软骨细胞、平滑肌细胞的增殖。 集落形成刺激因子（CSF）——负责免疫细胞的粒细胞、巨噬细胞等干细胞的增殖。 各类白介素（LL—1—19）——促进免疫细胞（T细胞、B细胞、NK 细胞） 以及胸腺细胞的增殖、分化，促进淋巴细胞活素产生 【干细胞分泌因子对人体的作用周期】: 第一阶段 干细胞分泌因子经血液循环进入细胞组织，开始迅速补充细胞新陈代谢所需的全部营养，使人体老化的细胞及过氧化物等代谢垃圾开始代谢排泄。同时，干细胞分泌因子开始耙向激活休眠的干细胞。 此阶段表现为：身体局部有退皮现象，皮肤斑痕初步淡化，皱纹变浅，
重组人干细胞因子工艺研究
重组人干细胞因子工艺研究 ---------专业班级姓名学号 摘要人干细胞因子(Human stem cell factor，hSCF)是一种重要的造血细胞因子，该文章在重组hSCF工程菌的基础上，通过高密度发酵培养、包涵体分离纯化、变复性、SP—Sepharose FF、Source 30RPC与Q—Sepharose FF层析等技术分离纯化出具有生物学活性的重组人干细胞因子，建立了适合大规模生产重组人干细胞因子的分离纯化工艺。 关键词组人干细胞因子包涵体复性分离与纯化生物学活性分离纯化工艺 人干细胞因子(Human stem cell factor，hSCF) 又称为肥大细胞生长因子(mast cellgro、Ⅵh factoL MGF)、kit配体(kit ligand，KL)及steel因子(steel factoL SL)，为c．kit原癌基因编码受体的配体蛋白，是自1990年发现的一种重要的细胞因子。它能够刺激早期造血干细胞及祖细胞增值，是造血干细胞增值分化的关键因子【1】。hSCF能刺激造血细胞的生长、增生与分化。它可以与其它造血因子共同发挥作用，如与白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、集落刺激因子(G-CSF)、促红细胞生成素(EPO)等表现出较强的协同效应，临床上SCF可用于治疗一系列原发性或继发性的(因毒性、辐射免疫损伤造成的)以髓细胞亚群数目减少为特征的干细胞功能异常等类型的疾病【2~4】。具有广阔的应用前景和药用开发价值。 正是由于SCF具有广阔的应用前景，所以对它的需求也很大，但是其天然来源有限，成熟型可溶性SCF(SCF165)在人体或动物体内含量甚微，在血中的浓度为3.3ng/mL，故不可能从天然组织中分离纯化足够量的样品进行实验室和临床应用研究【5】。大量实验证明，人SCF的糖基化对其活性不是必需的，如此就可以用基因工程方法，使用大肠杆菌等表达体系来生产重组人SCF(rhSCF)，以此来解决这个难题【6】。 国内外多家研究单位或生物制药公司已从多方面开展重组人干细胞因子的开发与研制【7~11】。目前在美国主要有两家公司(Amgen和Immunex公司)从事rhSCF的研制，其中Amgen公司采用大肠杆菌表达系统，而Immunex公司主要采用酵母表达体系。Amgen公司产品于1994年己基本完成临床I、II期研究，于1997年完成临床III期研究，并通过FDA的审批。现在rhSCF已在澳大利亚和加拿大限制性地上市。国内军事医学科学院生物工程研究所采用rhSCF制备工艺，经过rhSCF包涵体复性，DEAE阴离子交换层析吸附、浓缩，再经S-200凝胶层析和疏水层析，最后利用G-25脱盐柱得到rhSCF样品，其生产工艺采用四步柱层析，工作量大，得率相对较低。因此应加快这方面的研究，有望在不远的将来，使我国的基因工程新药产品中能够增加rhSCF新成员【12】。 1、SCF的生物学功能【5】
人表皮干细胞的分离培养
人表皮干细胞的分离培养 【摘要】目的探索人表皮干细胞原代培养方法。方法将皮肤标本进行分离，用DispaseⅡ酶消化表皮皮片后，重悬细胞，接种于铺有Ⅳ型胶原的培养瓶进行培养。表皮干细胞的鉴定采用免疫细胞化学技术检测其表面标记物β1整合素、CK19的表达。对表皮干细胞与角质形成细胞的克隆形成情况进行比较。结果倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长状况良好，表皮干细胞β1整合素及CK19角蛋白染色阳性。表皮干细胞克隆形成率高于角质形成细胞（P＜0.05）。结论采用本方法进行人表皮干细胞的培养较为理想。 【Abstract】Objective The present research was performed to find primary cell culture method of human epidermal stem cells. Methods The skin samples were isolated by Dispase Ⅱ，the cells were seeded in culture flask which was dealed with type IV collagen. The epidermal stem cells were identified by immunocytochemical technique for the detection of integrin β1 and CK19. The cell clone formation of epidermal stem cells and keratinocyte were compared. Results Cell morphology was observed under microscope and good growth status inverted，epidermal stem cells were positive reaction to integrin β1 and CK19 antibody. Epidermal stem cell clone formation rate is higher than that of keratinocytes （P＜0.05）.Conclusion Our results indicate that the method was effective for culture human epidermal stem cells. 【Key words】Epidermal stem cell；Culture；Identification 表皮干细胞具有无限增殖的能力，在组织工程皮肤的研究中具有重要的作用，本文就表皮干细胞的原代培养进行探讨。 1 材料与方法 1. 1 主要试剂DMEM培养基（dulbecco’s modified eagle medium，DMEM），单克隆抗体β1整合素，单克隆抗体CK19，Ⅳ型胶原，DispaseⅡ酶，胎牛血清（FBS），表皮细胞生长因子，0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）。 1. 2 实验设备CO2恒温培养箱，无菌超净工作台，倒置相差显微镜，普通光学显微镜。 1. 3 方法 1. 3. 1 原代培养严格无菌操作，切取5×5 mm2左右的皮肤标本，标本源自本院4月龄自愿引产胎儿包皮，切取前分离皮下组织，将分离得到的皮肤组织用含青-链霉素的PBS冲洗3次，切成小皮块后置于含 2.5 mg/ml DispaseⅡ酶的DMEM培养基中4℃过夜，培养基中含有青霉素（100 U/ml）及链霉素（100 μg/ml），第二天分离表皮和真皮层，收集表皮皮片，37℃条件下0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化15 min，胎牛血清终止消化，轻轻吹打，200目
用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法
公开 号 CN101461772 A 发布 类型 申请 专利 申请 号 CN 200910067634 公开 日 2009年6月24日申请 日期 2009年1月7日优先 权日 2009年1月7日 公开号200910067634.8, CN 101461772 A, CN 101461772A, CN 200910067634, CN-A-101461772, CN101461772 A, CN101461772A, CN200910067634, CN200910067634.8 发明 者 李文忠, 欧来良 申请 人 天津欧瑞生物科技有限公司 导出 引文 BiBTeX, EndNote, RefMan 被以下专利引用 (1), 分类 (2), 法律事件 (3) 外部链接: 中国国家知识产权局, 欧洲专利数据库 (Espacenet) 用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法 CN 101461772 A 摘要 本发明涉及一种可用于美容、护肤的干细胞分泌因子的制备方法。包括细胞分离、干细胞的扩增、干细胞因子体系的获取和浓缩、贮存得到含有干细胞活性因子体系。该体系包括目前已鉴定的各型干细胞所分泌的活性因子。本发明所得的干细胞活性因子体系中不含外来的培养液成分，也不含有死细胞裂解成分。并可以长期保存而维持组织和细胞修复活性。使干细胞美容真正从理想走向了现实。在生物医学的深度对传统美学观念进行了提升。同时该发明简单易行，适宜于大规模生产，为干细胞服务于美丽事业提供了一条捷径。 权利要求(6) 1、一种用于美容护肤的干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于包括的步骤：1)分离干细胞：从人或哺乳动物相应组织中分离出干细胞；2)干细胞的扩增，用相应干细胞的常规培养方法，包括a-MEM培养基，加入10％的胎牛血清，5％CO2，
重组人蛋白细胞因子的研究选择 - 细胞因子 - MedChemExpress
重组人蛋白细胞因子的研究选择- 细胞因子- MedChemExpress 1．重组蛋白表达体系 MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。 2．重组蛋白纯度和浓度测定 重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。 重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测 定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。 3．重组蛋白表达体系对比
4．重组蛋白表达体系选择
5．重组蛋白开盖使用前处理 为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保 证每管产品的蛋白总量达到标示含量。 6．重组蛋白复溶 a. 使用前先离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。 b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。大 多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于100 μg/mL，以便于 后续进一步稀释至工作浓度。 c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心 数秒。 d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。 7.重组蛋白储存
由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分 装避免反复冻融。 a. 短期储存： 冻干粉状态产品在室温下存放3 周，不影响活性。 复溶后的产品在4℃ 可稳定储存1-2 周。 b. 长期储存： 冻干粉状态产品在-20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。 可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或5% 海藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于-20℃ 下，可保存至少三个月；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。 注：分装冻存时，蛋白浓度不低于100 ng/μL，且每管的体积不可小于20 μL。 8.重组蛋白标签影响 蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。MCE 的重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的 需要加有标签。 a. 标签利于蛋白纯化。 b. 当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行Western Blot 或ELISA 分析方法鉴定。
干细胞在美容中的应用及展望
干细胞在美容中的应用及展望 黄亚东、李校堃 在自然界中，壁虎尾巴断了，过不了几天，又完整地长出来;螃蟹的大螯断了，也能很快长出来。科学研究发现，壁虎的尾巴、螃蟹的大螯含有比例很高的成体干细胞！正是这些干细胞使壁虎和螃蟹具有神奇和强大的肢体损伤修复能力！自然界的神奇现象给科学家有益的思考和提醒：干细胞在人体医学上的应用会产生什么样的效果? 利用干细胞具有的向机体其他细胞分化转变的潜在能力，再生性和再造性地修复各种变性、坏死性、损伤性、代谢性和退行性病变，恢复病损或退化组织器官结构和功能的一系列临床干细胞移植治疗技术和再生保健技术被称为再生医学 (Regeneration Medicine)，是托马斯.林博士提出和概括的新的再生医学概念。再生医学是医学临床治疗学领域的革新，国际医疗界重点发展和研究的高科技医疗领域。它是现代临床医学的一种崭新的治疗模式，对医学治疗理论、治疗和康复方针的发展有重大影响，必将会成为本世纪人类疾病治疗的支柱性医疗技术之一。 一、解读“干细胞” 干细胞是一种具有复制能力，可以分化成各种功能细胞的早期未分化细胞。干细胞的“干”（读gan去声）译自英文“Stem”，意为“树”、“干”和“起源”，干细胞即起源细胞。 人的机体在发展适应过程中，为弥补普通细胞在分化过程中由于高度分化而完全失去了再分裂的能力，最终衰老死亡的不足而保留了一部分未分化的原始细胞，也就是干细胞。按其分化潜能大小，干细胞可分为三种类型：一类是全能干细胞，它具有形成完整个体的分化潜能，如胚胎干细胞；第二类是多能干细胞，它具有分化出多种细胞组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力；第三类称为专能干细胞，只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化。此外，根据来源，干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞，成体干细胞是出生后
肝细胞生长因子是什么
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 肝细胞生长因子是什么 导语：肝细胞可以再生是因为我们的身体里面拥有肝细胞生长因子，如果我们的肝细胞因子受到损伤或者是说肝细胞因子减少了，都会大大地影响我们的肝 肝细胞可以再生是因为我们的身体里面拥有肝细胞生长因子，如果我们的肝细胞因子受到损伤或者是说肝细胞因子减少了，都会大大地影响我们的肝细胞再生的。想要让自己的肝细胞可以再生就要保护好我们的肝细胞再生因子，但是，大家知不知道什么是肝细胞生长因子呢？ 1HGF及其受体的结构 肝细胞生长因子(HGF)[1]最早是1984年由日本的中村敏一教授从大鼠血浆中得到的，其结构实质是含728个氨基酸的肝素结合糖蛋白. 它来自间质细胞，以旁分泌方式作用于邻近细胞，并与细胞表面的受体结合并激活酪氨酸激酶活性，具有较强的促有丝分裂、组织成形、诱导上皮细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用[2]. HGF的受体是原癌基因cmet编码的一种跨膜蛋白，称为Met，是由Mr为190000的前体蛋白分裂而得来，由Mr为50000的a链和Mr为145000的3链经二硫键相连而成的杂二聚体. Prat等发现某些癌细胞的Mr为190000 Met 的前体，缺乏裂解过程，不需连接配体就已有活性，因此就失去了HGF的生长控制. 各种瘤细胞和cmet转化后的细胞都过度表达Met，对HGF的反应比正常细胞更敏感强烈. 2HGF及其受体的生物学作用 (1) 启动肝再生实验证明，在众多细胞因子中，HGF是肝再生的启动信号，并在肝细胞增殖过程中起重要作用. (2) 促进细胞分裂作用HGF 在原代肝细胞的无血清培养中可刺激肝细胞DNA合成，1 g/L HGF即可 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
细胞因子类药物的市场分析
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 细胞因子类药物的市场分析 细胞因子类药物的市场分析生物制药产业是二十一世纪发展前景最诱人的产业之一，尽管我国在生物制药领域起步不晚，但不可否认，我国生物制药产业与美国等发达国家相比，差距越来越大。 纵观全球生物制药产业，经历了两次跨越式发展阶段，第一发展阶段从 1982 年重组胰岛素问世至 1997 年 G-CSF 成为第一个年销售额超过 10 亿美元的生物技术药物，这个阶段主要是 EPO、G-CSF、INF- 等细胞因子类产品，这些产品在 1994 ~ 1997 年生物制药产业第一发展阶段的后期已从快速增长期进入平稳发展期，全球生物制药产业都面临发展后劲不足的局面，年销售额一直徘徊在 100 亿美元左右。 1997 年后，随着 Rituxan、Remicade、Herceptin 和 Enbrel 等治疗性抗体相继批准上市，生物制药产业进入了第二个快速发展阶段，增长速度已连续 10 年保持在 15% ~ 33%，成为发展最快的高技术产业之一。 2007 年基因工程药物的销售额已达到 840 亿美元，2008 年尽管有全球金融危机影响，生物制药市场仍将突破 900 亿美元。 我国较好地抓住了生物制药起步发展的机会，EPO、G-CSF、INF-，IL-2 等产品在 1990 年代中期都获准上市，稍微落后于美国，几乎与欧洲同步。 但是，我国却没有抓住以治疗性抗体为代表的生物制药第二个黄 1 / 8
表皮干细胞
表皮干细胞 表皮干细胞强的潜在增生特点，它的自我修复能力可以保持体内平衡和表皮再生。在美容，药理学，再生医学，烧伤中有非常重要的作用。 表皮干细胞( epidermal stem cell) 为组织特异性干细胞，在胚胎期主要集中于初级表皮嵴，至成人时呈片状分布在表皮基底层。表皮干细胞的分化潜能有限，只能定向分化为角质细胞、毛发及皮脂腺。表皮干细胞典型特征有: (1)自我更新能力, 体外培养时呈克隆性生长，可分裂140 次，产生1X1040 个子细胞；(2)慢周期性，表现为活体细胞标记滞留；(3)对皮肤基底膜的黏附, 干细胞主要通过整合素实现对基底膜的黏附，是干细胞维持特征的基本条件。诱导表皮干细胞分化的因素有表皮细胞生长因子( EGF) 、纤维母细胞生长因子( FGF) 及?- 连环蛋白等。表皮干细胞的研究，目前仍处于实验观察阶段，但已展示了良好的临床应用前景。 表皮干细胞包括多种类型 毛囊干细胞、毛囊间表皮干细胞、皮脂腺前体细胞以及峡部干细胞。其中位于毛囊隆突部位的毛囊干细胞目前研究的最为清楚，它对于维持毛囊组织稳态以及皮肤创伤愈合十分重要；毛囊间表皮干细胞位于表皮基底层，虽然目前还没有足够明确的标记物将其准确定位，但它对于维持动物无毛部位以及人类表皮组织稳态发挥着作用；皮脂腺干细胞或前体细胞是另一类表皮干细胞，它独立于毛囊干细胞而存在，在维持皮脂腺组织稳态过程中发挥作用。 表皮干细胞的标记物 目前一些细胞表面糖蛋白，如整合素、核蛋白P63、角蛋白等已被作为表皮干细胞的特异性标记物而受到关注 整合素：整合素为一类位于细胞膜表面的糖蛋白受体家族分子，这类分子主要介导细胞与细胞外基质的黏附。整合素包含α和β两种亚型。通过α6和CD71可以将基底细胞分为3种类型：α6briCD71bri细胞占总数的(58.6±8.2)%，主要是短暂扩增细胞；α6briCD71dim细胞占总数的(8.1±2.0)%，代表干细胞；α6dim细胞占总数的(15.1±2.5)%，代表终末分化细胞。最近的研究发现，整合素和CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为表皮干细胞与短暂扩增细胞及其两者之间过渡状态细胞的区分标志之一。P63转录因子：P63是P53基因家族的一员，对表皮干细胞的生物性能维持和增殖分化起着决定性作用。对体外培养的角质形成细胞进行克隆分析，可将其分为全克隆细胞和部分克隆细胞，P63在全克隆细胞中大量表达，而在部分克隆细胞中几乎不表达。这些研究数据表明，P63可能是表皮干细胞的一个特异表面标记物。 角蛋白：角蛋白是表皮细胞的结构蛋白，可用于鉴别表皮干细胞、短暂扩增细胞和终末分化细胞。表皮干细胞表达K19，而TAC表达K5、K14，终末分化细胞表达K1和K10。又有实验发现毛囊隆突部表皮干细胞表达K15，而且在干细胞的分化过程中，K15表达的下调较K19更早，K15阴性而CK19阳性的细胞可能是“早期”TAC，因此，K15在鉴别毛囊隆突部表皮干细胞方面可能比K19更有意义。 其他：Redvers等[9]在大鼠皮肤中发现部分细胞能够分泌烟酸己可碱，这些细胞有表皮干细胞的一些特征。最近的实验研究表明，CD90、CD98、CD200也可以作为表皮干细胞的表面标志。
肝细胞生长因子及其受体c(一)
肝细胞生长因子及其受体c(一) 【关键词】肝细胞生长因子；受体；c 【摘要】肝细胞生长因子（HGF)是一种多肽生长因子，具有促进包括肝细胞、上皮细胞、内皮细胞、造血细胞等多种类型细胞的生长、迁移和形态发生的作用.它还参与多种细胞的增殖、迁移,对各类肿瘤的侵袭转移有着重要的诱导作用.本文通过对近年来国外有关文献的回顾，希望能够为进一步探讨HGF及其受体在卵巢癌治疗中的具体意义提供新的思路. 【关键词】肝细胞生长因子；受体；cmet；卵巢肿瘤 1HGF及其受体的结构 肝细胞生长因子(HGF)〔1〕最早是1984年由日本的中村敏一教授从大鼠血浆中得到的，其结构实质是含728个氨基酸的肝素结合糖蛋白.它来自间质细胞，以旁分泌方式作用于邻近细胞，并与细胞表面的受体结合并激活酪氨酸激酶活性，具有较强的促有丝分裂、组织成形、诱导上皮细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用〔2〕.HGF的受体是原癌基因cmet编码的一种跨膜蛋白，称为Met，是由Mr为190000的前体蛋白分裂而得来，由Mr为50000的a链和Mr为145000的3链经二硫键相连而成的杂二聚体.Prat等发现某些癌细胞的Mr为190000Met的前体，缺乏裂解过程，不需连接配体就已有活性，因此就失去了HGF的生长控制.各种瘤细胞和cmet转化后的细胞都过度表达Met，对HGF的反应比正常细胞更敏感强烈. 2HGF及其受体的生物学作用 (1)启动肝再生实验证明，在众多细胞因子中，HGF是肝再生的启动信号，并在肝细胞增殖过程中起重要作用.(2)促进细胞分裂作用HGF在原代肝细胞的无血清培养中可刺激肝细胞DNA合成，1g/LHGF即可观察到生物活性，最大活性浓度5~10g/L.另有报道HGF对其他许多细胞也有刺激作用，例如能够刺激肾小管细胞、角化细胞、黑色素瘤等细胞的DNA合成.(3)细胞运动作用HGF具有类似散射因子的功能，在一些上皮细胞和内皮细胞培养体系中加入不同浓度，均可促进细胞扩散和迁移HGF具有促进包括肝细胞、上皮细胞、内皮细胞、造血细胞等多种类型细胞的生长、迁移和形态发生的作用，还参与多种细胞的增殖、迁移和形态发生.(4)肿瘤坏死作用高浓度的HGF对某些癌及肉瘤细胞系有抑制作用和肿瘤坏死用，该作用机制尚不完全清楚.（5）cmet原癌基因的RNA表达存在于人类的某些上皮组织:如肝脏、肾脏、胎盘、消化道上皮等〔3〕.共聚焦激光扫描显微镜下证实，cmet基因蛋白表达位于腺样结构细胞的边缘.cmet编码的蛋白属于酪氨酸激酶生长因子的受体家族，在体外细胞恶性转化的过程中可以出现基因扩增、重排和过度表达.对于依赖外生的受体调节生长刺激的，进入细胞周期和分裂进程的正常细胞来说，这就意味着存在着一个调节细胞增生的平衡机制〔4〕.相比较而言，肿瘤细胞通过产生生长因子与受体获得一定水平的自主生长信号（自主分泌）.近年来，已有相关研究表明，与癌形成和发展有关的不同细胞类型之间出现异型信号(非自主分泌)，但目前的体内实验方法不足以说明这种复杂的关系〔4〕.在研究与cMet 蛋白的相关信号通过非自分泌机制促进转移中报告，利用转基因鼠移植模型将过度表达HGF 及受体cmet的肿瘤细胞移植后，直接评估异型信号对转移部位的作用〔5〕.在体内，非自主分泌信号与自主分泌进行的是条件不均衡的竞争.恶性肿瘤细胞的非内部生长因子对体内转移产生重大影响，提供了异型信号对肿瘤进展发挥作用的实验依据. 3HGF及其受体对癌细胞侵袭的影响机制 肿瘤的浸润和转移是一个非常复杂的病理过程，也是患者死亡的主要原因.大量的临床和实验研究表明，HGF和cMet在肿瘤的发生发展中具有重要作用.正常细胞有能力通过减少cmet 的表达控制其对HGF的反应；而在大部分肿瘤细胞中cmet为过表达的状态，并呈现高水平的自体磷酸化.一般来说，cmet的过表达是由于基因的扩增所致.在结，直肠癌、肝癌和脑胶质瘤中，cmet的表达与肿瘤的发生发展有着密切联系.Ivan和Webb等用激活的ras和ret基
人骨髓间充质干细胞体外培养模型的建立和表型分析
经验交流 文章编号１００６－８１４７（２０11）０4-0458-03 人骨髓间充质干细胞体外培养模型的建立和表型分析 刘长乐1，李广平1，郑心田1，孟恒星2，邱录贵2，娄建石3 （1.天津医科大学第二医院心脏科，天津300211；2.中国协和医科大学血液病学研究所，天津300020；3.天津医科大学药理学教研室，天津300070） 关键词骨髓间充质干细胞；流式细胞术；培养模型中图分类号 Q813 文献标识码 B 骨髓（bone marrow ，BM ） 中包含有两类干细胞，即造血干细胞和间充质干细胞(mesenchymal stem cells ，MSCs)。MSCs 属混杂细胞群，其表面抗原标志尚未完全确定。MSCs 作为多能干细胞具有可塑性，有报道显示在细胞因子作用下可以在体外诱导分化为骨骼肌细胞、脂肪细胞、心肌细胞、上皮细胞和血管内皮细胞，并且参与体内组织新生、损伤修复 和重建[1]。本实验应用改进的密度梯度离心法、差异 贴壁法和酶消化法建立MSCs 的体外培养扩增模型，寻找高度特异性的表面抗原，以利于干细胞移植的广泛应用。1材料与方法 1.1材料（1）BM ：39岁男性健康志愿者5mL 。（2）仪器：FACScar 流式细胞仪（Beckman -Coulter ），倒置相差显微镜（OLYMPUS ），荧光显微镜（OLYM －PUS ） ，恒温培养箱（Forma Scientific ），高速低温离心胞系MHCC97-H 的增殖。骨髓间充质干细胞旁分泌物质或许通过分泌细胞因子影响肝癌细胞某一信号通路促进细胞增殖的。 AFP 是CBRH-7919肝癌细胞分泌的一种蛋白，本研究发现随着骨髓间充质干细胞旁分泌物质浓度的升高，AFP 也逐渐升高，表明骨髓间充质干细胞旁分泌物质也增强了7919肝癌细胞分泌AFP 的功能。 骨髓间充质干细胞促进肝癌细胞增殖的具体机制目前尚未明确，目前有以下几种学说：免疫抑制影响肿瘤基因的表达，分泌细胞因子以及参与肿瘤血管形成等[4-7]。邵志红等[5]发现大鼠骨髓间充质干细胞能通过影响Walker-256肝癌细胞VEGF 和nm23的表达,促进肝癌细胞的增殖。Li 等[6]发现人骨髓间充质干细胞是通过分泌细胞因子进而影响TGFβ信号通路促进肝癌细胞增殖的。尽管骨髓间充质干细胞对肝癌增殖的确切机制尚未明确，但有效地抑制骨髓间充质干细胞的促增殖作用具有重要的意义，其有可能成为新的抗癌靶点。笔者将继续研究骨髓间充质干细胞旁分泌物质促进肝癌细胞增殖的内在机制，为肝癌治疗带来新的希望。 参考文献： ［1］Lu YR,Yuan Y,Wang XJ,et al.The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo[J].Can-cer Biol Ther,2008,7(2):245 ［2］乔玲，赵铁军，山长亮，等.人间充质干细胞抑制肝癌细胞增殖 的作用及其基因表达谱分析[J].中国生物化学与分子生物学报，2007，23(12):1037 ［3］陈双庆，王培军，李铭华，等.磁标记骨髓间充质干细胞对肝细 胞癌的抑制作用[J].临床放射学杂志，2009，28(10):1454 ［4］Djouad F,Plence P,Bony C,et al.Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals [J].Blood，2003,102(10):3837 ［5］邵志红，王培军，李铭华，等.大鼠骨髓间充质干细胞移植对 Walker-256肝癌生长影响的实验研究[J].中华医学杂志，2009，89(7):491 ［6］Li GC,Ye QH,Xue YH,et al.Human mesenchymal stem cells in-hibit metastasis of a hepatocel lular carcinoma model using the MHCC97-H cell line [J].Cancer Sci,2010,101(12):2546 ［7］Zhu W,Xu W,Jiang R,et al.Mesenchymal stem cells derived from bone marrow favor tumor cell growth in vivo [J].Exp Mol Pathol,2006,80(3):267 ［8］Zheng JF,Liang LJ.Transplanted bone marrow stromal cells are not cellular origin of hepatocellular carcinomas in a mouse model of carcinogenesis[J].World J Gastroenterol,2008,14(19):3015 ［9］Leek RD,Harris AL,Lewis CE.Cytokine networks in solid human tumors:regulation of angiogenesis[J].J Leukoc Biol,1994,56(4):423 ［10］Budhu A,Wang XW.The role of cytokines in hepatocellular carci-noma[J].J Leukoc Biol,2006,80(6):1197 （2011-04-27收稿） 作者简介刘长乐（1979-），男，主治医师，硕士，研究方向：冠心病、心律失常；通信作者：李广平，Email ：tjcardiol@https://www.360docs.net/doc/cf5325648.html, 。 Ｖｏｌ．１7熏Ｎｏ．4Dec.２０11 天津医科大学学报 Journal of Tianjin Medical University 第１7卷4期２０11年12月 458
人体干细胞知识问答
人体干细胞知识问答 1、什么是干细胞 答：是一种未充分分化，尚不成熟的细胞。具有自我更新及分化潜能。可以产生构成身体器官各种类型的组织，生物学家将它称为“全能性细胞”。 2、人体的美容、健康、衰老、疾病和死亡均和细胞有关。 3、干细胞的特点是什么 答：一、干细胞本身不是处于分化途径的终端；二、干细胞能无限地增殖分裂； 三、可连续分裂几代，也可较长时间内处于静止状态。 4、干细胞能分几类 答：一、据个体发育过程中出现的先后次序分：胚胎干细胞：ES细胞（220多种细胞，包括生殖细胞）和成体干细胞（具有修复和再生能力的细胞）；二、据干细胞的发育潜能分：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞； 5、什么是干细胞技术 答：又称为再生医疗技术，是指通过对干细胞进行鉴别、分离、纯化、扩增、体外培养、定向诱导甚至基因修饰等过程，在体外繁育出全新的、正常的、甚至更年轻的细胞、组织或器官，并最终通过细胞组织或器官移植实现对临床疾病的治疗。 6、干细胞治疗安全吗 答：干细胞研究已经完成了临床前全套安全性实验，包括急性毒性、长期毒性、致瘤性、致畸性、局部刺激、发热和免疫毒性试验。结果表明：安全无毒。因为干细胞是一种未分化、未成熟的细胞，其表面抗原表达很微弱，患者自身免疫系统极难识别，因此干细胞治疗不会产生免疫排斥及过敏反应，十分安全。 7、胚胎干细胞的特点是什么 答：一、源于早期胚泡中的内细胞群，保持未分化及自我复制能力，可分化为三个胚层中的所有细胞。二、通过单细胞克隆，建立有相同遗传特性的胚胎干细胞系。三、具有正常、完整、稳定的染色体核型。四、端粒酶活性呈阳性，具有维持端粒长度，保持干细胞增殖能力的重要作用。五、可形成畸胎瘤。 8、人体是由60万亿个细胞所组成的生命体。 9、如何获取干细胞 答：成人干细胞可以从骨髓或外周系统中提取，其次可从脐带血中提取，第三可从胚胎中提取。 10、哪些人不适宜移植干细胞 答：高敏体质者；生命体征不正常或休克者；严重感染者；晚期恶性肿瘤者；多脏器衰竭者；出血性疾病者；艾滋、乙肝、梅毒等血清学检查阳性者；基因或免疫缺限者；期望过高或要求不合理者。
干细胞美容背后的真相
干细胞美容背后的真相 自从干细胞技术引起科学界的关注后，乘着干细胞概念的顺风车，整形市面兴起了一批号称能抗衰老、“还原青春”，并美白、祛斑、祛皱等功效于一身的所谓“干细胞针”。许多消费者为了追求美丽，心甘情愿付出不菲的代价，以求达到美容机构所宣传的效果。 干细胞是一种能够分化成其他细胞的细胞，通过注射有望用干细胞来修复那些被疾病和创伤所破坏的细胞和组织。干细胞是人的组织里面细胞的一种，把它提取出来以后在体外进行培养，可以培植出各种组织细胞。但细胞是不稳定的，既有可能培育出“好细胞”，但也有可能培育出。“不好细胞”。 另外市面上很多的干细胞美容产品，用的是另外一成份——重组牛碱性成纤维细胞生长因子。重组牛碱性成纤维细胞生长因子是由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。也就医药里面重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用液又称贝复剂的主要成份，有促进创面愈合的作用，用于多种难愈创面的治疗。但该药一个特殊的地方是需要低温冷藏，2℃-10℃，医院都是放在专门的冰箱里面，使用的时候才拿出来，而普通的美容产品，整个生产，流通，储藏的条件是远远达不到这个要求的，基本不可能保证其存活，更别说保持其活性和功效了！ 中科院院士、细胞生物学家翟中和教授说：“全世界的干细胞研究目前只限于人类健康方面，还没有到美容这个层次。而且，目前干细胞研究更多是在实验室的研究阶段，还没有一项干细胞产品真正推向了市场，利用干细胞进行美容是不可能的。” 由于干细胞针剂是注射针剂，一些生产厂家都号称通过了卫生部的审查，有的甚至可以向消费者出示相关批文。但卫生部专门负责审批药品的医管处负责人曾接受媒体采访时明确表示：卫生部没有批准过任何干细胞美容产品。据国家食品药品监管局的有关人士表示，中国没有批准上市也没有批准进口过任何干细胞制品。 有关干细胞美容的宣传主要分为两类，一类是“胚胎干细胞”，另一类是“自体干细胞”。翟中和院士告诉记者：“美容机构的宣传不可信，胚胎干细胞是从流产婴儿身上提取的，是不能轻易做的。因为如果没有经过配型就直接注射胚胎干细胞，容易引起免疫排斥反应。此外，这种干细胞进入体内发育成熟，会攻击受者的皮肤、肝脏、肾脏等，导致组织器官受损。同时，早期的胚胎干细胞容易发生癌变，可能造成细胞恶性转化。而且直接把细胞拿来移植，还存在着生物安全、病毒感染的潜在风险，因为艾滋病等许多病毒都是通过母亲传播给婴儿的，由此可能传给受者。所以，直接注射胚胎干细胞是极不科学、也是极其危险的。目前，对于干细胞技术应用的研究还处于相当初步的实验探索阶段。现在说注射干细胞或者提取液会对人体健康有什么好处是不太可能的，相反有可能出现过敏等反应。”
细胞因子常识
细胞因子常识 重组细胞因子概述 一、细胞因子的概念 细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。细胞因子具有非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢等。 二、细胞因子的特征 1、低分子量；一般为＜60kD的多肽或糖蛋白。多以单体形式存在，少数为二聚体，三聚体。 2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌，通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。 3、一种细胞因子可由多种细胞产生，同一种细胞可产生多种细胞因子。 4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。 5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。 三、细胞因子的分类 1、白细胞介素(interleukin，IL-s) 最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。 2、干扰素（interferon,IFN) 最早发现的细胞因子，有干扰病毒感染和复制的能力。分α、β和g三种类型。 3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor，TNF) 1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。 4、集落刺激因子(colony-stimulating factor，CSF) 指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。包括G-CSF（粒细胞）、M-CSF（巨噬细胞）、GM-CSF（粒细胞、巨噬细胞）、Multi-CSF（多重）（IL-3）、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素(TPO)等。 5、趋化因子(chemokine)
肝细胞生长因子_HGF_对肝再生的影响_杨怀滔
肝细胞生长因子是一种多效性细胞因子，是由ＮＡＫＡＭＵＲＡ等于１９８４年从部分肝切除大鼠血清中分离得到，因其能刺激原代培养肝细胞生长和合成，将其命名为ＨＧＦ。ＨＧＦ是目前已知最强的肝再生促进剂，是最早被认识在肝再生过程中起重要作用的细胞因子之一。肝再生是由多因子参与的多阶段受多种影响因素精密调控的过程，肝脏是人或动物中少有的能够进行快速再生的器官之一，当肝被部分切除或受到药物损害后剩余的肝细胞通过ＤＮＡ合成和有丝分裂重建与机体大小相适应的最佳体积，即肝再生。但是这种再生并非是切除的肝脏重新长出，而是由剩余的肝叶代偿性的增大直至恢复原有肝的质量和体积，恢复后肝细胞的再生根据肝脏的重量与个体体重的比例来决定再生是否停止［１，２］。因此肝再生被分为启动，增殖和终止三个阶段。各个阶段有着不同的细胞因子参与调控，ＨＧＦ主要在增殖阶段起作用。 一、ＨＧＦ一般生物学特性 ＨＧＦ是成熟肝细胞ＤＮＡ合成最强的刺激因子和肝损伤后再生的激发因子，并是肝非实质细胞的一种有效促分裂剂［３］。成熟的肝细胞生长因子是由一个分子量为６９ｋＤ的α－链和一个分子量为３４ｋＤ的β－链以二硫键连结形成的异二聚体双链结构，由７２８个氨基酸组成［４］。 近年来一些学者利用免疫组化和ＨＧＦｍＲＮＡ检测技术发现ＨＧＦ广泛分布于肝脏内枯否氏细胞、内皮细胞、成纤维细胞、贮脂细胞、肺脏内皮细胞；恶性肿瘤细胞（包括肺癌细胞、胰腺癌细胞、胃癌细胞）等多种细胞中［５，６］。其中以肝脏内枯否氏细胞分泌最为主要。ＨＧＦ具有许多生物学功能，但是ＨＧＦ对肝细胞的作用最为显著，表现在ＨＧＦ可以抑制肝细胞凋亡，促进肝细胞再生，恢复肝细胞功能，有助于度过肝衰竭危险期［７］。此外ＨＧＦ在血管生成、组织损伤修复以及促进肿瘤细胞的发生及转移等方面也起着重要作用［８］。ＨＧＦ是通过ＨＧＦ受体在肝再生中发挥作用的，ＨＧＦ受体在１９９１年被识别，是Ｃ－Ｍｅｔ原癌基因编码产物，因此ＨＧＦ受体也被称为Ｃ－Ｍｅｔ受体［９］。Ｃ－Ｍｅｔ受体是由分子量为５Ｏｋｄ的细胞外α－亚单位和分子量为１４５ｋｄ的跨膜β－亚单位组成的异二聚体。β－亚单位分为细胞外区、跨膜区和细胞内部分，含有一个蛋白激酶区，可被酪氨酸残基的磷酸化而激活［１０］。ＨＧＦ和ｃ－ｍｅｔ受体结合后，酪氨酸残基自动磷酸化，激活受体的酪氨酸激酶区。酪氨酸残基的磷酸化募集了细胞内的信号分子，信号分子相互偶联形成多个复合体，不同的复合体与ｃ－ｍｅｔ受体不同的位点结合，诱导相应的生物学效应。 二、ＨＧＦ对肝再生的影响 肝细胞受损时，ＨＧＦ的合成分泌增加，血清ＨＧＦ升高，可作为肝脏受损的指标之一［１１］，Ｔｏｍｉｙａ等发现１１２例慢性肝病患者９０％有ＨＧＦ升高，浓度超过了１．２ｎｇ／ｍｌ，与血清总胆红素、总胆酸、ＡＳＴ水平呈正相关。１６例暴发性肝衰和１６例慢性肝衰，血清ＨＧＦ升高的发生率分别为１００％和８０％，表明ＨＧＦ水平高低在一定程度上反映了病情的严重程度，测定血清ＨＧＦ对诊断各型肝炎及病情估价具有重要的参考价值。朱洪等［１２］证实了应用促肝细胞生长素能降低肝部分切除后ＡＬＴ，ＡＳＴ和钾离子的水平，何勇等［１３］在离体细胞水平上直接观察到转染ＨＧＦ可提高ＣＣＬ４染毒肝细胞的存活率，降低受损细胞ＡＬＴ、Ｋ＋漏出，国外的一些学者［１４，１５］观察到加入外源性ＨＧＦ实验组的肝脏功能明显强于对照组，因此外源性ＨＧＦ具有提高肝细胞膜的完整性，抗肝细胞凋亡，对抗各种肝损伤的活性。 ＨＧＦ具有极强的促成熟肝细胞分裂，促进组织血管新生和侧支循环 的建立的作用［１６，１７］，在保护肝脏功能，促进肝细胞再生中起关键作用［１８］。有学者发现肝部分切除后应用肝细胞生长因子与单纯肝部分切除相比肝再生指数和残留肝脏质量明显升高，因此ＨＧＦ能促进肝脏再生［１９］。张弘炜等［２０］的研究结果显示，术后给予外源性ＨＧＦ后，残肝重量／减体积前全肝重量以及反映肝细胞再生的ＭＩ、ＰＣＮＡＬＩ及ＢｒｄＵＬＩ均比对照组有显著提高，提示ＨＧＦ对大鼠减体积肝移植术后移植物的再生有明显促进作用。左国杰，杨立群等［２１］证明了外源性ＨＧＦ可明显降低ＡＬＴ、ＡＳＴ，改善肝部分切除术后的肝功能，促进肝再生。钱晓峰，张峰等［２２］的实验中实验组的肝细胞ＰＩ以及Ｋｉ－６７标记指数均在术后第２、４ｄ时较对照组明显增高，这在一定程度上说明术后使用重组肝细胞生长因子（ｒＨＧＦ）能促进移植肝细胞再生。Ｈｉｄｅｓｕｋｅ等［２３］得出重组肝细胞生长因子活化剂能显著恢复切除肝脏的功能，增强增殖细胞抗原的标记指数和肝再生比率。另外余宏建［２４］等在给实行ＰＶＥ的家兔注射外源性ＨＧＦ后，观察到残肝在全肝中的体积比例显著高于对照组，得出了与上述相同的实验结果。 研究表明ＨＧＦ是通过促肝细胞ＤＮＡ和蛋白质合成来影响肝脏再生。王书奎等［２５］观察到肝６８％切除组的ＰＣ—ＮＡ在１２ｈ表达增加，２４ｈ达到高峰，这与肝细胞ＤＮＡ合成的峰值相一致，随后逐渐下降，至１６８ｈ为最低水平。这一变化规律与残肝中ＨＧＦ的表达相一致，由此可以推测，ＨＧＦ可以促进肝细胞ＤＮＡ的合成，从而影响肝细胞的增殖。ＹＯｇｕｒａ等［２６］的实验证明了外源性ＨＧＦ能够促进肝再生过程中的ＤＮＡ与蛋白质的合成，从而对肝再生发挥着重要作用。 最新研究表明，ＨＧＦ具有诱导其它细胞向肝样细胞分化的作用。袁宏等［２７］的实验中加有ＨＧＦ与ＩＬ－６的脐血间充质干细胞培养组检测见ＣＫ１８阳性率高于其他任何组，证明ＨＧＦ可以诱导脐血间充质干细胞分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞。同时还有学者得出ＨＧＦ和表皮生长因子联合应用可以使体外的培养的卵圆细胞分化为成熟肝细胞［２８］。Ｙａｍａｚａｋｉ等［２９］研究体外肝脏非实质细胞和肝功能衰竭患者的血清在鼠类骨髓细胞转化为肝细胞中的作用时，骨髓细胞在与含肝功能衰竭的患者血清、制瘤素Ｍ和ＨＧＦ的培养基中共同培养数天后，培养基内出现了骨髓来源的肝细胞样细胞克隆体，并且这些克隆体表达肝细胞特异基因，提示ＨＧＦ具有诱导骨髓细胞向肝样细胞分化的潜能。这些研究可能会成为将来治疗各种肝脏疾病的可行方法。 三、ＨＧＦ对肝功能的影响 动脉血酮体比是一项反映肝储备功能的指标。实验将大剂量ＨＧＦ组与对照组进行比较，发现有显著差异性。结果表明，ＨＧＦ能促进肝细胞的能量代谢，进而提高肝储备功能［１２］。朱洪等通过测定临床上总蛋白、白蛋白、ＡＬＴ、ＡＳＴ、总胆固醇、动脉血酮比的肝功能指标，表明小剂量的促肝细胞生长素对肝部分切除术后的肝功能改善不明显，而大剂量的促肝细胞生长素对肝脏部分切除术后肝功能改善有明显作用［３０］。同时该实验也证明ＨＧＦ可明显降低ＡＬＴ、ＡＳＴ，改善正常肝脏或伴有慢性肝损伤的肝脏，行肝部分切除术后的肝功能。无论是正常肝脏或伴有慢性肝损伤的肝脏、行肝部分切除术后，肝脏的蛋白合成功能降低，因而血清蛋白也相应降低。该实验中，使用大剂量ＨＧＦ组与对照组相比，血清总蛋白和白蛋白恢复较快，显示ＨＧＦ能促进肝脏的蛋白合成，提示ＨＧＦ能影响肝脏脂代谢。 ＨＧＦ的在临床上主要用于治疗重型肝炎、肝硬化、慢性活动性肝炎以及暴发性肝衰竭等疾病［３１，３２］。ＨＧＦ对肝再生起作用的同时还对正常组 肝细胞生长因子（HGF）对肝再生的影响 杨怀滔１荣成２陈智芳３张晓２李可洲４ （１．成都医学院２００７级影像本科班２．成都医学院实验技术教研室 ３．成都医学院２００７级临床本科班９班４．成都军区总医院肝胆外科）［摘要］肝细胞在正常情况下很少分裂，但在肝损伤后会表现出强大的再生能力。肝细胞生长因子（ＨｅｐａｔｏｃｙｔｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）是一个多效应生长因子，参与机体多种器官组织细胞的生长、再生和重塑等过程。但是它在肝再生中所起的作用尤为突出，现就其 做一综述。 ［关键词］肝再生肝细胞生长因子 基金项目：本文系成都医学院“综合创新项目”（编号：ＣＸＳＹ２００９０４）。 作者简介：杨怀滔（１９８８．６－），汉族，０７级影像本科班，从事ＳＤ大鼠无创门静脉栓塞法对门静脉血管内皮细胞的影响及与肝再生的关系。通讯作者：荣成（１９８０．７－），汉族，助教，成都医学院实验技术教研室，科研秘书，主要从事ＳＤ大鼠离体心脏灌流的影响因素与ＳＤ大鼠无创门静脉栓塞法对门静脉血管内皮细胞的影响及与肝再生的关系。 ４０７ ——