生物制品无菌试验规程
生物制品无菌试验规程
生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。
1 抽样
1.1原液及半成品
原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1 大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。
1.1.2 原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。
1.2 成品
每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。
1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～10000支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。6～20ml抽检量加倍。5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。
2 无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）
2.1 检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。
2.2 检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。
检查霉菌和腐生菌应采用改良马丁培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。
2.3 检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。
2.4 生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。
2.5 无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。
2.6 生物制品无菌试验培养基由质量检定部门与培养基制造部门会同进行灵敏度试验。每当更换主要原材料时，应进行灵敏度试验，合格后方可应用（灵敏度试验法见附录2、3）。
2.7 各生产单位的质量检定部门应定期抽检无菌试验培养基的灵敏度，检定所应定期抽检各所的无菌试验培养基。
3 无菌试验方法
3.1 无菌试验取样、移种等全部操作，应在无菌操作室内或无菌条件下进行，无菌操作室应经常保持清洁，在每次操作前，应彻底消毒。
3.2 菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品及粘稠不易过滤的血液制品应用直接接种法进行无菌试验。人白蛋白及人丙种球蛋白（包括各种剂型及应用途径的制品）应用薄膜过滤法进行无菌试验，其他血液制品亦可用薄膜过滤法或直接接种法进行。
3.3 直接接种法
3.3.1 菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品
3.3.1.1 每安瓿装量5.0ml以上者（不含5.0ml）取样不应少于1.0ml，装量在5.0ml以下者（含5.0ml）取样不得少于0.5ml，装量不足0.5ml者，全部吸取。
3.3.1.2 含防腐剂的制品，接种量与培养基的比例：用苯酚或氯仿作防腐剂者至少为1:20，用汞作防腐剂者或制品内含有甲醛、抗生素者至少为1:50。先按此比例接种于硫乙醇酸盐培养基内增菌，于20～25℃培育3～4天后移种至硫乙醇酸盐培养基、适宜的琼脂斜面、改良马丁培养基各2管，每管0.5ml。将硫乙醇酸盐培养基、适宜的琼脂斜面各1管置30～35℃培育，其余各管置20～25℃培育，培育时间除有专门规定者外共为8天。
3.3.1.3 不含防腐剂制品，装量在5.0ml以下者（包括5.0ml）每10支安瓿混合，装量在5.0ml以上者每7支安瓿混合，将混合后的样品直接接种一组培养基，分别置20～25℃、30～35℃培育，培育时间共为8天。
3.3.1.4 支原体培养基临用时将半固体煮沸10～15分钟后，冷却到56℃左右，加入未灭能马血清或灭能小牛血清和酵母浸液（培养基、血清、酵母浸液之比为7:2:1），并可酌情加入适量青霉素或醋酸铊，充分摇匀，等冷至35～37℃时种入待检样品0.5～1.0ml，共接种2支培养基，置35～37℃培育14天。
3.3.1.5 混浊和接种后不能判定结果的制品，可取规定量的样品接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基（200ml）内进行增菌培养，3～4天后移种。培养基种类和支数、培育温度同3.3.1.2项，共培育8天后判定结果。
3.3.2 血液制品
3.3.2.1 取规定抽样数，按下列规定，从每瓶抽取样品，并全部接种完。
样品每瓶装量不足1.0ml者，抽取全量，1～20ml以下者（不含20ml），抽取1.0ml以上，每支装量为15ml的培养基，接种1.0ml。
样品每瓶装量以下者（不含）抽取5.0ml以上,100ml及以上者按15%抽样，每支装量为40ml的培养基，接种5.0ml。
应接种的培养基支数依取样的总量而定。接种硫乙醇酸盐培养基与改良马丁培养基支数之比为2:1。
接种后将硫乙醇酸盐培养基总支数的1/2置30～35℃培育，其余置20～25℃培育，改良马丁培养基置20～25℃培育，培育时间不少于14天。
3.4 薄膜过滤法
滤膜孔径为0.22～0.3μm。
取规定抽检样品数，每瓶装量100ml及100ml以下者取全量，100ml以上者取半量加入灭菌薄膜过滤器内，加压或减压过滤。如为含汞防腐剂者，在样品过滤后，应用灭菌生理盐水或其他适宜溶剂冲洗滤膜3次，每次100ml。过滤后，无菌取出滤膜，分别放入硫乙醇酸盐培养基2支及改良马丁培养基1支（每支装量不少于40ml，高度不得低于7cm）。如果使用一个过滤装置，则将该膜剪成三等分，分别放入规定培养基中。将滤膜放入培养基后，一支硫乙醇酸盐培养基置30～35℃培育，其余各支培养基置20～25℃培育。培育时间不少于7天。
最好采用全封闭式一次性微孔过滤集菌器，要求每支培养器培养装量为100ml。
3.5 检查厌氧性杂菌用培养基需加热驱氧者，必须冷却到45℃以下再行接种。
3.6 冻干制品按使用说明书或瓶签规定的稀释量稀释后进行无菌试验。
4 判定
4.1 无杂菌生长判为合格（有专门规定者除外）。
4.2 无菌试验发现杂菌生长，可复试。该制品量应加倍。若复试仍有同样杂菌生长，该制品判为不合格。如为不同杂菌生长，可第二次复试，复试样品为第一次复试量的2倍，若仍有杂菌生长该制品判为不合格。支原体阳性者不复试，该批制品判为不合格。
4.3 成品无菌试验不合格的亚批数占整批的30%以上时，由质量检定部门会同有关部门根据具体情况，全部或部分废弃。
附录1无菌试验培养基处方
1硫乙醇酸盐培养基
胰酪蛋白胨（或酪素胰酶消化液，以总氮计2000mg）15g
酵母浸出粉（或酵母透析液200ml）5g
葡萄糖5g
氯化钠 2.5g
L-胱氨酸（或半胱氨酸盐酸盐）0.5g
硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.6ml）0.5g
琼脂0.65～0.75g
新鲜配制的0.1%刃天青溶液（或0.2%美蓝溶液0.5ml）1.0ml
去离子水（或蒸馏水）加至1000ml
最后pH7.1±0.2
2 硫乙醇酸盐培养基（不含琼脂）
胰酪蛋白胨（或酪素胰酶消化液，以总氮计2000mg）15g
酵母浸出粉（或酵母透析液200ml）5g
葡萄糖5g
氯化钠 2.5g
L-胱氨酸（或半胱氨酸盐酸盐）0.5g
硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.6ml）0.5g
去离子水（或蒸馏水）加至1000ml
最后pH7.1±0.2
3 改良马丁培养基
葡萄糖20g
蛋白胨5g
酵母浸出粉（或酵母透析液100ml）2g
磷酸氢二钾1g
硫酸镁（含7分子结晶水）0.5g
去离子水（或蒸馏水）加至1000ml
最后pH6.4±0.2
4 猪胃消化液
半固体培养基
猪胃消化液500ml
1:2牛肉浸液500ml
氯化钠 2.5g
葡萄糖1g
琼脂3～4g
牛心消化液1000ml
酵母浸膏1g
琼脂3～4g
附录2 需-厌氧菌无菌试验培养基灵敏
度试验法
1 菌种
1.1 需氧菌
乙型溶血性链球菌（32210株），短芽胞杆菌（7316株）。
1.2厌氧菌
生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）。
以上菌株均由中国药品生物制品检定所分发。
2 培养基
凡应用于无菌试验的培养基（增菌和试验用）都应进行灵敏度试验。
3 操作
3.1 不应在同一无菌操作室内同时操作2个菌株。
3.2 将菌种接种于适宜的培养基，经30～35℃培育一定时间（乙型溶血性链球菌和生孢子梭状芽胞杆菌培育24～48小时，短芽胞杆菌培育18～20小时）后，将乙型溶血性链球菌和短芽胞杆菌分别刮入灭菌的生理盐水内制成均匀菌液，生子孢梭状芽胞杆菌先将菌液吸入灭菌的试管内，再用灭菌生理盐水稀释适宜浓度制成均匀菌液，再将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度。然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释。
3.3 将10-6～10-8（短芽胞杆菌、生子孢梭状芽胞杆菌为10-6～10-8，乙型溶血性链球菌为10-7～10-9）菌液各1ml分别接种到9ml（用于厌氧菌的培养基在试管中装置高度不得低于7cm）试验用培养基中，每个稀释度至少接种3管，并用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生子孢梭状芽胞杆菌的培养基，置30～35℃培育3天，接种短芽胞杆菌的培养基培育5天，记录结果。
4 结果判定
以接种后培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次试验中，以2次达到的最高灵敏度为判定标准。
附录3 霉菌无菌试验培养基灵敏度试
验法
1 菌种
白色念珠菌、腊叶芽枝霉，由中国药品生物制品检定所分发。
2 培养基
凡应用于霉菌无菌试验用的培养基都应进行灵敏度试验。
3 操作
3.1 操作霉菌的无菌室应与其他无菌室隔离，有2个以上菌株试验时，不应在同一无菌操作室内同时进行。
3.2 将菌接种在土豆培养基上，20～25℃培养5～7天后用灭菌生理盐水洗下菌苔，移入装有玻璃珠的大管中将孢子打散，经装有脱脂棉注射器过滤。将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度，然后做10倍系列稀释。
3.3 将10-5～10-7菌液各1ml分别接种到9ml试验培养基中，每个稀释度至少接种3管并用未接种过的培养基作对照，20～25℃培育5天，逐日观察结果。
4 结果判定
以接种培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次试验中以2次达到的最高灵敏度为判定标准。
生物制品生产用动物细胞制备及检定规程
生物制品生产用动物细胞制备及检定规程Requirements for Preparation and Control of Animal Cell Substrates Used for Production of Biologics 本规程适用于生产和/或检定疫苗等生物制品的细胞培养，其中包括二倍体细胞、传代细胞和原始细胞培养。本规程对这些细胞的性质、质量及安全性检定提出了明确要求。 A 对各类细胞培养总的要求 1 细胞库的建立 来自人或动物的细胞，已经通过全面检定，并得到国家药品管理当局批准，方可用于生物制品生产及检定。 1.1原始细胞库 由一个原始细胞群体，发展成细胞系（株）或经过克隆培养而形成拘泥的细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产及检定。为了保证能持续使用而建立原始细胞库。目的是使得制品每一生产周期，都能提供一个已标定好的相同质量的细胞源。因此，在特定条件下由有一定数量、成分一致的细胞，按一定量均匀分装于安瓿，于液氮或-100℃以下冻存备用，即为原始细胞库。 1.2主细胞库（MCB） 取原始细胞种子，通过相应方式进行细胞传代，增殖一定数量细胞，将所有细胞均匀混合成一批，定量分装安瓿，保存于液氮或-100℃以下备用。这些细胞必须以其自身的特定质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，为建立工作细胞库用。 1.3工作细胞库（WCB） 工作细胞库的细胞由主细胞库细胞传代扩增而来。主细胞库之细胞经传代增殖，达到一定代次水平的细胞，全部合并成一批均质细胞群体，再按要求的细胞数量分装安瓿，保存于液氮或-100℃以下备用。冻存时细胞的传代水平须确保细胞复苏后传代增殖的细胞数量能满足生产一批或一个亚批产品。此时传代的水平必须在该细胞用于生产限制最高代次之内。工作细胞库细胞，必须按该细胞的检定要求，逐项进行全面检定，合格后方可用于生产。 1.4生产用细胞培养 取出冻存的工作细胞库中一个或多个安瓿，混合后培养，传递一定代次后供生产制品使用。其代次不得超过对该细胞用于生产的最高限制代次。从工作细胞库取出的细胞种子增殖出来的细胞，不再回冻保存和再用于生产。 1.5体外培养细胞龄的计算 二倍体细胞龄以细胞群体倍增计算，以每个培养容器细胞群体细胞数为基础，每增加一倍作为一世代，即1瓶细胞传2瓶（1：2分种率）再长满瓶为一世代；1瓶传4瓶（1：4）为二
灭菌物品的发放、储存要求(全文)
灭菌物品的储存、发放要求及质量控制 一、基本概念： 无菌物品存放区：消毒供应中心内存放、保管、发放灭菌物品的区域，为清洁区域。 质量控制：是指“质量管理的一部分，致力满足质量要求”。质量控制的目标是确保产品质量能满足用户的要求。 二、主要内容 （一）储存 储存是影响无菌质量的重要环节。清洁、干燥、温湿度适宜的环境可以降低无菌物品储存中微生物等污染的几率。消毒供应中心人员须严格执行消毒隔离和卫生措施，从而保证无菌物品质量，降低医院感染。无菌物品发储存必须严格按照监测质量标准确认无菌物品质量，确保储存的无菌物品质量。各类无菌物品的储备量应充足，及时补充用量。保障临床诊疗、手术、急救、突发公共事件工作顺利开展。加强无菌物品使用量和周转率的控制，避免和减少过期物品以及积压、损坏、丢失等问题造成的浪费。 1、无菌物品储存 储存包含储存和保管。储存，有物品以备待用的含义。保管是储备的继续，是保护物品不受损害的过程。无菌质量特性决定了无菌物品储存及保管有其特殊的管理要求，即更严格的质量安全和控制污染的措施。无菌物品储存区是“存放、
保管、发放无菌物品的区域，为清洁区域”。消毒供应中心无菌物品储存分为无菌储存区和库房储存两种形式。 无菌储存区储存保管的无菌物品包括由消毒供应中心处理的重复使用无菌医疗器械、器具，部分一次性使用无菌器械等物品。无菌物品储存工作包括以下方式和要求： （1）建立基数：根据临床工作量建立各类无菌物品、抢救物品名目和数量。各类无菌物品每日清点、及时补充，保证储备充足。重复使用器械的备量不低于1：2，即用1份备2份物品量。一次性物品采购流程的工作周期较长，一般储量不低于10天。急救物品的储备根据医院规模和承担急救任务量定额。 （2）固定放置位置：物品摆放位置规格化，能够存取方便。可设柜架号、层次号、位置号。依据物品分类目录、储备量定额以及物品物理、化学等自然属性。例如手术器械、手术敷料、常规诊疗器械、各类一次性诊疗器械、贵重器械等具有物理和化学属性不同的特点。还可根据备用性质进行位置的规划，例如，专科使用器械、急救物品器械等。通过固定位置利于存取方便。 （3）物品分类放置：通常灭菌包应分类为手术器械包类、手术辅料包类、病区通用的无菌包类、专科无菌包类、低温灭菌包类、紧急突发事件和抢救用无菌包类、一次性无菌物品类、或贵重物品类等。各类物品均应分架或分开摆放，不应堆放或混放。手术器械包摞放一般不超过两层，同类名称的器械宜放置同一层架上或同一灭菌篮筐内；手术辅料包应和手术器械包分开层架码放；病区普通诊疗包应分类放置在同一层架上或同一灭菌篮筐内；较小、不规则的无菌包应分
无菌技术操作流程及评分标准
无菌技术操作流程 开始：各位老师下午好，我操作的项目是无菌技术操作。 1.无菌技术操作的目的：保持无菌物品无菌区域不被污染，防止一切微生物侵入机体，避免给患者带来不应有的损失和危害 2.环境评估：操作前30分钟停止清扫，操作中减少人员走动，开窗、通风、换气，操作台宽敞、平坦、整洁、干燥。 3.用物准备：治疗盘无菌包：包内置无菌巾若干无菌容器内置无菌持物钳棉签无菌包：内置治疗碗一个，镊子两把，弯盘一个无菌纱布罐无菌棉球罐无菌生理盐水一次性无菌手套 铺无菌盘 1.洗手戴口罩。 2.治疗盘清洁，干燥。铺无菌换药盘。 3.开无菌包：化学指示胶带有变色，在有效期内，无潮湿、无破损。斜角打开（打开无菌包内角时，手不可触及包布内面，不得跨越无菌区域）看化学指示卡，有变色。用无菌持物钳夹取一块无菌巾放入治疗盘内，将无菌包按原折痕“一字”包好后，看时间：记录日期、时间、并签名、24小时内有效。 4.铺无菌巾：双手捏住无菌巾一侧两角外面轻轻抖开，由近及远的将治疗巾一半铺于治疗盘上，将上下对齐后上层扇形折三次，开口外边向外，使治疗巾内面构成一无菌区。 5.开无菌包，前述指示胶带变色，在有效期内，侧孔、底孔闭合 1）打开无菌包，看化学指示卡变色 2）用无菌钳分别取治疗碗（内含两把镊子）、弯盘入无菌盘内。 3）打开无菌纱布罐夹取纱布置无菌盘内；同法夹取无菌棉球置治疗碗内（手不可触及容器边缘或内侧），无菌容器盖内面朝下直接盖上。 6.倒无菌溶液：（拿起溶液瓶，看瓶签）述：瓶身干净，标签完整、字迹清楚，0.9%Nacl500ml，在有效使用期内，瓶盖无松动，瓶身瓶底无无裂缝，对光检查：溶液澄清、无杂质。除盖：查棉签（无漏气，在有效试用期内）写好开包日期，消毒瓶盖、手指，开瓶盖。倒溶液于治疗碗内，再次消毒瓶口，盖回瓶盖看时间：记录日期、时间、签名，24小时有效。 7.铺完盘，看时间口述：记录名称、时间并签名（小标签贴于盘缘）、4小时内有效。述：已铺好换药盘，可以给病人进行换药护理。一份无菌物品只供一位病人使用，以防交叉感染。 8.注意事项：在操作中应注意：无菌容器盖放于稳妥处时，应内面朝上。到远处夹取无菌物品，应同时搬移无菌持物钳和容器。无菌持物钳和浸泡容器每周灭菌2次，同时更换消毒液，干燥保存4小时更换一次 带无菌手套 1．目的：用于进行无菌操作，防止患者受到感染，用于接触某些无菌物品或区域，保持无菌物
生物制品无菌试验规程(20190124165420)
生物制品无菌试验规程 生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。 1 抽样 1.1原液及半成品 原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于1.0ml。 1.1.1 大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。 1.1.2 原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。 1.2 成品 每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。 1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～10000支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。 1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。6～20ml抽检量加倍。5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。 1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不 再做。 2 无菌试验用培养基（培养基处方可附录1） 2.1 检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时 检查，有专门规定者除外）。 2.2 检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。检查不含汞类防腐剂 制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。 检查霉菌和腐生菌应采用改良马丁培养基。
检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。 2.3 检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半固体培养基。 2.4 生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥培养基配制。 2.5 无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8，短芽胞杆菌（7316株）和生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）应达到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231）和腊叶芽枝霉应达到10-6。 2.6 生物制品无菌试验培养基由质量检定部门与培养基制造部门会同进行灵敏 度试验。每当更换主要原材料时，应进行灵敏度试验，合格后方可应用（灵敏度试验法见附录2、3）。 2.7 各生产单位的质量检定部门应定期抽检无菌试验培养基的灵敏度，检定所 应定期抽检各所的无菌试验培养基。 3 无菌试验方法 3.1 无菌试验取样、移种等全部操作，应在无菌操作室内或无菌条件下进行， 无菌操作室应经常保持清洁，在每次操作前，应彻底消毒。 3.2 菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品及粘稠不易过滤的血液制品应用直接 接种法进行无菌试验。人白蛋白及人丙种球蛋白（包括各种剂型及应用途径的制品）应用薄膜过滤法进行无菌试验，其他血液制品亦可用薄膜过滤法或直接接种法进行。 3.3 直接接种法 3.3.1 菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品 3.3.1.1 每安瓿装量 5.0ml以上者（不含5.0ml）取样不应少于 1.0ml，装量在5.0ml以下者（含5.0ml）取样不得少于0.5ml，装量不足0.5ml者，全部吸取。 3.3.1.2 含防腐剂的制品，接种量与培养基的比例：用苯酚或氯仿作防腐剂者 至少为1:20，用汞作防腐剂者或制品内含有甲醛、抗生素者至少为1:50。先按此比例接种于硫乙醇酸盐培养基内增菌，于20～25℃培育3～4天后移种至硫乙醇酸盐培养基、适宜的琼脂斜面、改良马丁培养基各2管，每管0.5ml。将硫乙醇酸盐培养基、适宜的琼脂斜面各1管置30～35℃培育，其余各管置20～25℃培育，培育时间除有专门规定者外共为8天。 3.3.1.3 不含防腐剂制品，装量在 5.0ml以下者（包括 5.0ml）每10支安瓿混合，装量在5.0ml以上者每7支安瓿混合，将混合后的样品直接接种一组培养基，分别置20～25℃、30～35℃培育，培育时间共为8天。
狂犬病免疫球蛋白制造及检定规程
狂犬病免疫球蛋白制造及检定规程 本品系由乙型肝炎疫苗免疫后，再经狂犬病疫苗免疫的献血员中采集狂犬病抗体效价较高的血浆，经低温乙醇法提制的特异性免疫球蛋白制剂。本品所含丙种球蛋白占总蛋白量的90%以上，每ml含狂犬病抗体效价不低于100IU。主要用于狂犬病的预防。 1 制造 1.1 制造要求 1.1.1 原料血浆应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》中11项要求。 1.1.2 狂犬病疫苗免疫按卫生部批准的免疫程序进行。所用抗原应符合《人用狂犬病浓缩疫苗制造及检定规程》要求。免疫后血样用酶标法或蚀斑法或小鼠脑内中和试验测定抗体效价，达到10Iu /ml以上者即可采集免疫血浆作为原料。在末次免疫后半年中，可每间隔2周采浆一次，每次400ml。 1.1.3 原料血浆应无热原污染，并保持无菌。不能及时投料制备时，应及时置-20℃以下冻存。冻存期最长不应超过1年。 1.1.4 制造工作室、冷库及各种生产用具等要求同《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3项。
1.1.5 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》，未纳入试行标准者应不低于化学纯。 1.2 制造工艺 1.2.1 采用低温乙醇法，可加适宜稳定剂。若加防腐剂硫柳汞，其含量不得超过0.009%(g /ml)。 1.2.2 分批 每批制品最少应由100名以上免疫献血员的血浆混合制成。同一制造工艺、同一容器溶解、稀释的制品作为1批；用不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品分为亚批。 1.2.3 半成品检定 除菌过滤后每批半成品应进行理化检定、抗体效价测定、无菌试验及热原质试验，其方法及要求同成品检定。 1.2.4 冻干 除菌过滤的制品应及时分装，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.2.5项进行冻干。制品温度不得超过35℃。 1.3 剂型与规格
T细胞NK细胞治疗技术管理规范
附件3 自体免疫细胞（T细胞、NK细胞） 治疗技术管理规范 （征求意见稿） 为规范自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为医疗机构及其医师开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的最低要求。 自体免疫细胞治疗技术是指从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。本管理规范适用于在临床上已完成安全性和有效性认证，并符合伦理要求，只涉及自体T细胞和NK细胞作为治疗手段的医疗技术。 一、医疗机构基本要求 （一）医疗机构开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术，应当与其功能、任务相适应。
（二）三级甲等医院，具有卫生行政部门核准登记的与应用自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术有关的诊疗科目。 （三）具有与自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关的科室，科室人员组成包括有与开展人体免疫细胞（T 细胞、NK细胞）治疗技术相适应的执业医师、执业护士、具有免疫学专业背景的专家和自体免疫细胞（T细胞、NK 细胞）制剂制备技术人员；具备开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的场地、设备和设施；具备从事自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗质量控制的专业检验科室和人员。 （四）医院设有管理规范、运作正常的由医学、法学、伦理学等方面专家组成的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用与伦理委员会。 （五）有至少2名具备自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用能力的本院在职医师，有经过自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关知识和技能培训的、与开展的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相适应的其他专业技术人员。 二、人员基本要求 （一）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗医师
中国生物制品规程
生物制品统一名称规程 生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程 生物制品国家标准品的制备和标定规程 生物制品分批规程 生物制品分装规程 吸附百日咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂制造及检定规程吸附百日咳菌苗、白喉类毒素混合制剂制造及检定规程 钩端螺旋体菌苗制造及检定规程 冻干皮内注射用卡介苗制造及检定规程 A群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程 冻干皮上划痕用鼠疫活菌苗制造及检定规程 皮上划痕人用炭疽活菌苗制造及检定规程 冻干皮上划痕人用布氏菌病活菌苗制造及检定规程 治疗用布氏菌病菌苗制造及检定规程 短棒状杆菌菌苗制造及检定规程
流行性乙型脑炎灭活疫苗制造及检定规程 冻干流行性乙型脑炎活疫苗制造及检定规程 森林脑炎疫苗制造及检定规程 人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程 冻干麻疹活疫苗制造及检定规格 冻干流行性腮腺炎活疫苗制造及检定规程 口服脊髓灰质炎活疫苗制造及检定规程 血源乙型肝炎疫苗制造及检定规程 冻干黄热活疫苗制造及检定规程 吸附精制白喉类毒素制造及检定规程 吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程 成人用吸附精制白喉类毒素制造及检定规程 吸附精制白喉、破伤风二联类毒素制造及检定规程精制抗毒素制造及检定规程 精制抗蛇毒血清制造及检定规程
精制抗炭疽血清制造及检定规程 精制抗狂犬病血清制造及检定规程 原料血浆采集（单采知浆术）规程 人胎盘血白蛋白制造及检定规程 人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程人血丙种球蛋白制造及检定规程 乙型肝炎免疫球蛋白制造及检定规程 狂犬病免疫球蛋白制造及检定规程 破伤风免疫球蛋白制造及检定规程 冻干组织胺丙种球蛋白制造及检定规程 冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程冻干人凝血酶原复合物制造及检定规程 冻干人纤维蛋白原制造及检定规程 冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程冻干基因工程α2a干扰素制造及检定规程
无菌物品的管理规定完整版
无菌物品的管理规定HEN system office room [HEN 16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688] 一、
无菌包的管理制度 1、无菌包的规格： (1)脉动真空压力蒸汽灭菌的物品包体积不得超过30cmX30cmX50cmo各种敷料包、器械包均放灭菌指示卡，包外贴3M胶带。 (2)敷料包不超过5Kg；金属包不超过7Kg。 2、无菌包的储存要求： (1)存放在无菌物品存放间的存放架上，存放架应便于清洁，不易生锈。 (2)保存环境应清洁、明亮，有空气净化装置，照明光线充足。 (3)温度低于24°C,相对湿度低于70%o (4)存放无菌物品的橱架应距地面20cm-25cm,离墙5cmT0cm,距天花板 50cm。 3、无菌物品存放区的卫生学要求： (1)空气细菌菌落数不超过4个/30min ?平皿 (2)物体表而细菌菌落数W5cfu/cm2。 (3)工作人员手细菌菌落数＜10cfu/cm2o (4)灭菌后物品不得检出任何种类的微生物及热原质。 4、无菌包的保管原则： (1)灭菌后的无菌包，应放在无菌间，与有菌物品分开放置。 (2)无菌间应有专人负责管理，接触无菌物品前要用快速手消洗手。 (3)无菌包应保持干燥，包装整洁不易松散，密封性好，无破洞，灭菌H 期及有效期标志清楚，便于目测清点。按照有效期顺序依次摆放，邻近过期的
物品放在方便取用位置。 (4)己打开未用完的无菌包，应无菌操作包好，可保留24小时。 (5)己铺置未用的无菌车、无菌盘及快速高压蒸气小锅灭菌的器械保留时间都为4小时，4小时后重新消毒。 5、无菌物品保存有效期无季节限制，依据包装材质不同保存有效期限不同，使用时应仔细查看有效期标志。 (1)使用棉布材质包装的无菌物品存放有效期为7天。 (2)—次性使用医用皱纹纸、一次性纸塑包装袋、医用无纺布包装的有效期为6个月。 6、使用无菌物品时应认真查看包装质量、有效期及包内物品质量。按无 菌包的使用顺序依次打开，出现以下情况之一禁止使用： (1)灭菌物品超过规定有效期限。 (2)灭菌物品包装松散或包布有破洞。 (3)包布潮湿、有污渍、水卬或水渍。 (4)灭菌过程指示胶带没变色或变色不均匀。 (5)灭菌包内化学指示卡不变色或变色不均匀。 (6)灭菌器械有污渍、锈渍。 (7)对灭菌过程及质量表示怀疑时。 二、手术室一次性使用无菌医疗用品的管理
人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程
人血xx（低温乙醇法）制造及检定 规程 本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。 1制造 1.1制造要求 1.1.1新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。 1.1.2血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。 低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。 1.1.3制造工作室应符合工艺流程。冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。 1.1.4生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。 所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。 1.2制造工艺
1.2.1采用低温乙醇法。应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或 0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。 1.2.2热处理 每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。 1.2.3分批 同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。 1.2.4半成品检定 液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。直接分装时应留样做上述试验。 1.2.5冻干 除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。制品的冻干工艺可根据机器性能特点制定，但应保证制品制备质量及保存质量符合要求。在冻干的全过程中，制品温度最高不得超过50℃。冻干的全过程必须在严格无菌条件下进行。 1.3剂型与规格 1.3.1剂型分为液体及冻干两种。 1.3.2规格 按蛋白质浓度分为5%、10%、20%或25%四种。每瓶（支）蛋白质装量为2g、5g及10g。冻干制剂每瓶蛋白质装量为5g及10g。 1.4制品重滤和再制 1.4.1无菌试验不合格，无肉眼可见混浊或沉淀，可立即再除菌过滤一次。
无菌技术基本操作评分标准
无菌技术基本操作评分标准 科室操作者考核日期操作时间得分 项目考核标准及内容要求分值扣分得分 素质要求衣帽整齐、洗手、戴口罩；头发不过肩，不穿硬底鞋，指甲规范；稳重大方， 精神面貌好 6分 操作前准备物品 治疗盘，清洁纱布，棉签缸，碘伏瓶，无菌持物钳及缸，弯盘2个，无菌包（内 有2块治疗巾），1瓶生理盐水，贮槽内盛治疗碗2个，无菌手套包（内有无菌 手套1付） 3分环境清洁，干燥，宽敞2分 操作过程 操作时间为4分钟 超时扣1分，以后每超时5秒扣1分铺无 菌治 疗盘 及无 菌包 的使 用 1、检查治疗盘是否清洁干燥（检查并口述），用纱布清洁治疗盘2分 2、检查无菌包的名称、有效期、有无潮湿、破损、松散（检查并口述）4分 3、将无菌包放置在清洁干燥平坦处，按包折顺序小心打开，无污染4分 4、用无菌持物钳取出无菌治疗巾放于治疗盘内4分 5、如包内物品一次未用完则按原折包好，一字形包扎，并注明开包日期、时间。 24小时未用完应重新消毒（口述） 4分 6、双手捏住治疗巾上层两角外面双折铺于治疗盘中，无菌巾上层向远端呈扇形 折叠，开口边向外。 6分 取无 菌物 品、 取无 菌溶 液及 无菌 持物 钳的 使用 7、擦液体表面灰尘，检查溶液名称、剂量、浓度、有效期、瓶盖有无松动、瓶 子有无裂缝、有无变色、混浊、沉淀等（检查并口述） 5分 8、启铝盖、消毒4分 9、用无菌持物钳在贮槽内取一个换药碗，放于铺好的治疗盘内2分 10、无菌换药碗无污染，取放无菌持物钳时应将钳端闭合，不可触及容器壁， 使用时应保持钳端向下 6分 11、贮槽盖随即盖严，不可暴露过久。2分 12、开瓶塞方法正确，倒液时，瓶签向手心倒少许溶液于弯盘中冲洗瓶口5分 13、从已经冲洗的瓶口处倒出溶液至无菌治疗碗中，倒后立即将胶塞塞好4分 14、记录开瓶日期、时间。已打开过的溶液内溶液可保存24小时（口述）3分 15、放入无菌物品后的治疗盘，拉平扇形折叠层盖于物品上，上下边缘对齐， 将开口处向上翻折两次，两侧边缘向下翻折一次。已铺好的治疗盘有效期4小 时（口述）。记录铺无菌盘时间 5分 戴 无 菌 手 套 16、检查手套包的名称、有效期、有无潮湿、破损及型号（检查并口述）4分 17、整理衣袖，打开手套包2分 18、取、戴无菌手套方法正确6分 19、未戴手套的手只能接触手套内面，已戴手套的手只能接触手套外面，如不 慎将手套污染或发现有破损时应立即更换（口述） 2分 20、脱手套前，将手套上污物洗去，然后由手套口往下翻转脱下，不可强拉手 指部分，以免损坏手套（口述） 2分 操作后整理用物，有菌、无菌物品分开放置3分理论提问略10分合计100分注：同等分数者，以操作时间先后排序
无菌物品存放区标准作业程序
无菌物品存放区标准作业程序 无菌物品存放区是CSSD内存放、保管、发放无菌物品的区域，为清洁区域。无菌物品存放区的温度要求低于24°C，相对湿度70%，换气次数4-10次/H 保持环境清洁整齐，内部通风良好，无灰尘。禁止将无菌物品放置在无菌存放区以外的地方，放置污染。认真执行灭菌物品卸载、存放的操作流程；接触无菌物品钱应洗手或手消毒；应根据临床工作量建立各类无菌物品、抢救物品名目和数量。按照“先进先出”的原则进行储存或周转，避免产生过期物品，灭菌物品一旦失效，必须重新进行清洗包装灭菌处理。各类无菌物品每日清点、及时补充，保证储备充足。重复使用器械的储备不低于1:2，即一份备两份物品量。次性物品采购流程的工作周期较长，一般储量不低于10天。急救物品的储备根据医院规模和承担急救任务量定额。物品摆放位置规格化，能够存取方便。可设柜架号、层次号、位置号。依据物品分类目录、储备量定额以及物品物理、化学等自然属性。例如手术器械、手术敷料、常规诊疗器械、各类一次性诊疗器械、贵重器械等具有物理和化学属性不同的特点。还可根据备用性质进行位置的规划。通过固定位置利于存取方便。各类物品均应分架或分开摆放，不应堆放或混放。较小、不规则的无菌包应分类放置在固定的容器中储存；一次性无菌用品，拆除外包装后，方可进入无菌物品储存区；各类无菌包按照灭菌日期先后顺序排放，先进先出的原则发放；一次性使用无菌器材应去除外包装后，再存放于无菌物品存放区，避免外包装污染储存环境。质量验收、记录；无菌物品进入储存区应进行质量确认、数量记录等工作。储存中应保护无菌物品不受污染和损坏，周转使用率低和急救物品有防尘措施；搬运无菌物品须借助专用的篮筐、车、架。无菌物品放在不洁的位置或掉落地上应视为污染包，不得使用。本章将介绍消毒供应中心常见灭菌器的卸载、储存、无菌质量检测以及发放的标准作业程序。 第一节灭菌后物品卸载作业程序 各种物品经过灭菌循环后，需将无菌物品从灭菌器中拉出，放于无菌物品存放区。压力蒸汽灭菌的灭菌物品应进行冷却，并设置“冷却”字样的标识牌，冷却时间应大于30min,待降至室温方可移动。卸载和搬运过程中避免无菌物品包装的损坏。从灭菌架上取已冷却物品时，应进行灭菌质量确认。 一、汽灭菌后物品卸载 1.操作目的 （1）检查灭菌程序的完整性，确认灭菌质量。 （2）通过合理规范的卸载操作，避免湿包及灭菌包的二次污染。 2.操作步骤 （1）环境准备：观察环境是否赶紧整洁。 （2）用物准备：防烫手套、高压蒸汽灭菌卸载车。 （3）高压蒸汽灭菌器蜂鸣提示灭菌循环结束。 （4）消毒员检查打印记录纸各项参数是否合格、灭菌循环是否完整。 （5）发放人员再次检查打印记录，确认合格并将打印记录粘贴于批量监测登记本上。（6）将车拉出，放置于人流少、避开空调出风口位置冷却30min以上，以接近室温为宜。
无菌技术操作规程及评分标准
无菌技术操作规程 【评估】 无菌技术操作条件（环境、物品） 【准备】 护士：着装整洁，剪短指甲、取手表、卷袖过肘、洗手并擦手，戴口罩。 物品:治疗车、治疗盘2个，无菌持物钳包、手消液、无菌注射器、无菌巾包，无菌溶液、安尔碘、无菌棉签、无菌有盖缸内盛纱布、无菌治疗碗包、号码合适得无菌手套一副、橡皮筋、标签纸、书写笔、污物缸、抹布、锐器盒。 环境：清洁、干燥。 【方法】 擦桌面→治疗盘→手消。 无菌持物钳得使用: 检查无菌包→开无菌持物钳容器包→取出无菌持物缸→取下包外3M消毒条书写开启时间及责任者贴于无菌缸外壁. 铺无菌盘法（单层铺巾法）： 检查无菌包→打开无菌包→用无菌持物钳夹取一块治疗盘内→未污染得剩余治疗巾按原折痕包好→捏住治疗巾上层两角外面打开→双折铺于盘上→扇形折叠打开→放无菌物品→双手捏翻折治疗巾两个角得外面向下覆盖，覆盖时将各边缘对整齐→将开口处向上折两次→两侧边缘分别向下折一次→露处治疗盘边缘→治疗盘即备好待用→注明开包→铺盘时间及责任者。 无菌碗得使用法： 检查无菌包→打开包(外层用手，内层用手或无菌持物钳均可，原则不污染）→扭转放无菌碗于治疗盘内→整理包布。 取用无菌溶液法： 核对瓶签，检查溶液→拉开输液瓶拉环盖→注射器抽取溶液→将溶液推入无菌碗内→消毒瓶口并贴瓶口贴或用无菌纱布盖好→注明开瓶时间及责任者（已打开得溶液２4小时内有效）. 无菌容器使用法：检查无菌容器→打开容器,盖得内面朝上→持无菌容器时手指不可触及容器得边缘及内面→用无菌持物钳取出无菌物品→将容器盖严。 戴无菌手套法： 戴手套：检查手套得号码、有效使用期及包装袋有无潮湿、破损→打开手套袋→两手同时掀开手套开口处，分别捏住两只手套翻折部分，取出手套→将两手套五指对准→先戴一只手,再以戴好得手指插入另一只手套得翻折面内,同法戴好→调整手套位置。 脱手套:一手捏住另一手得手套口外面翻转脱下→已脱手套得手伸入另一只手套内将其脱下→将手套得里面翻套在外面→将用过得手套放医用垃圾袋内备处理. 【评价】 1、操作准确、轻巧、熟练,物品放置合理，不影响操作. 2、注明开包、开瓶、铺盘日期及时间。 3、无菌观念强，手臂未跨越无菌区,操作过程无污染。 【注意事项】 1、开包后得无菌包与开封后得无菌溶液有效期均为24小时，无菌盘有效期限不超过4小 时。 2、无菌持物钳取时不可触及容器口边缘及溶液以上得容器内壁。使用时应保持钳端向下， 不可倒转向上，用后立即放回容器中。如到远处夹取物品时，无菌持物钳应连同容器一
无菌检查操作规程2015 (1)
无菌检查操作规程 1.目的 建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。 2.使用范围 本公司无菌产品的无菌检查 3.职责 质量部QC 4.依据 2015版《中国药典》通则1101 GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998） 《疗器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验》 GB/T 14233.2-2005 《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》 5.内容 5.1.无菌检查环境保障 5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检 査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。 5.1.2.操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用 洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期监测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。 5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 5.1.4.洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求。 5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控， 5.2.培养基、稀释液、缓冲液 5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。除另有规定，接种后应置 30~35℃培养。 5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。接种后应置20~35℃培养。 5.2.3.中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培
养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。 5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。 5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。 5.2. 6.沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。 5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。 5.2.8.0.9%无菌氯化钠溶液。 5.2.9.培养基使用性检查 无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。本检查可在供试品的无菌检査或与供试品的无菌检査同时进行。 5.2.9.1.无菌性检查：每批培养基随机取5支（瓶），按各培养基规定的温度下 培养14天，应无菌生长。 5.2.9.2.灵敏度检查 5.2.9.2.1.菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中 心获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以 证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 生孢梭菌[CMCC(B)64 941] 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 5.2.9.2.2.菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物 至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭 菌的培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30?35℃培养18?24小时； 接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼 脂培养基上，20?25℃培养24?48小时，上述培养后的新鲜培养物用 PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小
森林脑炎疫苗制造及检定规程
森林脑炎疫苗制造及检定规程 森林脑炎疫苗系用森林脑炎病毒“森林”株接种于地鼠肾 单层细胞，培育后收获病毒液，加入甲醛溶液将病毒灭活后制成。用于预防森林脑炎。 1 毒种 1.1 毒种来源 卫生部长春生物制品研究所保存之冻干毒种“森林”株。每3～5年会同中国药品生物制品检定所应用新分离的流行株病毒攻击，检测“森林”株的保护力，以了解该毒株的有效性。 1.2 毒种检定 1.2.1 无菌试验 毒种启封及每次传代后，均需做无菌试验，合格者方可使用。 1.2.2 病毒滴定 每正代必须用小白鼠进行脑内滴定。滴度 ≥9.0Lo gLD50/1.0ml方可用于生产。 1.2.3 纯毒试验
生产前须用小白鼠脑内法做中和试验鉴定毒种的特异性，中和指数必须在500以上。生产中如对毒种有怀疑，应及时进行鉴定。 1.3 毒种传代 分正亚代传递。传递代数正代不得超过15代，传代时选用体重10～12g健康小白鼠或乳鼠。每次毒种传代不得少于3个鼠脑。脑内接种病毒，72小时后选择眼结膜正常，有典型战栗、痉挛、肢体麻痹的小白鼠，处死后无菌取脑，并进行无菌试验。如发现污染者，应及时废弃。 1.4 毒种保存 鼠脑毒种收剖经无菌试验后立即保存于-60℃以下，无菌试验通过后方可使用。亦可将鼠脑毒种研磨乳化制成10%脑悬液，分装小瓶，冻存于-60℃以下，无菌试验合格后备用。 冻干毒种保存在2～8℃。 森林脑炎病毒“森林”株属二类毒种，必须设专人按有关规定负责管理，使用前、后记录清楚。 2 疫苗制造 2.1 细胞制备
2.1.1 地鼠 选用2周龄左右的健康地鼠。如发现肾脏异常或有乳糜状腹水，应废弃。 2.1.2 细胞消化及培养 处死地鼠，无菌取肾，加入适量胰蛋白酶液消化。用营养液分散细胞，制备细胞悬液，分装培养瓶，于37℃进行培养。营养液中牛血清含量不得超过8%。 2.1.3 外源因子检查 每生产批细胞留5%（或不少于500ml）悬液作为对照细胞检查外源病毒。该细胞除不接种病毒外，细胞尝试和处理均与生产过程平行进行。至原液收获之日，用显微镜观察，应无病变发生。并用0.2%～0.5%豚鼠红细胞（4℃保存不超过7天）进行血吸附试验，置4～8℃30分钟判定结果；再置20～25℃30分钟再次判定结果，均应为阴性。如有可凝病变或血吸附可疑阳性，在同种细胞上继续盲传，如传出病毒，该批细胞制备的疫苗应予废弃。 2.2 病毒接种和培育 2.2.1 生产毒种配制
灭菌物品的发放、储存要求
一、基本概念： 无菌物品存放区：消毒供应中心内存放、保管、发放灭菌物品的区域，为清洁区域。 质量控制：是指“质量管理的一部分，致力满足质量要求”。质量控制的目标是确保产品质量能满足用户的要求。 二、主要内容 （一）储存 储存是影响无菌质量的重要环节。清洁、干燥、温湿度适宜的环境可以降低无菌物品储存中微生物等污染的几率。消毒供应中心人员须严格执行消毒隔离和卫生措施，从而保证无菌物品质量，降低医院感染。无菌物品发储存必须严格按照监测质量标准确认无菌物品质量，确保储存的无菌物品质量。各类无菌物品的储备量应充足，及时补充用量。保障临床诊疗、手术、急救、突发公共事件工作顺利开展。加强无菌物品使用量和周转率的控制，避免和减少过期物品以及积压、损坏、丢失等问题造成的浪费。 1、无菌物品储存 储存包含储存和保管。储存，有物品以备待用的含义。保管是储备的继续，是保护物品不受损害的过程。无菌质量特性决定了无菌物品储存及保管有其特殊的管理要求，即更严格的质量安全和控制污染的措施。无菌物品储存区是“存放、保管、发放无菌物品的区域，为清洁区域”。消毒供应中心无菌物品储存分为无菌储存区和库房储存两种形式。
无菌储存区储存保管的无菌物品包括由消毒供应中心处理的重复使用无菌医疗器械、器具，部分一次性使用无菌器械等物品。无菌物品储存工作包括以下方式和要求： （1）建立基数：根据临床工作量建立各类无菌物品、抢救物品名目和数量。各类无菌物品每日清点、及时补充，保证储备充足。重复使用器械的备量不低于1：2，即用1份备2份物品量。一次性物品采购流程的工作周期较长，一般储量不低于10天。急救物品的储备根据医院规模和承担急救任务量定额。 （2）固定放置位置：物品摆放位置规格化，能够存取方便。可设柜架号、层次号、位置号。依据物品分类目录、储备量定额以及物品物理、化学等自然属性。例如手术器械、手术敷料、常规诊疗器械、各类一次性诊疗器械、贵重器械等具有物理和化学属性不同的特点。还可根据备用性质进行位置的规划，例如，专科使用器械、急救物品器械等。通过固定位置利于存取方便。 （3）物品分类放置：通常灭菌包应分类为手术器械包类、手术辅料包类、病区通用的无菌包类、专科无菌包类、低温灭菌包类、紧急突发事件和抢救用无菌包类、一次性无菌物品类、或贵重物品类等。各类物品均应分架或分开摆放，不应堆放或混放。手术器械包摞放一般不超过两层，同类名称的器械宜放置同一层架上或同一灭菌篮筐内；手术辅料包应和手术器械包分开层架码放；病区普通诊疗包应分类放置在同一层架上或同一灭菌篮筐内；较小、不规则的无菌包应分类放置在固定的容器中储存；一次性无菌用品，拆除外包装后，方可进入无菌物品储存区；各类无菌包按照灭菌日期先后顺序排放，先进先出的原则发放；一次性使用无菌器材应去除外包装后，再存放于无菌物品存放区，避免外包装污染储存环境。质量验收、记录；无菌物品进入储存区应进行质量确认、数量记录等工作。
无菌技术操作评分标准
无菌技术操作评分标准
无菌技术操作 一、无菌持物钳（镊）使用法 （一）目的 取用或者传递无菌敷料、器械等。 （二）注意事项 1、无菌持物钳（镊）不能夹取未灭菌的物品，也不能夹取油纱布（条、球）； 2、取远处物品时，应当连同容器一起移至物品旁进行操作； 3、无菌钳（镊）使用时不能低于腰部； 4、打开包后的干持物筒、持物钳使用的有效期≤4小时。 二、无菌容器使用法 （一）目的 保持已经灭菌的物品处于无菌状态。 （二）注意事项 1、使用无菌容器时，不可污染容器盖内面、容器边缘及内面； 2、无菌容器打开后，须记录开启的日期、时间，有效使用期为24小时。 三、铺无菌盘法 （一）目的 将无菌巾铺在清洁干燥的治疗盘内，形成无菌区，以供实施治疗时放置无菌物品使用。（二）注意事项 1、操作区域须清洁干燥，无菌巾避免潮湿； 2、非无菌物品不可触及无菌面； 3、注明铺无菌盘的日期、时间，无菌盘使用的有效期为4小时。 四、戴无菌手套 （一）目的 执行无菌技术操作或者接触无菌物品时须戴无菌手套。
（二）注意事项 1、戴手套时须注意未戴手套的手不可触及手套的外面，戴手套的手不可触及未戴手套 的手或另一手套的里面； 2、戴手套后如发现有破洞，应立即更换； 3、脱手套时，应翻转脱下。 二、皮内注射技术操作评分标准
皮内注射技术 （一）目的： 用于药物的皮肤过敏实验、预防接种及局部麻醉的前驱步骤。 （二）指导患者： 向患者解释操作的目的及注意事项等。 (三)注意事项 1、如患者对皮试药物有过敏史，禁止皮试； 2、皮试药液要现用现配，剂量要准确，并备肾上腺素等抢救药品及物品； 3、皮试结果阳性时，应及时告知医师、患者及家属，并予注明。
无菌检查法-中国药典2010第三部-附录XIIA
附录XII A 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基 培养基的制备：培养基按以下处方制备，亦可用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2~25℃避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般可在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在1年内使用。 1、硫乙醇酸盐流体培养基 酪胨（胰酶水解）15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸0.5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0mL 硫乙醇酸钠0.5g （或硫乙醇酸0.3mL） 琼脂0.75g 水1000mL 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值为弱碱性，煮沸，滤清，加入水葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH值使灭菌后为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2，灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经1000℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）后，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。 2、改良马丁培养基 胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g 酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁0.5g 葡萄糖20.0g 水1000mL 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值约为6.8，煮沸；加入putaotang 溶解后，摇匀，滤清，调pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，灭菌。 3、选择性培养基 按上述硫乙醇盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验。 4、营养肉汤培养基 胨10.0g 氯化钠 5.0g 牛肉浸出粉 3.0g 水1000mL 取上述成分混合，微温溶解，调pH值为弱碱性，煮沸，滤清，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。 5、营养琼脂培养基 按上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。