小鼠经口的急性毒性评价

食品质量与安全：张志颖

指导教师：丁志刚

摘要：通过霍恩法对啮齿类动物小白鼠做急性毒性实验，以氯化镁溶液为外源化学物，了解氯化镁溶液对机体是否产生毒效应。确定外源化学物的致死剂量及其他急性毒性参数，通过观察动物中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步评定外源化学物的毒效应特征、靶器官、剂量—反应关系和对人体产生损害的危险性。

关键词：小白鼠氯化镁溶液霍恩法急性毒性评价

1前言

氯化镁常温下为白色结晶，易吸湿，100℃时失去2分子结晶水，在110℃开始失去部分盐酸而分解，强热转为氧氯化物，其PH约为<7,有刺激性，氯化镁是有毒的，其次氯化镁是低毒的。氯化镁本身的毒性来自其本身凝血的作用，例如卤水点豆腐，就是使蛋白质凝固。假如一定剂量的氯化镁进入血液，血液凝固，人必死无疑。所以说氯化镁对于温血动物来说还是有一定的杀伤力。制作豆腐时，氯化镁可以作为很好的混凝剂。它常与硫酸镁一起凝固豆奶，由于其营养价值，氯化镁还是婴儿配方奶粉的组成部分。

2材料与方法

2.1 材料试验动物：健康成年小鼠16只，雌雄各半，体重在18~25g之间。

2.2仪器与试剂试验器材：注射器、刻度吸管、容量瓶、小烧杯、滴管、灌胃针、电子天平、镊子、动物体重秤、手套。

试验试剂：受试物（氯化镁）、3%~5%的苦味酸溶液、0.5%的品红溶液。

2.3实验方法

2.3.1健康动物选择

2.3.2性别辨认

2.3.3小鼠称重、编号和随机分组根据霍恩法将小鼠分为4个小组，每组4只。

编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 随机数18 43 38 62 82 16 48 35 67 05 72 12 25 83 43 41

除4余数 2 3 2 2 2 0 0 3 3 1 0 0 1 3 1 1

所在组别二三二二二四四三三一四四一三一一

2.3.4剂量设置（1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg、10000mg/kg）

组号一二三四

染毒剂量1000mg/kg 2150mg/kg 4640mg/kg 10000mg/kg

27.75mg 57.587mg 122.96mg 280mg

每组小鼠染毒

毫克数

2.3.5氯化镁溶液的配制

（1）氯化镁的量取（称量法）

准确称取12.6575g的氯化镁固体，加蒸馏水溶解后，倒入25ml容量瓶，混匀，再加蒸馏水定容至刻度。备用浓度为506.3mg/ml。

（2）氯化镁溶液的稀释

等容量稀释法：根据试验确定的四个剂量组剂量（1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg、10000mg/kg）将氯化镁稀释分别配制成不同浓度溶液，各个剂量组的动物按20ml/kgBW的容量灌胃，则应配制成四个不同浓度，依次为：50.65mg/ml(11.6ml)、109.1mg/ml(11.6ml)、235mg/ml（11.6ml）、506.3mg/ml。

2.3.6灌胃

对四个剂量组的小鼠采用经口灌胃法一次性给予氯化镁溶液，各剂量组的灌胃体积相同，小鼠常用容量为20ml/kgBW。若一次给予量太大，也可在24h内分2~3次给予，每次间隔4~6h，但合并作为一次剂量计算。

试验动物在试验前一般禁食16h左右，不限制饮水。染毒后继续禁食3~4h。若采用分多次染毒，根据染毒时间长短，必要时可给动物一定量的的食物。

2.4检测指标急性毒性实验除了要获得主要参数LD50外，还要全面观察动物的各种反应和变化，仔细分析实验动物在染毒后出现的中毒表现、剂量—效应、时间分布等，这对于了解外源化学物的毒性作用特征，获取尽可能多的毒性信息非常重要，可以补充LD50表示急性毒性的不足。

2.4.1小鼠中毒症状和死亡情况观察

染毒后要注意观察小鼠中毒表现和死亡情况。观察指标通常包括小鼠外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况（死亡时间、濒死亡前的反应）、体重变化（给药前、试验结束处死动物前各称重一次，观察期间可每3天称重一次）等，观察时间为7天，对死亡小鼠和观察期满存活小鼠处死进行大体解剖，认真做好试验记录。试验结束后，要按照试验结果，填写急性毒性试验记录表。

组别动物

编号体重染毒总

剂量

mg/kg

灌胃容

量ml

中毒症状中

毒

时

间

死亡时间体重

变化

记录

第一组10 27g

1000 0.4ml 染毒后活动减少，精

神萎靡，抱团睡觉，

一天之后回归正常。

之后几天小鼠存活，

无异常。

染

毒

后

13 27g 0.4ml -1g

15 28g 0.4ml 0g

16 29g 0.4ml 0g

第二组 1 28g

2150 0.4ml 染毒后活动减少，精

神萎靡，四肢抽搐，

一天之后回归正常。

之后几天小鼠存活，

无异常。

染

毒

后

+2g

3 27g 0.4ml +2g

4 28g 0.4ml +6g

5 26g 0.4ml +3g

第三组 2 26g

4640 0.4ml 染毒后颤抖、抽经，

四肢抽搐，9号小鼠

在夜间死亡。之后几

天小鼠存活，无异常。

染

毒

后

9号小鼠夜间

死亡具体时间

不明

+1g

8 29g 0.4ml +7g

9 26g 0.4ml -1g 14 25g 0.4ml 0g

第四组 6 27g

10000 0.4ml 染毒后反应剧烈，痛

苦的挣扎，呼吸困难，

6、7、11号小鼠很快

死亡，12号小鼠精神

萎靡，在一天之后活

动正常。之后几天小

鼠存活，无异常。

染

毒

后

6、7、11号小

鼠染毒后两分

钟

7 28g 0.4ml 0g

11 28g 0.4ml 0g

12 29g 0.4ml -7g

2.4.2体重

实验动物体重的变化，可以反映动物中毒后的整体变化，是一个比较简便的量化指标。体重降低或增长缓慢的原因是多方面的，如果毒物影响了食欲或消化系统的功能受累而厌食或拒食，可以是体重改变。如果是因毒物影响食物的吸收和利用，也能导致体重变化。

还有影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上有反映。

2.4.3病理检查

急性毒性实验中，所有的动物包括试验期间死亡、人道处死和实验结束处死的动物都要进行大体解剖检查，记录每只动物大体病理学变化，如脏器外观、大小、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其他改变，出现大体解剖病理改变时应做病理组织学显微镜观察。

2.4.4其他指标急性毒性实验中，还可根据需要进一步扩大观察项目，如体温、心电图和一些生化指标的测定。

3结果分析

3.1试验结果观察五天后，第一组小鼠无死亡，第二组小鼠无死亡，第三组9号小鼠死亡，其余存活，第四组6、7、11号小鼠死亡，12号小鼠存活。

3.2结果分析

由于在实验结果在霍恩表上不能显示，本组实验结果不能求出氯化镁的LD50值。可能存在的原因如下：

1、由于是初学者，操作技术不成熟导致实验动物非正常死亡；

2、试验外源化学物剂量设计的不合理，导致LD50求不出来；

3、实验操作时出现的误差，如灌胃时操作不规范，导致药物外泄，使剂量不准确；

4、由于实验环境的影响，使外源化学物氯化镁的毒性没有明显体现；

5、由于第四组存活小鼠的自身体质、对毒物的抵抗力强，没有死亡。