空气细菌培养的采样方法
1空气细菌培养的采样方法检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。此法简便，目前大部分医疗单位采用。在消毒处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距
空气消毒效
空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格。
Ⅰ类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。Ⅱ类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应
因为患儿本身呼吸系统抵抗力较低，
质量的好坏更能影响患儿疾病的转归，这一点应该引起高度重视。本次研究发现，儿科门诊输液室空气消毒后效果监测，符合标准，而且指数较低，接纳输液患者后细菌数逐渐上升，2 h、4 h均超标，因此，儿科门诊输液室在人员持续不断流动的情况下，无法持续进行紫外线消毒，仅靠一天两次的紫外线消毒是不能保证空气质量。自然通风降低菌落数的效果较持久。自然通风通过对流换气持续30 min，可以显著减少空气中微生物的含量，降低室内CO 及废气的浓度。每天累计通风2 h~3 h，能持久降低室内空气中的菌落数。有报道通风流出和进入的空气达到本房间容积时为换气1次，可清除原细菌数的3.2%，所以通风是最简单的消毒方法［3］。另外，也应注意及时关闭门窗,保持已清洁消毒后的室内净化效果。通过对空气中菌落的初步鉴定发现主要以革兰阳性菌为主，其中葡萄球菌、微球菌、奈瑟氏菌和棒状杆菌是本院儿科输液室中最主要的细菌，与其他文献报道葡萄球菌是医院病房空气中最
主要细菌相一致［4］。本次结果中葡萄球菌、肠杆菌等条件致病菌占有一定的比例，由于这些菌常引发院内感染，因此应引起大家的重视。针对本院儿科门诊输液室的自身特点，应采取的一些相应消毒措施：经常打开门窗通风，保持室内空气新鲜。自然通风能在短时间内置换室内空气，降低空气中的微生物含量，对人体无害，冬季室内外温差大，在开窗过程中一定要注意患者的保暖，不要让风直接吹到患者。减少人员活动。尽量减少陪护人员数量，最好能减至一个患儿一位家长。适当增加输液室内护工数量，让护工来统一协助家长。
空气培养方法
图 1 (< 30 m2) O O O O O 图2 （大于〉30 m2）盖面朝下斜扣到底盘边上空气细菌培养 、流程: 1 1 关好门窗，用紫外线消毒1小时 1 二、注意事项： 1、取培养基时，应用手托住培养基的底座，避免污染。 2、打开培养基时，盖子向下扣放于平板旁。 3、取样后将培养基的盖子盖好，方可离开治疗室。 4、送检时间不超过6h，若样品保存于2-8度条件时，送检时间不能超过24 小时。 5、送检过程中如盖子不小心打开，应该重新留取标本送检。 三、放置培养皿示意图 操作者洗净双手，取培养基进行取样
三十三、物体表面培养（细菌） 注意事项： 1、要在台面的工作区或需重点监测的区域采取。 2、送检时间不超过6小时，若样品保存于1-4度条件时，送检时间不超过24h。 3、送检过程中如盖子不小心打开，应该重新留取标本送检。
三十四、紫外线消毒 清理及抹拭治疗室台面，关治疗室门窗，熄照明灯 注意事项： 1、在使用过程中，应保持紫外线灯表面的清洁，每日用95%勺酒精擦拭灯管一次，发现灯 管表面有灰尘，油污时，应随时擦拭。 2用紫外线等消毒室内空气时，房间内应保持清洁干燥，减少尘埃和水雾，温度低于20C 或高于40C，相对湿度大于60%寸应适当延长照射时间。 3、用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射。不得使紫外线光源 照射到人，以免引起损伤。 4、紫外线灯使用过程中其辐射强度逐渐降低（一般紫外线使用时限为1000 小时），故应定期测定消毒紫外线的强度，一旦降到要求的强度以下时，应即使更 换。 5、每月一次空气培养，空气消毒后作空气培养。 6、如消毒时，仍有补液未接完，将剩余补液放在治疗室外，备治疗盘及部分必用治疗用 物。
细菌培养采样方法
供应室工作环境监测 各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下： 消毒液的采样及检查方法 采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。 采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用于消毒物品的消毒液其染菌量﹤100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格; 空气采样及检查方法 检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h。未检出致病菌为合格，不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定区域所执行的标准参数；
空气采样及检查方法： 采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样； 采祥高度：与地面垂直高度80－150cm； 布点方法?：室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m 处各取一点;室内面积>30m2，设东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m，注意采样时不走回头路，不得逆行； 采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。 采样前准备：洗手，戴口罩，培养皿（看采样面积大小准备）； 物体表面采样及检查方法 采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样； 采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2； 采样方法：用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采样1-4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。不规则样物品如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩，无菌规格板 医护人员手采样及检查方法 采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 采样面积及方法?：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2〕，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位；将棉试子放入装有10ml采样液的试管内这位。采样面积按平方厘米（cm2）计算。 采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口罩
(推荐)硝化菌的培养方法
硝化菌的培养方法 硝化反应影响因素： 1、温度在生物硝化系统中，硝化细菌对温度的变化非常敏感，在5～35℃的范围内，硝化菌能进行正常的生理代谢活动。当废水温度低于15℃时，硝化速率会明显下降，当温度低于10℃时已启动的硝化系统可以勉强维持，硝化速率只有30℃时的硝化硝化速率的25%[1]。尽管温度的升高，生物活性增大，硝化速率也升高，但温度过高将使硝化菌大量死亡，实际运行中要求硝化反应温度低于３８℃[2]。 2、pH值硝化菌对pH值变化非常敏感，最佳pH值是8.0～8.4，在这一最佳pH值条件下，硝化速度，硝化菌最大的比值速度可达最大值。Anthonison认为pH对硝化反应的影响只是表观现象，实际起作用是两个平衡H++NH3 = NH4+和H++NO2-= HNO2中的NH3（FA）和HNO2（FNA），pH通过这两个平衡影响FA和FNA的浓度起作用的。 3、溶解氧氧是硝化反应过程中的电子受体，反应器内溶解氧高低，必将影响硝化反应得进程。在活性污泥法系统中，大多数学者认为溶解氧应该控制在1.5～2.0mg/L内，低于0.5mg/L则硝化作用趋于停止。当前，有许多学者认为在低DO（1.5mg/L）下可出现SND现象。在DO＞2.0mg/L，溶解氧浓度对硝化过程影响可不予考虑。但DO浓度不宜太高，因为溶解氧过高能够导致有机物分解过快，从而使微生物缺乏营养，活性污泥易于老化，结构松散。此外溶解氧过高，过量能耗，在经济上也是不适宜的。 4、生物固体平均停留时间（污泥龄）为了使硝化菌群能够在连续流反应器系统存活，微生物在反应器内的停留时间（θc）N必须大于自养型硝化菌最小的世代时间（θc）minN，否则硝化菌的流失率将大于净增率，将使硝化菌从系统中流失殆尽。一般对（θc）N的取值，至少应为硝化菌最小世代时间的2倍以上，即安全系数应大于2。 5、重金属及有毒物质除了重金属外，对硝化反应产生抑制作用的物质
空气培养采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法 一、采样时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。 二、采样高度 与地面垂直高度80-150厘米。 三、布点方法 1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1） 2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2） 图2 四、采样方法 用9厘米直径普通琼脂平皿，打开后盖面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。 五、结果分析 I类区域：<10 cfu/m3 II类区域：<200 cfu/m3 III类区域：<500 cfu/m3 六、附录 Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。 Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。 Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。 Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准 一、局部百级，周围千级： 共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。 采样布置点示意图： 二、局部千级，周围万级： 共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。 采样布置点示意图： 三、局部万级，周围十万级： 共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。 五、要求： 1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方； 2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟； 3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养24小时； 4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。 5.放置培养皿示意图： 盖面朝下斜扣到底盘A边上 六、洁净室空气细菌菌落总数标准
微生物标本采集 送检及处理原则
微生物标本采集、送检及处理原则 一、标本采集的一般原则： 1、病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。 2、无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。 3、根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。 4、注意在不同病程采集不同部位标本。 5、采集标本时要防止传播和自身感染。 二、标本的处理： 1、标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。 2、标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。 3、厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。 Ⅰ血液及骨髓标本： 血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤
寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。 1、采血时间及次数 2、抽血部位及抽血量 3、报告方式：培养5d无菌生长者报告“培养5d无菌生长”。 查见细菌报告菌名和药敏结果。 4、菌血症、败血症的诊断标准：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）； 2）发病星期后血中抗体滴度上升。 Ⅱ脑脊液标本： 脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。 常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。 1、涂片检查： (1) 一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查
空气细菌培养的采样方法
1空气的采样方法检测空气的培养法平板暴露法。此法简便，目前大部分医疗单位采用。在处理后，操作前进行，室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点，内外点布位距墙壁1m处，室内面积＞30m2设4角及中央5点，4角的布点部位距墙壁1m处。基本原理是：空气中细菌等可随尘粒一起下降，在室内各采样点处放好平板，采样高度距地面～，采样时，将平板盖打开，暴露5min或10min，盖好平板。将平板置于37℃培养48h计算菌落数。2细菌数的细菌总数（c f u/m3=4500N/A×T）式中A=平板面积（cm2） T——平板暴露时间（min） N——平均菌落数（cfu） 这个计算公式是根据在面积100cm3的表面，5min落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。 3效果和污染状况的评价
空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养，如消毒后空气中细菌数明显下降，说明消毒效果好，下面规定适用GB15982——1995规定：Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3，并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格；Ⅲ类区域细菌总数≤500c f u/m3并且未检出致病菌为消毒合格。 Ⅰ类环境包括层流和层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。Ⅱ类环境包括普通、产房、婴儿室、室、普通室、、烧伤病房、病房、采用循环风或式空气消毒器，这类均为有人房间，必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。Ⅲ类环境包括儿科病房、检查室、、换药室、、供应室、、、各类普通病房室和房间，采用，或喷雾消毒。 据统计，目前世界上有41种主要，其中经空气传播的就有14种，占首位［1］。空气是疾病的主要传播媒介，而儿科门诊输液室是患儿及家长聚集的地方，的好坏，不仅对患儿的影响很大，也同时给家长的健康带来威胁。这已成为重要的，也对提出严峻的考验。调查表明，空气中浮离菌数在700 cfu/m3~1 800 cfu/m3时，就有发生感染的危险性，而如果细菌总数不足180 cfu/m3时，则这种危险性似乎很小［2］。本次研究发现使用2 h后的输液室空气细菌总数平均为748 cfu/m3，并随着时间的推移，细菌总数逐步上升，在使用4 h后的细菌总数平均值达到1 785 cfu/m3。这样的环境都有可能导致疾病通过空气传播。儿科门诊患者大多是急性或，在患者咳出的、痰液及分泌物中含有多种致病菌，同时每个患儿通常都有家长陪护，导致空气细菌含量较高。因为患儿本身较低，所以儿科输液室空气质量的好坏更能影响患儿疾病的转归，这一点应该引起高度重视。本次研究发现，儿科门诊输液室空气消毒后效果监测，符合标准，而且指数较低，输液患者后细菌数逐渐上升，2 h、4 h均超标，因此，儿科门诊输液室在人员流动的情况下，无法持续进行，仅靠一天两次的紫外线消毒是不能保证空气质量。降低菌落数的效果较持久。自然通风通过换气持续30 min，可以显着减少空气中的含量，降低室内CO及废气的浓度。每天累计通风2 h~3 h，能持久降低中的菌落数。有报道通风流出和进入的空气达到本房间容积时为换气1次，可清除原细菌数的%，所以通风是最简单的消毒方法［3］。另外，也应注意及时关闭,保持已清洁消毒后的室内净化效果。通过对空气中菌落的初步鉴定发现主要以革兰阳性菌为主，其中葡萄球菌、微球菌、奈瑟
大肠杆菌一般培养方法
使用牛肉膏蛋白胨培养基? 组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,～。? 具体配置步骤：? 1.称药品?按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.? 2.加热溶解?在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.? 3. 调pH?检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH 的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.?
4.过滤?液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.? 5.分装?按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.? 6.加棉塞?试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.? 7.包扎?加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.?
院感细菌培养操作
1.目的: 医院是病原微生物较集中,抵抗力低的人群密集的地方,加之化疗、放疗等手段的采用，影响病人免疫机能下降，大量使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失调，以及先进医疗仪器广泛应用等原因，增加消毒灭菌的难度，致使院内感染已成为当前医疗实践的严重障碍，直接影响医疗效果。进一步规范院内感染监测标本的程序，更好、更快检测病原微生物的生长情况，预防医院感染的发生。 2.设备、试剂与材料 VITEK 2 compact鉴定药敏分析系统 VITEK 32鉴定药敏分析系统 美国FORMAⅡ级生物安全柜 显微镜 酒精灯 接种环 恒温培养箱 各种培养基 革兰氏染色液 触酶试剂 氧化酶试剂 移液器 无菌吸嘴 3.院感标本采集 3．1空气的采样 3．1．1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 3．1．2采样高度与地面垂直高度80-150CM。 3．1．3布点方法室内面积＜30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙1m 处各取一点；室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。 3．1．4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检。
3．2．1采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。 3．2．2采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面＞100cm2，则取100cm2。3．2．3采样方法用5×5 cm2的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积，剪支手接触部位，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。3．3医护人员手采样 3．3．1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 3．3．2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30 cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。 3．4医疗用品采样 3．4．1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 3．4．2采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等，取其中的一部分放培养液中培养。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。 3．5使用中消毒剂的采集 3．5．1采样时间采取使用中的消毒剂。 3．5．2采样方法在无菌条件下，用无菌注射器抽取1ml被检样品，加入10ml稀释液混匀。（对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80和%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80，以中和被检样液的残效作用。）
细菌的培养方法
细菌的培养方法 根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。 1. 一般培养法 将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18－24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌，需培养3－7天直至一个月才能生长。为使培养箱内保持一定湿度，可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固，以防培养基干裂。 2. 二氧化碳培养法 某些细菌，如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空气中才能生长，尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法，常用方法有以下几种： (1) 二氧化碳培养箱可将已接种的培养基直接放入箱内孵育，即可获得二氧化碳环境。 (2) 烛缸法将已接种的培养基，置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内。缸盖或缸口处均需涂以凡士林，然后点燃蜡烛直立置入缸中，密封缸盖。待燃自行熄灭时，容
器内约含5－10％的CO2 容器置37℃培养。 (3) 重碳酸钠－盐酸法每升容积的容器内，重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例，分别将两种药各置一器皿内（如平皿内），连同器皿置于标本缸或干燥器内，盖严后使容器倾斜，两种药品接触后即可产生二氧化碳。 3. 厌氧培养法 目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。 (1) 厌氧罐法是目前应用较广泛的一种方法，共分为以下几种。 抽气换气法：该法适用于一般实验室，其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境。标本接种后，将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa，停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 、20%H2 、10%CO2 （有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果）。罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管，美蓝在有氧的环境下呈蓝色，无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即可持续无色。
细菌培养技术
第二节细菌培养检测技术 节概述 细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定 知识点导航 一.培养基的种类 培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基 能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选 择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。 （一）基础培养基 只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉 汤培养基、琼脂培养基。 （二）营养培养基 在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细 菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。 （三）选择培养基 利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的 培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别 。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。 （四）鉴别培养基 培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴 别和鉴定细菌。 （五）厌氧菌用培养基 专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。 （六）特殊培养基 为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良Kagan氏培养基等。 二.培养基的制备 制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整pH、过滤、分装、灭菌及检定和 保存。 三.细菌检验室的注意事项及无菌技术
细菌培养实验报告(新)
篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm 左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 1．液体培养基配制
病原微生物标本采集 运送
病原微生物检验标本采集、运送操作规程正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物检验工作质量至关重要，为了准确检出病原菌，避免漏检与误诊，临床医护人员和实验室工作人员应掌握微生物标本的选择，采集，运送，保存及处理的一般原则。 一、标本采集的一般原则 1.早期采集 采集时间最好在病程早期，急性期，且必须在使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。 2.无菌操作 采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近或皮肤黏膜正常菌群的污染，使病原菌与正常菌群混淆，造成临床误诊。采集的标本应存放在无菌容器内，容器不能使用消毒剂处理，标本中也不能添加防腐剂，以免降低病原菌的检出。 3.适量的标本 标本量过少可能导致假阴性结果。 4.适当的采集方法 对于厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌的采集方法是不同的，用于厌氧菌培养的标本应尽量用注射器采集抽取物，室温保存，不能冷藏和冷冻。 5.盛放标本的容器 采集标本应存放在无菌，防漏，应带有螺旋盖的容器内。 二、标本的运送 1.标本采集后立即送检，若有延迟也应在2小时内送到实验室，否则会影响病原菌的检出，一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。 2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。 三、不同标本的采集，运送
（一）血液标本采集，运送 1.血培养指针征 当患者出现：发热（大于38度）或低温（小于36度），寒战，白细胞增多,皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭，血压降低，c反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，具备上述一种或几种体征时，临床怀疑菌血症应采集血液标本进行血培养，对入院危重感染患者应在未使用抗菌药物治疗前，及时做血培养。 2.对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集２套以上血培养标本。成年患者：推荐同时采集２－３套（不同部位）血培养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本），采血量每瓶不少于5ml;婴幼儿患者：推荐同时采集２次（不同部位）血培养标本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）.在采取血培养后的2—5天内，无需重复采取血培养。两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。 3.血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。 检出率与采血量成比例增长，每增加1ml的血液，病原菌的检出率就会相应增加。儿童患者血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。采用一对（需氧瓶+厌氧瓶）组合，比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。采血量不能满足推荐的量时，应首先满足需氧瓶的需要。 推荐从外周静脉采集血液标本,不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读。 4.血标本采集的注意事项 在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再进行穿刺部位的皮肤消毒。严格按照“酒精、含碘消毒剂、酒精”的消毒步骤操作，并等待足够的消毒时间。严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套.不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头;采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室,血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。 (二)痰培养标本采集，运送 1.痰培养指征
临床标本细菌培养鉴定常见的个疑问
临床标本细菌培养鉴定常见的个疑问
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问题1:如何正确应用药物敏感结果? 正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面: 首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床； 重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考； 考虑到药敏试验的局限性:体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。 问题２:是否MIC越低的药物越好？ 不一定。因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。因此，不能单纯比较MIC值而认为ＭＩＣ越低的药物就一定越好。ＭＩC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远)说明该药物对相应的病原菌的作用越强。只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。 问题３：是否所有报告的细菌均为病原菌? 不一定。原因如下: 所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染,尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。 可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。特别是原为复数菌感染时,针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可能
出现真菌感染。 有2种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。 问题4:为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？ 由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致; 某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低,能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长； 标本从采集到接种的时间过长,造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。 问题５:我们想用的药物在药敏试验中没有做? 1.天然耐药 ２.可能是药物的敏感性被其他药物所预报 问题6：为什么有的菌报告很多种药物,有的仅报告几种药物? 报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多,而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。 问题７:是否能将所用的药都做药敏试验? 1．没有必要:通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性 2.没有可能:不是所用药物都可以做药敏试验(需要药物在体外稳定,需要有操作标准和解释标准） 问题8:选择药敏报告敏感的药物,为什么临床治疗无效？ ①体外药敏试验只能预测体内治疗效果,并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效;敏感≠治疗有效；
产房细菌培养采样方法
产房细菌培养采样方法 一采样及检查原则 采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h,若样品保存于0 － 40C条件时，送抢时间不得超过24h。 二空气采样及检查方法 采样高度时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 采祥高度 与地面垂直高度80－150cm。 布点方法 室内面积≤30㎡，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处各取 一点; 室内面积>30㎡，东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。 采样方法 用9m直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。 细菌菌落总数检查 产房空气细菌菌落总数≤200cfu/m3
三物体表面采样及检查方法 采样时间 选择消毒处理后4h内进行采样。 采样面积 被采表面<100㎡，取全部表而；被采表面≥100㎡,取100㎡ 采样方法 用5×5㎡的标准灭菌规格板,放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格权内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子，连续采样1—4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。 门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 细菌菌落总数检查 规定执行。 结果计算 物体表面细菌菌落总数≤5cfu/㎡ 四医护人员手采样及检查方法 采样时间
在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 采样面积及方法 被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双 手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积 30cm2〕，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位。 将棉试子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方 厘米（cm2）计算。 细菌菌落总数检查 手细菌菌落总数≤5cfu/ cm2 五医疗用品采样及检查方法 采样时间 在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 采样量及采样方法 浸有无菌生理盐水采样液的棉试子在被检物体表面涂抹采样， 被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取 100cm2。 使用中消毒剂与无菌器械保存液 采样时间 采取更换前使用中的消毒剂
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤
细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
细菌分离培养及移植
细菌分离培养及移植 在细菌学诊断中，分离培养是不可缺少的一环。分离培养的目的主要是在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。在分离培养时应注意：选择适合于所分离细菌生长的培养基、培养温度、气体条件等。同时应严格按无菌操作程序进行实验，并做好标记。 [目的要求] (1)掌握细菌分离培养的基本要领和方法。 (2)掌握厌氧菌培养的原理及其方法。 [实验材料] 菌种：大肠杆菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合培养肉汤等。 器械：剪刀、记号笔(以上小组共用)。 培养基：普通肉汤和普通琼脂斜面、普通琼脂和鲜血琼脂平板、酒精灯、接种环(以上每人一套)。 [需氧性细菌分离培养法] 1．划线分离培养法此法为常用的细菌分离培养法。平板划线培养的方法甚多，可按各人的习惯选择应用，其目的都是达到使被检材料适当的稀释，以求获得独立单在的菌落，防止发育成菌苔，以致不易鉴别其菌落性状。划线培养时须注意以下几点：
(1)左手持皿，用左手的拇指、食指及 中指将皿盖揭开呈20。左右的角度(角度愈小愈好，以免空气中的细菌进入皿中将培养基污染)。 (2)右手持接种环，从大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合培养肉汤中取少许材料涂布于培养基边缘，然后将接种环上多余的材料在火焰中烧毁，待接种环冷却后，再与所涂材料的地方轻轻接触，开始划线，方法如图(5-l)。 (3)划线前先将接种环稍稍弯曲，这样易和平皿内琼脂面平行，不致划破培养基。 (4)划线中不宜过多地重复旧线，以免形成菌苔。 (5)接种完毕，在皿底上作好菌名、日期和接种者等标记，平皿倒扣，置37℃培养。 2．纯培养的获得与移植法将划线分离培养37℃24h的平板从温箱取出，挑取单个菌落，经染色镜检，证明不含杂菌，此时用接种环挑取单个菌落，移植于琼脂斜面培养，得到的培养物，即为纯培养物，再作其他各项试验检查和致病性试验等。具体操作方法如下：
细菌标本采集规范
临床微生物学标本采取和处理的规范化要求 正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果，给临床以误导，延误对患者的正确治疗。为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。 一、血液细菌培养标本的采集和处理 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。 1．采集方法：静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。 2.采血时间以及血培养份数：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本，可使细菌检出率高达99%。对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则： （1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2～3份血液标本培养。 （2）可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养，如果24小时后阴性，再采集两份血标本培养。 （3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24～36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。因为1次血培养不足以说明问题，可能会遗漏阳性结果。
（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时；应改变血培养方法，以获得罕见或苛养的微生物。 （5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗；或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。 3.采血部位：采血部位通常为肘静脉。疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染，其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。采血时要求严格无菌操作，防止皮肤正常菌群污染。 4.采血量：采血量与血培养的检出率相关，所以采血量一定要足够。成人一般为8～10ml/瓶，新生儿与婴幼儿为1～5 ml/瓶，骨髓采血量为1～2ml/瓶。 5.标本运送与保存：含血样的培养瓶应立即送往实验室；不能及时送检的标本，应将其放在室温，切忌冰箱存放，因为某些苛养菌可在低温环境中死亡，而使培养阳性率下降。 二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取和处理 下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但痰标本的质量往往难以保证，造成病原学诊断和实际引起感染的病原菌脱节，直接影响抗菌药物的应用、甚至耐药菌的出现或流行。痰标本的细菌学检验地带网检查应注意如下几个问题。 1.标本的采集：痰液标本最好在应用抗菌药物之前采集，以深咳晨痰最好，主 要有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、小儿采痰法和气管穿刺法等。
空气培养的采样方法精选版
空气培养的采样方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法 一、采样时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。 二、采样高度 与地面垂直高度80-150厘米。 三、布点方法 1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1） 2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2） 四、采样方法 用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。 五、结果分析 I类区域：<10 cfu/m3 II类区域：<200 cfu/m3 III类区域：<500 cfu/m3 六、附录 Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。 Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。 Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。 Ⅳ类区域：传染病科及病房。 洁净室空气细菌培养监测布点与标准 一、局部百级，周围千级： 共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级： 共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：
共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。采样布置点示意图： 四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。 五、要求： 1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方； 2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟； 3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时； 4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。 5.放置培养皿示意图： 盖面朝下斜扣到底盘A边上 六、洁净室空气细菌菌落总数标准?