发光细菌的应用
发光细菌
一、发光细菌方法简介
近年来，水污染问题日益严重，与此同时也开发出许多灵敏、有效的环境监测方法，这些方法可以划分为两类：分析技术和生物监测。其中分析技术常常用于废水常规指标的测试，但不能反应水质综合毒性的大小。传统的生物监测以水蚤、藻类或鱼类为受试对象，虽然能反映毒物对生物的直接影响，但是这些方法的最大缺点是实验周期长，实验过程比较繁琐。
针对传统生物毒性检测方法的不足，研究和开发新型生物毒性监测技术——发光细菌法。该方法以简便的操作方式、测量结果一目了然，受到了科研单位和企业的青睐。
自1672年R．Boyle观察到发光的菌体所发出的光易被化学物质抑制后，许多科学家相继对细菌的发光效应进行了大量的研究。本世纪70年代至80年代初，国外科学家首次从海鱼体表分离和筛选出对人体无害，对环境敏感的发光细菌，用于检测水体生物毒性，现已成为一种简单、快速的生物毒性检测手段。80年代初我国引进了这项技术，并先后分离出海水型和淡水型（青海弧菌）的发光细菌，用以检测环境污染物的急性生物毒性。
一般发光细菌长约1.5-3um（微米），宽度0.5-0.8um，因此肉眼根本看不到，要用显微镜放大至1千倍时方可以分辨它们的体形。而它们的发光，也要在特定的条件中才能看得见。
青海弧菌是目前唯一的非致病型淡水发光菌，所以专利产品青海弧菌冻干粉在运输、使用过程中安全可靠，对废弃的菌液也不用进行特殊处理，不会引起二次污染。
二、检测原理及操作
发光细菌最特别的生理代谢特征是在其生长的一定时间内，能够发射可见光，发光的原理与萤火虫的发光有点类似，但并不相同。简单来说，细菌发光可概括如下：
细菌身体内可以合成一种酶，它可以催化还原型的黄素单核苷酸（FMNH2）和长链脂肪醛（RCHO，至少含8个C）并在O2的参与下发生氧化反应而放出光子，这种氧化反应并不放热，故而发光细菌在发光时并不伴随发热，是典型的“冷”光。
合成细菌荧光酶
发光细菌生理代谢合成长链脂肪醛其他产物+光
生成还原型黄素单核苷酸
发光波长在490nm左右。这种发光过程极易受到外界条件的影响，凡是干扰或损害细菌呼吸或生理过程的任何因素都能使细菌发光强度发生变化。当有毒有害物质与发光菌接触时，发光强度立即改变，并随着毒物浓度的增加而发光减弱。这种发光强度的变化，可用精密测量仪，即北京滨松光子技术股份有限公司研制开发的BHP9511型水质毒性快速检测仪进行测量。
主要操作流程图如下：
发光菌干粉
10分钟后可以用于测定 样品（液体） 测量杯 放入测试仪中 检测发光值及数据处理 加入适量复苏液 取50或100μl 1~2ml 15min 后
三、毒性的表示方法
（1）用苯酚浓度表示：
当未经稀释的样品（即样品稀释度为100％）的抑光率在5％～95％时，也即相对发光强度在95％～5％范围内，可以用相同抑光率时苯酚的浓度来表示样品的毒性。大多数水样均在此范围内。
（2）用EC 50值表示：
EC 50值是指受试物对发光菌作用后，
发光强度下降为对照组的50%时（即相对发光强度或抑光率为50%时）的受试物浓度。EC 50值是评价化合物生态毒性的重要参数，也是评价有机污染物对生物体毒理学效应的常用参数，常用于表征化合物对发光菌的作用结果。EC 50值越小表明受试物的毒性越大。
（3）毒性表达方法还应注明样品与发光菌作用的时间，因为作用时间也影响数值大小。发光菌作用时间10min 和作用15min 的数值是不同的，有时差异还很大，故必须表明作用的时间。一般可在数值表达后用括号加注作用时间，例如：EC 50＝0.10%(15min),或抑光率45％（15min ），表明是15min 时实测数据。
四、发光细菌法的应用
根据发光细菌法的原理和方法，凡能干扰或破坏发光细菌呼吸、生长、新陈代谢等生理过程的环境因子，例如有毒有害的物质等都可以运用发光细菌法检测生物毒性。其主要应用包括：
1、在教学领域的应用：配合《水和废水监测分析方法》（第四版）中关于发光菌应用方面的实验，同济大学已率先开设了此项实验；
2、在受污染现场的应用：因泄漏事故、环境污染，以及人为破坏而造成的饮用水污染，能够快速的初筛、监测、为控制污染扩散提供参考数据；
3、对污水处理中的进出水、食品加工用水、地表水、沉淀物毒性的检测；
4、对油污染物毒性、工业用水中的生物杀减剂的测试与监测；
结果报告 有毒 无毒
可疑
以下为我公司产品实际应用数据图表：
仪器：BHP9511型水质毒性快速检测仪
试剂：淡水型青海弧菌（Q67）
样品：氟乙酰胺
地点：上海市公安局
图1 氟乙酰胺与Q67作用5min
图3 氟乙酰胺与Q67作用15min
图4 氟乙酰胺与Q67作用20min
结果分析：样品对青海弧菌的发光抑制作用非常明显，在20min内发光强度基本保持稳定，且所测得的EC50值也能保持稳定，表明青海弧菌在5min内就能得出一个稳定的结果，反应时间的经验值为15min；由图可见，氟乙酰胺对青海弧菌的EC50=0.3mg/ml，灵敏度较高。
现行标准：
美国ASTM 标准 (D-5660) 《通过对海洋发光细菌进行毒性试验而对遭化学污染的水和土壤进行微生物解毒予以评估的标准试验方法》
美国环保局(EPA)饮用水毒性测试协议(WET)认可
欧盟ISO11348-3：《水质测定——水样对于发光细菌的抑制效应测定》
中国国标GB/T15441-1995《水质急性毒性的测定发光细菌法》
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
水中发光细菌的急性毒性快速检测技术
水中发光细菌的急性毒性快速检测技术 刘康 （北京市环境保护监测中心 北京 100048） 摘 要 现场检测中，通过对水体进行发光细菌急性毒性检测，快速判定水体的综合毒性和污染量级，起到早期预警作用。文章介绍了DeltaTox毒性仪及其工作原理和方法、毒性参照物实验和比对实验等内容。仪器通过高敏感度分析仪（光度计）测试发光细菌与水样混合后的光强度，并与空白实验的光强度比较，根据实验前后样本发光强度的变化得到光损失或光增益的百分比。该检测耗时短，操作简便，敏感度高，适用于现场检测或突发性污染事故的应急监测。 关键词 发光细菌；急性毒性；快速检测 Rapid Testing Technique on Acute Toxicity of Luminescent Bacteria in Water Kang Liu (Beijing Municipal Environmental Monitoring Center,Beijing,100048) Abstract By acute toxicity test using luminescent bacteria,the concerned water’s overall toxicity and polluted level can be rapidly determined right in field.This test can be used as an early warning.The essay introduced the working principle of DeltaTox instrument,the toxicity reference substance experiments and the contrast experiments,etc.The high-sensitivity analyzer(photometer)of the DeltaTox detects the light intensity of the mixture of the luminescent bacteria and the potentially contaminated https://www.360docs.net/doc/d47552957.html,paring it with the blank test,we can obtain the percentage of optical loss and gain according to the luminous intensity of the simples before and after the experiment.This testing method is a simple,sensitive and rapid way which can be used both in pollution accidents and regular on-site testing. Key words Luminescent bacteria;A cute toxicity;Rapid testing 近些年,随着工农业的快速发展,各种有毒有害物质大量产生,它们随着地表径流直接排入到江、河、湖泊等环境水体中,给人类赖以生存的水资源带来了巨大威胁.为及时掌握水质情况，控制水体污染，提高水环境安全水平,为制定水污染防治措施提供技术支撑，需要对环境水体的水质进行便捷、快速地监测．目前对水体毒性物质的分析主要采用气相或液相色谱等化学分析方法进行。通过分析某一种或几种代表性污染物浓度来估测水体的毒性．其有效性并不为毒理学界广泛认同。另外．分析化学方法虽然精密度和灵敏度较高．但设备庞大，无法在野外进行水质毒性的快速检测。近来水质毒性的生物检测方法取得了快速的进展．尤其以发光细菌检测方法相对简便和快速，应用较广泛。 1 实验部分 1.1 仪器（试剂） DeltaTox是美国SDI(Strategic Diagnostics Inc)一种急性毒性检测系统，该毒性测试技术是一种基于生物传感技术的应急毒性检测系统，测定系统的基础是使用一种发光细菌即：费希尔弧菌(Vibrio fiseheri)。该毒性仪体积小、携带方便，工作温度在10°C -28°C之间，非常适合变化的现场环境。整个系统包括一台高灵敏度的分析仪（光度计）、干冻的细菌试剂、实验控制液和补充液。
海洋氮循环中细菌的厌氧氨氧化_洪义国
Mini -Review 小型综述 微生物学报Acta Micro biologica Sinica 49(3):281-286;4M arch 2009ISSN 0001-6209;CN 11-1995 Q http : journals .im .ac .cn actamicrocn 基金项目:国家自然科学基金(30800032);广东省自然科学基金(84510301001692);中科院院长专项启动基金(07Y Q091001) ＊通信作者。Tel :+86-20-89023345;E -mai :jdgu @hkucc .hku .hk 作者简介:洪义国(1974-),内蒙赤峰人,博士,主要从事海洋环境与分子微生物学的研究。E -mail :yghong @scsio .ac .cn 收稿日期:2008-09-30;修回日期:2008-12-08 海洋氮循环中细菌的厌氧氨氧化 洪义国1,李猛2,顾继东 1,2＊ (1中国科学院南海海洋研究所,中国科学院热带海洋环境动力学重点实验室,广州510301) (2香港大学生物科学学院,香港) 摘要:细菌厌氧氨氧化过程是在一类特殊细菌的厌氧氨氧化体内完成的以氨作为电子供体硝酸盐作为电子受体的一种新型脱氮反应。厌氧氨氧化菌的发现,改变人们对传统氮的生物地球化学循环的认识:反硝化细菌并不是大气中氮气产生的唯一生物类群。而且越来越多的证据表明,细菌厌氧氨氧化与全球的氮物质循环密切相关,估计海洋细菌的厌氧氨氧化过程占到全球海洋氮气产生的一半左右。由于氮与碳的循环密切相关,因此可以推测,细菌的厌氧氨氧化会影响大气中的二氧化碳浓度,从而对全球气候变化产生重要影响。另外,由于细菌厌氧氨氧化菌实现了氨氮的短程转化,缩短了氮素的转化过程,因此为开发更节约能源、更符合可持续发展要求的废水脱氮新技术提供了生物学基础。关键词:厌氧氨氧化(Ana mmox )细菌;海洋氮循环;厌氧氨氧化体 中图分类号:Q938.1 文献标识码:A 文章编号:0001-6209(2009)03-0281-06 氮是生命活动必需的元素,是组成蛋白质、核酸等生物大分子以及氨基酸、维生素等小分子化合物的重要成分。氮通过在自然界中的不断循环,维持着整个生物圈的生态平衡和物种的不断进化。通过科学家们大量的长期的研究,目前对氮的生物地球化学循环有了基本的了解 [1] 。传统的观点认为,大 气中的氮气主要来源于微生物的硝化(Nitrification )和反硝化作用(Denitrification ),氨(NH 3)只能在有氧条件下才能被氧化成亚硝氮(NO -2)或硝氮(NO - 3),NO -2或NO -3再被还原成氮气(N 2)释放。近年来,微生物家发现了在厌氧条件下微生物能够以NO -2 作为电子受体将NH 3氧化成N 2的过程,而且认识到这一过程在自然界的氮循环中可能发挥极其重要的作用。这一发现改变人们对传统氮的生物地球化学循环的认识,近十年来在这一领域取得了很多突破性进展。 1 厌氧氨氧化的发现缘于偶然 长期以来,NH + 4的氧化一直被认为是在绝对有氧条件下进行的。1977年,Broda 根据热力学反应自由能计算和生物进化关系的分析,推测自然界中可能存在化能自养微生物将NH + 4氧化成N 2,但一直没有找到实验证据 [2] 。在上个世纪90年代,在荷 兰Delft 一个酵母厂的污水脱氮流化床反应器中,工人们发现了一个奇怪的现象,反应器中有NH + 4消失,且随NH + 4和NO - 3的消耗,有N 2生成。这一发现与原来认为的只有在有氧条件下才能去除NH + 4 的认识相违背。Delft 大学的微生物学家Gijs Kuenen 对这一现象进行详细研究,Kuenen 认为这一神秘的现象一定是由一种特殊的微生物作用完成的,而且这种微生物的发现可能为废水处理提供新的方法。如果这种微生物广泛分布在自然界中,那么这种代 DOI :10.13343/j .cn ki .wsxb .2009.03.009
Lumifox2000便携式发光细菌水质综合毒性检测仪
产品名称:手持式发光细菌毒性检测仪 Product name: portable water toxicity detector 小巧、轻便的理想应急检测产品 Smart and lightweight product ideal for emergency 快速、准确 Fast, accuracy 一次性检测出水质综合毒性 detect comprehensive toxicity of water quality at a time 中文智能引导式操作界面 Chinese intelligent operation guide menu LumiFox 2000 手持式发光细菌毒性检测仪是朗石公司最新推出的专利产品，其 工作原理是通过检测水质综合毒性对发光细菌发光强度的抑制率来确定水样的毒性强弱。LumiFox 2000是手持式的，其最大优点是可在现场快速方便地进行水质毒性（尤其是对于未知化学污染物）检测。在出现水质污染紧急事故时，可以帮助您快速评估水样的污染程度。因此，它是一种理想的应急产品。 Lumifox2000 portable water toxicity detector is a patent product published by Labsun. The design principle on the basis is detecting the intensity of emitting-light of the bacterium for evaluating the toxicity of water sample. The portable Lumifox2000’s greatest strength is fast and easily on-site detecting poison materials in water (especially for un-known pollutant). When water pollution emergency occurred, Lumifox2000 can help you fast evaluate the pollution level. Consequently it is an ideal choice for emergency. 产品用途：水环境污染事故应急监测
细菌形态结构观察实验报告精品
细菌形态结构观察实验报告精品篇 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号055656565 指导教师:xxxxxx 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告 《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告 实验目的 1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。 2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。 实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来
不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。 高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
发光细菌法测生物毒性
主要任务 1.对常用钻井液材料进行生物毒性分析，遴选出符合环保要求的材料。 2.通过进行生物毒性分析，对不符合环保要求的钻井液材料，如果是必备材 料而且目前又找不到相同功能的替代品，则研制新型的符合环保要求的替代品材料。 3.在遴选出的钻井液材料中，择优选用价格性能比较好的材料，通过室内钻 井液性能综合试验研究，研制出一种钻井液性能优良，能保证钻探施工顺 利进行，符合环境保护要求的新型钻井液体系。 4.现场试验两口井，通过实践检验其钻井液综合性能，整理试验数据，编写 研究报告。 一、完成了符合环保要求的钻井液材料的遴选 1．生物毒性测定方法的选择 （1）糠虾生物试验法 （2）微毒性分析法 （3）发光细菌法 通过对发光细菌法与糠虾法试验结果对比，我们发现发光细菌法的EC50值与糠虾生物试验法的LC50值之间具有一定的相关性：EC50值总是小于LC50值，实验结果见表1。这说明相同数值的EC50值和LC50值相比，EC50值比LC50值对环境的毒性污染更小，更安全可靠。
表1 四种钻井液体系的EC 50值与LC 50值比较 因此本项目采用发光细菌法，测定钻井液单剂及体系的生物毒性，用EC50(相对发光率50%时)来表征被测物的生物毒性， EC50值越大，表明被测物的生物毒性越小；EC50值越小，表明被测物的生物毒性越大。我们参照糠虾法的排放标准，以EC50＞30000ppm 作为钻井液单剂及体系允许排放的标准。并参照糠虾生物毒性试验法的生物毒性分级标准，将生物毒性等级划分为六个等级(表2)，以此作为本项目的环境可接受性评价方法和标准。 表2 生物毒性等级分类
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告 篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细) 一、实验题目：培养基的制备与灭菌 二、实验目的： 1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。 2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。 三、实验器材： 1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、实验原理： 1、培养基的制备 包括一下几种成分： （1）水分：主要成分。 （2）n源：包括无机氮和有机氮。 （3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 （4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。 有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些 氨基酸或核酸等。 2、培养基配置的原则 根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。 培养基有以下分类： 按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基 培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。 3、灭菌： 用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。 （1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器， 加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若 是含糖培养基，110℃、30min。
海洋细菌的分离与培养5
海洋细菌的分离与培养 制药工程王凯 指导教师曲田丽 摘要：本文自青岛城阳区海西村海域距离海岸50m处采集海泥和海水样品，采用平板稀释分离方法进行海洋细菌分离，共分离出4种海洋细菌分别为X1、X2、X3、X4。再以6种病原细菌，6种病原真菌为供试靶标菌进行生物活性测定，结果表明，所分离的海洋细菌X4对番茄早抑病菌抑菌效果最好，最高抑菌率达84.7%。 关键词:海洋细菌；分离；培养；活性测定 Isolation and Cultivation the Marine Bacteria Pharmaceutical engineering Wang kai Tutor Qu Tianli Abstract:The mud and sea water of this experiment was come from the city of Haixi Village of Chengyang Qingdao sea，where away off the coast 50m, then use separation-plate -dilution method and flat culture isolated four species of bacteria. Then use six bacteria, six fungi as the bacteria tested target for bacteria bioassay. At last the marine bacteria had best effect on Alternaria solani,the inhibitory rate was 84.7%. Key word: Marine bacterium; Separation; Raise; Active determination
细菌培养实验报告(新)
篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm 左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 1．液体培养基配制
海洋浮游细菌研究
海洋浮游细菌研究 1 引言 海洋细菌是海洋生态系统中的重要组成部分，在海洋物质循环、能量流动以及生态调控等方面具有重要作用.海洋细菌的群落结构与种类组成直接影响整个海洋生态系统的健康发展，同时细菌群落结构又与其栖息的环境密切相关.海洋细菌的分类鉴定及其群落结构的分析方法包括表型鉴定法和分子遗传学鉴定法两大类(金光，2011)，表型鉴定法包括细菌形态和生理生化水平、细胞组分水平、蛋白质水平上的鉴定，分子遗传学鉴定法是在核酸水平上的鉴定，包括核酸杂交、PCR 技术、16S rRNA序列分析、全基因组测序等. 变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)技术最早是由Fischer和Lerman于1983年创立的，是根据在不同浓度的变性剂中DNA片段解链行为的不同而导致电泳迁移率发生变化，从而将片段大小相同而碱基组成不同的片段分开.近年来PCR-DGGE 技术已经广泛运用于细菌的群落结构分析中. 大亚湾位于南海北部，是广东省重要的养殖基地，也是大亚湾核电站和惠州港所在地.由于近些年该海域污染日趋严重，海洋环境状况发生显著变化，浮游细菌群落结构也会发生明显变化.目前有关大亚湾浮游细菌方面的报道不多，尚未有浮游细菌DNA指纹及分子多样性方面的报道.为了了解大亚湾海域浮游细菌群落结构以及分子多样性，本文采集了大亚湾海域表层水样，利用PCR-DGGE技术对浮游细菌的DNA指纹进行了研究，以揭示DGGE技术等分子手段在浮游细菌群落结构多样性分析上的应用. 2 材料与方法 2.1 样品的采集与处理 在广东省大亚湾海域设置的9个采样点(图 1).S1～S3位于大亚湾澳头海域，该海域毗邻惠州市澳头镇，是重要网箱鱼类养殖基地;S4～S6位于大鹏澳海域，该海域位于深圳市大鹏镇，湾内有鱼类和贝类养殖区，同时也是大亚湾核电站和岭澳核电站所在地;S7～S8位于大亚湾湾口，受到养殖和人类活动的影响较小.分别于2010年12月15日(2010年冬)、2011年6月8日(2011年夏)采集表层水样，每个采样点采集水样9 L，并在现场用中性鲁哥试剂固定.固定的水样先用孔径为10 μm网筛过滤，然后再依次用GF/A滤膜(Whatman)以及 0.2 μm 聚醚砜滤膜(Millipore)过滤，滤膜上的样品置于1.8 mL SET裂解缓冲液(20% 蔗糖，50 mmol · L-1 Tris-HCl pH 7.6，50 mmol · L-1 EDTA)中，储存在-20 ℃待分析.
发光细菌毒性测试仪器LUMIStox300简易操作步骤
发光细菌毒性测试仪器LUMIStox300 SCREEN法简易操作步骤 1.打开LUMIStox300电源，预热30分钟。 2.打开LUMIStherm电源，必须等待其温度达到15℃才能使用。 3.准备样品。浊度大的污水，需静置后取上清液。一般样品不需加任何处理。如果是冷冻 样品，必须完全解冻；漩涡后沉淀、离心过滤必须混匀；如果样品pH值不在6.5-8.0之间，用HCL或NaOH调节至7.0±0.2；水样按3%比例投加NaCl置冰箱备用。若样品盐度不足2%，则应添加固体NaCl。样品盐度应在2%-5%之间。(选用2%的最小投加量，因为之前有加过缓冲盐，并且某些碱度样品中有碳酸盐。) 4.若每个样品测量两次，则一个批次可以同时测量9个样品；如果每个样品测量一次，则 一个批次可以同时测量14个样品。根据样品测量次数，用移液管移取每个样品以及一份控制液（LCK481，2%NaCl溶液）1.5 ml (供两次测量使用) 或1 ml (供一次测量使用)到每个测量试管中，放在LUMIStherm预温槽里使其达到正确的温度。 5.将LCK491冻干粉置冰浴中，加入1.0mL复苏液(LCX047)，盖盖，摇晃，继续置冰浴中15 分钟。然后取0.1mL复苏发光细菌溶液，以1：50的体积比例，加入5mL稀释液(LCX048)，制成细菌悬浮液，放在LUMIStherm上。 6.根据样品和控制溶液的数量，用移液管迅速移取相应数量的0.5 ml 细菌悬浮液到每个 测量试管中，放在LUMIStherm上恒温15分钟。 7.用移液管移取每个样品和控制溶液各0.5 ml 到每个细菌悬浮液测量试管中，继续放在 LUMIStherm预温槽中恒温15分钟。 8.在LUMIStox300上选择LU测量模式，测量参比溶液的发光度值，此数值应在800-1200之 间，表示发光细菌活性良好。若数值低于800，说明发光细菌活性较差，需要在下一批次制备细菌悬浮液时降低稀释液的比例。 9.在LUMIStox 300上选择评估模式
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验1 微生物的分离、培养及计数 实验原理 纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、Ph 等）。用平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。 筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB 培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB 培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。 梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。 实验目的 1. 通过制备LB 固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体LB 平板。 2. 通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。 3. 通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。 实验材料和药品 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP 管 实验步骤（用简单的流程图表示）
实验数据的记录与分析（如照片、表格等） 稀释倍数104105 大肠杆菌单个菌落个数837799111812 平均数86.313.7 浓度 1.726×1070.274×107 实验结果与讨论 结果：稀释了105计算出来的结果约为1.726×107ml/cm^3 稀释了104计算出来的结果约为0.274×107ml/cm^3 全组数据计算出来结果为2.233×107ml/cm^3 讨论： 在稀释倍数为104的试验中大肠杆菌菌落较少，原因可能是在稀释过程操作中，震荡不够，而且由于不小心洒了半管104稀释液，所以取液接种的时候底层的大肠杆菌数量偏少了。也有可能是靠近酒精灯附近使得温度升高杀死了一部分细菌或者降低了活性。 从实验图片中可以看出，涂布过程中由于操作失误导致固体培养基上不平滑，有多处破损，细菌在破损处的生长大多是不规则的连续紧挨在一起的，所以不便于菌落的计数，也会影响最终实验数据。 课后提问 使用稀释涂布平板计数法，计算出来的细菌数量与实际相比是偏大还是偏小呢？误差有多
发光细菌
发光细菌 一、填空题 1．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441—1995)，若须排除pH影响，应先将水样和氯化钠溶液的pH进行调整，具体为：含铜水样的pH调整为，含其他金属水样的pH调整为 5.4，含有机化合物水样的pH调整为。 2．《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T15441-1995)适用于、和实验室条件下可溶性化学物质的水质的急性毒性监测。 3．发光菌急性毒性试验中，样品的急性毒性水平可用相对发光度、 或等来表示。 4．淡水型的发光菌急性毒性试验中，样品的急性毒性水平则用相对发光度、 和等来表示。 5．用青海弧菌Q67进行发光菌急性毒性测定时，环境温度在℃之间均可进行，但在测试过程中要求温度波动在±℃内。 二、判断题 1．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，用发光菌测定样品的毒性非常简便，冻干粉经复苏后即可用于进行样品的测定。( ) 2．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T15441-1995)，若须测定包括pH影响在内的急性毒性，不应调节水样pH。( ) 3．在进行发光菌急性毒性试验中，对含有固体悬浮物的样品须离心或过滤去除，以免干扰测定。( ) 4．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，氯化汞母液可在2～5℃冰箱里保存6个月，而氯化汞工作液在2～5℃冰箱里只能保存24h。( ) 5．根据《水质急性毒性的测定发光细菌法》(GB／T 15441-1995)，在测定有色样品时，先要进行颜色干扰的校正，计算出因颜色引起的发光量校正值。( ) 6．进行淡水型发光菌急性毒性试验时，苯酚溶液的保存和氯化汞溶液相同。( ) 7．EC50值越小，表示受试物的毒性也越小。( )
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验 年级：13级生物工程（专升本）班级：2013011201 学号：1301014026 姓名：徐红贞 指导老师：刘凤霞教授 日期：二零一三十月五号
目录 1实验目的及原理 (1) 1.1实验目的 (1) 1.2实验原理 (1) 2实验材料 (1) 2.1实验仪器 (1) 2.2实验试剂 (1) 2.3培养基 (2) 2.3.1 生长培养基 (2) 2.3.2鉴定培养基 (2) 2.3.3摇瓶培养基 (2) 3试验方法 (2) 3.1仪器的准备 (2) 3.2培养基的配置 (2) 3.3初步筛选及鉴定 (2) 3.3.1采集土样 (3) 3.3.2富集培养 (3) 3.3.3稀释分离、纯化 (3) 3.3.4初筛 (3)
3.4复筛及鉴定 (4) 3.4.1革兰染色 (4) 3.5酶活力的测定 (4) 3.5.1摇瓶培养 (4) 3.5.2酶液稀释 (4) 3.5.3酶液测定 (4) 4结果分析 (5) 4.1平板涂布分离 (5) 4.2平板划线分离 (5) 4.3初筛 (5) 4.4复筛 (5) 4.5摇瓶培养 (6) 4.6酶活力测定 (6) 5参考资料 (7) 6附录 (8)
枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 1.实验目的及原理 1.1实验目的 （1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。 （2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。 （3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。 （4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。 （5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。 1.2实验原理 选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断培养物中是否有产淀粉酶微生物及产淀粉酶的能力。 2. 实验材料 2.1实验仪器 无菌玻璃涂棒无菌移液管接种环无菌培养皿土样电子天平三角瓶烧杯试管酒精灯擦镜纸载玻片吸水纸恒温摇床恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅
发光细菌的特性及其在环境监测方面的应用(精)
发光细菌的特性及其在环境监测方面的应用 发布时间：2008年7月30日 16时19分来源：化学工程与装备网 贺志庆1,王文波2 (1台州市环境监测中心站,浙江台州 318050 2台州市路桥区环境监测站,浙江台州 318050) 摘要：随着现代工业的不断发展，随之而来的环境问题也越来越突出。因此一些新的环境监测方法也应运而生。发光细菌检测方法就是其中的一种。它具有快速、简便、灵敏等特点，并在环境监测中的应用范围也很广泛。本文主要从发光细菌的原理、测定方法及其在环境监测中的应用等方面对其进 行了阐述。 关键词：发光细菌环境监测毒性 1 前言 到了二十一世纪，世界进入了工业化时代，随着现代工业的不断发展，当今世界面临着严重的环境问题。我国是一个发展中的大国 ,几十年来 ,尤其是改革开放以来经济发展突飞猛进 ,令全世界瞩目。但是随着工业化和城市化的不断发展，环境问题日益突出 ,严重影响了我国经济与社会的进一步发展。数量，种类日益增多的环境污染物迫切需要进行毒性鉴定，而传统的分析手段已难以对此做出迅速、有效、全面的回答。因此，发展新的快速，准确评价各类污染物毒性的有效方法显得非常迫切，必要。 环境中有毒物质生物毒性的测定与评价，一般用水生生物（如鱼，枣等）。植物（紫露草，蚕豆根类等）细菌或其他生物作为指示生物，以其形态，运动性，生理代谢的变化或死亡率做指标来评价环境物质的毒性。但这些方法大都操作繁琐，需要较多的仪器设备，结果不稳定，重复性差，因而难以推广应用。随着科学的不断发展，新的环境中有毒物质生物毒性的测定与评价不断建立，其指示生物包括细菌，藻类，底栖软体动物，浮游生物和鱼等，其中发光细菌因其独特的生理特性，与现代光电检测手段完美匹备的特点而备受关注，因此由其而发展起来的发光细菌毒性测试技术引人注目。发光细菌检测法是一种简单快速的生物毒性检测方法，它不仅能测试理化法所能测定的单因子指标，尤其能快速准确的测出环境的综合毒性指标，具有理化法无可比拟的 特点。 2 发光细菌检测有毒物质的原理 发光菌检测法是以一种非致病的明亮发光杆菌作指示生物，以其发光强度的变化为指标，测定环境中有害有毒物质的生物毒性的一种方法。细菌的发光过程是菌体内一种新陈代谢的生理过程，是光呼吸进程，是呼吸链上的一个
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验原理 纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、Ph 等）。用平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。 筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB 培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB 培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。 梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。 实验目的 1. 通过制备LB 固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体LB 平板。 2. 通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。 3. 通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。 实验材料和药品 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP 管 实验步骤（用简单的流程图表示） 实验数据的记录与分析（如照片、表格等）
实验结果与讨论 结果：稀释了105计算出来的结果约为×107ml/cm^3 稀释了104计算出来的结果约为×107ml/cm^3 全组数据计算出来结果为×107ml/cm^3 讨论： 在稀释倍数为104的试验中大肠杆菌菌落较少，原因可能是在稀释过程操作中，震荡不够，而且由于不小心洒了半管104稀释液，所以取液接种的时候底层的大肠杆菌数量偏少了。也有可能是靠近酒精灯附近使得温度升高杀死了一部分细菌或者降低了活性。 从实验图片中可以看出，涂布过程中由于操作失误导致固体培养基上不平滑，有多处破损，细菌在破损处的生长大多是不规则的连续紧挨在一起的，所以不便于菌落的计数，也会影响最终实验数据。 课后提问 使用稀释涂布平板计数法，计算出来的细菌数量与实际相比是偏大还是偏小呢？误差有多大？有没有误差更小的更准确的方法来计数？
细菌的生理生化反应实验报告
细菌的生理生化反应实验报告 【实验目的】 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。 【实验原理】 通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚， 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与 肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发 酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种 微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。 【实验材料和用具】 1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。 2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗 糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂 3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、 杜氏小管。 【实验方法】 （一）V-P反应 1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、 普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。 （二）甲基红实验 于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验 1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变 形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙 醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果 （四）糖发酵试验 1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录 【实验结果与分析】 （一）V-P 大肠产气枯草变形对照 结果—+———