制备冷沉淀方法的比较汇总

制备冷沉淀方法的比较

冷沉淀是一种特殊的成份血液制品,含有第Ⅷ、XIII因子、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、血管性血友病因子,主要用于血友病及凝血因子减少的出血性疾病。冷沉淀是由新鲜冰冻血浆融化、分离,再次提取而制备的。目前国内各大血液中心在制备过程中普遍采用传统的4℃恒温冰箱自然解冻离心法、普通容器水浴人工摇动解冻离心法或比较先进的数控水浴融化虹吸法。我血液中心在以上3种方法的基础之上,经过实践总结出了一套制备方法-数控水浴融化离心法。此方法制备冷沉淀简便、快速,FⅧ回收率高,明显优于其他方法,值得推广应用。

1 制备方法

原料血液采集全雪后6小时内,5000g,4℃,10min,离心分离制品新鲜冰冻血浆,放入-50℃冰箱快速速冻后,置于-20℃以下的冰箱保存。冷冻24h以上新鲜冰冻血浆用于制备冷沉淀[1]。

1.1数控水浴融化离心法运用数字控制水浴式血浆融化箱融化新鲜冰冻血浆,待融化到保留少量冰渣时取出,配平,离心(2℃±2℃5000×g9/620分钟)分离出上层血浆,下层(25±5)ml血浆和白色沉淀物即为冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.2 数控水浴融化虹吸法同样运用数字控制水浴式血浆融化箱融化新鲜冰冻血浆,在融化过程中利用虹吸原理的作用使血浆流到另一转移空袋中,待原袋容量达到25ml±5ml标量时,即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.34℃恒温冰箱自然解冻离心法应用4℃恒温冰箱缓慢融化新鲜冰冻血浆(约需15小时)后,配平,离心(2℃±2℃2000×g 9/6 10分钟)后分离即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.4 普通容器水浴人工摇动解冻离心法采用较传统的容器(如大盆)由工作人员自行控制水温、融化时间、摇动待血浆融化后,配平,离心(2℃±2℃2000×g

9/6 10分钟)后分离即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结[3]。

2 结果

四种方法制备冷沉淀比较将随机抽取的40袋200 ml FFP,随机分成四组,用上述四种方法分别进行检测,见表1

3 讨论

传统的制备方法中4℃恒温冰箱解冻存在所需时间长(15小时),融化不均匀,影响凝血因子的回收。普通容器水浴融化的方法,其水温、时间都是由工作人员控制,没有客观的量化标准,水温控制恒温难度大,摇动不均匀等,会影响到产品最

终质量且存在着一次融化量少,工作效率低。由于上述因素的影响,两种制备方法均有20%由于外观检测不合格被废弃,影响了制备的成功率。

数控水浴融化离心法和数控水浴融化虹吸法运用数字控制水浴式血浆融化箱,其利用恒温解冻,产生循环水流按摩血袋,以加速血浆融化的原理融化原料血浆,使融化过程更加规范化、科学化。在提高了产品质量的同时节约了时间及人力资源,提高了工作效率。这两种制备方法的主要区别在于是否离心,通过以上结果我们可以看到离心法制备的冷沉淀的Ⅷ因子含量远高于虹吸法, 冷沉淀的Ⅷ因子含量差异有显著性可能是虹吸法在新鲜冰冻血浆溶解的过程中,冷沉淀有时不能形成大的凝聚团块,或成絮状,不能聚集吸附在中央未新鲜冰冻血浆融化的冰块上或袋壁上,有部分往往由于虹吸作用而流到另一转移空袋中,降低了FⅧ含量。在制备的时间上,由于数控水浴融化离心法,加入了新鲜冰冻血浆融化到一半多时取出血浆袋,将还未融化的血浆块捏散成碎冰块的步骤,缩短了融化过程,抵消了离心增加的时间,故而与虹吸方法时间相差不大。

4 结论

综上所述,四种方法都能制备出符合GB18469-2001《全血及成分血质量要求》

的冷沉淀。冷沉淀的制备受到采集、分离、制备环境和保存等多个环节的影响,由于FⅧ是不稳定因子,随着时间的延长或制备期间温度的升高,FⅦ的活性降低,极易衰减,半衰期为12h～24h[2,3]。

冷沉淀的质量好坏在临床疗效中取到了至关重要的作用,因此选择好的制备方法也是非常关键的。数控水浴融化离心法制备的冷沉淀FⅧ含量要优于其他方法,其融化速度快,温度控制准确,在不增加原有耗材的基础上,同时大大地提高了产品质量,提高了工作效率,以其纯度高,止血效果好的特点深受临床医生的认可并在各类疾病中得到大量应用,抢救了大批危重患者的生命。

【参考文献】

[1] 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程(血站部分)[M].天津:天津科学技术出版社,1997:44.

[2] 苗翠英,李蓬,孙波,等.新鲜冰冻血浆中FⅦ:C检测结果分析[J].中国输血杂志,2002,15(1):34.

[3] 王军,李平,刘焕亮,等.冷沉淀因子Ⅷ生物半衰期的测定及意义[J].血栓与止血杂志,1977,4:125-126.

常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结

常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结一、物质的分离与提纯方法 1.混合物的物理分离方法易溶物与难溶物分开漏斗、烧杯碰；②沉淀要洗涤； ③定量实验要“无损” 在互不相溶的溶剂里，溶解度的不同，把溶质分离出来分液漏斗 ①先查漏；②对萃取剂的要求；③使漏斗内外通;④上层上口倒出分离互不相溶液体分液漏斗2.混合物的化学分离法

二、物质的检验物质的检验通常有鉴定、鉴别和推断三类，它们的共同点是：依据物质的特殊性质和特征反应，选择适当的试剂和方法，准确观察反应中的明显现象，如颜色的变化、沉淀的生成和溶解、气体的产生和气味、火焰的颜色等，进行判断、推理。 1.常见气体的检验有水。不是只有氢气才产生爆鸣声；可点燃的气体不一定是氢气可使带火星的木条复燃黄绿色，能使湿润的碘化钾淀粉试纸变蓝(O 3.NO 2 也能使湿润的碘化钾淀粉试无色有刺激性气味的气体。在潮湿的空气中形成白雾，能使湿润的蓝色石蓝试纸变红；用蘸有浓氨水的玻璃棒靠近时冒白烟；将气体通入有白色沉淀生成。无色有刺激性气味的气体。能使品红溶液褪色，加热后又显红色。能使酸性高锰酸钾溶液褪色。

2.几种重要阳离子的检验 (l)H+能使紫色石蕊试液或橙色的甲基橙试液变为红色。 (2)Na+、K+用焰色反应来检验时，它们的火焰分别呈黄色、浅紫色(通过钴玻片)。 (3)Ba2+能使稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液产生白色BaSO 4 沉淀，且沉淀不溶于稀硝酸。 (4)Mg2+能与NaOH溶液反应生成白色Mg(OH) 2沉淀，该沉淀能溶于NH 4 Cl溶液。 (5)Al3+能与适量的NaOH溶液反应生成白色Al(OH) 3 絮状沉淀，该沉淀能溶于盐酸或过量的NaOH溶液。 (6)Ag+能与稀盐酸或可溶性盐酸盐反应，生成白色AgCl沉淀，不溶于稀 HNO 3 ，但溶于氨水，生成［Ag(NH 3) 2 ］+。 (7)NH 4 +铵盐(或浓溶液)与NaOH浓溶液反应，并加热，放出使湿润的红色石蓝试纸变蓝的有刺激性气味NH 3 气体。 (8)Fe2+能与少量NaOH溶液反应，先生成白色Fe(OH) 2 沉淀，迅速变成灰绿色，最后变成红褐色Fe(OH) 3 沉淀。或向亚铁盐的溶液里加入KSCN溶液，不显红色，加入少量新制的氯水后，立即显红色。2Fe2++Cl 2 ＝2Fe3++2Cl－ (9)Fe3+能与 KSCN溶液反应，变成血红色 Fe(SCN) 3 溶液，能与 NaOH溶液反应，生成红褐色Fe(OH) 3 沉淀。 (10)Cu2+蓝色水溶液(浓的CuCl 2 溶液显绿色)，能与NaOH溶液反应，生成蓝色的 Cu(OH) 2 沉淀，加热后可转变为黑色的 CuO沉淀。含Cu2+溶液能与Fe、Zn片等反应，在金属片上有红色的铜生成。 3.几种重要的阴离子的检验 (1)OH－能使无色酚酞、紫色石蕊、橙色的甲基橙等指示剂分别变为红色、蓝色、黄色。 (2)Cl－能与硝酸银反应，生成白色的AgCl沉淀，沉淀不溶于稀硝酸，能溶于氨水，生成[Ag(NH 3) 2 ]+。 (3)Br－能与硝酸银反应，生成淡黄色AgBr沉淀，不溶于稀硝酸。 (4)I－能与硝酸银反应，生成黄色AgI沉淀，不溶于稀硝酸；也能与氯水反应，生成I 2 ，使淀粉溶液变蓝。 (5)SO 42－能与含Ba2+溶液反应，生成白色BaSO 4 沉淀，不溶于硝酸。 (6)SO 32－浓溶液能与强酸反应，产生无色有刺激性气味的SO 2 气体，该气体能使品红溶液褪色。能与BaCl 2溶液反应，生成白色BaSO 3 沉淀，该沉淀溶于盐酸，生成无色有刺激性气味的SO 2 气体。

沉淀蛋白质的常用方法

dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes]. 5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.) Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration

冷沉淀

冷沉淀相关运用介绍冷沉淀是通过血液分离技术，从新鲜血浆成分中提取的浓缩凝血因子制剂，主要含有五种成分：凝血因子Ⅷ、凝血因子ⅩⅢ、血管性血友病因子、纤维蛋白原、纤维结合蛋白，其中Ⅷ因子较不稳定，在冷沉淀中Ⅷ因子得到了保存，但这五种浓缩的凝血因子，比新鲜血浆中的浓度高5-10倍。. 以200ml血浆制备冷沉淀为例，可制备成一袋20-30ml 的冷沉淀，其中纤维蛋白原的含量≥150mg（正常新鲜血浆纤维蛋白原的含量为0.75 mg/ml）; Ⅷ因子含量≥80单位（新鲜血浆中Ⅷ因子含量≥0.7单位/ ml）。我们知道：人体凝血系统有两个，一个是外源性凝血系统，一个是内源性凝血系统，正是这两个凝血系统维持着我们人体的凝血和纤溶的平衡。在外伤或出血时能迅速组织止血。但不论是外源性凝血系统还是内源性凝血系统都是在凝血因子的参与下进行的，而凝血过程又是环环相扣，一当某一个环节的凝血因子缺乏或者异常，就会导致凝血和纤溶的异常，进而导致某些疾病的发生，如血友病；DIC。因此，急需补充某种缺乏的凝血因子，冷沉淀不失为一个重要的选择。冷沉淀的适应症： 1.儿童及轻型成年人甲型血友病；

2.手术后出血、严重外伤及ＤＩＣ等病人的替代治疗； 3.先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症患者； 4.血管性血友病。冷沉淀的用法及剂量： 1.甲型血友病，伴轻度出血，按10～15单位/kg体重，维持输用3－14天，具体输注天数根据病情而定，如伴中度或重度出血者最好选用因子Ⅷ浓缩制剂； 2.血管性血友病患者的剂量，按1单位/10kg体重，每日输注一次，维持3－4天； 3.以补充纤维蛋白原为目的，可按11.5单位/10kg体重，可使血中纤维蛋白原维持在0.5-1.0mg/ml。输注冷沉淀注意事项： 1.输注冷沉淀需要向输血科提前预约，才能确定冷沉淀输注时间； 2.冷沉淀在-20℃环境中冰冻保存，输注前通知输血科37℃ 水浴中融化，在4小时内用于患者；未在规定时间内输注即报废； 3.应以患者耐受的速度尽快输注； 4.在补充冷沉淀的同时，不能忽略血小板情况，如血小板异常，还要注意血小板的补充，否则起不到治疗作用。输血科 2013-8-13

沉淀蛋白质的常用方法

沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤） TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent). 2) Vortex and let sit for 30min at 4oC. 3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use gloves!!!). 4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes]. 5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.) Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration 1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use gloves!!!). 2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). 3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of

有机物分离和提纯的常用方法(实用)

有机物分离和提纯的常用方法分离和提纯有机物的一般原则是：根据混合物中各成分的化学性质和物理性质的差异进行化学和物理处理，以达到处理和提纯的目的，其中化学处理往往是为物理处理作准备，最后均要用物理方法进行分离和提纯。方法和操作简述如下： 1. 分液法��常用于两种均不溶于水或一种溶于水，而另一种不溶于水的有机物的分离和提纯。步骤如下：分液前所加试剂必须与其中一种有机物反应生成溶于水的物质或溶解其中一种有机物，使其分层。如分离溴乙烷与乙醇（一种溶于水，另一种不溶于水）：又如分离苯和苯酚： 2. 蒸馏法��适用于均溶于水或均不溶于水的几种液态有机混合物的分离和提纯。步骤为：蒸馏前所加化学试剂必须与其中部分有机物反应生成难挥发的化合物，且本身也难挥发。如分离乙酸和乙醇（均溶于水）：

3. 洗气法��适用于气体混合物的分离提纯。步骤为：例如：此外，蛋白质的提纯和分离，用渗析法；肥皂与甘油的分离，用盐析法。有机物分离和提纯的常用方法 1，洗气 2，萃取分液溴苯（Br2），硝基苯（NO2），苯（苯酚），乙酸乙酯（乙酸） 3， a，制无水酒精：加新制生石灰蒸馏 b，酒精（羧酸）加新制生石灰（或NaOH固体）蒸馏c，乙醚中混有乙醇：加Na，蒸馏 d，液态烃：分馏 4，渗析 a，蛋白质中含有Na2SO4 b，淀粉中KI 5，升华奈（NaCl）鉴别有机物的常用试剂所谓鉴别,就是根据给定的两种或两种以上的被检物质的性质,用物理方法或化学方法,通过必要的化学实验,根据产生的不同现象,把它们一一区别开来.有机物的鉴别主要是利用官能团的特征反应进行鉴别.鉴别有机物常用的试剂及特征反应有以下几种: 1. 水适用于不溶于水,且密度不同的有机物的鉴别.例如:苯与硝基苯. 2. 溴水 (1)与分子结构中含有C=C键或键的有机物发生加成反应而褪色.例如:烯烃,炔烃和二烯烃等. (2)与含有醛基的物质发生氧化还原反应而褪色.例如:醛类,甲酸. (3)与苯酚发生取代反应而褪色,且生成白色沉淀. 3. 酸性溶液 (1)与分子结构中含有C=C键或键的不饱和有机物发生氧化还原反应而褪色.例如:烯烃,炔烃和二烯烃等. (2)苯的同系物的侧链被氧化而褪色.例如:甲苯,二甲苯等. (3)与含有羟基,醛基的物质发生氧化还原反应而使褪色.例如:醇类,醛类,单糖等. 4. 银氨溶液(托伦试剂) 与含有醛基的物质水浴加热发生银镜反应.例如:醛类,甲酸,甲酸酯和葡萄糖等. 5. 新制悬浊液(费林试剂) (1)与较强酸性的有机酸反应,混合液澄清.例如:甲酸,乙酸等. (2)与多元醇生成绛蓝色溶液.如丙三醇. (3)与含有醛基的物质混合加热,产生砖红色沉淀.例如:醛类,甲酸,甲酸酯和葡萄糖等. 6. 金属钠与含有羟基的物质发生置换反应产生无色气体.例如:醇类,酸类等. 7. 溶液与苯酚反应生成紫色溶液. 8. 碘水遇到淀粉生成蓝色溶液. 9. 溶液与酸性较强的羧酸反应产生气体.如:乙酸和苯甲酸等.

冷沉淀制备方法及质量影响因素

冷沉淀制备方法及质量影响因素【关键词】冷沉淀; 制备; 质量冷沉淀是用新鲜冰冻血浆为原料制备的一种成分血，主要用于血友病甲、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症患者，也可用于手术后出血、严重外伤及DIC等[1] 。因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，现将本中心的冷沉淀制备方法及质量因素影响分析汇报如下。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器大容量低温离心机(CrYOFUge6000),日本日立公司生产的速冻冰箱(SanYO ),美国CYTOTHERM公司生产的CT-4T.6C型自动摇摆式恒温水浴溶化箱，日本产SYSMaX(CA-50)凝血因子分析仪，韩国产热合机(SE250)。 1.2 冷沉淀原料浆制备采用费森尤斯卡比(广州)生产的密闭四联袋，采集400ml全血6h内离心分离制成血浆60袋(200±10ml)，将血浆迅速置-80℃速

冻机内，冻结后置-30℃冰箱备用。 1.3 制备冷沉淀取60袋血浆置室温中放置3min，待连接两袋的塑料管变软后分两组(A、B)放入低温水浴箱中(4℃~6℃)，A组30袋用水浴虹吸法制备冷沉淀，B组30袋用快速溶化离心法制备冷沉淀，计时。A组新鲜冰冻血浆融化时固定于恒温摇摆式水浴箱的血袋夹中，垂直浸没于恒温的循环水浴中，水浴箱自动摇摆，血浆溶化，上清液虹吸流入空袋，袋中心剩余(25±5)ml未溶化的血浆及吸附在上面的冷沉淀。B 组新鲜冰冻血浆融化时去掉固定夹，融化过程中人工给力捏碎血浆冰块，血浆溶解到尚存少许冰碴后，用大容量低温离心机离心，温度4℃，相对离心力3200g,离心20min，分离血浆，袋内存留(25±5)ml血浆冷沉淀，将A、B组冷沉淀快速置于速冻冰箱中冻结。A组平均用1.2h，B组平均用2.0h。 1.4 质量检测用血凝仪对不同方法制备的冷沉淀进行凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原的测定,t检验分析。 2 结果用相同的溶化设备，采用不同制备方法制备所得冷沉淀质量

浓缩蛋白方法

1，透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。主要用于更换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特殊的仪器。 2，冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等）。密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。在冷冻状态下让扬品种的液体升华 3，吹干浓缩法将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。此法简单，但速度慢，且温度不能过高，最好不要超过15℃。4，超滤膜浓缩法此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的。 5，凝胶浓缩法选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。 6，浓缩胶浓缩法浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80％～90％。比凝胶应用方便，直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意，浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在浓缩胶表面产生阳离子交换，影响浓缩物质的回收率。 7，丙酮沉淀法：试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 8，免疫沉淀法：通过免疫沉淀法，用蛋白质特异性能够定量能够分离目的蛋白。有三个步骤组成：首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质A和抗体形成复合物，蛋白质A与免疫球蛋白的Fc部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋白A结合Sephrarose树脂，为从细胞提取物中分离出抗原抗体复合物，提供一个固体基质。最后通过洗脱，除去尚未沉淀的杂质。为了除去已破碎的或固定差的细胞，在用于免疫沉淀（作用）之前可以与纤细地金黄色葡萄球菌细胞，如果要用蛋白质ASephrarose树脂,参考厂家说明书。 9，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析），选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济. 10， (低温)有机溶剂沉淀法：强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮等。注意：Mg2+离子，pH值。 11，聚乙二醇（PEG）沉淀法： PEG是一个水溶性非离子多聚体，使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀。

物质分离提纯方法总结

物质分离提纯方法总结导读：分离提纯是指将混合物中的杂质分离出来以此提高其纯度。分离提纯作为一种重要的化学方法，为大家分享了物质分离提纯方法，一起来看看吧！一、结晶和重结晶溶质从溶液中析出的过程（即晶体在溶液中形成的过程）称为结晶。而重结晶是指将晶体溶于溶剂（或熔融）以后，又重新从溶液（或熔体）中结晶的过程，又称再结晶。重结晶主要针对固态晶体物质的分离提纯，效果与溶剂选择大有关系。溶剂最好满足以下任一条件：（1）、对主要化合物是可溶性的，对杂质是微溶或不溶的溶剂。滤去杂质后，将溶液浓缩、冷却结晶，即得较纯的物质。（2）、物质的溶解度在该溶剂中受温度影响较为显著。中学阶段最常见的实例是KNO3和NaCl的混合物。对于该混合物的分离，主要是利用它们在同一种溶剂中的溶解度随温度的变化差别很大。则可在较高温度下将混合物溶液蒸发、浓缩，首先析出的是溶解度升高不大的NaCl晶体，除去NaCl以后的母液再浓缩和冷却后，可得较纯KNO3。另一个实际例子就是选修5第一章提到的苯甲酸的重结晶实验。重结晶往往需要进行多次，才能获得较好的纯化效果。二、蒸馏法蒸馏是利用混合液体或液-固体系中各组分沸点不同，使低沸点

组分蒸发，再冷凝以分离整个组分的操作过程，是蒸发和冷凝两种单元操作的联合。与其它的分离手段，它的优点在于不需使用系统组分以外的其它溶剂,从而保证不会引入新的杂质。蒸馏是分离和提纯液态化合物常用的方法之一，是重要的基本操作。但蒸馏主要针对组分沸点相差大于30℃以上时，才有理想的分离效果。对于组分沸点相差不大的混合体系则采用分馏。而分馏装置由于要使用分馏柱，高中并不常见，故高中实际教学中很少提及。一个变通的思路，是“固定组分蒸馏法”。比如，乙醇-水混合物，单纯用蒸馏分离效果很不理想，可以先加入生石灰与水反应，将水“固定”住，然后蒸馏，可以得到较纯的乙醇。三、萃取法萃取是利用溶质在互不相溶的溶剂里溶解度的不同，用一种溶剂把溶质从另一溶剂所组成的溶液里提取出来的操作方法。萃取分离物质时，必须用分液漏斗。萃取的`关键是找到一个合适的萃取剂，被萃取的物质在两个溶剂中的溶解度差距越大，则萃取的效果就越好。萃取法在化工制药等领域属于常用手段，但高中阶段常见的是利用有机溶剂萃取水溶液中的物质，比如利用CCl4萃取碘水中的碘。萃取完得到的CCl4-I2混合体系，可以采用蒸馏的方法进行分离，从而得到较纯的碘单质。四、升华法某些物质固态时就有较高的蒸气压，因此受热后不经熔化就可直

常用蛋白质沉淀方法有哪些

P13三、5 、常用蛋白质沉淀方法有哪些？列举沉淀应用的实例蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。常用蛋白质沉淀的方法有： (一)盐析(Salting Out) 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。 (二)重金属盐沉淀蛋白质蛋白质可以与重金属离子如汞、铅、铜、银等结合成盐沉淀。重金属沉淀的蛋白质常是变性的，但若在低温条件下，并控制重金属离子浓度，也可用于分离制备不变性的蛋白质。如临床上利用蛋白质能与重金属盐结合的这种性质，抢救误服重金属盐中毒的病人，给病人口服大量蛋白质，然后用催吐剂将结合的重金属盐呕吐出来解毒。 (三)生物碱试剂以及某些酸类沉淀蛋白质蛋白质又可与生物碱试剂(如苦味酸、钨酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、过氯酸、硝酸)结合成不溶性的盐沉淀。如临床血液化学分析时常利用此原理除去血液中的蛋白质，此类沉淀反应也可用于检验尿中蛋白质。 (四)有机溶剂沉淀蛋白质可与水混合的有机溶剂，如酒精、甲醇、丙酮等，对水的亲和力很大，能破坏蛋白质颗粒的水化膜，在等电点时使蛋白质沉淀。在常温下，有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性。例如酒精消毒灭菌就是如此，但若在低温条件下，则变性进行较缓慢，可用于分离制备各种血浆蛋白质。

冷沉淀制备的关键控制环节

综合医学 Zongheyixue　《中国医学创新》第9卷第10期（总第220期）2012年4月①广州血液中心　广东　广州　510095通讯作者：苏红冷沉淀制备的关键控制环节苏红①　谭爱玲①　许少英①　胡文娟①　车胡毓① 【摘要】　目的：控制影响冷沉淀质量的关键环节，提高冷沉淀的质量。方法：筛选从采集到制备间隔时间短、FⅧ损失少的全血制备的血浆留做冷沉淀原料浆。保持良好的冷链系统，尽快低温分离成分血，控制好设备和环境温度，把握好制备的最佳时间等环节。结果：2010年2-5月份冷沉淀质量控制结果显示，有25%不合格，不合格原因均为F Ⅷ因子含量达不到80 IU。通过对上述各个环节的不断改进和控制，2010年6-9月份冷沉淀质量控制抽检全部合格。结论：冷沉淀制备的质量控制涉及到全血的采集、储存和运输、分离以及新鲜冰冻血浆的融化、分离、入库等诸多环节，任何一个环节的失控，都会影响到冷沉淀的最终质量。因此，要求心中有关部门加强沟通、紧密协作。质量控制的关键是减少冷沉淀中的不稳定成分FⅧ 因子的损失，而FⅧ因子的活性随温度的升高破坏很大，所以控制的核心内容是保持血液的冷链系统，最大限度地减少血液/血制品在常温下的时间。要保证各个环节的的严格受控，制备优质的冷沉淀，除了配备必要的设备外，还要提高员工的质量意识和效率意识，提高专业技能，两个方面缺一不可。【关键词】　冷沉淀；　制备；　冷链系统 doi ：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.10.093 冷沉淀是新鲜冰冻血浆在1 ℃~4 ℃条件下不溶解的白色沉淀物，其中主要含有五种成分：纤维蛋白原(Fg)、FⅧ、血管性假血友病因子(vWF)、凝血因子X Ⅲ、纤维结合蛋白(Fn)等多种成分。冷沉淀是存在于血液中的一种功能性成分，具有广泛的生理功能和很高的临床应用价值。近年来，冷沉淀的应用已突破传统的用于甲型血友病、纤维蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治疗，在临床肿瘤手术、多发伤和手术创伤、弥散性血管内凝血(DIC)、深度烧伤、黏膜和皮肤疾病、自发性气胸、糖尿病足等方面得到广泛应用，并且取得了显著的效果。冷沉淀中F Ⅷ 因子极其不稳定，FⅧ的体内生物半衰期变化较大，一般为8~12 h，其活性易丧失[1-2]。新鲜速冻血浆(FFP)融化后，FⅧ因子活性随着时间的延长而有明显的降低，其活性衰减了41.17％[3]。从全血采集到新鲜冰冻血浆的制备再到冷沉淀的制备的很多环节都会影响冷沉淀的最终质量。因此，笔者通过实际工作中证明，在制备冷沉淀过程中注意把握关键环节，才能制备出优质的冷沉淀。 1　资料与方法 1.1　一般资料　冷沉淀原料浆来源：本中心流动采血车采集的四联袋全血，要求在6 h 之内制备并冻结成块的且各项检测合格的新鲜冰冻血浆。 1.2　仪器设备　美国 SORVALL RC-12BP 大容量冷冻离心机，费森尤斯 Compomat G4血液分离机，低温操作台，低温周转冰箱，4 ℃贮血冰箱/恒温水浴箱，塑料卡子，MBF21血浆速冻机、热合机。1.3　方法 1.3.1　制备优质的冷沉淀原料浆　(1)全血(原料)的选择：制备冷沉淀选择采血顺畅、采集到的全血及时将资料录入电脑后即放贮血专用冰箱储存。目前我国自愿无偿献血已取代计划无偿献血，多以街头采血为主，接血司机应按规定及时将血接回中心待检库。(2)保持良好的冷链系统：街头采集的血液应储存在2 ℃~6 ℃冰箱中，血液从采血点到待检库的运输必须装入已降温的血液专用隔热冷藏箱中，不能放入常温容器更不能仅用塑料袋包装。(3)尽快低温分离成分血：血液从全血到分离成红细胞和血浆操作过程，要尽量缩短暴露于室温下的时间，因此尽快并保持低温分离是保证血液质量、减少FⅧ 因子衰减的关键。把握好时间、温度这两个关键环节，能够最大限度减少血浆中F Ⅷ等不稳定成分的损失，得到优质的新鲜冰冻血浆，新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ含量必须≥0.7 IU/ml [2]。 1.3.2　制备优质的冷沉淀　(1)设备的准备：采用冰箱融化法制备时，需提前10~14 h 将原料浆放在4 ℃贮血冰箱内融化，每层摆放200 ml 血浆10袋(室温超过30 ℃进摆放13袋)。每部冰箱放5层，血浆之间不能重叠，使其融化成带小冰碴的糊状半流质。采用恒温摇摆式水浴融化法制备时，原料血浆提前放入预置温度为2 ℃的融化箱中，制备当日解冻期间将离心机温度设定在0 ℃~4 ℃ ，并打开低温操作台及开始预冷血浆速冻机使温度降至-50 ℃。做好设备预设达到适合该成分血温度要求是保证产品质量的一个关键环节。(2)融化冷沉淀原料血浆：将血浆轻放入血浆解冻箱，启动解冻程序，在2 ℃循环水浴中自行融化，随时观察血浆的融化情况，此环节可设定时钟。由于血浆融化需99~120 min，定时钟可提醒工作人员，避免出现融化过度的情况。选择恰当的融化终点很关键，以笔者经验，当多数血浆融化至冰块直径4~5 cm、厚度约l cm 时，终止融化最为恰当。经过配平、离心，待分离时，冰块基本融化剩少量冰渣，冷沉淀达最佳分离状态。如果选择冰渣量很少或基本无冰渣为终点，就会融化过度，待分离时，有的会出现冷沉淀溶解的状况，造成冷沉淀含量降低；如果选择终点提前，冰块过大，会造成冷沉淀容量超标。快速在低温操作台上配平血浆，在已降温的离心机离心。美国 SORVALL RC-12BP 大容量冷冻离心机可设0 ℃~4 ℃、4036 g、8 min。尽快分离热合速冻。(3)质量标准：由200 ml FFP 制备的冷沉淀：FV Ⅲ含量≥80 IU/200 ml，Fg

蛋白纯化的一般原则及方法选择

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的最好方法去纯化蛋白。在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败，因为后者要求规模化，且在每日的应用中要有很好的重复性。本文综述了蛋白质纯化的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化的方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。 1 蛋白纯化的一般原则蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速，颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨常用的离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指蛋白的各成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。 2.各种蛋白纯化方法及优缺点 2.1蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸。在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。硫酸铵是沉淀蛋白质最常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保护蛋白的活性。硫酸铵分馏常用做纯化的第一步，它可以初步粗提蛋白质，去除非蛋白成分。蛋白质在硫酸铵沉淀中较稳定，可以短期在这种状态下保存中间产物，当前蛋白质纯化多采用这种办法进行粗分离翻。在规模化生产上硫酸铵沉淀方法仍存在一些问题，硫酸铵对不锈钢器具的腐蚀性很强。其他的盐如硫酸钠不存在这种问题，但其纯化效果不如硫酸铵。除了盐析外蛋白还可以用多聚物如PEG 和防冻剂沉淀出来，PEG是一种惰性物质，同硫酸铵一样对蛋白有稳定效果，在缓慢搅拌下逐渐提高冷的蛋白溶液中的PEG浓度，蛋白沉淀可通过离心或过滤获得，蛋白可在这种状态下长期保存而不损坏。蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。

常见物质的分离提纯和鉴别方法总结

常见物质的分离提纯和鉴别方法总结文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]

常见物质的分离、提纯和鉴别方法总结一、物质的分离与提纯方法 1.混合物的物理分离方法

2.混合物的化学分离法二、物质的检验物质的检验通常有鉴定、鉴别和推断三类，它们的共同点是：依据物质的特殊性质和特征反应，选择适当的试剂和方法，准确观察反应中的明显现象，如颜色的变化、沉淀的生成和溶解、气体的产生和气味、火焰的颜色等，进行判断、推理。

蛋白质纯化的方法选择

蛋白质纯化的方法选择随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的最好方法去纯化蛋白。在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败，因为后者要求规模化，且在每日的应用中要有很好的重复性。本文综述了蛋白质纯化的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化的方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。 1、蛋白纯化的一般原则蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速，颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨率，常用离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。 2、各种蛋白纯化方法及其优、缺点 2．1 蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸，在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或者特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。硫酸铵是沉淀蛋白最常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保持目的蛋白的活性。硫酸铵分馏常用作试验室蛋白纯化的第一步，它可以初步粗提蛋白质，去除非蛋白成分。蛋白质在硫酸铵沉淀中较稳定，可以短期在这种状态下保存中间产物，当前蛋白质纯化多采用这种办法进行粗分离翻。在规模化生产上硫酸铵沉淀方法仍存在一些问题，硫酸铵对不锈钢器具的腐蚀性很强。其他的盐如硫酸钠不存在这种问题，但其纯化效果不如硫酸铵。除了盐析外蛋白还可以用多聚物如PEG和防冻剂沉淀出来，PEG是一种惰性物质，同硫酸铵一样对蛋白有稳定效果，在缓慢搅拌下逐渐提高冷的蛋白溶液中的PEG浓度，蛋白沉淀可通过离心或过滤获得，蛋白可在这种状态下长期保存而不损坏。蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。 2．2 缓冲液的更换虽然更换缓冲液不能提高蛋白纯度，但它却在蛋白纯化方案中起着极其重要的作用。不同的蛋白纯化方法需要不同pH及不同离子强度的缓冲液。假如你用硫酸铵将蛋白沉淀出来，毫无疑问蛋白是处在高盐环境中，需要想办法脱盐，可用的方法有利用半透膜透析，通过勤换透析液体去除盐分，此法尚可，但需几个小时，通常要过夜，也难以用于大规模纯化中。新型的设备将透析膜夹在两个板中间，板的一侧加缓冲液，另一侧加需脱盐的蛋白溶液，并在蛋白溶液一侧通过泵加压，可以使两侧溶液在数小时内达到平衡，若增加对蛋白溶液的压力，还可迫使水分和盐更多通过透析膜进入透析液达到对蛋白浓缩的目的。也有出售的脱盐柱，柱内的填料是小孔径的颗粒，蛋白分子不能进入孔内，先于高浓度盐离子从柱中流出，从而使二者分离。蛋白纯化的每一步都会造成目的蛋白的丢失，缓冲液平衡的步骤尤甚。蛋白会结合在任何它能接触的表面上，剪切力、起泡沫和离子强度的快速变化很容易让蛋白失活。 2．3 离子交换色谱这是在所有的蛋白纯化与浓缩方法中最有效方法。基于蛋白与离子交换树脂间的相互电荷作用，通过选择不同的缓冲液，同一种蛋白既可以和阴离子交换树脂（能结合带负电荷的分子）结合，也可以和阳离子交换树脂结合。树脂所用的带电基团有四种：二乙基氨基乙基用于弱的阴离子交换树脂；羧甲基用于弱的阳离子交换树脂；季铵用于强阴离子交换树脂；甲基磺酸酯用于强阳离子交换树脂。蛋白质由氨基酸组成，氨基酸在不同的pH环境中所带总电荷不同。大多数蛋白在生理pH（pH6～8）下带负电荷，需用阴离子交换柱纯化，极端的pH下蛋白会变性失活．应尽量避免。由于在某个特定的pH下不同的蛋白所带电荷数不同，与树脂的结合力也不同，随着缓冲液中盐浓度的增加或pH的变化，蛋白按结合力的强弱被依次洗脱。在工业化生产中更多地是改变盐浓度而不是去改变pH值，因为前者更容易控制。在实验室中几乎总是用盐浓度梯度去洗脱离子交换柱，利用泵的辅助可以使流入柱的缓冲液中盐浓度平稳地上升，当离子强度能够中和蛋白的电荷时，蛋白就被从柱上洗脱下来。但在工业生产中盐浓度很难精确控制，所以常用分步洗脱而不足连续升高的盐梯度。与排阻层析相比，离子交换特异性更好，有更多的参数可以调整以获得最优的纯化效果，树脂也比较便宜。值得一提的是，即便是用最精确控制的条件，仅用离子交换单一的方法也得不到纯的蛋白，还需要其他的纯化步骤。

沉淀蛋白题库

1、去除蛋白质的方法有哪些答：(1) 加入与水混溶的有机溶剂； (2).加入中性盐； (3).加入强酸; (4).加入重金属盐; (5).超滤法; (6).酶水解法; (7).加热法. 2、去除蛋白质的意义是什么答：使结合型药物释放出来，以便测定药物的总浓度；得到较“干净”的提取液，减少乳化；消除对测定的干扰；保护仪器，延长使用期限。 3、: 4、沉淀蛋白中加入甲醇或乙腈的目的是什么答：加入水溶性的有机溶剂甲醇或乙腈，可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而是蛋白凝聚，是蛋白质结合的药物释放出来。 5、，有机溶剂沉淀蛋白的原理是什么答：原理是降低水的介电常数，导致具有表明水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。 6、用强酸沉淀蛋白的原理是什么答：酸沉试剂（高氯酸等）原理是，在低于蛋白质等电点的pH条件下，蛋白质阳离子与沉淀剂的阴离子形成难溶性盐而沉淀，蛋白变性而沉淀。 7、常见蛋白沉淀剂的试剂有：甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、高氯酸、四氢呋喃、三氯乙酸。（至少写三种） 8、沉淀蛋白的操作步骤：血浆样品解冻，涡流混匀备用。在EP管中，依次加入内标、血浆样品、沉淀试剂，之后涡流混匀，15000 rpm离心5 min，取上清进样分析。 9、用甲醇、乙腈作为沉淀试剂时，血浆与沉淀剂的比例是多少答：一般用血浆与沉淀剂的比例为乙腈最低1:2（一般1:3以上），甲醇最低1:3（一般1:5以上）。 10、（

11、简述沉淀蛋白的注意事项（答案开放，仅供参考）答：（1）涡流混匀一定要充分，至少30 S 以上；（2）沉淀试剂量一定要足，沉淀要充分。（3）有时需要考虑溶剂效应，对峰型的影响（4）热不稳定的药物，离心时需要冷冻离心。（5）注意操作，防止污染。 12、比较下面沉淀试剂的沉淀效率：甲醇、乙腈、乙醇、高氯酸。答：高氯酸>乙腈>乙醇≥甲醇。表1常见沉淀试剂的蛋白沉淀效率 13、与液液萃取和固相萃取相比，沉淀蛋白的优缺点是什么（答案开放，仅供参考）答：优点：简单、方便、迅速、提取回收率高、成本低、易于操作缺点：杂质多，对特殊的药物基质效应强。沉淀剂 · 上清液pH 值沉淀 mL 血浆中95%以上蛋白时所需沉淀剂体积（mL ）三氯乙酸（10%，W/V ） ~ 高氯酸（6%，W/V ） < 钨酸】焦磷酸（5%,W/V ）硫酸铜、钨酸钠氢氧化锌 $ 硫酸铵（饱和）乙腈丙酮 9-10 乙醇 { 9-10 甲醇