第三章 血液分析仪检验

第三章 血液分析仪检验
第三章 血液分析仪检验

第三章血液分析仪检验

通过本章节学习,你将能回答关于“血液分析仪检验”的下列问题:

1.自动血液分析仪在哪一年代问世?在临床检测中有何强劲优势?

2.现代血液分析仪具有检测哪几类血细胞的功能?

3.简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理?

4.射频电导法可检测细胞的哪些特征?

5.什么是流式细胞术Mie光散射理论?

6.简述流式细胞术检测细胞的主要原理?

7.简述激光散射法系统的基本组成?

8.血液分析仪应用分光光度法何种原理、检测何种物质?

9.血液分析仪应用哪两大类溶血剂检测血红蛋白?各有何特点?

10.血液分析仪检测白细胞应用哪些原理?试列举尽可能多的检测参数?

11.血液分析仪检测红细胞应用哪些原理?试列举尽可能多的检测参数?

12.血液分析仪检测血小板应用哪些原理?试列举尽可能多的检测参数?

13.什么是VCS?检测血细胞各具有何特点?

14.血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板分别用哪些特殊细胞染色法?15.什么是MAPSS?检测血细胞具有何特点?

16.什么是DHSS?检测血细胞具有何特点?

17.血液分析仪检测红细胞计数、血小板计数分别应用哪些原理?

18.血液分析仪有哪几类结果显示形式?

19.简述三分群血液分析仪白细胞、红细胞和血小板直方图的表达特点?

20.哪些因素可影响正常细胞直方图?

21.简述五分类血液分析仪散点图上任意一点的表达特点?

22.红细胞体积血红蛋白九分区散点图有何特点?

23.什么是血液分析仪的报警概念?常见哪些报警方式和内容?

24.标本中哪些因素可引起血液分析仪检测参数报警(分检测参数举例)?

25.国际上有哪些重要文件涉及血液分析仪质量保证、仪器校准和性能评价?

26.血液分析仪质量保证包括哪些环节?

27.血液分析仪仪器校准有哪些要点?

28.血液分析仪性能评价有哪些要点和具体评价项目?

29.血液分析仪白细胞分类计数性能评价对标本来源有何要求?

30.2005年,国际血液学组织发布的血液分析仪显微镜复检规则有几条?

31.用什么原则和指标评价血液分析仪检测参数的临床应用价值?

32.简述红细胞参数RDW、IRF、CHr临床意义?

33.简述血小板参数MPV、IPF临床意义?

34.简述白细胞参数MID、IG、HPC、MPXI临床意义?

自动血液分析仪(automated hematology analyzer,AHA),早年称血细胞计数仪(blood cell counter),已是目前国内外临床检验最常用的筛检仪器之一。传统手工法显微镜血细胞计数或分类方法,不仅速度慢,而且因操作过程的随机误差、实验器材的系统误差和检测方法的固有误差,检测的精密度不高。在应对检查大量临床标本时,显微镜细胞计数法难以满足临床及时诊断疾病的需求。20世纪50年代初,美国W.H.Coulter申请了粒子计数法的技术专利,在世界上研发了第1台电子血细胞计数仪,并应用于临床,开创了血细胞计数的新纪元。从此,随着基础医学和高科技,特别是计算机软件技术的发展,其检测原理逐渐完善,检测技术不断创新,检测参数显著增多。“精度高、速度快、易操作、功能强”是血液分析仪的强劲优势,还可与血涂片制备和染色仪进行组合,由后者完成血液分析仪检测后的形态学复检。现代血液分析仪的功能还扩展到检测体液红细胞、白细胞计数和分类。当前,应用多项检测原理的血液分析仪问世,为临床不同层次需求提供了有效的血细胞检测参数,对疾病诊断与治疗有着重要的临床意义。

现代血液分析仪的功能有:①全血细胞计数功能(红细胞、白细胞和血小板计数及其相关的计算参数)。

②白细胞分类功能(3分群或5分类白细胞百分率和绝对值)。③血细胞计数和分类功能的扩展功能,包括:有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检测;未成熟粒细胞、幼稚粒细胞、造血干细胞计数;未成熟血小板比率;淋巴细胞亚型计数;细胞免疫表型检测等。

第一节检测原理

现代血液分析仪主要综合应用了电学和光学2大原理,用以测定血液有形成分(细胞)和无形成分(血红蛋白)。电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法;光学检测原理包括激光散射法和分光光度法。激光散射法检测的对象有2类:染色的和非染色的细胞核、颗粒等成分。

一、电阻抗法

(一)血细胞计数原理

悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液为非导电颗粒,其电阻比电解质溶液大。利用两者导电性能的差异,当体积大小不同的血细胞(或类似颗粒)通过计数小孔时,可引起小孔内、外电流或电压的变化,形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压,从而间接区分出血细胞群,并分别进行计数,这就是电阻抗原理(principle of electrical impedance),即库尔特原理(Coulter principle)(图3-1)。

图3-1 电阻抗细胞计数原理

电阻抗法可准确测量出细胞(或类似颗粒)的大小,是三分群血液分析仪的主要应用原理。电阻抗法还与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。

(二)三分群血液分析仪基本组成

三分群血液分析仪基本组成见表3-1。

表3-1 三分群血液分析仪基本组成

组成功能

信号发生器各种微粒(血细胞、细胞碎片、杂质等颗粒)通过检测小孔产生电阻抗脉冲信号的检测源

放大器将血细胞微弱脉冲信号放大以触发电路系统

阈值调节器调节能区分不同群细胞合适的信号电平

甄别器去除非参考电平的各种假信号以提高计数的准确性

整形器将不一致的脉冲波形信号调整为标准的波形后触发计数电路系统

计数系统将整形后的血细胞脉冲信号显示为不同类群的细胞数

二、射频电导法

射频(radio frequency,RF)指射频电流,是每秒变化大于10 000次的高频交流电磁波。电导性(electrical conductivity)即电的传送性能。高频电流能通过细胞壁。用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层可测定细胞的导电性,提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质(如比例)、颗粒成分(如大小和密度)等特征性信息(图3-2)。电导性特别有助于鉴别体积虽相同、但内部结构性质不同的细胞(或相似体积的颗粒);如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞两者直径虽均为9~12μm,但在高频电流检测时,因两类细胞不同核质比例而出现不同的检测信号。射频电导法结合其他检测原理一起应用于血液分析仪中。

图3-2射频电流检测原理

三、激光散射法

(一)基本检测原理

激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测原理。

1.流式细胞术光散射理论目前,细胞分析应用Mie同质性球体光散射理论(Mie theory of light scatter for homogenenous spheres)。即:当光散射符合“2λ/π<D<10λ/π”(λ,入射光波长;D,球形物体直径)时,则测定光照射在颗粒上所形成的光散射强度的公式是:

S=F(λ,α,τ,φ,β)

其中,S:散射光强度;λ:使用波长;α:折射率;τ:容积;φ:检测角度;β:形状因子。

2.流式细胞术检测原理将经试剂稀释、染色、球形化的细胞(或其他颗粒)悬液注入鞘液流中央,单个细胞随悬液和鞘液流两股液流整齐排列,以恒定流速定向通过石英毛细管(图3-3)。当细胞(或其他颗粒)通过激光束被照射时,细胞(或其他颗粒)因本身的各种特性(如体积大小、染色程度、细胞成分浓度或细胞核密度等),可阻挡或改变激光束的方向,产生与细胞(或其他颗粒)特征相应的各种角度的散射光。置放在石英毛细管周围不同角度的信号检测器(光电倍增管)接受到特征各异的散射光。来自低角度散射光(或称前向散射光)的信息,反映细胞(或其他颗粒)的数量和表面体积大小;来自高角度散射光(或称侧向散射光)的信息,反映细胞(或其他颗粒)的内部颗粒、细胞核等复杂性。如细胞(或其他颗粒)用荧光染料染色,则染色后的细胞(或其他颗粒)被激光照射时,可产生不同波长的荧光散射,可用检测器接受散射荧光(图3-4)。将来自各种散射光的信息进行综合分析,即可准确区分正常类型的细胞(或其他颗粒)。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时,比电阻抗法血细胞分群更准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。

图3-3鞘流技术

(二)激光散射法系统基本组成

激光散射法系统基本组成见表3-2,图3-4。

表3-2 激光散射法系统基本组成

名称组成及评价

光源气体(氦-氖、氩气等)激光或固体(半导体)激光(单色光);钨光源(多色光)

鞘流维持颗粒于液流中央,顺序、单个、恒速向前流动,即流体动力学聚焦(hydrodynamic focusing)

细胞悬液被检测细胞(颗粒)的悬液,由气压导入流动池

光检测器接受来自各种角度的散射光或吸收光信号,并转换成相应特征的电信号

图3-4流式细胞术检测通道和光路系统

四、分光光度法

分光光度法检测原理遵循Lambert-Beer比色定律,即A= lg(I0/I)。其中,A是吸光度(absorbance),

或称光密度(optical density,D);I

是单色入射光强度,I为透过光强度。被检物质吸收的单色光量与有色溶液(或悬液)的性质、厚度和浓度有关。当液体性质和厚度固定后,则吸光度与液体物质浓度成正比。

分光光度法仪器的主要组成:单色光源、检测池和比色容器、光检测器。

三分群或五分类血液分析仪均用分光光度法原理测定血红蛋白:含有溶血剂的稀释液使红细胞溶解并释放出血红蛋白,血红蛋白与溶血剂中某些成分结合,形成一种稳定的血红蛋白衍生物,在特定的光波范围(530~550nm)下进行比色;吸光度的变化与血液血红蛋白浓度成正比。

目前,用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类。一类是含氰化物的溶血剂,所形成氰化血红蛋白(HiCN),最大吸收峰在540nm,显色稳定。另一类是不含氰化物的溶血剂,如月桂酰硫酸钠血红蛋白(sodium lauryl sulfate,SLS)法,当用HiCN法校准后,其检测的优点是既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性,又可避免HiCN法试剂对操作人员的潜在危害和对环境的污染。

五、血液分析仪检测参数原理

(一)血液分析仪检测参数原理

不同类型血液分析仪检验参数的原理不尽相同。高档仪器应用2种或2种以上检测原理,组合电学、光学、细胞化学等技术,在独特检测通道测定红细胞、血小板和白细胞系列的数量、亚类及相关参数(表3-3、表3-4)。

表3-3 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术-白细胞系列

检测参数英文全称缩写单

检测原理和技术

白细胞计数white blood cell

count/concentration WBC×

109

/L

光散射(或加荧光染色)(五分类);

电阻抗法(三分群,五分类)

中性粒细胞neutrophil count/absolute NEUT#×光散射(或加荧光染色,或加细胞化

计数concentration109

/L 学法)、射频法、鞘流电阻抗法、光吸收法(五分类);电阻抗法(三分群)

淋巴细胞计数lymphocyte count/absolute concentration

LYMPH

#

×

109

/L

单核细胞计数monocyte count/absolute

concentration

MONO#×

109

/L

光散射(或加荧光染色,或加细胞化

学法)、射频法、鞘流电阻抗法(五

分类)、光吸收法(五分类)

嗜酸性细胞计数eosinophil count/absolute concentration

EO#×

109

/L

嗜碱性细胞计数basophil count/absolute concentration

BASO#×

109

/L

中间细胞群计数middle cell count MID#×

109

/L

电阻抗法(三分群)

中间细胞群

百分率

middle cell percent MID%来自计算(三分群)

粒细胞群计数granulocyte count GRAN#×

109

/L

电阻抗法(三分群)

粒细胞群百

分率

granulocytepercent GRAN%%来自计算(三分群)

淋巴细胞群计数lymphocyte count LYM#×

109

/L

电阻抗法(三分群)

淋巴细胞群

百分率

lymphocyte count LYM%%来自计算(三分群)

淋巴细胞百分率lymphocyte percentage of WBCs LYMPH

%

%来自计算(五分类、三分群)

单核细胞百

分率

monocyte percentage of WBCs MONO%%来自计算(五分类)

嗜酸粒细胞

百分率

eosinophil percentage of WBCs E0%%来自计算(五分类)

嗜碱粒细胞

百分率

basophil percentage of WBCs BAS0%%来自计算(五分类)

未成熟粒细胞计数immature granulocyte absolute

count

IG#,

IMG%

×

109

/L

射频法和电阻抗法、光吸收法(五分

类)

续表3-3 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术-白细胞系列

检测参数英文全称缩

写单

检测原理和技术

未成熟粒细胞百分率immature granulocyte percent IG

%,

IM

G%

%来自计算(五分类)

造血祖细胞百分率hematopoietic progenitor cell

percentage

HP

C%

%来自计算(五分类)

造血祖细胞计数hematopoietic progenitor cell

absolute count

HP

C#×1

09/

L

射频法和电阻抗法(五分类)

大型未染色细胞计数large unstained cell count LU

C#

×1

09/

L

光散射法(加细胞化学染色)(五

分类)

大型未染色细胞百分率large unstained cell percentage LU

C%

%来自计算(五分类)

CD3 T细胞计数absolute number of T-cells(CD3+

lymphocytes)

CD

3T

×1

09/

L

光散射(加免疫单克隆抗体荧光染

色)(五分类)

CD4 T细胞计数absolute number of

T-helper/inducer cells(CD3+CD4

+lymphocytes)

CD

4T

×1

09/

L

光散射(加免疫单克隆抗体荧光染

色)(五分类)

CD8 T细胞计数absolute number of

T-suppressor/cytotoxic cells(CD3

+CD8+lymphocytes)

CD

8T

×1

09/

L

光散射(加免疫单克隆抗体荧光染

色)(五分类)

CD3 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are

T-cells(CD3+lymphocytes)

CD

3%

%来自计算(五分类)

CD4 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are

T-helper/inducer cells

(CD3+CD4+lymphocytes)

CD

4%

%来自计算(五分类)

CD8 T细胞百分率percentage of lymphocytes that are

T-suppressor/cytotoxic cells(CD3

+CD8+lymphocytes)

CD

8%

%来自计算(五分类)

CD4/ CD8 T 细胞比率ratio of T-helper/inducer cells to

T-suppressor/cytotoxic cells

(ratio of CD3+CD4+lymphocytes

to CD3+CD8+lymphocytes)

4/

8

-来自计算(五分类)

续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术-红细胞和血小板细胞系列

检测参数英文全称缩

写单

检测原理和技术

红细胞计数red blood cell

concentration RB

C

×

101

2/L

鞘流电阻抗法(五分类),电

阻抗法(三分群)

血红蛋白浓度hemoglobin concentration HG g/氰化活非氰化高铁血红蛋白比

B L色法(三分群,五分类)

血细胞比容hematocrit HC

T

%来自计算(三分群,五分类)

平均红细胞体积mean cell/corpuscular

volume MC

V

fl鞘流电阻抗法(五分类),电

阻抗法(三分群)

平均血红蛋白量mean cell/corpuscular

hemoglobin MC

H

pg来自HGB/RBC计算(三分群,

五分类)

平均血红蛋白浓度mean cell/corpuscular

hemoglobin concentration MC

HC

g/

L

来自HGB/ HCT计算(三分群,

五分类)

有核红细胞计数nucleated red blood cell

absolute concentration NR

BC

#

×

109

/L

光散射(或加核酸荧光染色)

(五分类)

有核红细胞百分率nucleated red blood cell

percentage of NR

BC

%

%来自计算(五分类)

红细胞分布宽度-s值red cell volume

distribution width-S RD

W-

s

fl来自计算(五分类,三分群)

红细胞分布宽度-CV值red cell volume

distribution width-CV RD

W-

CV

%来自计算(五分类,三分群)

球形细胞平均体积mean sphered cell volume MS

CV fl光散射、射频法、鞘流电阻抗法(五分类)

单个红细胞平均血红蛋白量corpuscular hemoglobin

content

CH pg光散射法(五分类)

单个红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin

concentration mean

CH

CM

g/

L

光散射法(五分类)

红细胞血红蛋白量分布宽hemoglobin concentration HD g/来自计算(五分类)

度distribution width W L

全部网织红细胞和成熟红细胞平均体积mean corpuscular volume of

reticulocytes of all gated

red cells

MC

Vg

#

fl光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

全部网织红细胞和成熟红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin

concentration mean of all

gated red cells

CH

CM

g#

g/

L

光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术-红细胞和血小板细胞系列

检测参数英文全称缩

写单

检测原理和技术

全部网织红细胞和成熟红细胞平均血红蛋白量mean hemoglobin content of

reticulocytes of all gated

red cells

CH

g#

pg光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

网织红细胞血红蛋白浓度分布宽度reticulocyte cellular

hemoglobin concentration

distribution width

HD

Wr

g/

L

来自计算(五分类)

网织红细胞平均血红蛋白浓度corpuscular hemoglobin

concentration mean of

reticulocytes

CH

CM

r

g/

L

光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

网织红细胞血红蛋白量reticulocyte hemoglobin

equivalent RE

T-

He

pg来自光散射(加荧光核酸染色)

网织红细胞计数(五分类)

网织红细胞平均血红蛋白量mean hemoglobin content of

reticulocytes

CH

r

pg光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

网织红细胞计数reticulocyte count RE

T#×

109

/L

光散射(加核酸荧光染色)(五

分类)

网织红细胞百分率reticulocyte count

percentage RE

T%

%来自计算(五分类)

未成熟网织红细胞比率immature reticulocyte

fraction IR

F

%来自计算(五分类)

低荧光强度网织红细胞比率low fluorescence ratio LF

R

%来自计算(五分类)

中荧光强度网织红细胞比率middle fluorescence ratio MF

R

%来自计算(五分类)

高荧光强度网织红细胞比率high fluorescence ratio HF

R

%来自计算(五分类)

低吸光度网织红细胞百分率low absorption

reticulocytes percent

%L

RE

T

%来自计算(五分类)

中吸光度网织红细胞百分率medium absorption

reticulocytes percent

%M

RE

T

%来自计算(五分类)

高吸收光网织红细胞百分率high absorption

reticulocytes percent

%H

RE

T

%来自计算(五分类)

低荧光网织红细胞百分率low fluorescence

reticulocytes percent RE

TL

%

%来自计算(五分类)

续表3-4 血液分析仪临床常用检验参数基本原理和技术—红细胞和血小板细胞系列检测参数英文全称缩写单

检测原理和技术

中荧光网织红细胞百分率medium fluorescence

reticulocytes percent

RETM%%来自计算(五分类)

高荧光网织红细胞百分率high fluorescence

reticulocytes percent

RETH%%来自计算(五分类)高散射光网织红细胞百分high light scatter HLR%%来自计算(五分类)

率retic percent

高散射光网织红细胞计数high light scatter

retic count HLR#×

109

/L

光散射、射频法、鞘流电阻抗

法(加非荧光核酸染色)(五

分类)

(网织红细胞)平均荧光指数mean fluorescence

index

MFI%光散射法(加核酸荧光染色)

(五分类)

网织红细胞平均体积mean reticulocyte

volume MRV,

MCVr

fl光散射、射频法、鞘流电阻抗

法(加非荧光核酸染色)(五

分类)

血小板计数Platelet

concentration PLT×

109

/L

光散射(或加荧光染色,或加

单克隆抗体)(五分类);鞘

流电阻抗法(五分类);电阻

抗法(五分群)

未成熟血小板比率immature platelet

fraction IPF%%来自光散射法(加核酸荧光染

色)(五分类)

血小板分布宽度platelet distribution

width PDW CV

%

),

s

fl

来自计算(五分类,三分群)

血小板平均体积mean platelet volume MPV fl鞘流电阻抗法(五分类);电

阻抗法(三分群)

大血小板比率Platelet larger cell

ratio

P-LCR%来自计算(五分类,三分群)血小板比容Plateletcrit PCT%来自计算(五分类,三分群)

(二)白细胞系列参数检测原理

1.体积、电导和光散射(volume,conductivity,light scatter,VCS)法(图3-5) VCS技术,通过一个检测通道,在细胞几近自然状态下,分别应用电阻抗技术检测细胞体积,电导(射频)技术检测细胞大小和内部结构(包括细胞化学成分和核的体积),光散射技术(10°~70°)检测细胞内的颗粒性、核分叶性核细胞表面结构。3种技术相互协调,同时检测。经复杂计算,按散点定位分析出细胞类型、按每一类型细胞数量计算出百分率、按散点密度检测出细胞亚类。

在VCS技术下,不同血细胞群的特征见表3-5。由于各种血细胞的特征不同,从而各种细胞在散点图处于不同的部位而得以区别(图3-6 )。VCS技术从正常细胞的数量、形态和密度可衍生出一整套报警形式,提示存在幼稚细胞等异常,并按细胞系列可作出原始细胞报警,经显微镜检复查后报告临床。VCS技术检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-7。

表3-5 VCS技术下各血细胞群的特征

细胞群特征

V C S

①淋巴细胞群小低弱

②单核细胞群相对①较大相对①低相对①弱

③中性粒细胞群与大淋巴或小单核细胞相似相对①和②较高相对①和②较强

④嗜酸性粒细胞群与③相似与③相似相对③较高

⑤嗜碱性粒细胞群与①相似相对①淋巴细胞较高相对①较强

图3-5 体积、电导和光散射法

图3-6 VCS细胞检测立体散点图

A:旋转的3维散点图(图中有红细胞和白细胞分类图),可从任何角度观察。

B:3维散点图上的细胞群落可显示和隐藏(图中已隐藏淋巴细胞和中性粒细胞)

图3-7 VCS异常细胞检测平面散点图位置

2.流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法检测通道:①4DIFF通道:利用激光流式细胞术、

核酸荧光染色技术,采用专一溶血剂溶解红细胞和血小板,而白细胞膜仅部分溶解出现小开口,核酸荧光染料聚次甲基(polymethine)进入受损的白细胞内,与DNA、RNA和细胞器结合,使之着色。染色后白细胞色深(未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色更深,成熟白细胞荧光染色浅),红细胞不染色,血小板稍染色。因荧光强度与细胞所含核酸量成比例,从而得到4DIFF白细胞散点图(图3-8),包括中性粒细胞和嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞(百分率和细胞计数绝对值)和未成熟粒细胞(百分率和细胞计数绝对值)。②WBC/BASO通道(图3-9):在碱性溶血剂作用下,除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩,随后用流式细胞术计数嗜碱性粒细胞,从而得到WBC/嗜碱性粒细胞百分率和细胞计数绝对值及WBC/BASO散点图。③未成熟粒细胞信息(immature myeloid information,IMI)通道(图3-10):用射频、电阻抗和细胞化学染色法。在细胞悬液中加硫化氨基酸,幼稚细胞与硫化氨基酸结合的量多于较成熟的细胞、且对溶血剂有抵抗作用。因此,当加入溶血剂时,成熟细胞被溶解,只留下幼稚细胞(含未成熟粒细胞、原始细胞、造血祖细胞)得以计数。IMI通道可定量分析不同类型幼稚细胞,包括造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)、成熟粒细胞、原始细胞、异型/异常淋巴细胞、核左移和有核红细胞,得到HPC百分率和绝对值计数。

图3-8 白细胞分类-4DIFF散点图

图3-9白细胞分类-白细胞/嗜碱性粒细胞散点图

图3-10未成熟粒细胞信息通道散点图

3.钨光源、激光散射法①过氧化物酶(peroxidase,Perox)染色通道(图3-11):用钨光源散射法、表面活性剂溶解红细胞、过氧化物酶染色。过氧化物酶活性强度:嗜酸性粒细胞大于中性粒细胞,后者大于单核细胞;淋巴细胞和嗜碱性粒细胞则无过氧化物酶活性。测定过氧化物酶平均指数(mean peroxidase index,MPXI),得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞或单核细胞相对过氧化物酶活性,得到过氧化物酶分布强度的散点图,作白细胞计数。②嗜碱性粒细胞/核分叶性(baso/lobularity)通道(图3-12):固体激光通道,用含苯二酸(phthalic acid)和强酸性表面活性剂稀释液溶解红细胞和血小板,除嗜碱性粒细胞外,其他所有白细胞膜均被破坏,胞质溢出,仅剩裸核,作白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度散射,位于散点图上部;裸核则位于下部。因不同细胞的裸核结构不同(如淋巴细胞、幼稚细胞为圆形,中性粒细胞为分叶核),分叶越多散点越靠坐标横轴右侧;根据多分叶核(polymorphonuclear,PMN)和单个核(mononuclear,MN)的比例,可计算出左移指数(left index,LI)。LI越强,说明左移

程度越明显。结合嗜碱性粒细胞/分叶核通道结果可计算出白细胞总数和分类计数结果。③未染色大细胞(large unstained cell count,LUC)检测:在Perox通道,可检测到大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞,如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。

图3-11 白细胞(N、L、M、E)过氧化物酶染色散点图

图3-12 嗜碱性粒细胞/核分叶性散点图

4.多角度偏振光散射法(multi angle polarized scatter separation,MAPSS)应用固体激光流式细胞荧光技术,多角度检测白细胞和分类。白细胞计数和分类:多散点图分析(multi scatterplot analysis,MSA),用含染DNA染料碘化丙啶(propidium iodide)试剂,可破坏有核红细胞膜和细胞质,只留下细胞核,裸核易于染色。染料对活性白细胞只有极小渗透性或无渗透性,故不出现细胞核染色。鉴别有核红细胞、非活性白细胞和脆性白细胞,计算活性白细胞比率。

MAPSS法可鉴别白细胞亚群、异常细胞类型,白细胞分类不受有核红细胞、血小板凝聚、不溶解红细胞和细胞碎片等干扰物质影响。血标本经鞘液稀释后,白细胞内部结构近似自然状态;血红蛋白从红细胞内溢出,红细胞膜结构仍保持完整,而鞘流水分子则进入红细胞,此时红细胞折光系数与鞘液相当,不干扰白细胞检测。多角度偏振光散射法分4个角度(图3-13)检测:①0°,前向散射光:反映细胞大小,同时检测细胞数量(图3-14)。②7°,侧向散射光:反映细胞内部结构及核染色质的复杂性。③90°,垂直角度散射光(偏振光):反映细胞内部颗粒及分叶状况(图3-15)。④90°D,垂直角度消偏振散射光;“去偏振”是指垂直方向激光光波运动随光散射结果而改变;在光散射过程中,嗜酸性粒细胞颗粒丰富,可去偏振光,与中性粒细胞鉴别(图3-16)。

CD3/4/8免疫T淋巴细胞计数:应用CD3/4和CD3/8单克隆抗体荧光染色标记技术、光散射法检测(图3-17,图3-18)。

图3-13 多角度偏振光散射法(MAPSS)模式图

图3-14 0°前向散射光反映细胞大小,同时检测细胞数量

7°侧向散射光反映细胞内部结构及核染色质复杂性

图3-15 90°垂直角度散射光(偏振光):反映细胞内部颗粒及分叶状况

图3-16 90°D垂直角度消偏振散射光(去偏振光)

90°垂直角度散射光(偏振光)

图3-17CD3/4免疫T淋巴细胞计数散点图

图3-18CD3/4/8免疫T淋巴细胞计数散点图

5.双流体(双鞘流)动力连续系统(double hydrodynamic sequential system,DHSS)用钨光源流式细胞光吸收、化学染色和电阻抗法。①白细胞计数通道:用电阻抗法检测。②嗜碱性粒细胞通道:用专用染液染色,嗜碱性粒细胞具有抗酸性,而其他细胞胞质溢出,成为裸核,用电阻抗法检测,所得结果与白细胞/血红蛋白通道(采用鞘流阻抗法测定白细胞)的白细胞结果进行比较(图3-19)。③白细胞分类通道:双鞘流系统中,用流式细胞光吸收、电阻抗和细胞化学染色液对细胞脂质和蛋白组分染色检测除各类嗜碱性粒细胞以外的白细胞(图3-20);在幼稚红细胞通道,荧光染色,进行白细胞分类。

图3-19嗜碱性粒细胞计数直方图

图3-20 白细胞分类计数散点图

DHSS技术:在流式通道中有2个鞘流装置,细胞经第1束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积,然后经第2束鞘流后到达光窗,测定细胞的光吸收,分析细胞内部结构(图3-21)。染色剂中含有溶血素及氯唑黑E(chlorazol black E)活体染料,溶解红细胞,对单核细胞初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞特异颗粒进行染色,同时对细胞膜、核膜、颗粒膜染色,得到中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞和巨大未成熟细胞(large immature cell,LIC)散点图结果。双矩阵LIC散点图可将幼稚细胞分为3个亚群(图3-22):①未成熟粒细胞(immature granulocyte,IMG):包括异常中性粒细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞、原始粒细胞。②未成熟单核细胞(immature monocyte,IMM):包括早幼单核细胞、原始单核细胞。③未成熟淋巴细胞(immature lymphocyte,IML):包括早幼淋巴细胞、原始淋巴细胞等。

图3-21 双鞘流图

图3-22 双矩阵巨大未成熟细胞(LIC)散点图

(IMG未成熟粒细胞、IMM未成熟单核细胞、IML未成熟淋巴细胞)(三)成熟红细胞系列参数检测原理

1.电阻抗法依据红细胞大小和数量进行红细胞计数(图3-23)。

图3-23 正常红细胞直方图

2.流式细胞术、鞘流电阻抗法红细胞/血小板计数通道:当红细胞计数和血小板计数结果异常时,可提示转换至RET/PLT-O光学检测通道,用光学法测定血小板(PLT-O)。得到与红细胞计数和血小板计数相关的众多参数(图3-24)。

图3-24 光学法检测网织红细胞、成熟红细胞和血小板散点图

3.流式细胞术激光散射法

(1)红细胞/血小板检测通道:用稀释液十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)使红细胞/血小板成为球形并经戊二醛固定,红细胞被激光照射后,所得信号相同,且不影响MCV的测定。用低角度光散射测量红细胞体积与总数,高角度光散射检测单个血红蛋白浓度,可准确测定MCV、MCH、MCHC值,得到红细胞散点图;同时可测定单个红细胞体积及红细胞内血红蛋白含量,得到相应直方图及RDW、HDW等参数。

(2)红细胞散点图:是红细胞体积与血红蛋白浓度二维散点图,反映光散射与细胞体积和血红蛋白浓度之间的相互关系,能准确区分小红细胞等异常。在正常红细胞体积/血红蛋白浓度(volume/hemoglobin concentration,V/HC)散点图中多数红细胞位于散点图中央,原始散点图为非线性(图3-25),如用视觉评价则有困难。在线性V/HC的散点图中,X轴表示红细胞中血红蛋白浓度(参考值280~410g/L),低于280g/L 为低色素红细胞,高于410g/L为高色素红细胞;Y轴表示红细胞体积(参考值60~120fl),小于60fl为小红细胞,大于120fl为大红细胞。报告参数有RBC、MCV、RDW、单个红细胞平均血红蛋白浓度(cell hemoglobin concentration mean,CHCM)、血红蛋白分布宽度(hemoglobin distribution width,HDW)、CH、HCT、MCH、MCHC(CHCM是RBC/HC直方图的平均值,HDW是RBC/HC直方图的平均值的标准差)。

线性散点图分为9个区(图3-26),有助于贫血的分类和诊断,欧洲已将其列入贫血和血透患者诊治指南。如小红细胞低色素,用小细胞/低色素(microcytic cell,M)/(hypochromic cell,H)比值表示,有助于区别β珠蛋白生成障碍性贫血和缺铁性贫血;小红细胞高色素可筛检球形红细胞性贫血。

图3-25 红细胞体积血红蛋白浓度原始散点图

图3-26线性化红细胞体积/ 血红蛋白浓度(V/HC)散点图

4.电阻抗法和光散射法用聚焦阻抗法(首次计数)和激光法(二次计数)分别测定红细胞数。在光散射法计数血小板时,用2个角度(90°、7°)检测红细胞(图3-27),作为校准电阻抗法红细胞计数之用。

图3-27光散射法血小板计数和红细胞计数散点图

(四)血小板系列参数检测原理

1.电阻抗法依据血小板大小和数量进行血小板计数。在电阻抗法血小板计数时,有的还采用3次计数、扫流和拟合曲线等技术提高计数准确性(图3-28)。

图3-28 电阻抗法正常血小板计数和拟合曲线直方图

2.流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法红细胞/血小板计数通道:用鞘流电阻抗法测定血小板计数(PLT-I)结果异常时,仪器转换至光学法核酸荧光染色网织红细胞/血小板检测通道,用光学法测定血小板(PLT-O)。核酸(DNA/RNA)荧光染色时,未成熟网织血小板染色多,成熟血小板染色少,并显示PLT-O 散点图结果(图3-24),可得到未成熟网织血小板比率(immature platelet fraction,IPF)、光学法血小板计数(PLT-O)、电阻抗法血小板计数(PLT-I)、血小板比容(plateletcrit,PCT)、血小板分布宽度(platelet distribution width,PDW)、血小板平均体积(mean platelet volume,MPV)、大血小板比率(platelet larger cell ratio,P-LCR)。成熟红细胞无DNA/RNA,不被染色,从而得以在体积大小和核酸染色上与血小板鉴别。

3.激光散射法根据Mie同质性球体光散射理论,球形化血小板通过激光照射区时,在高角度(5°~15°)得到血小板折射指数(refactive index,RI),此与血小板密度有关;低角度(2°~3°)得到血小板大小。血小板的体积为1~30fl,RI在1.35~1.40(图3-29,图3-30)。红细胞含高浓度血红蛋白,RI 较高在1.35~1.44。大血小板虽然可能与小红细胞、红细胞碎片、影红细胞(ghost)以及其他细胞碎片体积相似,但因其内容物不同,RI相差较大,在血小板二维散射图上可得以区别。在血小板散点图上,大血小板折射率为1.3~1.40,体积大于20fl;在红细胞散点图上,红细胞折射率(1.35~1.40),体积小于60fl。因此,二维激光散射法可区分血小板和红细胞。

图3-29 血小板体积和折射率光散点图

图3-30 血小板体积和折射率线性光散点图

4.固体激光散射法、电阻抗法和单克隆抗体荧光染色散射法用激光法(初次计数)和聚焦阻抗法(二次计数)分别测定血小板数;在激光散射法,用2个角度(7°和90°)检测血小板(图3-31);用CD61单克隆抗体免疫标记荧光染色光散射法主要用于阻抗法血小板计数的核查,可进一步验证血小板计数的准确性(图3-32,图3-33)。稀释液使血小板成为球形并经戊二醛固定,血小板被激光照射后,所得信号相同,而且不影响PCV的测定。用电阻抗法测定血小板计数。在低浓度血小板时,CD61血小板计数更准确,不受白细胞和红细胞碎片的影响。

图3-31 光散射法血小板计数散点图

图3-32 单克隆抗体CD61荧光散射法血小板计数散点图

图3-33 单克隆抗体CD61血小板检测正常直方图

(五)血红蛋白浓度测定检测原理

用光学比色原理测定血红蛋白浓度,有2类稀释液:

1.改良氰化高铁血红蛋白法测定波长540nm,稀释液含氰化物成分。

2.非氰化高铁血红蛋白法即稀释液不含氰化物配置的成分。如SLS-Hb测定法,测定波长555nm。与手工法HiCN测定的相关性高(r=0.999)。手工法HiCN反应时间长,仅用于仪器的校准。有些血液分析仪测定血红蛋白,可兼用非氰化物试剂(如用二甲基月桂胺氧化物dimethyl laurylamine oxide)和氰化物试剂(如用咪唑imidazole,含氰化物试剂作用,但无毒性)。

(六)网织红细胞系列参数检测原理

用各种染色剂对网织红细胞RNA成分进行染色,增强了网织红细胞计数的精密度和准确性。染色剂有:①非荧光染料:新亚甲蓝(new methylene blue)。②荧光染料:噁嗪(oxazine)、碱性槐黄O(auramine O)、聚次甲基、噻唑橙(thiazole orange)、氧氮杂芑750(oxazine 750)等。

1.非荧光染料染色法用新亚甲蓝对网织红细胞RNA染色,同时用一种试剂使红细胞内血红蛋白溢出后变为“影细胞”,可减少对网织红细胞检测的干扰,采用VCS技术测定网织红细胞(图3-34)。此外,还应用柔变轮廓分析技术,以非线性方式区分网织红细胞群和成熟红细胞群。网织红细胞群分10个成熟度;RNA最多的网织红细胞位于最强的光散射区(3~10区)。散点图可得到网织红细胞参数:RET%、RET#、未

成熟网织红细胞(immature reticulocyte fraction,IRF)、网织平均红细胞体积(mean reticulocyte volume,MRV,MCVr)、平均球形细胞体积(mean sphered cell volume,MSCV)、网织红细胞成熟指数(reticulocyte maturity index,RMI)、高散射光网织红细胞(high Light scatter retic,HLR)、网织红细胞分布宽度(reticulocyte distribution width,RDWr)。

图3-34 VCS原理新亚甲蓝染色网织红细胞测定散点图

2.荧光染料染色法

(1)用聚次甲基染RNA和噁嗪染DNA法:在光学法网织红细胞/血小板计数通道,因白细胞所含DNA 量远大于网织红细胞所含RNA量,白细胞荧光强度远超出网织红细胞的荧光范围,网织红细胞的荧光强度高于成熟红细胞,故可对成熟红细胞、网织红细胞、血小板和白细胞进行区别(图3-24)。半导体激光流式细胞术、散点图可得到RET#/%、高荧光强度网织红细胞比率(high fluorescence ratio,HFR)、中荧光强度网织红细胞比率(middle fluorescence ratio,MFR)、低荧光强度网织红细胞比率(low fluorescence ratio,LFR)、网织红细胞血红蛋白量(reticulocyte hemoglobin equivalent,RET-He)、未成熟网织红细胞比例[IRF=(MFR+HFR)/(MFR+HFR+LFR)]和PLT-O等参数。

(2)用氧氮杂芑750染RNA法:激光散射法可从低角度、高角度散射光检测,得到单个网织红细胞内血红蛋白浓度,可准确得出MCVr、网织红细胞平均血红蛋白浓度(corpuscular hemoglobin concentration mean of reticulocytes,CHCMr)、网织红细胞平均血红蛋白含量(mean hemoglobin content of reticulocytes,CHr)、RDWr、网织红细胞血红蛋白浓度分布宽度(reticulocyte cellular hemoglobin concentration distribution width,HDWr)等参数、散点图(图3-35,图3-36)和直方图(图3-37,图3-38)。根据网织红细胞荧光强弱,可分成低吸光度网织红细胞(low absorption reticulocytes percent,L Retic)、中吸光度网织红细胞(medium absorption reticulocytes percent,M Retic)和高吸光度网织红细胞(high absorption reticulocytes percent,H Retic)三部分。散点图可得到RET#、RET%、MCVr 等参数。

图3-35氧氮杂芑750荧光染色网织红细胞测定散点图

图3-36 氧氮杂芑750荧光染色网织红细胞测定线性散点图

图3-37氧氮杂芑750荧光染色网织红细胞血红蛋白含量直方图

XN-L血细胞分析仪招标参数

XN-L系列血液分析仪招标参数 1、*检测速度:CBC+DIFF≥70/小时,:CBC+DIFF+RET≥30/小时 2、检测参数:血液报告参数≥35个,体液报告参数≥6个 3、*用血量:全血进样量≤25ul;预稀释模式用血量≤20ul,进样量≤70ul; 4、白细胞计数:应采用先进的激光流式原理及核酸荧光染色技术,使白细胞计数免受难溶红细胞、巨大血小板、血小板簇及细胞碎片等的干扰 5、低值白细胞检测:当遇到低值白细胞样本时,仪器可自动或人工选择转换到低值白细胞检测模式,使白细胞检测颗粒数比普通检测模式增加2倍,结果更准确、可靠。 6、*血小板计数:具有两种方法进行血小板的定量计数 7、网织红细胞检测功能:使用核酸荧光染色及流式细胞技术,具有全自动网织红细胞定量计数和对网织红细胞成熟度的分类。 8、网织红细胞血红蛋白功能:具有定量报告检测网织红细胞血红蛋白含量的功能,为报告参数。 9、体液检测速度:≥30样本/小时; 10、可以对脑脊液、胸水、腹水、关节腔积液等体液进行红细胞和白细胞计数,并对白细胞进行分类; 11、体液检测中具有通过高荧光体液细胞参数对肿瘤细胞进行提示功能; 12、线性范围:全血检测要满足WBC:0-440×10^9/L;RBC:0-8.6×10^12/L;PLT:0-5000×10^9/L 13、*血液质控品:定期提供原厂配套的高、中、低三个水平的质控品,并通过FDA及CFDA注册。质控项目覆盖所有报告参数; 14、*体液质控品:定期提供原厂配套的高、低两个水平的质控品,并通过FDA及CFDA注册。质控项目覆盖所有报告参数; 15、*校准品:定期提供原厂配套的、在中国CFDA注册的校准品。校准品可校准项目包含RBC、WBC、HGB、PLT、HCT、MCV、RET。 16、实时网络通讯系统:具有实时在线网络质控功能,通过室内质控实现实时的室间质评,确保用户的结果质量达到国际质量水准。 17、正确度(静脉血):白细胞:≤3.0%;红细胞:≤2.0 %;血红蛋白:≤2.0%;血小板:≤5.0 %。 18、具有自动复检功能,并能自动追加自动检测项目;(限XN550) 19、流程控制:附带流程控制软件Labman,含三大功能:复检规则设定、数据统计功能(假阴性、假阳性,复检率等)、复检信息管理功能。

三分类血液细胞分析仪与五分类区别

三分类血液细胞分析仪与 五分类区别 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012

三分类血液细胞分析仪与五分类区别 血液细胞分析仪又名血细胞分析仪,目前市场上的血细胞分析仪主要分为全自动的和半自动的仪器。随着该仪器成为医院临床检验的必备仪器以及近几年来计算机技术的不断发展,产品也从三分群转向五分群,从二维空间转向三维空间,对于三分类血液细胞分析仪与五分类仪器有何区别呢? 1、仪器检测原理的区别 三分类的仪器大都采用电阻抗检测技术,由信号发生器、放大器、甄别器、阀值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成;五分类的产品大都采用光散射检测技术,主要由激光源(多采用氩离子激光器,以提供单色光)、检测区(主要由鞘流形式的装置构成,以保证细胞混悬液在检测液流中形成单个排列的细胞流)、检测器(散射光检测器系光电二极管,用以收集激光照射细胞后产生的散射光信号;荧光检测器系光电倍增管,用以接受激光照射荧光染色后细胞产生的荧光信号)。 2、白细胞分类方法的区别 三分类产品是将白细胞分为淋巴细胞,单核细胞,粒细胞;五分类的仪器则是将白细胞分为淋巴细胞、单核细胞、粒细胞(中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞)。 3、适用客户的区别 三分类血液细胞分析仪主要适用于三甲以下的医院、妇幼保健院、诊所以及社区服务中心等,价格相对要便宜很多;而五分类的产品主要用于三甲以上的医院,价格以及试剂方面要贵很多。 随着当前临床检测的需要,各种血液细胞分析仪不断涌现,小编个人认为产品没有好坏之分,主要是选择合适自己的,客户可根据临床检测样本量的多少以及检测标准来选择

BC-5390-CRP血液细胞分析仪标准操作程序

BC-5390 CRP血液细胞分析仪标准操作程序 1 仪器设备检验项目 适用于血液白细胞计数及分类,红细胞计数,血红蛋白,血小板计数,红细胞压积,红细胞体积分布宽度,平均红细胞血红蛋白含量,平均红细胞血红蛋白浓度,平均红细胞体积,血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 适用于血液C-反应蛋白的检测。 2仪器设备试剂 BC-5390 CRP血液细胞分析仪专用试剂:M-53D稀释液;M-5LEO(I) 溶血剂;M-5LEO(II) 溶血剂;M-53LH 溶血剂; M-53P 探头清洁液;LC 溶血剂;C-反应蛋白(CRP)测定试剂盒(乳胶免疫比浊法)。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备环境要求,使用安全措施 3.1 仪器设备环境要求 3.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间,以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间,以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5390 CRP血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5390 CRP血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 3.1.2 运行条件 环境温度要求:-10℃~40℃。 环境相对湿度要求:10%~90%。 电源电压要求:100~240VAC,50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰;仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备;不应放在通风条件差、阳光直射的环境中,或热源及风源前。 3.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品,避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下,禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板,以免损害线路板;禁止触摸BC-5390 CRP血液细胞分析仪外壳里面的电子元件,尤其避免湿手触摸,以免造成电击。 仪器设备使用前,必须认真检查设备之间连接及外接线(件)是否正确、正常,电源插头是否正确插接,设备是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断,应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关,并实施安全保护措施。 仪器设备的运输必须按BC-5390 CRP血液细胞分析仪使用说明书规定进行搬运,禁止鲁莽装卸,应避免倾斜,振动和碰撞。 如果标本、试剂溢出在分析仪上,立即擦掉并依照科室相关规范处理。

血细胞分析仪

深圳大学实验报告 课程名称:体外诊断仪器原理与实践 实验项目名称:血细胞分析仪 学院:医学院 专业:医疗器械工程 指导教师: 报告人:学号:班级: 实验时间: 2014-05-09 实验报告提交时间: 教务部制

方法、步骤: 实验仪器: 三分类血细胞分析仪: 一、简要操作指南及注意事项 1、开机前的准备 检查试剂是否足量,有无浑浊变质,试剂管道有无扭结,并倒空废液瓶2、开机

综上可知: 不同脉冲波的大小表示细胞体积的不同. 不同脉冲波的数量即为细胞的个数 库尔特原理主要由测量杯、小孔管、内外电极等组成。其中 , 小孔管(主要是红宝石孔)下图 是整个测量系统的主要部分 , 它决定了血球分析仪的测量准确度。小孔越小(大概100

μ米那样) , 测量准确度越高 , 但易造成堵孔 ; 小孔越大 ,测量准确度越低 , 但不易堵孔。目前市场上销售的利用电阻抗法设计的血球分析仪的竞争焦点就在于把小孔做得小而不易堵孔 ,为了实现细胞逐个通过可采用鞘流法,根据两侧鞘流的流速不同使细胞一个个的进入孔内从而不造成堵孔和细胞并排进入的误差的问题(如下图): 其排堵方法大致有反冲法和电灼烧法两种 , 或二者兼而有之。测量系统得到的电平信号经放大、阈值调节、甄别、整形后进行计数 , 得到 RBC、WBC、PLT 的数量。但三者的计数原理又略有不同。白细胞计数时 , 机内微型计算机按体积大小将白细胞从 30~45fl 分为 256 个通道 , 每个通道为1164fl。根据细胞大小被分别放在不同的通道中得到白细胞体积的直方图 , 根据体积大小可分为不同的细胞群 , 第一群主要是淋巴细胞 , 第二群主要是单核细胞 , 第三群为粒细胞 , 这就是“三分群法”也就是常说的三分类。 红细胞计数原理同白细胞计数原理大致相同。在红细胞计数的同时 , 把各脉冲幅度相加 , 得到红细胞的总体积 , 经计算得到红细胞的平均体积。血红蛋白的测量通常用比色法得到。红细胞的平均体积 (MCV) , 红细胞平均血红蛋白含量 (MCH) , 平均血红蛋白浓度 (MCHC) , 红细胞体积分布宽度(RDW) 都是通过计算得来的。血小板计数时 , 微型计算机按体积分成 64 个通道 , 范围为 2~28fl 之间 , 血小板的平均体积(MPV) 是计算得来的

血细胞分析仪检测原理

?继续教育园地? 血细胞分析仪检测原理 乐家新 周建山 兰亚婷 传统的血细胞检查完全采用手工方法,不仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数结果的准确性和精密度难以保证。1958年,库尔特采用电阻率变化与电子技术相结合的方法,发明了性能比较稳定的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞分析的新纪元。20世纪90年代以来,随着各种高新技术在血细胞分析仪中的应用,使其检测原理不断完善,检测水平不断提高,测量参数不断增加,各种类型的血细胞分析仪已在国内外各医院广泛使用。但从根本上讲,其检测原理大致分为两部分,即电阻抗法与光散射法。 图1 细胞计数电阻抗原理 作者单位:100853北京,解放军总医院临床检验科 一、电阻抗法血细胞分析技术 (一)电阻抗法白细胞计数和分类原理 电阻抗法白细胞计数原理是根据血细胞非传导性的性质,以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行白细胞计数和体积测定。在等渗电解质溶液(稀释液)中,有一个用于细胞计数的小孔管,其内侧充满了稀释液,并有一个内电极,其外侧细胞悬液(稀释液)中有一个外电极,小孔两侧的电极之间有稳定的电流。细胞为相对不良导体,其导电性质比稀释液低,当有一个细胞通过小孔时,于瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲的数量与细胞的数量成正比,脉冲的高度与细胞的体积成正比。脉冲信号经放大、阈值调节、甄别、整形后,送入计数系统进行处理,得出被测细胞的数量。图1显示出血细胞计数仪应用电阻抗原理进行细胞计数及体积分析的方 法及过程。 目前,许多仪器除给出细胞数外,还同时提供可以表示细胞群体分布情况的图形———直方图。可显示出某一特定细胞群的平均细胞体积、细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群,由脉冲累积得到。如图2所示,左图为示波器显示的所分析细胞的脉冲大小,右图为相应的体积分布直方图,横坐标为体积,纵坐标为相对数量。 在进行白细胞分析时,仪器将体积范围从35~450fl 分为256个通道,每个通道约为1164fl ,并将每个白细胞的脉冲根据其体积大小分类并储存在相应的体积通道中。再由计算机拟合成一条平滑曲线,从而得到白细胞体积分布直方图(见图3),其纵坐标表示白细胞的相对数量(REL No 1),横坐标表示白细胞体积(单位:fl )。 电阻抗法得到的白细胞分类值是根据各群细胞在白细胞直方图上所占面积的大小计算得来的(见图4)。白细胞计数池中除加入一定量的稀释液外还加入了溶血剂,此溶血剂一方面使红细胞溶解;另一方面使白细胞浆经胞膜渗出,胞膜紧裹在细胞核或存在的颗粒周围,使白细胞成为“膜包核”。仪器将体积在35~450fl 的这种颗粒认定为白细胞,并根据其体积大小在直方图上从左至右初步确认其相应的三个细胞群。在正常白细胞直方图上,小细胞群是位于左侧又高又陡的峰,分布在35~90fl 范围,以成熟淋巴细胞(L YM )为主要特征细胞;大细胞群是位于右侧较低且分布宽的峰,

血液分析仪概述

血液分析仪(综述)(一) 2016-6-9|编辑: admin|查看: 263|评论: 0|来源: CAIVD 摘要: 第一节概述血液分析仪(Hematology Analyzer),又称血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer),也可称为血细胞计数仪(Blood Cell Counter),主要用于检测血液标本,能对血液中有形成分进行定性、定量分析,并提供相 ... 第一节概述 血液分析仪(Hematology Analyzer),又称血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer),也可称为血细胞计数仪 (Blood Cell Counter),主要用于检测血液标本,能对血液中有形成分进行定性、定量分析,并提供相关信 息的仪器。 一、产品定义、性能及应用特点 自50 年代初库尔特先生发明了粒子计数技术的专利,制造了第一台血液分析仪并应用于临床以来,血液分析 仪的发展已有60年的历史。血液分析仪实质上是指对一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器。最 初的血球计数仪(Cell Counter)仅能计数红细胞(RED)和白细胞(WBC),后来又有了血红蛋白HBG),血小板 (PLT),红细胞压积(HCT),平均红细胞体积(MCV)等几个参数。而发展成为血液分析仪(Hematology Analyzer) 后,又增加了许多分析和计算参数,如红细胞体积分布宽度(RDW),平均血小板体积(MPV),血小板体积分布宽 度(PDW),血小板压积(PCT),大血小板比率,白细胞三分群,白细胞五分类,血红蛋白浓度分布宽度,异常淋巴细 胞提示,幼稚细胞提示等各种参数和功能也不断地添加到一些品牌的仪器上。 为了纪念库尔特先生对血液分析仪的贡献,特将其计数原理命名为库尔特原理(the coulter principle)即电 阻抗原理,该原理现已成为血细胞计数和分析中最经典的原理。库尔特原理的基本含义是:在待测液体中置 一微孔,在微孔的两端各加一定电压的电极,当液体中的颗粒经过微孔时,电极间的电阻就会产生瞬间的变化, 以因而产生电脉冲,对这种电脉冲进行计数就可得到颗粒的数量,脉冲幅度的大小表示颗粒的体积的大小,经

第三章 血液分析仪检验

第三章血液分析仪检验 一、名词解释 1.DHSS 2.报警 3.报警有效性 4.稀释效应 5.携带污染率 6.可比性 7.准确度 8.Bessman贫血MCV/RDW分类法 [ 9.中间细胞群(MID) 二、选择题 【A1型题】 1.现代血液自动分析仪的英文缩写是 A.AHA B.BCC C.HAA D.CBC E.BAC 】 2.手工法显微镜血液细胞计数不具备的特点是 A.检测速度慢 B.检测精度高 C.有系统误差 D.有固有误差 E.有随机误差 3.美国发明世界上第1台电子血细胞计数仪的时间是20世纪 A.30年代 ; B.40年代 C.50年代 D.60年代 E. 80年代 4.射频是高频交流电磁波,每秒变化的频率大于 A.100 000次 B.10 000次 C.1 000次 D.100次 、 E.10次 5.血液分析仪用分光光度法主要检测的血液参数是 A.HGB B.HPC C.HCT D.HDW E. HFR 6.在血液分析仪WBC/BASO通道,未被试剂溶解或萎缩的细胞是 < A.淋巴细胞 B.单核细胞 C.中性粒细胞 D.嗜酸性粒细胞 E. 嗜碱性粒细胞 7.未成熟粒细胞信息(IMI)通道,与幼稚细胞结合的试剂主要成分是

B.伊红 C.新亚甲蓝 ' D.硫化氨基酸 E.氧合血红蛋白 8.在血液分析仪过氧化物酶(Perox)染色通道使用的光源来自 A.钨灯光源 B.氩气激光源 C.氦氖激光源 D.半导体激光源 E.二氧化碳激光源 ~ 9.在血液分析仪Perox染色通道,细胞过氧化物酶活性强度最大的是 A.单核细胞 B.淋巴细胞 C.中性粒细胞 D.嗜酸性粒细胞 E.嗜碱性粒细胞 10.在血液分析仪Baso/Lobularity通道:经试剂作用后,众多细胞成为裸核,但除外 A.幼稚细胞 B.淋巴细胞 " C.中性粒细胞 D.嗜酸性粒细胞 E.嗜碱性粒细胞 11.血液分析仪MAPSS法进行分类时,在试剂作用后,红细胞不干扰白细胞检测,因红细胞折光系数与A.鞘液相当 B.血清相当 C.染色液相当 D.清洗液相当 E.稀释液相当 > 12.血液分析仪MAPSS法检测时,反映细胞大小和细胞数量的前向散射光,指散射光为 A.0° B.7° C.90° D.90°D E.110° 13.血液分析仪MAPSS法检测时,反映细胞内部结构及核染色质的复杂性的侧向散射光,指散射光为A.0° [ B.7° C.90° D.90°D E.110° 14.血液分析仪MAPSS法检测时,反映细胞内部颗粒及分叶状况的垂直角度散射光,指散射光为A.0° B.7° C.90° D.90°D : E.110° 15.血液分析仪MAPSS法检测时,可去偏振光、与中性粒细胞鉴别的垂直角度消偏振散射光,指散射光为

血细胞分析仪检测指标

血细胞分析仪检测指标 血常规是最常见的一种检验,也是体检时必须做的检测,一般情况下,HF-3800血细胞分析仪的检测项目在23项左右,包括白细胞计数与分类,血红蛋白检测与血小板计数以及与这些相关的参数,可大致分为3类: (1)红细胞系统,包括红细胞数和血红蛋白。正常红细胞数应为4~5×10^12/L,如低于4×10^12/L,或血红蛋白低于110g/L时,则认为有贫血,医生则根据红细胞和血红蛋白的比例关系,来了解各种原因引起的贫血及贫血的程度。 (2)白细胞和白细胞分类。从血球计数即可测出白细胞总数和不同大小的分类白细胞。医生在遇到各种发热患儿,怀疑是感染性疾病时,最简单的检查就是血常规中白细胞计数和分类,一般来讲,白细胞总数升高超过10×10^9/L或多形核白细胞超过50%~60%就认为可能是细菌感染,而白细胞总数低于10×10^9/L及多形核白细胞低于50%就可能是病毒感染,这样就可决定采用抗生素治疗或抗病毒治疗。但年幼、身体衰弱或病情极端严重时,这些结果可能出现特殊情况或异常反应,需要综合判断。 (3)血小板计数,正常值应为100~300×10^9/L。血小板也是一种

血细胞,它与体内凝血和出血有密切关系,如血小板总数低于100×10^9/L,临床上就可出现鼻出血、牙龈出血或全身皮肤紫癜,即临床诊断为血小板减少性紫癜。 以上3类细胞都在骨髓中分化、成熟,然后运行到全身。如果发现这3类细胞都减少,往往意味着骨髓增生障碍或有其他血液恶性疾病如白血病等,此时就需要查骨髓象来帮助明确诊断。 血常规是一项最基础的化验检查,临床医生要根据病情,结合体格检查,并参考血常规检查,进而作出正确的诊断和采取合适的治疗。有时血常规需多次检查,才能予以定论。 山东海力孚企业管理有限公司

血细胞分析仪厂家国内外比较知名的有哪些

血细胞分析仪厂家国内外比较知名的有哪些? 第一:血细胞分析仪著名厂家介绍 在中国,生产血细胞分析仪的著名厂家有美国贝克曼库尔特、日本希森美康、美国雅培、法国ABX、德国拜耳等,国内的血细胞分析仪产品不多,综合能力还算可以的就剩迈瑞及库贝尔了。前年德国拜耳把诊断业务卖给西门子了,这样做血细胞分析仪的就更少了。 1)美国贝克曼库尔特是由贝克曼仪器公司、库尔特公司于1997年合并成立的,说起库尔特公司,我们自然会想起经典库尔特原理,正是由公司创始人Coulter兄弟发明的。这也决定了贝克曼库尔特成为血细胞分析仪之父、行业鼻祖的地位。再到后来,coulter二弟,乔治库尔特在中国深圳创建了孪生品牌库贝尔icubio,所以,业内知情的人士往往买血球都会优先考虑库贝尔。库尔特能了解的就是这么多,再深入一些就不知情了。 2)日本SYSMEX(希森美康)株式会社是一家跨国企业,创建于1968年,原名为日本东亚医用电子株式会社。它做血细胞分析仪的年代也比较早,上个世纪末正式进入中国市场,2000年1、7月,希森美康医用电子(上海)有限公司和希森美康电脑技术(上海)有限公司的先后成立,以及2001年4月北京、上海、广州、成都、西安、沈阳六处办事处的成立,标志着SYSMEX在中国市场营销服务体系的建立和完善,以贴近市场、贴近用户,进一步拓展业务,更好地为中国用户服务。

3)美国雅培公司是一家全球性的多元化医疗保健公司,一直致力于新药与新技术的研发,如今已有120多年历史,68000名员工,于1995年进军中国市场,在中国的员工2000多名,总公司在上海。雅培公司涉及营养、西药、血糖、诊断等领域,其中诊断产品血细胞分析仪一直以研发技术而闻名于世。 4)国内厂家库尔特的孪生品牌库贝尔(乔治库尔特创始人,但现在库贝尔不太会承认),于2010年成立于深圳,是国家高新技术企业,市政府全力扶持的新兴生物企业,产品主要是生化、血球及试剂产品。有一款微型生化分析仪是诺贝尔医学组委会与库贝尔携手联合开发,用户体验度及性价比非常好,是诺贝尔医学实验室特别定制产品。血球的产品,尤其五分类血球甚至比迈瑞还要颇具优势。技术正宗,稳定性非常好。 5)国内著名厂商迈瑞在1991年成立,是中国领先的高科技医疗设备研发制造厂商,产品涵盖生命信息与支持、临床检验、数字超声、放射影像四大领域,血细胞分析仪产品也是国内血细胞分析仪品中的佼佼者,其生产的心电监护及彩超一直广受好评。 第二:著名厂家代表机型列举 自1953年Coulter兄弟俩设计的世界上第一台血细胞分析仪问世到如今,血细胞分析仪的发展日新月异,半个世纪的时间让血细胞分析仪从最简单的计数发展到如今的全自动五分类,检测速度的加快,

血细胞分析仪

血细胞分析仪 血细胞分析仪 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,随着近几年计算机技术的日新月异的发展,血细胞分析的技术也从三分群转向五分群,从二维空间进而转向三维空间,而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非常先进的流式细胞仪相同的技术,如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本文重点就五分群血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述。 检测方法 1.体积、电导、激光散射法(VCS) 这是Beckman-Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法,它集三种物理学检测技术于一体,在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在

标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞,然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用,使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池(Flowcell)中,接受仪器VCS三种技术的检测。 V代表体积(Volume)测量法,是采用经典的库尔特专利技术,用低频电流准确分析细胞体积。体积是区分白细胞亚群的一个重要的参数,它可有效区分体积大小差异显著的淋巴细胞和单核细胞。 C代表高频电导性(Conductivity),采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异,也是该公司的专利技术。细胞膜对高频电流具有传导性,当电流通过细胞时,细胞核的化学组份可使电流的传导性产生变化,其变化量可以反映出细胞内含物的信息。该参数可用来区分体积相近而内部性质不同的细胞群体,如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞,由于它们的细胞核特性不同而在传导性参数上有所区别。 S代表激光散射(Scatter)测量技术,采用氦氖激光源发出的单色激光扫描每个细胞,收集细胞在10°~70°角度内出现的散射光(MALS)信号。该激光束可穿透细胞,探测细胞内核分叶状况和胞浆中的颗粒情况,提供有关细胞颗粒性的信息,可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。例如细胞内颗粒粗的要比颗粒细的散射光更强,因此可以用于区分粒细胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜碱性三种细胞。

五分类血球原理总结

血细胞分析仪五分类检测技术与原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,随着近几年计算机技术的日新月异的发展,血细胞分析的技术也从三分类转向五分类,从二维空间进而转 向三维空间,而且我们也注意到现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了和当今非 常先进的流式细胞仪相同的技术,如散射光检测技术、鞘流技术、激光技术等等。本 文重点就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以阐述 1、电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法 这是Coutler公司1987年推出的新技术,血球悬浮在电解液中,用一定的电流通过传感器的内外两个电极,由于血细胞电阻抗很大,当血细胞通过两个 电极时,电极间阻抗瞬间增大,形成幅度与血细胞体积成正比的电脉冲,根据 脉冲的大小可测出细胞的体积。在测量红细胞时,利用一个脉冲甄别器,将幅 度较小的血小板脉冲去掉,保留红细胞和白细胞脉冲,因血液中白胞的数量不 及红细胞的1/500,故其总数据近似认为是对红细胞计数。在测量白细胞时, 利用溶血素,使红细胞溶解,再对剩下的白细胞计数。在对血小板计数时,调 低脉冲甄别器的阈值,计出总数,再减去红细胞的计数(其中已包括白细胞的 计数),即为血小板计数。由于不同类型但体积相同的细胞产生的脉冲幅度相 同,故仅靠体积是不能完全区分,利用高频电导法和激光散射分析白细胞内部 结构可以弥补这一缺陷。虽然细胞壁不能使低频电流通过,但能通过高频电流,细胞核的大小和密度不同,它们对高频电流的阻抗也不同,因此可以用来区分 白细胞。激光散射技术主要用来检查细胞膜表面特征和内部结构。激光散射对 细胞颗粒的结构和密度的区分能力强,粗颗粒产生的光散射比细颗粒强,借此 可将粒细胞区分开来,美国COULTER公司的STKS、MAXM系列血细胞分 析仪五分类就是利用电阻法、高频电导及激光散射联合检测法 2、光散射和细胞化学染色联合检测法 它利用激光散射和过氧化物酶染色技术进行细胞分类。嗜酸性粒细胞有很强的过氧化氢酶活性,中性粒细胞浆内含有较为丰富的过氧化氢酶,单核细胞 次之,原始细胞则极少,而淋巴细胞和嗜碱性细胞则缺管此酶。使用微量血液 经与含有清洗剂和甲醛的高渗液体进行适当稀释并孵育几十秒钟,此时细胞被 清洗剂所破坏,白细胞浆内酶固定,此后继续再进行第二次反应,加入过氧化 氢和四氢一萘酚加热,此时待测细胞中过氧化氢酶分解过氧化氢产生氧,后者 使四氯一萘酚显色并沉淀定位于含酶的颗粒中,此类细胞经激光束,由于光散 射及细胞大小不同而被分类。显然暑碱性细胞、淋巴细胞、原始细胞由于不含

迈瑞血细胞分析仪

迈瑞血细胞分析仪 Document number:WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT

BC-3000PLUS血细胞分析仪工作原理及故障分析 摘要:本文主要介绍了BC-3000PLUS血细胞分析仪的工作原理和其常见的一些故障分析与处理方法。 前言 目前我国大型医院在血常规检查时多采用五分类血球仪,但其机器及试剂成本过高,在医院大型体检和乡镇医院,三分类的血细胞分析仪任占有不可取代的地位,迈瑞BC-3000PLUS血细胞分析仪以其价格合理,性能稳定,重复性好等优势,成为市场上占有率最高的三分类血球仪。现将其工作原理和使用过程中可能遇到的问题与分享,介绍如下。 工作原理:该仪器采用库尔特.贝克曼原理对血液中的WBC、RBC、PLT进行计数,并对WBC分类,利用朗伯.比尔定律对HGB进行测量。 常见故障:该血球仪常见的故障主要分为机械故障、液路故障、结果异常等 一机械故障 BC-3000PLUS机械运动部分主要有采样针组件,用其实现标本采集、稀释、混匀等功能;注射器及注射器电机组件,用其实现样本和试剂的定量及机器管路的清洗; 1升降/偏转电机故障 BC3000PLUS血细胞分析仪采用德国进口步进电机,()上下各一个,上面的控制升降,下面的控制偏转,在工作时,功率驱动板接受CPU板的控制信号,给电机提供驱动电压,带动采样针的上下左右的动作。在特定的位置,装有光耦,用来确定采样针的位置,上面一个长线的为升降电机光耦,下面两个短线

的为偏转电机光耦。若在规定的时间,光耦没有被触发,或者光耦没在规定时间就被触发,则机器报相对应的电机故障。 故障处理方法:若出现这样的报警,先进入服务菜单进行自检,其步骤如下,“菜单——服务——系统检测——升降/偏转电机检测”,如果结果正常,则故障消除。若故障无法消除,检测1温度是否太低2丝杆脏,阻力大3运动过程中是否有东西阻挡运动部件4上下光耦故障5电机故障6驱动板坏。另外,由于升降电机的运动优先于偏转电机,当升降电机故障时可能会导致机器报“偏转电机故障”的警。 维修案例 现象采样针无法正确偏转到计数池上方机器,机器报“偏转电机故障” 处理过程及故障分析进入维修菜单,做偏转电机自检,正常,但是再做标本,故障依旧。因为可以完成自检过程,而且上下左右的运动都比较流畅,可以排除电机自身故障、阻力过大故障、阻挡、驱动板供电不足故障,而且光耦能传递位置信号。再仔细观察计数过程,发现给偏转定位并控制采样针搅拌的那个小孔(在偏转电机上方的一个两层塑料环上)通过右光耦时机器没能控制偏转电机停下,判定是该光耦的问题,拆下擦拭后机器正常。 2注射器电机故障 BC-3000PLUS一共有三个注射器、两个电机,其中10ml注射器由一个电机推动、另外50ul和的注射器由同一个电机推动。电机工作原理跟升降/偏转电机原理相同,每个电机对应一个光耦。当光耦没有按规定被触发时,机器报相应的电机故障。

血细胞分析仪

血细胞分析仪Hematology Analyzer 操作Operation 设置Properties 数据管理Data Management 关于About 退出Close 血细胞分析仪管理系统Hematology Analyzer Management System 测量Measure 查找Search 质控Control 删除记录Delete Records 欢迎使用血细胞分析仪计算机管理系统Welcome to use Hematology Analyzer Computer Management System 预览质控图形Preview quality control graphics 调协质控参数Cordinate the quality control parameters 清空质控数据Clear Quality Control data 退出Close WBC质控数据WBC Quality Control data 白细胞总数(WBC)Nombre de Leucocytes 红细胞数(RBC)Nombre d’érythrocytes 红细胞平均体积(MCV)V olume Globulaire Moyen 红细胞Erythrocytes WBC 无数据WBC No Data 帮助Help 编辑病员信息Edit patient information 打印报告单Print report 存入质控区Enter the quality control area 增加Increase 姓名:Nom: 性别:Sexe: 年龄:Age: 样本编号:No. Echantillon 序号No. 日期Date 血细胞分析仪——测量Hematology Analyzer —— Measure 姓名Nom 科别Departement 性别Sexe 通用General

电阻抗法血液分析仪检测原理

电阻抗法血液分析仪检测原理 电阻抗 电阻抗法血液分析仪检测原理 2009-8-7 9:52 【大中小】电阻抗法血细胞计数原理又名库尔特原理。 1. 红细胞检测原理:将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器红细胞检测原 理中,将小孔管(也称传感器)插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液,并有一个内电极,小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。当接通电源后,位于小孔管两侧电极产生稳定电流,稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔(直径 <100um,厚度约75um)向小孔管内部流动,使小孔感应区内电阻增高,引起瞬间电压变化形成脉冲信号,脉冲振幅越高,细胞体积越大,脉冲数量越多,细胞数量越多,由此得出血液中血细胞数量和体积值。 三分类血球分析仪工作原理示意图 2. 白细胞分类计数原理根据电阻抗法原理,经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时,脉冲大小不同,将体积为35~450fl 白细胞,分为256 个通道,其中,淋巴细胞为单个核细胞、颗粒少、细胞小,位于35~90fl 的小细胞区,粒细胞(中性粒细胞)的核分多叶、颗粒多、胞体大,位于160fl 以上的大细胞区,单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等,位于90~160fl 的单个核细胞区,又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例,计算出各亚群细胞的百分率,医学教育网整理并同时计算各亚群细胞的绝对值,显示白细胞体积分布直方图。 3.血红蛋白测定原理当稀释血液中加入溶血剂后,红细胞溶解并释放出血红蛋白,血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物,在特定波长(530~550nm)下比色,吸光度变化与稀释液中Hb 含量成正比,最终显示Hb 浓度。不同类型血液分析仪,溶血剂配方不同,所形成血红蛋白衍生物不同,吸收光谱不同,如含氰化钾的溶血剂,与血红蛋白医学教育网整理作用后形成氰化血红蛋白,其最大吸收峰接近540nm。

血细胞分析仪五分类检测技术及原理

血细胞分析仪五分类检测技术及原理 血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,随着科学技术日新月异的发展,血细胞分析的技术也从几年前的三分类转向现在的五分类,从二维空间进而转向三维空间,同时现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了先进的技术,如鞘流技术、激光技术等。下面就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以说明。 1 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法 直流电阻抗法(DC)用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况(细胞核以及颗粒情况),侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量,特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Str-matolyzer-EO可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩,含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中,使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩,含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。幼稚细胞检查通道(IMI)可以根据幼稚细胞膜比成熟细胞膜表面含有脂质较少的现象,在细胞稀释悬液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多,对溶血剂有抵抗作用,当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解,而幼稚细胞不易被破坏,可通过电阻法检测出来。综合各个测量方法,得到白细胞五分类的图形和数据。这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中。 2 电阻抗和射频电导联合检测法 这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞:(1)淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解,而使白细胞保持完整,细胞浆及核形态近似于生理状态,当这些细胞通过检测系统时,对白细胞进行电阻抗法(测量细胞体积)和射频电导法(检测细胞核和颗粒密度)的联合检测,结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。(2)嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统:在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂,除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外,其他细胞均被溶解或萎缩,再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。(3)幼稚细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多,且对溶血剂有抵抗作用,当加入溶血剂时,成熟细胞被溶解,只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。目前日本东亚公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。 3 多角度激光偏振光散射检测法

全自动五分类血液细胞分析仪

全自动五分类血细胞分析仪参数 1. 仪器类型:全自动五分类血细胞计数仪 2. 检测原理:WB(五分类双通道检测,采用半导体激光散射,流式 细胞术,细胞化学染色,实现白细胞的准确五分类。 3. 检测参数:测试参数不少于23 项。 4. DIFF 激光通道:对嗜酸性粒细胞进行特异性染色,使淋巴细胞, 单核细胞,嗜酸性粒细胞和中性粒细胞完全区分开来。 5. WBC/BAS通道:保存完整的嗜碱性粒细胞,实现嗜碱性粒细胞和 WBC、数的精确检测。 6. 利用特异性的细胞差别溶解修饰技术,可有效排除难溶性红细胞, 巨大血小板,血小板聚集等因素对嗜碱细胞等计数结果的影响。 7. 检测速度:》40样本/小时。 8. 激光装置:信号稳定,使用寿命长的半导体激光器。 9. 检测模式:静脉全血模式,微量全血模式,预稀释模式 10. 分析模式:大于等于四种,预稀释末梢血CBC, 预稀释末梢血 CBC+5DIFF 全血CBC 全血CBC+5DIFF 11. 报告图形显示:3个直方图,3个散点图(含研究界面2个散点 图) 12. 异常信息报警功能:具备未成熟细胞和异常淋巴细胞等报警功能。 13. 末梢血分析:静脉全血测定W 15卩L,血液预稀释测定W 20卩L。 15卩L末梢血即可得到准确的白细胞五分类和全血细胞计数,满足门急诊病人、儿童患者、血液病人等特殊患者采血的需要。 14. 预稀释重测功能:具备预稀释重测功能,避免二次采血。 1 5.试剂恒温系统:采用螺旋式恒温技术,完全避免环境温度变化对 检测结果的影响,提供照片或者验机。 16. RBC/PLT!道:采用双向立体后漩流液路结构,完全避免细胞残留, 重叠现象对细胞检测的影响。 17. 抗干扰技术:采用独特的电气隔离技术。 18. HGB佥测采用无氰试剂检测,避免环境污染。

ABX-MICROS-60型全自动血细胞分析仪

ABX-MICROS-60型全自动血细胞分析仪 操作维护规程 1 技术参数 适用于该仪器操作手册所列的细胞计数参数、直方图、血红蛋白检测局限性以外的血液标本分析。

3 操作步骤 (1)检查仪器是否有稀释液、清洗液、溶血素。 (2)打开主机电源及计算机和打印机开关。 (3)按启动循环键(START UP) 等待仪器进行自检。 (4)样品采用EDTA-K2抗凝,并使血样轻轻地摇动,充分混匀。 (5)开启电脑,双击RECEIRE快捷键, 待出现画面后点击最小化。 (6) 再双击ABX快捷键, 出现画面后, 点击ABX血细胞分析报告管理系统, 即可打开操作画面。 (7) 进行样品编号。 (8) 进行样品测定, 把样品轻轻地完全混匀,然后按取样板或分析循环键,当批示灯停止闪烁,LED变为红色时可移动开样品管,这个循环持续80秒,进行数据付运LED变绿,可进行下一个分析循环。 (9)再双击ABX血细胞分析报告系统输入编号,并打印检验报告单。 (10)定期用浓缩清洁液清洗管道,一般一个星期清洗一、二次。 样品要求: 1、一般用静脉血,也可用末梢血。 2、用EDTA-K2R抗凝,轻轻摇动促进血与抗凝剂混合,使抗凝完全。 3、发现抗凝不良的样品应拒收,重采。 4、采好的样品应在6小时内检测。 4 注意事项 (1) 环境要求:ABX-MICROS60血细胞分析仪,应安放在稳固工作台上,保持通风,避免震动,避免阳光直射,避免灰尘,避免无线电波干扰,电源条件应满足117/220/240V AC±10%;50/60HZ。检测室温范围为20—30℃,相对湿度为30—50%,所用试剂必须存放于室温为18—30℃之间。 (2) 仪器不使用时请罩防尘罩。 (3) 注意检查仪器的运行情况,并填写《仪器使用登记表》。 5 仪器维护 (1) 使用注意。该仪器在日常使用中请注意符合“4. 注意事项”要求 (2) 废液瓶满要及时倒掉废液,切勿强行扯动红黄两根管来打开瓶盖,检查废液瓶是否漏气,防止低真空出现。 (3) 当出现堵孔时,按自动冲洗键冲洗管道。 (4) 严格按照仪器的关机程序关机。 6 期间核查 (1)ABX-MICROS60血细胞分析仪的定标不需要特别的周期间隔,本实验室ABX-MICROS60

探讨血液分析仪检验急慢性白血病的临床应用

探讨血液分析仪检验急慢性白血病的临床应用 发表时间:2016-01-11T14:24:23.813Z 来源:《医药前沿》2015年第29期供稿作者:冯丹王衍晶(通讯作者) [导读] 大连医科大学附属第一医院医学技术在不断的发展,人们对疾病诊断的准确性要求越来越高。 冯丹王衍晶(通讯作者) (大连医科大学附属第一医院 116011) 【摘要】目的:研究分析血液分析仪在急慢性白血病检验中的临床应用。方法:此次研究的对象是选取2011年1月初—2013年12月底在我院接受治疗的42例急慢性白血病患者。将42例急慢性白血病患者全部作为观察组,选取的对照组是同期在我院接受健康体检的42例体检者,采用血液分析仪检验两组的血液,分析对比两组的检测数据结果。同时将观察组分成两组,采用常规方法检验21例观察A组,采用血液分析仪检验观察B组。结果:慢性白血病组的C反应蛋白为(185.3±4.2)mg/L,白细胞为(105.2±0.4)×109/L,血红蛋白为(32.4±10.3)g/L。急性白血病组的C反应蛋白为(112.4±4.6)mg/L,白细胞为(90.1±0.8)×109/L,血红蛋白为(34.3±6.2)g/L。对照组的C反应蛋白为(40.6±3.6)mg/L,白细胞为(10.3±1.3)×109/L,血红蛋白为(120.3±22.6)g/L。慢性白血病和急性白血病患者的血红蛋白远远低于健康体检者,而C反应蛋白、白细胞则远远高于对照组。观察A组是漏诊率为9.5%。观察B组漏诊率为28.6%。观察A组的漏诊率显然比对照组低。对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血液分析仪在急慢性白血病检验中具有很高的应用价值,大大提高了诊断准确性,降低了误诊漏诊率,值得推荐。 【关键词】急性白血病;慢性白血病;血液分析仪;检验;应用 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2015)29-0370-02 医学技术在不断的发展,人们对疾病诊断的准确性要求越来越高。白血病的危险性非常高,严重威胁人类的健康。在检测白血病过程中,对于C反映蛋白、血红蛋白、白细胞的检测非常重要。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取2011年1月初~2013年12月底在我院接受治疗的42例急慢性白血病患者作为观察组,女性患者有18例,男性患者有24例,年龄5~70岁,平均年龄大约是(35.1±2.5)岁。其中有34例属于急性白血病,年龄5.8~70岁,平均年龄大约是(35.8±2.7)岁。有8例属于慢性白血病。年龄5~69岁,平均年龄大约是(35.4±2.2)岁。选取的对照组是同期在我院接受健康体检的42例体检者,女性体检者有17例,年龄5.3~67岁,平均年龄大约是(35.2±2.1)岁。男性体检者有25例,年龄5.3~68岁,平均年龄大约是(35.0±2.2)岁。两组研究者的性别构成、年龄结构、身体状况等资料信息无显著性(P>0.05),可比性较强。 1.2 方法 医务人员抽取两组受检者空腹状态下的血液,将2ml的血液放进真空抗凝管内,并将其混匀。采用血液分析仪检测抽取的血液。需要注意的是,采集标本2h内必须完成检测,因为标本放置时间越长,干扰因素越多,检测结果误差较大。分别检测受检者的C反应蛋白、白细胞、血红蛋白,并记录下检测的全部数据,最后进行对比分析。 1.3 统计学方法 运用计算机软件SPSS18.2对两组患者的治疗统计数据进行计算分析,用x-±s表示计量,用t来验证组间数据差异,用χ2表示对比率,经软件计算,两组患者的病情变化数据差异明显P<0.05,数据对比结果存在统计学意义。 2.结果 慢性白血病组的C反应蛋白为(185.3±4.2)mg/L,白细胞为(105.2±0.4)×109/L,血红蛋白为(32.4±10.3)g/L。急性白血病组的C 反应蛋白为(112.4±4.6)mg/L,白细胞为(90.1±0.8)×109/L,血红蛋白为(34.3±6.2)g/L。对照组的C反应蛋白为(40.6±3.6)mg/L,白细胞为(10.3±1.3)×109/L,血红蛋白为(120.3±22.6)g/L。慢性白血病和急性白血病患者的血红蛋白远远低于健康体检者,对比差异有统计学意义(P<0.05)。慢性白血病和急性白血病患者的C反应蛋白、白细胞均高于对照组,对比差异有统计学意义(P<0.05)。21例观察A组患者中,被诊断为局部感染的总共有1例,被诊断为紫癜的总共有1例,漏诊率为9.5%。21例观察B组患者中,被诊断为局部感染的总共有2例,被诊断为紫癜的总共有2例,被真算为障碍性贫血的总共有2例,诊断漏诊率为28.6%。观察A组的漏诊率显然比对照组低。对比差异有统计学意义(P<0.05)。 3.讨论 根据其发病速度的缓急可以将白血病分为慢性白血病和急性白血病。慢性白血病的白细胞分化较高的主要是成熟细胞和幼稚细胞,该病的病程较长,病情发展较缓。急性白血病患者的白细胞通常在旱期阶段停滞分化,以旱幼细胞和原始细胞为主,该病的病程较短,病情发展非常迅速,但是因为急性白血病的病情发展非常快速,及早诊断和早期治疗的意义非常大。急性白血病患者的主要症状为关节疼痛、胃痛、淋巴结肿大、出血、高热,部分患者甚至出现胆囊炎、肾功能衰竭[1]。由于急性白血病患者的症状较为明显,因此极易诊断,然而,大多数急性白血病患者的症状有ENS浸润、局部感染、局部出血等非典型症状,对于这些非典型症状急性白血病患者的诊断难度较大。因而采用血液分析进行检测,对检测结果进行分析,将会提高诊断准确性[2]。 对比传统的检测方式,血液分析仪的特点是快速、准确、重复性好,大大提高了血样检验准确性,为临床治疗提供准确的数据依据,而且利用血液分析仪进行血细胞分析的筛选的优越性较为明显。然而,患者一旦出现大量的异常细胞,就会影响细胞分类结果,血液分析仪难以克服这些干扰,在一定程度上影响了诊断结果。所以,对于出现血细胞技术异常或者报警信号的患者,最好进行复查,在一定程度上控制漏诊和误诊率。 【参考文献】 [1] 高枫.现代全自动血液分析仪检测技术的发展和应用[J].中国医疗器械杂志,2012,4(14):366-367. [2] 彭黎明,李丽娟,彭志勇等.几种血细胞分析仪结果的比对和质控[J].中华检验医学杂志,2013,5(23):555-556.

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