检验标本采集处理

一﹑临床常用检验项目的标本采集和处理

（一）血常规检验标本

一般用EDTA-2K（EDTA-K2-2H2O）1.5～2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管）采血。采血注意事项为：

1. 采血后立即上下颠倒混匀（5-10次，不可用力震荡）；

2. 应按抗凝管刻度准确采血至2ml；

3. 采血后应尽快送检（需显微镜观察形态的标本采血后应及时推片固定，因为超过2h WBC形态会发生改变）。

（二）红细胞沉降率（血沉， ESR）测定标本

静脉采集枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L）抗凝血（枸橼酸钠抗凝管采血）。注意事项：

1.采血后立即上下颠倒混合5-10次；

2.单独采1管血,准确采血至2ml（抗凝剂：全血 = 0.4 ：1.6）；

3.采血后应尽快送检（必须2h内检测）。

（三）凝血检测（ PT、APTT 、 TT 、 FBG 、 DD ）标本

静脉采集抗凝血（最好真空负压系统采血），抗凝剂用枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L,抗凝剂:全血 = 0.2：1.8 ）。采血注意事项：

1.空腹采静脉血（餐后脂血影响检测结果，使因子Ⅶ活化，导致PT延长）；

2.采血时患者应保持平静状态30min以上（剧烈活动可使因子Ⅷ活化，APTT明显缩短）；

3.应单独1管血；

4.必须准确采血至刻度线2.0ml；

5.采血后应立即上下颠倒混匀5-10次，不可有凝块；

6.采血后应尽快送检（必须2h内检测）。

（四）血型与血交叉标本

为EDTA-2K抗凝血。采血注意事项：

1.最好血型与血交叉各采1管血（要求保留血样）；

2.采血量分别为1.0ml和1.0～2.0ml；

3.采血后立即上下颠倒混匀（5～10次）。

（五）尿液常规检查标本

１.尿液常规检查标本应按以下原则进行采集：

（1）新鲜晨尿最佳，门诊病人亦可留随机尿；

（2）尿液采集于干净带盖容器中，不可使用未经洗涤的装药物或试剂的器皿；

（3）避免混有经血、白带、精液和粪便；

（4）尿液标本冰箱可保存6～8h，但细胞等有型成分会有破坏，会有结晶析出；

（5）尿液成分定量检查应留取24h防腐混合尿100～200ml（须记取24h尿液总量）；

（6）根据不同检测目的选择不同的防腐剂：临床最多用的尿液防腐剂为:①甲醛（formalin），用于尿液有形成分检查，浓度为400mg/L尿液即40%；②甲苯（toluene），

常用于尿糖和尿蛋白等化学成分的定性或定量检查，5-20ml/L尿液；③浓盐（hydrochloric ａｃｉｄ），用于定量测定尿１７－羟、１７－酮、肾上腺素、儿茶酚胺和尿钙等，浓度为１ｍｌ/L尿液。

２.尿液常规检查标本采集方法：

（１）晨尿最好（安静状态下留取清晨第一次尿，浓缩，无其他影响）；

（２）随机尿较常用（随时留尿，适用于门诊和急诊病人，结果易受多种因素影响）；

（３）清洁尿（中段尿、导管尿、膀胱穿刺尿，用于病原微生物学培养、坚定和药敏）；

（４）24h尿（用于尿液成分24h定量检查分析，一定要教会病人留取24h尿正确方法）。

（５）３ｈ、１２ｈ等计时尿和餐后尿等特殊实验尿，则应按医嘱要求进行留尿。

（六）粪便常规检查标本

1.一般应为新鲜的自然排出的粪便３～５ｇ，必要时可肛拭子采取；

2. 送检粪便应盛于洁净带盖的塑料盒中送检，要做好标记；

3.要选取粪便的脓、血、黏液等异常成分进行检查，表面无异常时应从粪便表面、深处及粪端多处取材；

4.检查蛲虫卵需用透明塑料薄膜于半夜12pm或早晨排便前，于肛门周围皱襞处拭取标本，并立即送检；

5.检查血吸虫卵时应取黏液、脓、血部分，如须孵化毛蚴应留取不少于30g的粪便，并尽快送检，必要时留取整份粪便送检。

6.检查痢疾阿米巴滋养体时，应床边留取新排出的粪便，从脓血和稀软部分取材，并立即保温送实验室，并且实验室接受标本后应立即进行检查。

7.做便隐血试验时，应嘱病人检查前3d内禁食肉类、含动物血的食物及某些蔬菜，禁服铁剂和维生素C等对实验有干扰作用的药物。

（七）浆膜腔积液检查标本

（1）浆膜腔积液标本一般由医生无菌穿刺采取；

（2）送检标本量：理学检查、化学检查、细胞学检查各留取２ml；细菌学检查用

无菌管采集标本，厌氧菌培养留取１ml，结核菌检查留取１０ml。

（3）标本采集后必须立即送检（否则可出现细胞变性，标本凝集，细菌溶解）；

（4）用于细胞学检查时，可在标本中加适量EDTA盐抗凝，但还须留取１管不加抗凝剂的标本用于观察积液的凝固性；化学检查标本宜用肝素抗凝。

（八）临床化学检验标本

临床化学检验多用非抗凝血标本，有条件应使用真空负压采血管。临床化学检验血标本采集主要注意事项是：

1.多项化学检测一般可采1管血；

2.采血量视检查项目多少不同而异，单通常为4.0～5.0ml；

3.如果检测项目不是很多，生化和免疫也可以采1管血；

4.多项检测同时采血时应按下列顺序采血：①血培养；②无添加剂管；③凝血管；④有

添加剂管的顺序为：a橼酸盐管；b肝素管；cEDTA管；d草酸盐/氟化钠管。

5.不论是抗凝血还是非抗凝血，为了缩短血清或血浆与血细胞的接触时间，以避免由此而影响结果的准确性，血液标本收集后，都必须尽可能早地将血清或血浆从全血中分离出来。从血液标本采集开始，必须在2h内将全血处理为血清或血浆。

（1）血清（非抗凝血）：采血后标本必须颠倒混合5～10 次，22～25oC（室温）15～30min后可自行（自发）完全凝固，禁用木棍和玻棒等剥离凝块；冷藏标本凝集较慢，加促凝剂时凝集加快。

（2）血浆（抗凝血）：应采用抗凝管采血，采血后立即颠倒混合5～10次，采血后数min内可离心分离血浆。

（3）冷藏标本：用于稳定血液中温度依赖性成分的（抑制细胞代谢），标本于2-8oC 冷藏（标本采集后立即置冰屑或冰水混合物中，冷藏必须充分）；标本需冷藏的测定项目有：儿茶酚胺、胃泌素、甲旁素、PH/血气、NH3、乳酸、丙酮酸等。，全血标本一般不冷藏，血钾测定标本冷藏不得＞2h

（4）代谢抑制剂和防腐剂的应用：用于抑制细胞代谢。血标本中加入氟化钠后，血细胞未分离情况下血标本中Glu，22～25oC稳定24h，2～8oC稳定48h；氟化钠不适用于新生儿及儿童的Glu测定（因儿童PCV高，细胞糖酵解难以控制）；氟化钠-麝香草酚混合剂不适合酶学检测（因氟化钠-麝香草酚混合剂能抑制酶活性）；甲醛—草酸钾抗凝保存剂不适用于血糖测定。

（5）实验室离心标本的准备：不主张用小棍强行剥离凝血块(诱发溶血)；必须剥离时应动作轻柔；真空采血管应一直保持封闭垂直位置直到离心取出血清或血浆。

（6）关于标本离心（指标本处于离心机里的一段时间）

①离心时间和相对离心力：离心时间为5～10min；相对离心力（RCF）为1000～1200×g；

②温度控制离心：离心时产热，不利于分析物稳定。温度依赖性分析物（ACTH﹑环腺苷酸﹑儿茶酚胺等）离心温度应控制在4oC；无特殊温度要求的分析物离心温度在20～22oC；冷藏运送标本应利用温度控制离心机离心。

③再离心：最好一次完成标本离心。普通采血管二次离心时必须在首次离心后短时间内完成；带分离胶的采血管不可以二次离心。

（7）离心后标本处理（指标本离心后和用于检测的血清或血浆被取出一定量之前）

(1)血清/血浆与接触的细胞/凝块应于采集后2h内尽快分离；

(2)分离出的血清或血浆的储存：

①8h内可以储藏于22oC，8h以上储藏于2～8oC 48h以上储藏于－20oC；

②标本不可反复冻融（只能一次，且不可储藏于无霜冰箱）；

③分离胶上面的血清或血浆，可保存2-5天；

④用非凝胶分离物质时，离心后必须立即移开血清或血浆；

⑤血清或血浆必须密闭保存（置于带塞或封口的试管中）。

（九）血气分析标本

血气分析标本为动脉（股﹑肱﹑挠动脉）抗凝全血，抗凝剂为肝素钠（0.05mg/ml，即1000u/ml，用9g/L的生理盐水配制）。标本采集注意事项为：

1.采血一定要用厌氧技术（让血液尽量少的与空气接触）；

2.采血前先吸入足够量液体肝素抗凝剂于注射器内，使其尽可能湿润注射器内壁，然后排出液体肝素，留下注射器死区内液体肝素约0.1ml即可；

3.采血量0.5～1.0ml（最好2.0ml）；

4.抽出的血液不能有气泡，如有气泡应立即排出；

5. 标本采好后立即封闭注射器针头，用两手挫动注射器针筒使标本混匀后立即送检。

（十）微生物学检验标本

微生物学检验标本的正确采集﹑运送及处理，与细菌的培养﹑鉴定结果有十分密切的关系；对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS ﹑炭疽﹑肺鼠疫等）患者采集标本时，必须按国家规范化要求严格注意生物安全；医生﹑护士﹑检验人员均应重视微生物学检验标本正确采集的有关问题，并有责任向患者及其家属进行正确采集标本的宣传和指导。

1．微生物学检验标本采集、运送、验收和处理注意事项

（1）标本采集

1）申请单标记必须清楚（姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等），以便实验室能够合理选择培养环境和培养基；

2）尽量在抗生素应用前采集标本，以避免漏检和提高阳性检出率；

3）标本采集应严格执行无菌操作；

4）咽拭、肛拭、伤口拭子等拭子标本，应插入运送培养基送检；

5）痰、尿液、伤口拭子等混有正常菌群的标本，不可放入肉汤培养基内送检；

6）采集标本的容器必须经灭菌处理，但不可用消毒剂。

（2）标本运送

1）标本采集后应尽快送到微生物实验室；

2）标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，可视为不合格标本。

（3）标本验收

1）实验室只能接受和处理合格标本；

2）实验室对不合格标本退回必须说明原因，并应及时与临床联

（4）处理

根据检验目的结合临床资料选择合适的培养基接种标本；混有正常菌群的标本应做定量细菌培养；不能精确定量或常规定量操作较困难的痰、伤口拭子等标本，应分离出优势菌做细菌鉴定和药敏实验，同时注明细菌量化指标；抗菌药物治疗的标本，必要时应加入某些物质以中和药物对细菌的抑制作用。

2．微生物学检验标本采集和处理

（1）尿液标本采集和处理

通常留取晨起第一次尿液（此时尿液在膀胱内储存4h以上）；尿液采集后要及时送检，并保证2h内接种；不能及时送检和接种时，尿液应置4-8℃冰箱保存；冷藏标本应于8h内接种；怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2w左右采集尿液，怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后2w采集尿液，上述时间此时阳性率高。尿液微生物学检验标本采集方法如下。

1）中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，于带盖的无菌盛器中留取中段尿液5～10ml

2）导尿法：用导尿管导取10～15ml尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检（不可采集尿液收集袋中的尿液送检）；

3）集尿法：怀疑结核分枝杆菌感染时，于清洁盛器中留取24h尿液，取其沉渣10～15ml 送检；

4）耻骨上膀胱穿刺法：培养结果与临床病情矛盾时可采用此法，一般较少应用；

5）肾盂尿采集法：必须由临床医生采集。

（2）粪便标本采集和处理

1）采集时间：

①腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便；

②伤寒患者于发病2w以后采集粪便；

③怀疑霍乱时立即采集粪便送检。

2) 采集方法：

①自然排便：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，2-3g或1-2ml，盛无菌容器内或置于保存液或增菌液内送检；

②直肠拭子：用于难以获得粪便或排便困难的患者和婴幼儿，标本采集后插入灭菌试管内送检。

（3）痰及下呼吸道标本采集和处理

1）自然咳痰法：

①晨痰为佳；

②先冷开水漱口清洁口腔和牙齿；

③再用力咳出呼吸道深部的痰；

④痰量不得少于1ml；

⑤痰咳出困难时可先雾化吸入NaCl溶液（100g/L，加温到45℃）使痰容易咳出。

2）小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上可送检。

3）支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法：此采集方法必须由医生操作。

（4）血液及骨髓培养标本

1) 抗生素治疗前，严格无菌静脉采血8～10ml（儿童1～4ml）；

2）无菌注入专用培养瓶（成人、儿童、需氧菌、厌氧菌、L型菌不同培养瓶）中送检；

3）如已用抗生素不能停用时，可于48h内分别于下次用抗生素之前，采取6份血液标本送检；

4）必要时可需氧菌、厌氧菌（占10%）和L型菌同时培养；

5）疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间，多次采血或动脉采血进行培养；

6）必要时可取骨髓1～2ml，无菌注入专用培养瓶中送检

( 5）脑脊液培养标本

1) 采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最是在应用抗生素之前采集脑脊液。

2) 采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3～5ml，分装到3个无菌小瓶中（各1～2ml）。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml。

（6）穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等穿刺液培养标本。

1) 采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后2-3d 采集标本。

2) 采集方法：

①无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；

②标本采集量应＞1ml（结核分支杆菌培养时应为1～5ml）；

③标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检；

④可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固（0.5ml肝素可抗凝5ml标本）

（7）胃液及胆汁培养标本

抽取空腹胃液5ml，置无菌管内送检；胆汁培养标本由十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁，采集胆汁量为5ml，置无菌管内送检；胃液和胆汁采集后必须立即送检。

（8）脓汁和病灶分泌物培养标本采集前局部消毒，然后无菌采取脓汁或病灶分泌物或组织。标本采集后立即置无菌管内送检。

（9）眼.耳.鼻.咽拭子培养标本用拭子常规采集各种标本。标本采集过程中应注意避免被黏膜上的正常菌群污染，标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检。

（10）泌尿生殖道培养标本

1）尿道分泌物：清洗尿道口采取尿道口溢出的脓性等分泌物，或用无菌拭子插入尿道2～4cm处轻轻转动后取出，置无菌试管中送检。

2）阴道、宫颈分泌物：通过阴道扩张器，用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管1～2cm处分泌物，置无菌试管中送检。

3）宫腔分泌物：在必要时用外套保护膜的灭菌导管抽取。

4）前列腺液：清洗尿道口冲洗膀胱后用前列腺按摩法采取前列腺液送检。

5）精液：受检者应5d未排精，清洗尿道口后手淫或体外排精法，射精于无菌容器内送检。

6）溃疡分泌物：灭菌生理盐水溶液清洗患处，用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物，

置无菌试管中送检。

( 11）烧伤感染培养标本

烧伤12h后用无菌棉拭子无菌操做采集标本；要注意从多个创面取样；烧伤严重感染时易发生败血症，创面取样的同时应该采集血样送做血培养（最好同时做需氧菌培养和厌氧菌培养）。

（12）厌氧菌感染培养标本

1）标本采集

①要注意避免标本污染和与空气接触，严格遵守无菌操作；

②用注射器抽取胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液或无菌手术抽出脓液；

③抽出液体标本后，要尽快排除注射器内的空气。

2）标本运送

①标本采集后不得冰箱储存，必须尽快（半小时内）送实验室；

②运送方法：

a注射器运送（标本抽取后尽快排除空气）或接种到专门的运送培养基中直接运送； b含运送培养基的无氧小瓶运送；

c厌氧罐运送（组织块）；

d 大量液体标本运送时要装满标本瓶并立即驱氧，加盖运送；

e一般不采用棉拭子法。

( 13）真菌感染培养标本

1）浅部真菌感染标本采集

①皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检；皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；

②指（趾）指甲：消毒指（趾）指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片5～6片，置无菌容器内送检；

③毛发：采集根部断折处，至少5～6根送检。

2）深部真菌感染标本采集

①血液：无菌采血8～10ml，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检；如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过8～9h；

②脑脊液：采样量不少于3～5ml，分别注入两支无菌试管中送检（一管做真菌培养和墨汁染色；一管测隐球菌抗原和其他培养）；③呼吸道及泌尿生殖道深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本。

（14）病毒感染标本

1）标本采集原则：根据不同检查目的采集不同的标本，见表1。尽量于疾病早期采集标本；尸检标本应在患者死亡后6h内采集标本。

2 ) 标本采集方法：

①呼吸道病毒感染标本用咽拭子采集；让患者先咳嗽，再口服0.5%乳蛋白水解物15ml，

反复含漱3～4次后吐到容器中立即送检；儿童常应用无菌棉拭子，先沾好0.5%乳蛋白水解物，再去涂拭扁桃体周围组织，并立即泡在0.5%乳蛋白水解物中，立即送检；

②乙脑病毒需采集血清或血浆，置无军菌容器中尽快送检；

③尿液则取其中段尿立即送检（否则置4℃冰箱12h内接种）；

④肠道病毒和柯萨奇病毒则采集新鲜粪便，尽快送检。

3）标本运送及保存：多数病毒对热不稳定，标本采集后应立即送检接种；如48h内接种，须置4℃冰箱保存；空运标本须置冰壶中48h内送到实验室并接种。