全自动免疫组化染色机报告

引进全自动免疫组化染色机可行性报告

全自动免疫组化染色机可代替手工操作，使染色结果更稳定，更标准，消除了多步骤人为因素的影响，可显著缩短出结果时间，可使我院的病理诊断真正做到规范化、标准化、精准化。可以对患者的早诊断、早治疗。使用免疫组化染色机可以开展更多的病理实验项目。病理科在使用全自动免疫组化染色机可在协助诊断、鉴别诊断、指导放化疗尤其在恶性肿瘤的个体化治疗——选择放化疗方案和选择靶向药物方面意义重大。根据卫生部三级综合医院评审指南，三级甲等医院必须装备全自动免疫组化染色机，如具有该设备，设备要求项可达到“A”。如我院装备全自动免疫组化染色机，将大大提升我院的免疫组化实验水平和病理诊断水平。

全自动免疫组化染色机的基本要求：

易于掌握及操作的英文或中文实验程序界面，为免疫组化标准提供了科学，可靠的平台。

主要性能

●开放式系统，适合不同厂家抗体。从烤片、脱蜡、抗原修复、封闭、标记一抗、标记二抗、显色直到苏木素复染全程自动化。

●适合多种标本：石蜡、冰冻、穿刺、细胞涂片、骨髓片。玻片盘对于上载的玻片无特殊的选择要求。

●精密微量加样，滴液量可调，最少可达100ul，节约昂贵的试剂。

●不同切片可设定不同的抗体滴液量。

●大瓶溶液包括脱蜡液、修复液1(pH6.0)、修复液2(pH9.0)、酒精及清洗缓冲液。当大瓶试剂报警存量不足时，主动提示需给大瓶容器添加新试剂。每次添加新试剂前剩余的部分旧试剂也一并投入新的运行中，为了避免检测过程中出现因大瓶溶液存量不足而影响染色运行的状况，每日运行仪器前设备自动检查各溶液的仓位，确认液量足够本批次染色运行。

●专业切片分区定位，保证最小的试剂用量发挥最大的效果，一次同时染色三十张切片。

●用户可根据实际工作流程选择整批上载或小批次连续上载，最大限度减少等待时间，提高实验室效率。

●整机密封性好，保持内环境湿润。

●密码保护，不同权限的人掌握不同内容。

●滴头表面特氟隆处理，清洗彻底，避免交叉污染。

●柔和吹除切片上的残液，保证切片染色均匀。

●程序可根据要求随时更改、定制特性。

●可预编百余种标准化免疫组化和原位杂交程序，可保证最优化的染色流程和染色结果。

●一台电脑可同时操控多台染色机主机。

●可配置外置电源，保证一次实验完整运行。

●全中文操作界面，随时监控运行情况，运行时间、运行步骤、运行进程等一目了然。

●机器具有上网功能，可轻松整合入医院信息系统，实现病例和患者之间信息的双向传输和索引追踪。

技术参数：

●切片容量：30张切片

●试剂容量：40种以上试剂

●加样量： 100ul，150ul，200ul，250ul

如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！

染色操作工安全操作规程

染色操作工安全操作规程一、常温常压染色机安全操作规程 1. 开车前，将工作场地、设备、工器具进行清洁卫生工作。 2. 检设备、仪器仪表是否完好无损，打开热交换器检查更换过滤网（将更换下来的过滤网必须当班清理干净）。 3. 按流转卡核对坯布名称、缸号、匹数是否相符，发现问题及时提出。 4. 坯布需用缝纫机接头，针码5-6针/2厘米，布匹两端必须打2厘米倒针。 5. 打开压缩空气阀门，打开少量主循环泵降温水，合上电控柜空气开关，关闭排液阀门。 6. 打开手动或自动进水开关，按工艺浴比要求准确入水。 7. 打开主循环水泵，待喷嘴喷出水时将布头投入，同时打开提布轮，让坯布导入染缸，首尾相接，关闭机门要严密，不准漏汽、漏液（同一染缸内各容布网管坯布量要均等，否则易造成管差）。 8. 打开机头照明灯，调整好车速及喷压，使坯布运行顺畅。 9. 打开电脑电源，按工艺流程选择合适的电脑曲线进行自动控制程序。 10. 化染料前，检查化料筒是否漏水，在正常条件下按工艺要求化料。打开搅拌机，直到化料化到无颗粒，全部溶解为止。 11. 按工艺要求，按顺序加入染液，加料时要均匀慢慢全部加入。 12. 在整个染色过程中，操作工应随时检查染缸温度、布速、喷压是否正常，发现问题及时处理。 13.染色完毕后，停止主循环泵，打开排污阀，将残液全部排放后，打开机门，局部查看染色质量情况，同时关闭排水阀门。 14.按工艺要求进行水洗，水洗后排水。打开出布开关，坯

布由出布机均匀摆放在小车内，出完布应关闭出布机，主泵降温水，机头照明灯，最后关闭总电源。 15.严禁染缸内无水、主泵无降温水空转运行，化料筒无水严禁开搅拌器。 16. 任何时候，电控柜、分控盒、各电机不得用水冲洗，严禁电控柜内放置各种杂物。 17.热交换器过滤网每班最少清理一次，严禁不放过滤网操作。上紧热交换器四颗螺丝时应均匀上紧，不得上偏或少上。 18.严禁软化水阀、自来水阀同时开放，以防串水。严禁排污阀、排清水阀同时开放。 19.工作完毕，应做好设备、工器具及环境清洁工作，并做好交接班。二、高温高压染色机安全操作规程 1. 每次开机前，将工作场地、染色机、工器具进行清洁卫生工作。 2. 检查设备、仪器仪表是否完好无损，打开热交换器检查更换过滤网（更换下来的过滤网必须当班清理干净）。 3. 按流转卡核对坯布名称、缸号、匹数是否相符，若有问题及时提出。 4. 坯布需用缝纫机接头，针码5-6针/2cm，布匹两端必须打2厘米倒针。 5.打开压缩空气阀门，打开少量主循环泵降温水，合上电控柜开关，并关闭排水阀门。 6. 打开手动或电动进水开关，按工艺浴比要求准确入水。 7. 打开主循环泵，待喷嘴喷出水时，将布头投入，让坯布导入染缸内，各个网管坯布首尾相接后，关闭机门要严密，不准漏汽、漏液（同一染缸内各容布网管坯布量要均等，否则易造成管差） 8. 打开机头照明灯，调整好车速及喷嘴压力，使坯布运行

一文读懂免疫组化步骤、结果分析及注意事项

文读懂免疫组化步骤、结果分析及注意事项导语实验室花花师姐正在教导新来的师弟：想拿高分文章，不学免疫组化怎么行？” 免疫组化王子毛博旁边插话：是这个理，今天我就豁出去，将我十多年的心得和经验奉献给小师弟你了。”小师弟感激涕零，唯诺细听两位前辈的教诲免疫组化，免疫组织化学技术（immunohistochemistry ），是项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但可以抗原修复，所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。免疫组化步骤详解免疫组化结果分析很多时候，我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。但是却不知道如何正确地分析，得出理想的结果。这实在是一件憾事。如下图，正常的结果应该是这样的：镜下细胞核呈蓝色，阳性结果呈深浅不一的棕色。结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在40*光镜下，随机10 个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0 分阴性着色，1 分淡黄色，2 分浅褐色，3 分深褐色）

和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。免疫组化结果分析是毛博的特长，以下是他传授的独门绝技。 1.对照染色和做实验的时候必须设立对照组一样，免疫组化也必须设立对照染色。没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。对照般有阳性组织对照，阴性组织对照，阴性试剂对照，自身对照。般来说，有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照就足够了。 2.定位抗原表达必须在特定部位。如LCA 应定位在细胞膜上；CK 应定位在细胞浆内；PCNA 及p53 蛋白应定位在细胞核内等等。不在抗原所在部位的阳性着色，不能视为确切的阳性结果。有可能是非特异性染色或者假阳性。不能确定怎么办？这就要用到上一段提到的对照染色了。 3.半定位现在一般用图像分析系统进行定量。如果你的实验室不幸没有那么高大上的话，就只好赶鸭子上架，用肉眼定一下量了。因为人为主观性比较强，所以只能称作半定量。免疫组化的半定量一般就分为三级：弱（+ ），中++ ），强（+++ ）。以绿色免疫荧光为例，则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和

免疫组化染色操作步骤

免疫组化染色操作步骤 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】

免疫组织化学染色原理和操作步骤一、免疫组织化学原理免疫组织化学（IHC）又称免疫细胞化学，是根据抗原—抗体特异性结合的原理，应用带有可见标记的特异性抗体作为探针，检测组织和细胞中抗原性物质的一种技术。免疫组化技术主要有直接法和间接法：直接法是以标记的一抗孵育标本以检测其中的抗原成分；间接法则先后加入一抗和二抗，形成抗原—一抗—二抗复合体以达到检测该抗原的目的，该法因二抗的放大作用而具有较高的敏感性。间接法常用的有过氧化物酶—抗过氧化物酶（PAP）法、亲和素—生物素—过氧化物酶（ABC）法和链霉亲和素—过氧化物酶（SP）法。 PAP法一抗和二抗均不标记，避免了标记过程对抗体活性的影响，但需要制备过氧化物酶的抗体，与适量过氧化物酶混合形成PAP复合物（含3个酶分子和 2个抗体分子），染色时依次加入一抗、二抗、PAP复合物孵育标本，最后用H 2O 2 和二氨基联苯（DAB）为底物显示过氧化物酶，即可检测标本中的抗原成分。生物素为含硫的杂环单羧酸，可通过其羧基与蛋白质中的氨基结合，从而标记抗体和酶。亲合素又称抗生物素蛋白，与生物素有很高的亲合力，1分子亲合素可结合4分子生物素，ABC法即在此基础上建立。ABC法与PAP法相似，一抗不标记，二抗用生物素标记，染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合，制成ABC复合物，并使亲合素分子上至少空出一个生物素结合位点。在标本孵育过一抗和二抗后，再加入ABC复合物使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB进行显色。ABC法的敏感性较PAP法更高。图1. 免疫组织化学基本原理示意图（引自八年制《组织学与胚胎学》）

肝切片的实验报告

肝切片的实验报告篇一：肝切片实验报告？实验九显微摄影――小鼠肝脏结构年级专业 *班 *组学号姓名αβ 500μm 1 m 2 100μm i 100μm 4 50μm 图版说明：图1：小鼠肝脏横切部分结构，示肝小叶（a），静脉血管（b）。图2：图1（α部位）的放大，示肝小叶（c）。图3：示肝小叶（d）。图4：示静脉血管（e）。图5：示肝细胞（f），肝细胞细胞核（g）。图6：图2（β部位)的放大，示上皮细胞（h），上皮细胞细胞核（i），肝血窦（j），中央静脉（k），肝动脉（l），血细胞（m）。结构说明：肝脏是脊椎动物身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面扮演着氧化，储存肝糖，解读等功能。肝脏由肝小叶组成，肝小叶是肝脏的基本组成成分，它来执行肝脏的基本职能。而肝小叶又是由肝细胞组成，当肝细胞大量损坏时，肝小叶不能正常工作，影响肝脏正常生理功能，而出现各种各样的症状。肝小叶成棱柱状，中央有一条中央静脉穿过，肝细胞围绕中央静脉成放射状排列。肝细胞是一种高度分化并具有多种功能的细胞，胞质内各种细胞器丰富而发达，并

含有糖原，脂滴等内涵物。细胞器和内涵物的含量与分布常因细胞的功能状况或饮食变化而变动。一般肝细胞里线粒体含量都比较多，遍布于胞质内，为肝细胞的功能活动不断提供能量。肝细胞核大而圆，居中央，染色质丰富色浅，核膜清楚，核仁1至数个。部分肝细胞（约 25%）有双核，有的肝细胞的核体积较大，为多倍体核。肝血窦位于肝板之间，互相吻合成网状管道。血窦腔大而不规则，血液从肝小叶的周边经肝血窦流向中央，汇聚到中央静脉。 5 50μm篇二：实验报告(一) 实验名称：实验性空气栓塞实验时间：成绩：实验目的：了解空气栓塞对机体的影响实验材料：家兔，20ml注射器及针头，解剖刀，剪，镊子，面盒，浸有二甲苯的棉球若干等实验方法（简要说明）： 1. 先观察家兔的一般状况：活动状态、呼吸频率、嘴唇颜色及瞳孔大小等。 2. 用浸有二甲苯的棉球涂擦一侧耳廓，使局部血管扩张，便于穿刺注射。 3. 用注射器经耳缘静脉注入空气10～15ml，记录时间，

溢流喷射染色机的染色

溢流喷射染色机的染色 1.染色 1.1浴比的控制：据印染机械生产企业的产品说明书上介绍浴比似乎越小越能吸引客户，其实不然，无论何种溢流喷射染色机的浴比不是由机械生产企业规定的，而是应该由染整企业根据加工的产品在制订工艺时確定，如染60~100g/m2重量的轻薄的涤纶织物，浴比一般控制在1∶12~1∶15之间，因为轻薄织物的体积大，相对长度也长，所以浴比宜大一些，反之，如加工250g/m2重量的涤/棉(或粘胶)混纺交织物浴比宜控制在1∶10左右。一般浴比的大小要使织物在机内运转一回(r)所需时间在1.5~2min之内。实践证明，对轻薄型织物来说，如果转速太快，织物接触导布辊的几率越多，织物交织点往往会因此而产生滑移(纰裂)，但是相反，则容易产生色花，就是对一般的织物来说，也要注意超载，它不仅是因织物在储布槽内堆积时间长，加之织物在机内滯留过程中难免受热不匀以而导致色花，而且往往还会因机内的染液流向快慢引起织物打结和堵布等现象。现在的溢流喷射染色机最小的浴比有1∶6，多数均为1∶10，总的来说，染色的质量优劣不能孤立地看浴比大小，更重要的看整机设计得是否合理，它的机械可控性等而定。从染整角度而言，要做到浴比定得恰当与否，还是要看整体的染色质量。 1.2.升温、保温与降温：这个问题总的也要看具体产品而定，它和染色时采用的染料品质，以及助剂的合理使用有一定关系。从快慢速度来讲一般可在0.5℃范围去调节，如原来是以1℃/min，考虑到其他因素，则可以加快或延缓0.5℃，即为1.5℃/min或0.5℃/min℃，切忌大起大落。并且溢流机上的温度与压力也要符合物理常数。

1.3. PH值的控制：这里讲的PH值尤其是在应用分散染料染涤纶及其混纺交织物时，大家都知道大约要用98%冰醋酸0.6ml/L把PH值调节到5±0.5，但有时就忽略如何把它稳住！防止出现色差色变。实践认为，分散染料染色时，颜色越浅对PH的影响越敏感。某企业老总问我：为什么我们厂里染出来的颜色总是“元色象咖啡，藏青象毛蓝”？结果我就考察了该厂的水质及染色工艺后决定，只要去除原来处方中的六偏磷酸钠就可以，这种盐类化合物是不宜作为软水剂的，因为它经加热后会使染浴的PH值上升(不稳定)，只有加入1.5~2g/L硫酸铵(NH4)2SO4，才可稳定原先调节好的染浴的PH值。当然磷酸二氢铵NH4H2PO4也可以，因为它们都有释酸作用，从染整角度讲，不仅分散染料染涤纶如此，酸性染料染锦纶也不例外，其实，每种染料在染色时都要讲究介质的PH值，这是不容置疑的。 1.4. 化料与加料：严格地说，用于染涤纶的分散染料的化料与加料很有讲究，否则都会不同程度地影响溢流喷射机的染色质量。因为分散染料本身是一种非离子的疏水性染料，在商品化时填入了扩散剂MF，有的甚至是NNO(不耐高温)，还有木质素磺酸钠，防尘剂甚至无机盐类化合物等，因此卖给染整企业的分散染料商品却变成了阴离子染料，由于它的溶解度很低，染料在水中是呈极细小的颗粒悬浮液，所以首先它只能采用30℃左右的温水加料。如果化料水温太高，反而会使染料产生聚集倾向，有时虽经搅拌，甚至筛滤入缸，但进入染浴后还会发生二次凝聚，很容易在染色时产生斑点导致染疵。其次是要注意加入染机时的速度和浓度，实践证明，一般应稀释至1∶10(即1kg染料或助剂要用10kg的水稀释)宜多而不宜少，然后用5min左右时间缓慢注入染机，不宜燥之过急！

常温染色安全机操作规程

常温染色安全机操作规程操作规程：一、开机前准备工作： 1、穿戴好劳保用品（工作服、工作鞋） 2、检查： A过滤网是否清理干净。 B观察窗玻璃是否有裂纹。 C化料桶是否清洁卫生。 D所有控制阀门是否正常、有无漏水、漏气现象。 E观察热交换器、喷嘴压力表指针应在0kg/cm2。 F电器操作按钮、电动机、主泵螺栓有否松动。二、操作顺序： 1、浴比水量，核对“生产流转卡”上投布量、用水量与水位计是否相符。 2、调节循环泵旋钮至中等位置，起动循环泵，观察循环泵运转情况有无异常、提布轮皮带松紧适中。 3、调节提布轮至最小位置，调节循环泵旋钮至适当位置，方能进布。 4、双管进布时，将其中一个布头打个记号，避免接错头。

5、缸口螺丝应按缸口序号对角拧紧。 6、关门时螺口不能拧的过紧，以免损坏密封圈。 7、打开加料阀门或开关开始加料。 8、打开蒸汽阀，注意开度。 A选择自动时，打开手动升温旋钮开始升温。 B选择自动时，打开自动旋钮，按“染机电脑”上的“运行”按钮。 9、当须降温、或电脑功能号指示“06”、“07”时、打开冷水阀，注意开度。 10、水洗干净后，关机循环泵，启动出布装置出布。三、安全注意事项： 1、非本岗位操作人员、未取得上岗证一律不得操作。 2、当进入正常运转后，操作人员应注意各个传动部是否正常有无噪声，热交换器压力表指针不超过5kg/cm2，指针式温度表是否与“染机电脑”指示温度一致，温度不超过100℃。 3、操作人员如发现任何异常应及时，进行处理。 4、设备出现异常应首先上报车间主任或工段长，待温度降到 80℃以下时，关闭电源。 5、设备出现紧急情况（循环泵、提布轮端口、机门密封大量漏液、观察窗玻璃有裂纹，电器故障），迅速关闭循环泵，

免疫组化操作步骤

免疫组化操作步骤集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#

免疫组化操作流程试剂准备 1. PBS缓冲液（～）： NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L。 2. L柠檬酸盐缓冲液（CB，，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸。即抗原修复液 : PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST 4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。操作流程免疫组织化学染色 SP法： 1. 脱蜡、水化：脱蜡前，应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟，观察石蜡应溶解。从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟；无水乙醇中浸泡3分钟； 95%乙醇中浸泡3分钟； 70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）； 50%乙醇中浸泡3分钟；自来水中浸泡3分钟；

梯度脱蜡 2. 抗原修复：（用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片）高压热修复高压锅里放少许水，用一量杯或容器（大小能容纳玻片架为宜）装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸，再放入玻片架，盖上不锈钢高压锅的盖子，将排气阀门套上，待听到阀门冒气时，即可倒计时2min，之后将玻片杯一起放入凉水中，静置15min，平衡至室温。电磁炉1000W 2min。 3.丢弃抗原修复液，将玻片浸泡在去离子水中（时间不限）可省略 4.用组织笔沿组织边缘画线（可与组织边缘留适当间隙），画完立即放入PBST溶液中浸泡3遍X3min（三个容器，每个容器3min，时间不限制）。 5. 3%H2O2滴加在切片上，室温静置15分钟(3%的H2O2用30%的 H2O2加双蒸水稀释10倍，现配现用。目的为阻断内源性过氧化物酶)； 6. PBST洗3次各3分钟(过三缸) 7. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟。用与一抗不同源的血清即可，本人用Western-blotting的含胎牛血清封闭液。 8. 甩去封闭液（注：不要冲洗），滴加一抗50ul（至少50ul否则易干片），4℃孵育过夜。4℃过夜后需在37℃复温45分钟（未验证：室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。）。 9. PBST洗3次各3分钟；

CC-基因表达检测的相关实验技术和蛋白印迹技术实验报告

课程名称：生物医学实验同组学生姓名：指导老师：应李强成绩：实验名称：基因表达检测的相关实验技术和蛋白印迹技术实验类型：生物化学一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验原理电泳是指带电颗粒在电场中的泳动。许多重要的生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都含有可电离基团，在非等电点条件下带有电荷，在电场力的作用下，它们向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳技术就是利用样品中各种分子带电性质、分子大小、形状等的差异，在电场中的迁移速度不同，从而对样品进行分离、纯化和鉴定的一种综合技术。可用于样品的制备、纯度鉴定、分子量测定等。蛋白质印迹技术（western blotting）又称免疫印迹技术和western印迹技术，是鉴别蛋白质的分子杂交技术原理：将经过SDS-PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体上。以固相载体上蛋白质或多肽作为抗原，与对应的未标记的一抗起免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗反应。经过底物显色、化学发光或放射自显影，检测特异基因表达的蛋白成分的存在和含量。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。二抗标记物常用的二抗标记物有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，辣根过氧化物酶最敏感的底物是3,3’-二氨基联苯胺，它在过氧化物酶所在部位被反应转变成棕色沉淀。在钴或镍离子存在下进行反应可以加深沉淀的颜色并提高反应的灵敏度。但是，使用辣根过氧化物酶不可能完全排除背景颜色，因此须十分小心地观察生色反应，一旦特异性染色蛋白带清晰可见，就应尽快终止生色反应。碱性磷酸酶可催化底物5一溴-4-氯-3-引哚磷酸／氮蓝四唑(BCIP／NBT)在原位转变为深蓝色化合物。这是利用二抗标记物进行的显色反应，是最早的Western Blotting检测方法，现在主要用于免疫组化，在显微镜下观察。该方法的灵敏度相对较低，可以检测ng水平的目标蛋白。 Western blotting 蛋白显影方法 1．增强化学发光法(ECL) ECL化学发光检测试剂是基于Luminol的新一代增强型化学发光底物试剂，它由辣根过氧化物酶（HRP）催化发生化学反应，发出荧光，结果可以通过X光片压片和其它显影技术展现，或使用Luminometer检测。溶液A主要成分为Luminol及特制发光增强剂，溶液B主要成分为H2O2及特殊稳定剂。发光液A和B在HRP的催化作用下Luminol与H2O2反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。在激发过程中不需要消耗HRP，HRP只是起催化作用，所以只要HRP没有降解失活，是可以重复加发光液的。ECL化学发光检测灵敏度较高，可以检测pg水平的目标蛋白。 Ecl 显色原理：氨基苯二酰肼类：主要是鲁米诺（luminol）及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。在Ecl底物中，含有鲁米诺（溶液A）和H2O2 （溶液B），在HRP（辣根过氧化物酶）催化剂的作用下，发出荧光来。HRP不消耗。

教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单

教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单免疫组化是用标记的特异性抗原（抗体）对组织内抗体（抗原）的分布进行检测。免疫组化虽然价钱昂贵，却有不能替代的作用： ①恶性肿瘤的诊断和鉴别②确定转移性恶性肿瘤的原发部位③对某类肿瘤进行病理分型④明确软组织肿瘤的正确组织学分类，明确软组织的诊断⑤发现微小转移灶⑥为临床治疗方案提供支持虽然免疫组化有那么多作用，但是很多患友拿到手了根本就看不懂，都是些英文缩写，代表着什么意思呀，别着急，下面小编就按照字母顺序列张表，告诉大家各个代表什么意思：项目临床意义Actin肌动蛋白，间叶组织来源标记，平滑肌、血管内皮、肌上皮组织表达。AE1/AE3细胞角蛋白 AE1/AE3，标记上皮及上皮来源的肿瘤，鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性，如胆管细胞阳性，肝细胞阴性，鉴别肝癌和胆管癌。AFP甲胎蛋白，肝癌细胞表达，胃和肝脏同时肿瘤时，胃肝样腺癌HepPar-1、AFP、CK19 和CDX-2等4 种不同程度阳性表达，而肝细胞癌CK19 和CDX-2不表达。ALK间变型淋巴瘤激酶，用于淋巴造血来源标记，间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤的诊断。AMACR甲基酰基辅酶A消旋酶，癌特异

性指标，只存在于癌症组织。结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等过度表达，以结直肠癌和前列腺癌表达最高。Bax促进凋亡蛋白，同Fas/FasL。Bcl-2抑制细胞凋亡相关基因-2，肿瘤预后指标，高表达者对多数抗癌药物、放射治疗耐受，高表达者预后差。Bcl-6B淋巴细胞凋亡相关基因-6，抑制细胞凋亡作用，淋巴造血细胞来源标记，用于B淋巴瘤诊断。Bel-XL抑制细胞凋亡相关基因-XL，Bcl-2 抑制细胞凋亡基因家族成员之一，作用同Bcl-2 。Cam5.2人角蛋白抗原决定簇，正常分泌上皮表达，复层鳞状上皮不表达，用于鉴别腺癌和鳞癌。CD10分化簇10，间叶组织来源标记，未成熟淋巴细胞阳性表达，用于B细胞淋巴瘤、慢性髓性白血病等诊断，某些非造血肿瘤子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌也可阳性。CD117分化簇117，间叶组织来源标记，胃肠间质瘤细胞阳性表达，阳性者可用格列卫靶向治疗。某些肿瘤如黑色瘤、白血病、皮肤纤维瘤、血管肉瘤、尤文氏瘤、胶质瘤也可阳性。CD14脂多糖LPS受体，单核细胞、巨噬细胞等细胞表面分化抗原,用于单核细胞和组织细胞相关病的鉴别诊断。CD15半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原标记，成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等阳性表达。用于霍奇金淋巴瘤、胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺

免疫组化步骤

免疫组化：链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法 1)将石蜡切片置于烤片机烘烤２－３h,{因为做石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，所以应烤片2-3h,除非组织的抗原性较稳定，则时间可长一点}后可把烤好的组织切片，放在60℃烤箱中过夜，最佳时间控制在14-18h{乳腺病理处省略此步骤}。取组织切片于切片架，用吹风机吹至产生蜡液，不可靠太近，以免使组织切片局部温度过高，破坏组织切片。 2）常规脱蜡 ({二甲苯脱蜡，在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长}二甲苯I 20min →二甲苯II 20min→二甲苯Ⅲ20min →无水乙醇10min（清洗二甲苯）→无水乙醇10min→95%乙醇5min→80%乙醇5min) {梯度酒精用无水酒精与蒸馏水配置} 目的：把水渗入组织切片中，给细胞创造一个水溶性环境 <以下步骤是为细胞染色做准备> 3）捞出，放入铁缸内，用凉清水冲洗3次{如果组织容易脱片，就尽量泡一下，这样脱片可以减少很多}； 4）将配好的柠檬酸盐抗原修复液（抗原修复液的量为稍高于横向放倒的切片架的高度）{EDTA配制方法：EDTA修复液使用比例：EDTA:蒸馏水=1:49,每次最好配制1000ml。EDTA修复液重复使用最好不要超过5次，并且3次之后要测PH值，测PH是否为9.0，如偏离太大则弃用。枸橼酸修复液只能用一次。修复的原因：因为常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得抗原性物质形成醛键，羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇。另外，蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。在染色时，要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态}{用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也可，因其抗原修复效果比柠檬酸盐的好，可从另外的问题上着手}灌入高压锅中，不旋紧，盖上即可，210℃烧至沸腾后，把切片架放入横向放倒，旋紧锅盖，待喷气时，开始计时2min-2min30s,如果组织不易染色，可延长修复时间，但一般不超过3min，否则容易掉片。 5）到时间后，把高压锅放入水池中用凉水冲至气体放出完，旋下锅盖，自然冷却至室温，大于30min。 6）冷却后取出切片架用凉清水冲洗3次，放入3% H2O2 罐中10min，目的：封闭过氧化物酶。【每天用前新放入10ml H2O2 】【配制方法：1000ml 3%的过氧化氢=100ml 30%过氧化氢+900ml蒸馏水，（H2O2保存需避光）】 7）捞出后用凉清水冲洗多次，应注意H2O2 有腐蚀性，最后一次用PBS（磷酸盐缓冲液），PBS

工贸企业染色机安全操作规程示范文本

工贸企业染色机安全操作规程示范文本 In The Actual Work Production Management, In Order To Ensure The Smooth Progress Of The Process, And Consider The Relationship Between Each Link, The Specific Requirements Of Each Link To Achieve Risk Control And Planning 某某管理中心 XX年XX月

工贸企业染色机安全操作规程示范文本使用指引：此操作规程资料应用在实际工作生产管理中为了保障过程顺利推进，同时考虑各个环节之间的关系，每个环节实现的具体要求而进行的风险控制与规划，并将危害降低到最小，文档经过下载可进行自定义修改，请根据实际需求进行调整与使用。 1、染色工上岗前要经过安全培训并考试合格方可上岗操作。 2、工作时要劳保穿戴整齐并符合要求方可工作。 3、每天工作前要先检查设备状况，设备如有安全隐患，不得操作设备。 4、操作蒸汽加热水时打开控制阀不能太急，同时盖好缸盖，防止沸水烫伤。 5、做吊染时身体各部位不能伸入吊架下，防止吊架脱落伤人。 6、如操作蒸锅，必须由取得特种设备操作许可证的人员并严格按蒸锅操作规程的要求操作。 7、所有染料、助剂的领用必须遵循定人、定时、定量

的原则，向缸内投放时防止灼伤。 8、保持消防通道的畅通，严禁堵塞通道；随时清除地面积水，防止摔伤。 9、每天工作结束后必须切断水、电、汽，清理设备。请在此位置输入品牌名/标语/slogan Please Enter The Brand Name / Slogan / Slogan In This Position, Such As Foonsion

免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较

生物化学实验报告记录：Westernblotting检测大肠杆菌重组蛋白

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实验三 Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白一、实验目的利用Western Blotting技术，定性（或定量）检测苦荞黄酮醇合酶基因（Flavon ol synthase gene, FtFLS）在大肠杆菌表达宿主菌Escherichia coli BL(DE3)中的诱导表达。二、实验原理黄酮醇合酶（FLS，EC 1.14.11.23）属于2-ODD家族，催化黄酮醇合成支路中最后一步氧化反应，也是直接合成黄酮醇的反应。FLS可以使二氢黄酮醇在C3链中C2和C3之间氧化形成双键，从而生成黄酮醇：a Dihydroflavonol + 2-oxoglutarate + O2 a Flavonol + succinate + CO2 + H2O。本实验采用PCR的方法，在苦荞黄酮醇合酶基因（FtFLS）ORF起始密码子前引入Kpn?酶切位点，去掉终止密码并引入Bam H ?酶切位点。克隆引入酶切位点后的FtFLS到表达载体pET-30b(+)质粒中，其表达产物分别在N-末端和C-末端各含有6 ×His标签。重组质粒（pET-30b(+)-FtFLS）经鉴定后转化表达宿主菌E. coli BL21(DE3)并使用IPTG进行诱导表达。收集诱导0 h、2 h、4 h、6 h和8 h的产物，经SDS-PAGE后用于考马斯亮蓝R-250染色或Western blotting分析。 Western blotting的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS-PAGE胺凝胶电泳分离，通过电泳转移到固相支持物上（硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜）；将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用并通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。本实验采用小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体（Anti-His tag IgG，一抗）与重组FtF LS蛋白的N-末端和C-末端6 ×His发生抗原-抗体特异反应，再利用辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG（peroxidase-Goat Anti- Mouse IgG，二抗）与一抗发生特异结合，最后使用DAB进行显色。DAB即：二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine），是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物。DAB在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。该方法常用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好，在免疫组化，原位杂交，Western blotting等膜显色中

着色工段安全操作规程示范文本

In The Actual Work Production Management, In Order To Ensure The Smooth Progress Of The Process, And Consider The Relationship Between Each Link, The Specific Requirements Of Each Link To Achieve Risk Control And Planning 某某管理中心 XX年XX月着色工段安全操作规程示范文本

规程文书样本 QCT/FS-ZH-GZ-K239 着色工段安全操作规程示范文本使用指引：此操作规程资料应用在实际工作生产管理中为了保障过程顺利推进，同时考虑各个环节之间的关系，每个环节实现的具体要求而进行的风险控制与规划，并将危害降低到最小，文档经过下载可进行自定义修改，请根据实际需求进行调整与使用。 1、按照着色工段设备操作规程做好开机前的各项准备工作，正确使用必要的劳动防护用品。 2、检查各部位设备的电气，要求动力配电箱和配电装置使用完毕处于关闭状态，机械运转及安全防护装置，确认正常。 3、生产过程中，操作人员须严守岗位，随时注意设备运行情况，发现问题及时妥善处理，并报值班生产领导。 4、要做好班次与班次间的生产交接记录，并对本班次的生产情况、设备安全运行情况了如指掌。 5、认真负责填写好生产流水记录卡。请在此位置输入品牌名/标语/slogan Please Enter The Brand Name / Slogan / Slogan In This Position, Such As Foonsion 第2页/总2页

免疫组化组织细胞地取材、固定、切片操作方法及要点

从大体标本上切除适量的组织材料进行研究就是取材。取材不仅在免疫组化而且在常规病理检查中也十分重要。用于免疫组化的组织一般取材大小为1．OcmXl．OcmX0．2cra。取材时应剔除脂肪和钙化，否则会影响切片，出现假阳性或假阴性结果。组织标本包括动物标本、手术活检标本、尸体解剖标本及细胞标本等，有关各种标本的取材方法分述如下。一、动物的致死法及取材 (一)致死法 (1)空气栓塞法向动物静脉注入一定量的空气，使动物很快死亡。一般适用大动物，例如兔、犬、猫等动物。 (2)麻醉法可将浸有乙醚或氯仿(三氯甲烷)的棉球连同动物一起放人密闭容器进行麻醉，也可用4％戊巴比妥作静脉注射，或用20％氨基甲酸乙酯做腹腔注射。适用于鼠等小动物。 (3)断头法用剪刀剪去动物的头部，待血液流出后立即取材。适用于小动物。 (4)去头法用重物猛击头后部或将动物头后部猛撞桌沿。 (5)股动脉放血法动物麻醉后，切开股动脉放血致死。 (二)取材注意事项 (1)最好在动物心脏还在跳动时立即取材，并迅速投入环保组织固定液。脏器的上皮组织易变质，争取在死后半小时取材完毕，否则免疫组化染色时会产生背景染色。 (2)切取组织使用的刀、剪要求锋利，避免来回挫动组织。因动物组织质脆，因此夹取组织时切勿用力过重，以免挤压损伤组织。二、尸体解剖的取材尸体解剖的取材应根据实际需要进行，一般取材部位和数量如下。 (1)心和大血管右心室一块，左心室一块，主动脉一块，取材部位可在距主动脉瓣5cm处。 (2)肺右下叶一块，切成正方形；左下叶一块，可切成长方形。 (3)肝右叶一块，切成正方形；左叶一块，切成长方形。 (3)脾一块。 (4)胰一块。 (6)肾两肾各一块，包括皮质、髓质和肾盂。右肾一块切成正方形，左肾一块切成长 (7)膀胱一块。 (8)肾上腺左、右各取一块。 (9)消化道食管一块，胃窦部一块，小肠一块，淋巴结一块，直肠一块。 (10)骨脊椎骨一块。 (11)胸腺一块。 (12)子宫宫颈和宫体数块。 (13)睾丸或卵巢各一块。 (14)脑左侧运动区一块，左侧豆状核一块，小脑一块。 (15)脑下垂体一块，前叶或包括前后叶。如有较严重或复杂病变时应适当增加取材数量，以便彻底检查而作出正确诊断。三、活检标本的取材 (一)常规活检标本的取材应注意病变的部位、形状、大小、颜色以及与周围组织的界限，有无完整的包膜。取材时应取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织。取材用的刀剪

酞菁染料安全操作规程示范文本

酞菁染料安全操作规程示范文本 In The Actual Work Production Management, In Order To Ensure The Smooth Progress Of The Process, And Consider The Relationship Between Each Link, The Specific Requirements Of Each Link To Achieve Risk Control And Planning 某某管理中心 XX年XX月

酞菁染料安全操作规程示范文本使用指引：此操作规程资料应用在实际工作生产管理中为了保障过程顺利推进，同时考虑各个环节之间的关系，每个环节实现的具体要求而进行的风险控制与规划，并将危害降低到最小，文档经过下载可进行自定义修改，请根据实际需求进行调整与使用。 1、酞菁染色机械的轧液、汽蒸、酸洗设备部分应装有局部而密闭良好的排气和通风设备，有利于将有毒有刺激性氨气及时排除，保持作业场所空气新鲜。 2、配液室的配液机械应自动搅拌，加罩密闭并设置良好的排毒设备和换气装置。 3、定期检测工作场所的有毒、有害气体，使低于国家允许浓度标准。如氨气浓度不得超过30mg/m3，二氧化氮气体不超过5mg/m3 。 4、酞菁染料的助溶剂力求做到以无毒代有毒，加强劳动保护和工业卫生。 5、操作工应配备好必需的个人防护用品，工作时要认真穿戴。如倒氨水时，要戴好防护眼镜，加有机溶剂勒伐

素ND，因有毒性，必须戴好橡胶手套方能操作。并按国家规定，供给保健食品和定期疗养。请在此位置输入品牌名/标语/slogan Please Enter The Brand Name / Slogan / Slogan In This Position, Such As Foonsion

HE染色与免疫组织化学染色实验报告

华中农业大学动物科技动物医学院 HE染色与免疫组织化学染色实验报告 1实验目的及意义 1.1了解石蜡切片的制作过程 1.2 掌握HE染色与免疫组织化学染色的基本原理以及染色方法 1.3 熟悉HE染色与免疫组织化学染色后的读片知识 2 实验方法及步骤 2.1 石蜡切片制作及HE染色步骤 2.1.1取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。 2.1.2脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。 2.1.3浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。 2.1.4切片前的准备工作：先将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，四周留约2mm的石蜡块，块两边必须切成平行的直线。将玻片擦洗干净后均匀涂抹薄薄的一层蛋白甘油，放置冰箱备用。 2.1.5切片与贴片：将预冷的蜡块固定于切片机上，调节切片厚度为6微米，切成薄片。切下的薄片往往皱折，放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。2.1.6 脱蜡至水

华中农业大学动物科技动物医学院二甲苯Ⅰ20分钟，二甲苯Ⅱ20分钟，无水乙醇3分钟，95％酒精3分钟，80％酒精3分钟，70％酒精3分钟，自来水洗5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.7染色：苏木素液7分钟，自来水洗5分钟，1％盐酸溶液分化30秒，自来水洗5分钟，1％氨水返蓝10秒，自来水洗20分钟，95％酒精3分钟，1％伊红酒精溶液2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.8脱水和透明： 95％酒精2分钟，无水酒精Ⅰ2分钟，无水酒精Ⅱ2分钟，二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.1.9封固：将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固，放入37℃烘箱。 2.2 SABC 染色步骤 2.2.1脱蜡至水：二甲苯Ⅰ20分钟，二甲苯Ⅱ15分钟，100％酒精2分钟，95％酒精2分钟，80％酒精2分钟，70％酒精2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。 2.2.2流水冲洗5分钟（水流要小） 2.2.3用蒸馏水配置新鲜的3%双氧水（30%双氧水1：9配制，配100ml），室温封闭15分钟，注意避光。 2.2.4蒸馏水洗5分钟，重复2次。 2.2.5热抗原修复，将切片浸入0.01M枸盐酸盐缓冲液中，置微波炉内高火5分钟，低火20分钟，完后自然冷却。 2.2.6取出切片放入染色缸中PBS洗5分钟，重复3次。 2.2.7取出切片放入湿盒中，滴加5%BSA封闭液（覆盖满组织为宜），室温20分钟。 2.2.8甩去多余液体（擦去周围的流痕），滴加一抗（覆盖满组织为宜）注:阴性对照滴加PBS,放入4℃冰箱过夜。 2.2.9放入染色缸中PBS洗5分钟，重复3次。 2.2.10取出放入湿盒中滴加二抗（覆盖满组织为宜），室温30分钟。 2.2.11取出置染色缸中PBS洗5分钟，重复3次。放回湿盒中加SABC（覆盖满组织为宜），室温30分钟。