生工基因组提取试剂盒说明书
Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒
产品编号：SK8255/SK8256
包装规格：50次/100次
试剂盒组成
组分 SK8255，50次 SK8256，100次
纯化套件（吸附柱+收集管） 50套 100套
Buffer Digestion 10 ml 20 ml
Buffer BD 12 ml 24 ml
PW Solution (concentrate) 18 ml 36 ml
Wash Solution (concentrate)7.5 ml 15 ml
CE Buffer (pH 9.0) 15 ml 30 ml
Proteinase K 1.2 ml 2.4 ml
Enzymatic lysis buffer 10 ml 20 ml
操作手册1份1份
保存方法及注意事项
试剂盒于常温运输，室温（15~25°C）保存，有效期见包装，4°C保存时间更长。
该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4°C保存。
Buffer Digestion中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍
本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种细菌基因组DNA抽提试剂盒。本产品对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用高浓度的蛋白变性剂，大大提高了裂解的效率，缩短了裂解的时间。无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从1 ml过夜培养的细菌菌液可以获得10~20 μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
标准抽提步骤
自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12,000 × g）、1.5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液（20 mg/ml）等。
试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀、Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存。（18 ml PW Solution中加入12 ml异丙醇，7.5 ml Wash Solution中加入22.5 ml 无水乙醇；36 ml PW Solution中加入24 ml异丙醇，15 ml Wash Solution中加入45 ml无水乙醇。）每次使用前请检查Buffer Digestion是否出现沉淀，如有沉淀，请于56°C溶解后使用。
1. 样品处理
a. 革兰氏阴性细菌：取1 ml过夜培养的细菌菌液，加入1.5 ml离心管中，室温8,000 rpm离心1 min，弃上清，收集菌体。
加入180 μl Buffer Digestion，再加入20 μl Proteinase K溶液，震荡混匀。56°C水浴1 h至细胞完全裂解。
b. 革兰氏阳性细菌：取1 ml过夜培养的细菌菌液，加入1.5 ml离心管中，室温8,000 rpm离心1 min，弃上清，收集菌体。
加入180 μl溶菌酶溶液（使用前将相应的溶解酶加入到Enzymatic lysis buffer中，配置成20 mg/ml的溶解酶溶液）重悬菌液，37°C水浴30~60 min。再加入20 μl Proteinase K溶液，震荡混匀。56°C水浴30 min至细胞完全裂解。
?水浴过程中，每10分钟颠倒混匀一次，可促进样品裂解。混合液变澄清透明为裂解完全。如溶液未变澄清，说明样品裂解不彻底，应适当延长水浴时间，否则将可能降低DNA的得率或导致提取的DNA不纯。
?如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20 μl的RNase A（20 mg/ml），室温放置2-5分钟。
2. 加入200 μl Buffer BD，充分颠倒混匀。
?加入Buffer BD后，如有沉淀产生，可70°C水浴10分钟。
3. 加入200 μl的无水乙醇，充分颠倒混匀。
?加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响DNA的提取和应用。
4. 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2 min，再12,000 rpm室温离
心1 min，倒掉收集管中的废液。
5. 将吸附柱放回收集管，加入500 μl PW Solution，10,000 rpm离心30 s倒掉滤液。
?使用前注意溶液中是否按比例加入异丙醇。
6. 将吸附柱放回收集管，加入500 μl Wash Solution，10,000 rpm离心30 s倒掉滤液。
?使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。
7. 将吸附柱重新放回收集管中，于12,000 rpm室温离心2 min，离去残留的Wash Solution。
?将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的 Wash Solution，Wash Solution 的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。
8. 取出吸附柱，放入一个新的1.5 ml离心管中，加入50-100 μl CE Buffer静置3 min，12,000 rpm室温离心2 min，收集
DNA溶液。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20°C保存。
?如果想提高DNA的得率，可重复步骤8。