白芍综述

一、白芍化学成分研究

1、单萜及其苷类成分

1963 年, Shibata S. 等首次从白芍的根中分离得到一种蒎烷单萜苷,命名为芍药苷paeoni-florin [1 ] 。在1972年,Kaneda M.等用X射线单晶衍射法确定了它的结构,并同时分离得到了羟基芍药苷oxypaeoniflorin,苯甲酰芍药苷benzoylpaeoniflorin和白芍苷albiflorin[2 ] 。随后,Kitagawa等从牡丹皮中分离得到苯甲酰羟基芍药苷benzoyloxypaeoniflorin[3]，Murakami N.等分离出了氧化苯甲酰芍药苷[4 ] 等成分。

1981 年,日本学者Shimizu M.等从芍药的根中分离得到了新的单萜芍药苷元酮paeoniflorigenone [5] , 此外，Shibutani S. 也得到了gallotan-nin [6 ] 。1983 年,郎惠英等从白芍的根中分离得到两个单萜苷,分别是β-10-蒎烯基-β-巢菜苷（Z）-(1S,5R)-β-pinen-10-yl-β-vicianoside[7]和药新苷lactiflorin[8]。在1990年，Jin Yu等修正了郎惠英等人会出的该化合物的结构式[9]。1985 年, Hayashi T 等人从芍药根中分离得到Paeonilacto-neA、B和C[10 ] 。20世纪90年代初, Kadota S.等人又得到一种新的类萜palbinone[11] ,并采用2D-NMR技术确定了它的结构。1996年日本学者Murakami N. 等人从日本芍药根甲醇提取物中分离得到了一种具有生物活性的单萜苷6-O-β-D-glucopyranosyl-lactinolide和两个新的单萜lactinolide. paeonilactinone以及新的单萜苷1-O-β-D-gluc-opyranosyl-paeonisuffrone[4 ]。

2002年，张晓燕等[12]从白芍根中分离得到一种新的单萜苷类化合物，并命名为白芍苷R1 albiflorin R1。

2、三萜及其苷类化合物

1995年,Ikuta A.等首次报道了从芍药中分离的三萜类化合物[13]：11α,12α-epoxy-3β,23-di-hydroxyolean-28,13β-olide. 3β-hydroxy-11α,12α-epoxy-olean-28-13β-olide. 3β-hydroxy-11-oxo-olean-12-en-28-oicacid.oleanolicaeid.hederagenin. Betulinicacid. 23-hy-droxybetulinicacid. 30-norhederagenin。

1997 年,Kamiya K.等从白芍中分得一个新的三萜类化合物[14] :11α,12α-epoxy-3β,23-dihydroxy-30-norolean-20-en-28. 13β-olide[9 ],同时还报道了6个其他的三萜.分别是oleanolic aeid. Hederagenin. 11α,12α-epoxy-3β,23-dihydroxyolean-28,13β-olide. 30-norhederagenin. 3β-hydroxyolean-12-en-28-al. betulinic acid。

3、黄酮及其苷类化合物

1997年K.Kamiya等从芍药中分离得到2个黄酮类化合物，分别是：kaempferol-3-O-β-D-glucoside和Kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucoside。[15]

4、鞣质类

1980年，Nishizawa等从芍药根中分离得到了

没食子酰鞣质类化合物（penta-,hexa-,hepta-,octa-,nona-,and decagalloylglucose）,1983年，他们用13C-NMR的方法确定了其中的1,2,3,6-O-四没食子酰基葡萄糖和1，2，3，4，6-O-五没食子酰基葡萄糖（1，2，3，6-tetra-和1，2，3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glu-cose)的结构。

1998年，张继振等[16]从杭白芍中分离得到β-谷甾醇、没食子酸、苯甲酸等化合物，其中，没食子酸是首次从白芍中分得。

5、多糖

1993年，Tomoda等[17]从白芍中分离得到了2个具有免疫活性的多糖SA和SB。1994年，他们又从白芍中分离得到了另一个酸性多糖PA[18]。

二、白芍药理

近年来白芍及其化学成分的抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、胃肠道疾病、

护肝和心血管疾病等的药理研究已取得显著进展。以下就白芍的现代药理研究做一简要概述。

1 镇痛、镇静、抗惊厥作用

高崇凯等[19] 用TGP 粉针剂100~ 300mg/ ( kg d) 静脉滴注可显著减少醋酸引起的小鼠扭体次数, 揭示该药具有镇痛作用。王永祥等[20] 利用大鼠热板反应和扭体反应检测TGP 对痛觉的影响, 发现TGP 在一定范围内呈剂量依赖性抑制小鼠扭体和嘶叫, 且该作用不能被纳洛酮阻断,提示其镇痛作用可能与吗啡受体无关。而TGP 对白细胞介素- 2 的抑制作用, 可能参与其镇痛机制。Kobayashi M等[21] 通过动物实验证实, 白芍有抗胆碱能作用, 因而具有止功效。AGP呈剂量依赖性抑制小鼠扭体、嘶叫、热板反应和延长大鼠热板反应潜伏期, 作用高峰在小时, 并对吗啡、可乐定抑制小鼠扭体反应有协同作用[22]〕。芍药苷与甘草的甲醇提取液FM100，在镇痛方面表现为协同作用[23] 〕, 与甘草甜素合用对离体小鼠隔神经肌标本呈阻断作用, 而二者任一单独应用都无此作用。国内动物实验研究证实TGP 具有抗惊厥作用。张艳等[24] 采用最大电休克发作法、士的宁惊厥法和戊血氮最小阈发作法, 观察TGP 对动物惊厥的影响。实验结果表明, TGP 呈剂量依赖性对抗小鼠的最大电休克发作, TGP[ 60~ 100mg/ ( kg d) , ig] 能对抗士的宁引起的小鼠和大鼠的惊厥。TGP[ 40~ 80 mg / ( kg d) , ig] 对小鼠的戊血氮最小阈发作无影响。TGP[ 40~ 80 mg/ ( kg d) , ig] 对小鼠最大电休克发作的作用高峰时间在0.5~ 1.5h 之间。白芍对戊四氮、士的宁诱发的惊厥均有对抗作用[25]。

2 抗炎作用

TGP 粉针剂50~ 150mg/ ( kg d) 静脉滴注可明显抑制角叉菜胶引起的大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿的形成, 并对佐剂性关节炎有明显的预防和治疗作用; 100~ 300mg/ ( kg d) 静脉滴注可显著抑制小鼠耳二甲苯所致的炎症, 揭示该药对急性、慢性和免疫性炎症均有抑制作用[26] 。进一步发现, 松果腺切除大鼠角叉菜胶致炎前5d, 每日给予TGP50mg/ kg 可以显著抑制松果腺切除引起的大鼠足爪的过度肿胀, 且与褪黑素有协调作用, 其作用机制可能与TGP 抑制炎症局部致炎因子, 如前列腺素E2 白三烯B4 的合成有关。周强等[27] 综述说明TGP 对白三烯B4 前列腺素E2 和一氧化氮的抑制作用可能参与TGP 的抗炎机制。近期, 魏伟等人对TGP 对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞的作用及机制进行了系列研究[28- 29] , 结果发现, TGP 能有效改善胶原性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构的变化, 并抑制其过度增殖反应和产生白细胞介素- 1、干扰素和前列腺素E2 的水平。表明TGP 对胶原性关节炎大鼠功能亢进的滑膜细胞具有明显的抑制作用, 其作用机制可能与其抑制滑膜细胞的过度增殖和分泌能力有关。通过检测滑膜组织Bcl- 2、Bax蛋白的表达, 该项研究还发现, Bcl- 2、Bax 参与胶原性关节炎的发病过程, TGP 可下调滑膜组织中Bcl- 2 表达、上调Bax 表达及降低Bcl- 2/ Bax 的比值, 这可能也是其治疗胶原性关节炎的机制之一。

3 在免疫反应中的作用

白芍水煎剂对巨噬细胞功能有明显的促进作用。50%白芍水煎剂给小鼠胃饲喂0. 8ml/ 只/ 天,连续5 天, 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数均较对照组有明显提高[30] 。白芍总甙(TGP) 每天以40mg/ kg 剂量给小鼠灌胃, 连续3 天,也能促进小鼠腹腔巨噬细胞

的吞噬功能。鲁米诺化学发光试验证明, 白芍总甙在0. 09~ 2. 25mg/ L 范围内浓度可依赖

性地增加腹腔巨噬细胞( PM) 的LDCL( 鲁米诺依赖的化学发光) 强度。当TGP 浓度增至11. 25mg/ L 时CL 降低, 量效曲线呈钟罩形趋势, 提示白芍总甙LDCL 的影响有双向作用[31, 32] 。研究表明, 白芍总甙100mg / L 对大鼠腹腔巨噬细胞产生白三烯B4 的抑制作用与同剂量的非甾体抗炎药氟灭酸相当, 但作用较缓慢。TGP0. 001 ~100mg/ L 剂量可依赖性地抑制白三烯B4 产生, 其50%抑制率( IG50) 为0. 66mg/ L。提示TGP 的抗炎和免疫调节作用可能与其影响的白三烯B4 的产生有关[33] 。白芍水煎剂对细胞免疫功能有一定的调节作用。白芍水煎液可拮抗环磷酰胺对外周血T 淋巴细胞的抑制作用, 使之恢复正常水平, 表明白芍可使处于低下状态的细胞免疫功能恢复正常。TGP 既对腹腔巨噬细胞的吞噬功能有调节作用; 还有使正常小鼠迟发型超敏反应增强的作用。另据报道, T GP( 0. 04mg/ L ) 可促进体外刀豆素A时间依赖地诱生L3T4 细胞和Lyt - 2+ ( Ts/ c) 细胞,并分别拮抗环孢霉素A 抑制T h 细胞诱生和左旋咪唑抑制Ts 细胞诱生的作用。提示TGP 促进不同淋巴细胞亚群诱生有明显的机能依赖性特征。试验提示, TGP 小鼠脾淋巴细胞ConA 增殖反应和体外抗诱生呈现浓度依赖性双向作用, 可能与其浓度体依赖性改变L3T4+ / Ly t- 2+ 细胞比值有关。低浓度T GP 促进ConA 增殖反应和Th 细胞诱生可能是经激活巨噬细胞而实现的。应用体内体外诱导特异性与非特异性T 调节细胞模型和MCAbs 直接检测了T 细胞亚群的方法。观察了TGP 对T 细胞的作用,结果显示, TGP 在体内外不仅可促进特异性T 调节细胞的诱导, 亦可增加非特异性T 调节细胞的诱导。提示这可能是发挥免疫调节作用的基础[34~ 37] 。白细胞介素是一类参与风湿性关节炎的重要细胞因子, 梁军山等采用小鼠胸腺细胞增殖法检测了IL- 1 的条件及TGP 对其产生的影响进行探讨。结果表明, 脂多糖( LPS) 诱导小鼠胸腺M 产生的最佳浓度8mg / L, T GP 可依赖性地增加IL- 1 的产生, 但高浓度TGP( 0. 25~ 125mg/ L) 时, IL- 1 的产生显著降低, 量效关系呈曲线罩形趋势, 提示TGP 对IL- 1 的产生具有双向作用[38] 。

4 对肝脏的保护作用

白芍是肝炎及肝硬化中医治疗的重要组方之一, 近年来对其保肝作用的研究逐渐增多, 戴俐明等[39] 应用四氯化碳诱导的小鼠实验性肝炎动物模型, 观察TGP 对实验性肝炎的保护作用。结果发现TGP( 20mg / kg) 连续7d, 腹腔注射的预防给药可显著改善小鼠肝损伤后的血清丙氨酸转氨酶升高, 血清蛋白下降及肝糖原含量降低, 并使形态学上的肝细胞变性和坏死得到明显的改善和恢复。同时超微结构上肝细胞内线粒体的肿胀、内浆网的空泡变性、溶酶体的脱落也得到明显改善。TGP 对肝癌细胞生长有抑制作用, 王世宏等[40] 采用四甲基偶氮唑盐法检测TGP 对人肝癌细胞株增殖的影响, 并应用荧光显微镜观察药物作用后的细胞形态, 发现TGP( 0.5~ 2.5g/ L) 能抑制人肝癌细胞株细胞生长,且呈浓度依赖性; TGP( 1. 0、1.5g/ L) 分别作用72h 后, 人肝癌细胞株细胞出现体积缩小, 荧光染色增强, 胞核或胞质中可见致密浓染的块状或颗粒状黄绿色荧光染色, 说明TGP在体外能够抑制人肝癌细胞株的增殖, 并能诱导细胞凋亡。

5 对肾的保护作用

近期研究发现TGP 有肾保护作用[ 41] 。采用胃肠道综合免疫方法建立大鼠肾小球肾炎模型, 以不同剂量的TGP干预, 以雷公藤多苷为对照, 观察对大鼠蛋白尿、血生化指标以及肾组织形态学改变的影响, 结果发现模型组大鼠尿蛋白增加, 血肌酐和尿素氮升高, 血浆总蛋白和白蛋白下降, 肾小球系膜细胞中至重度增生, 系膜基质聚积。灌胃给予TGP 干预4 周后, 给药组的系膜细胞增生、基质聚积减少, 大鼠的蛋白尿减轻, 血肌酐和尿素氮下降, 表明TGP 可保护肾小球肾炎大鼠的肾功能, 部分逆转受损的肾小球病理改变。

6 对心脑血管系统的作用

白芍水溶物可明显延长异丙肾上腺素所致心肌缺氧的存活时间, 对抗由垂体后叶素引起的大鼠心电图变化, 增加小鼠心肌对86Rb 的摄取量, 从而增加小鼠心肌的营养性血流量[ 42, 43] 。TGP 能使离体兔耳血管扩张, 分钟内的滴数和容量( 毫升数) 均增加。TGP 本身对离体兔主动脉条无明显作用, 但能显著地增加NA 对兔动脉条的收缩作用。使兔舒张压升高、d p/ dtmax 增加及心率减慢; 酚妥拉明对其升压现象无阻断作用。此外, 它还有增强NA 的升压作用, 尤以收缩压更为明显。

7 骨骼肌、平滑肌的作用

(1) 对子宫平滑肌的作用

芍药对子宫具有特异性作用, 其提取物对小鼠离体子宫运动, 低浓度时呈兴奋、高浓度时呈抑制作用, 且能对抗乙酞胆碱、组织胺引起的收缩。芍药贰能明显抑制催产素引起的子宫收缩[44,45]，但也有报道（TGP）可增强催产素引起的子宫收缩[46]。

(2) 对肠平滑肌的作用

芍药苷以及芍药的浸出液对豚鼠离体小肠有抑制自发收缩、降低紧张性的作用。后者低浓度时对家兔离体肠管亦呈抑制作用, 而高浓度表现出先兴奋、后抑制的效应, 可拮抗氯化钡引起的兔肠收缩加强, 抑制由肾上腺素引起的肠管活动[47，48]。但亦有相反报道, 如白芍生品及五种炮制品均可使离体兔肠自发性收缩活动幅度加大[49] 〕。可明显增强乙酞胆碱引起的豚鼠离体回肠收缩, 亦可增强组织胺引起的收缩反应[50]。

(3) 对支气管平滑肌的作用

芍药对发作时的支气管平滑肌痉挛有解痉作用。芍药试可使豚鼠气管扩张而具镇咳作用。芍药中的配糖体能扩张上拨鼠的气管。

(4) 对骨骼肌的作用

芍药配质酮能够依赖性抑制间接刺激骨骼肌所致颤搐反应, 其作用机理为去极化型, 其对神经肌肉接合部位的阻断作用可被甘草皂苷明显增强。

8 其他作用

对睡眠节律的影响[51]TGP 50mg/ ( kg d) , ig 连续7 d, 可延长正常大鼠慢波睡眠的持续时间, 并能使咖啡因诱导的失眠大鼠, 睡眠各参数恢复到接近正常水平。还可明显延长游泳大鼠慢波睡眠和异相睡眠的总时间, 提示TGP 可改善不同功能状态下的大鼠睡眠。

抗应激作用实验研究表明, 从亳白芍提取出的TGP ( 5 ~40mg/ kg) 腹腔注射呈剂量依赖性延长小鼠常压缺氧存活时间; 白芍提取物能提高动物对高温刺激的耐受力。

三、白芍中有效成分测定方法

中药白芍中化学成分复杂，研究也较多，芍药苷是白芍的主要成分，含量测定也多以芍药苷为主要事实成分。其中2000版和2005版《中国药典》对芍药苷的含量测定方法都作出了规定[52]。2000年版和2005年版中国药典采用超声法提取白芍，通过实验发现2000年版的方法提取不完全，2005年版的方法比回流法的略低，且两版药典的色谱条件下，色谱峰型均不太好 (不对称)，2000年版药典峰型呈前延峰，2005年版药典呈拖尾峰。[53]2000版中规定其芍药昔的含量测定方法为采用甲醇超声提取，HPI.C法测定，流动相为甲醇一0.05mol/L磷酸二氢钾溶液一醋酸一异丙醇。在实验过程中我们发现甲醇对芍药昔提取效率较低，测定结果偏低;流动相复杂，流动相组分中含盐易堵塞色谱柱和通道。[54]

目前针对药典规定的不足人们作出了不少研究，测定方法主要有高效液相色谱法，薄层扫描法，毛细管电泳法，其中以高效液相色谱法应用最广泛，使用频率最高，研究也较为深入。

高效液相色谱法(HPLC法)具有分离度高,分析速度快,应用范围广,检测灵敏度高,流动相选择范围宽,流出组分易收集,色谱柱可反复使用等优点。常用的色谱柱为C18分析柱。

但其不同的提取方法对芍药昔提取量也有影响:目前最常用的三种方法为超声波提取法、索氏提取法和回流提取法。高海等[55]用该法对16份白芍药材中芍药苷含量进行分析考察,得出白芍中芍药苷的平均含量为0.93%,且试验表明:以甲醇浸泡白芍4h,再经超声波处理30min,比无水乙醇浸泡12h提取率提高2倍。聂慧芳[56]用超声波提取法按现行2000版一部白芍项下条件操作，即取药材粉末1g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇80Inl，浸泡4小时，超声提取30而n取出，放冷后以甲醇定容至100ml，备用;索氏提取法取药材粉末1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80ml提取4小时，提取液放冷后以甲醇定容至100ml，备用;回流提取法则取药材粉末烤，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇即耐回流提取4小时，提取液以甲醇定容至100ml，备用。分别吸取三种方法所得的提取液，以0.45μ的滤膜滤过，弃去初滤液，精密吸取上述三种续滤液各10μl尽，注入液相色谱仪，结果表明回流提取法的芍药昔提取量远高于其他两种提取方法。

不同的HPLC条件对测定结果也有一定影响。刘玉红等[57]以苯甲酸为对照品,通过碱水解后,采用LUNAC18色谱柱,流动相为甲醇-0.05mol/ L磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4),检测波长为230nm的HPLC法对白芍提取物中的白芍总苷进行含量测定,平均回收率为98.2%,RSD为 2.7%(n=5)。黄夏敏等[58]采用色谱柱为SpherisorbC18,流动相为乙腈-水(13∶87)的HPLC法结合生产工艺,分步跟踪检测了白芍在中成药生产过程中芍药苷的含量变化,得出芍药苷下降的主要原因是生产过程中受热破坏所致。林庆义等[59]用色谱柱为Turner C18,流动相为甲醇-水(40∶60)的HPLC法对白芍的提取工艺条件进行了研究,研究结果表明:超声波提取可提高芍药苷的提出率,且缩短提取时间。

另外,由于中药成方制剂成分较复杂,金芳等[60]先采用大孔树脂(DA-201)吸附样品,以水、10%乙醇洗脱除去干扰成分,收集50%乙醇洗脱液,再用HPLC法测定芍药苷的含量。

杨兰英等[61]在测定中成药肝络欣丸中,采用色谱柱为Varian KYWG,流动相为乙腈-0.05mol/ L磷酸二氢钾(15∶85),检测波长为230nm的HPLC法。通过对甲醇、水、50%甲醇3种溶媒,超声波处理与热回流提取,聚酰胺小柱及D101大孔树脂小柱除杂的对比实验,确定了以50%甲醇为溶媒,超声波提取及D101大孔树酯除杂质的供试品制备方法

其余两种方法由于应用不多，简单介绍如下

薄层扫描法也是常用的芍药苷含量测定方法之一。该法快速、灵敏,但其精密度仍不甚理想。赵亚男等[62]用该法对亳白芍不同生长期、不同规格、不同加工品的质量进行了研究,对其主要成分芍药苷的含量进行了定量分析,实验表明:2年生亳白芍含芍药苷量最高,随着生长期的增大,芍药苷的含量呈现下降趋势;不同规格的白芍中花片芍药苷含量最高;不同加工品中,以带皮者含量最高。侯江雁等[63]对不同炮制品中芍药苷含量变化进行了研究,采用薄层板为硅胶G254板,展开系统为氯仿-甲醇-乙酸乙酯(8∶2∶1),双波长反射式锯齿扫描,λS=230nm,λR=370nm。实验表明白芍中芍药苷的含量与炮制方法的关系为:生品>麸炒品>醋炒品>炒黄品>炒焦品>酒炒品。彭百承[64]采用双波长薄层扫描法对不同炮制品中芍药苷的含量进行测定,结果发现芍药苷的含量:生

品>麸制品>酒麸制品>炒制品>盐制品>酒制品>醋制品>土制品>煨制品>焦制品>制炭

品,炮制后芍药苷含量均有所下降,降低幅度不一。

毛细管电泳法是近年来使用的新检验技术。与HPLC法比较,它具有高效,快速,进样体积小,溶剂消耗少和抗污染能力强等特点,对中药质量评定和鉴别提供了一种快速、准确的检测

方法。杨更亮等[65]利用胶束毛细管电泳法(EMCC)测定白芍及其炮制品中芍药苷的含量,以30mmol/ L磷酸盐缓冲液(NaH2PO4- Na2HPO4)中含20mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)表面活性剂作为电解质(pH=6.85),紫外检测波长254nm。结果显示白芍苷线性关系良好(r=0.9989),理论塔板数达到46 000。实验认为炮制后的芍药苷含量均有所下降。陈勇川等[66]采用高效毛细管电泳法测定芍药苷的含量。测试条件:运用缓冲液50mmol/ L硼砂缓冲液(pH=10.6),操作电压20kV;检测波长230nm。结果表明芍药苷线性范围为0.0625~1.0mg/ml,r=0.9995,回收率为99.07%。日内和日间精密度分别为1.61%和3.15%,测定结果与HPLC法一致。实验中HPCE理论塔板数可达到100 000以上,分离效率大大高于传统的HPLC法。由方法学考察结果可见,该法精密度高,稳定性好,重现性好。

四、白芍中某些部位提取方法

白芍的提取过程，系指溶剂进入药材细胞组织溶解其有效成分后变成浸出液的全过程。它的实质就是溶质由药材固相转移到液相中的传质过程。系化扩散原理为基础，一般药材浸出过程包括下列相互联系的几个阶段：浸润、渗透、解吸、溶解、扩散、几个阶段。

白芍提取方法的选择。常用方法有：超声波提取法、索氏提取法和回流提取法。聂惠芳【67】研究了不同提取方法对芍药苷提取量的影响。首先考察了最常用的三种方法：超声波提取法、索氏提取法和回流提取法。其中，超声波提取法按现行2000版一部白芍项下条件操作，即取药材粉末1g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇80ml，浸泡4小时，超声提取30arin取出，放冷后以甲醇定容至100ml，备用；索氏提取法取药材粉末1异，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80ml提取4小时，提取液放冷后以甲醇定容至100ml，备用；回流提取法则取药材粉末1g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇80ml回流提取4小时，提取液以甲醇定容至100nrl，备用。分别吸取三种方法所得的提取液，以0．45￡t 的滤膜滤过，弃去初滤液，精密吸取上述三种续滤液各10 ，注人液相色谱仪，结果见表3。

由表可知，回流提取法的芍药苷提取量远高于其他两种提取方法，因而选择回流提取法。。

提取溶剂选择。取白芍生药粉碎过120目筛，取细粉1．25g，精密称定。别加入一定体积的9种不同溶剂超声提取30min。静置过夜，滤过，定容至50mL，离心(12000r·min )后过滤，准确吸取滤液5 L，进样分析芍药苷含量(见表2)。

结果表明：甲醇和乙醇作溶剂的提取率较高.【68】

芍药苷回流提取条件的考察：根据回流提取影响因素，设计二因素三水平试验。按因素水平表设计9份试验，取白芍粉末1g，精密称定，置于锥形瓶中，加甲醇提取2次，每次提

取后以甲醇10ml洗涤药渣，洗涤液并入提取液中，合并两次提取液，以甲醇定容至100M，分别精密吸取各提取液5／d．注人液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果见表5。

由表5可知，随提取时间延长，芍药苷提得率略显升高，但无统计学意义。

提取次数对芍药苷提取量的影响。

精密称取白芍粉末1g，置锥形瓶中，加甲醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液以甲醇定容至100rtrl，备用。药渣再以甲醇5(hnl回流提取1小时，滤过，滤液回收甲醇定容至lOml。备用。药渣再以甲醇50ml回流提取1小时，滤过，滤液回收甲醇定容至10ml，备用。分别吸取三次提取液各一定量，注人液相色谱仪，测定峰面积，并计算芍药苷含量，结果见表。

提取两次时芍药苷的提取率已达98％，故选择撮两次即可。

正交实验法筛选最佳提取工艺

王爽,侯立强【69】采用正交试验进行了醇提取工艺的研究。考察不同加醇量、提取时间和提取次数对白芍药材中芍药苷提取率的影响。

微波提取法微波提取技术具有快速、溶剂用量少、提取率高、成本低、质量好等许多优点，是天然产物提取中一种非常有发展潜力的新型技术。此外与超临界等新型提取方法相比，它设备简单、易于操作、投资小、适用面广，因此微波提取技术在天然植物尤其是中药提取中

有良好的应用前景。

采用单因素结合正交设计法,优选出65%乙醇为提取溶媒,进一步考察了微波功率、微波辐射时间、乙醇体积分数及料液比4个因素,用紫外可见分光光度法测定乌头总生物碱,采用HPLC 法测定芍药苷,并以其量及浸膏得率作为评价指标。结果以65%乙醇为提取溶媒,在微波功率800 W,微波辐射时间为0.5 h,固液比为1∶10时乌头总生物碱和芍药苷的提取量最高且浸膏得率最低。结论微波提取时间短,有效成分提取率高,此方法是一种有发展潜力的工艺。【70】

五、芍药的炮制

中药白芍有多种炮制方法，酒白芍：取白芍片加黄酒拌匀, 用文火炒成, 微黄色时, 出锅。土白芍：取白土炒热, 将白芍片倒入,炒成微黄色时, 出锅、摊开、筛去白土、晾凉。醋白芍：取白芍片加醋拌匀, 用文火炒成微黄色时, 出锅、摊开、晾凉。每100kg 白芍片用醋10kg。焦白芍：将白芍片用武火炒成焦黄色时，出锅、摊开、晾凉。白芍炭：将白芍片用武火炒成表面焦黑色（存性）。喷洒清水少许, 出锅, 摊开, 晾凉。生白芍：除去杂质，按粗细分开，分别浸泡六七成透（4~5小时），捞出、润透，晾1~2小时，切片、摊开、晾干。炒白芍：用武火将锅炒热，撒入麸皮，俟发出浓烟时，取白芍片倒入，炒成微黄色时，出锅、筛去麸皮、摊开、晾晾。

不同的炮制方法具有不同的目的，白芍用不同的方法处理后其成分变化不同。

白芍具有多种化学成分, 如单萜类、三萜类、黄酮类化合物等[71]。白芍原药材中芍药苷含量最高, 生白芍、麸炒白芍、酒白芍、醋炒白芍、土炒白芍、焦白芍中含量逐渐减少[72]。薛建海应用薄层扫描法对白芍原药材、生白芍及麸炒、酒炒、土炒白芍、焦白芍中芍药苷含量作了比较, 结果白芍原药材0.65% , 生白芍0.44% , 麸炒白芍0. 36% , 酒炒白芍0.25% , 醋炒白芍0. 23% , 土炒白芍0. 14% , 焦白芍0. 16% [73] 。杨建国等报道, 芍药苷的煎出量与炮制方法的关系为生品> 麸炒品> 醋炒品, 炒黄品>炒焦品> 酒炒品[74]。孙秀梅等依据有关文献[75] 测定芍药苷含量的方法, 结果生品0. 317% , 清炒品0.162% , 麸炒品0. 198%, 酒炒品0.178% , 醋炒品0.185%。白芍经炮制后, 芍药苷含量均显著降低, 各炮制品中清炒品降低最多,麸炒品降低相对最小[76] 。殷玉生等就白芍生品、酒制品、醋制品及炒黄品中芍药苷的含量进行了定性定量比较。结果表明, 炒黄、酒制、醋制等炮制品中芍药苷的含量均高于生品, 尤以炒黄品中含量最高, 约为生品含量的3 倍[77] 。采用双波长薄层扫描法进行测定, 对白芍几种不同炮制品中芍药苷的含量进行测定, 结果: 芍药苷的含量: 生品>麸制品> 酒麸制品> 炒制品> 盐制品> 酒制品> 醋制品> 土制品> 煨制品> 焦制品> 制炭品[78] 。采用高效液相色谱法, 比较加工炮制后白芍不同饮片中芍药苷含量的影响, 结果表明, 白芍饮片经以炒制后其活性成分芍药苷均呈不同程度下降。芍药苷含量为生品> 麸制品> 炒制品>酒制品[79] 。

目前使用较多的方法是硫磺熏制法，硫熏法的目的有两个：1、防腐作用硫熏法是利用硫磺燃烧后产生了大量的二氧化硫，用于药材及饮片中解离成亚硫酸。亚硫酸具有还原性，显示漂白和防腐的作用。2、漂白作用亚硫酸在被氧化时，将着色物质还原，而呈现强烈的漂白作用。药材的褐变，多与氧化酶的活性有关，而亚硫酸是一种强还原剂，对氧化酶的活性有很强的抑制作用，防止酶促褐变，这有利于中药材的贮藏。褐变的另一原因是药材中的葡萄糖与氨基酸发生糖氨反应，反应产物为褐色。亚硫酸与葡萄糖能进行加成反应，其加成物不酮化，因此阻断了含羰基的化合物与氨基酸的缩合反应，进而防止了由糖氨反应所造成的非酶性褐变。硫磺熏制法虽然减少了芍药苷的损失，防止了霉烂，有利于贮藏运输，而且外观颜色也得到了极大的改善，增加了成品的色泽美感，但是硫磺熏制法存在一定的弊端。

一方面硫熏后的芍药入药后对人体造成不同程度的危害；另一方面，硫磺熏蒸对白芍中有效成分芍药苷的含量也有很大的影响。硫磺熏蒸时间对白芍中芍药苷含量影响的实验表明：以未经硫熏的白芍的芍药苷含量最高，且随硫磺熏蒸时间的增加芍药苷含量逐渐下降，如图1所示：【80】

随着白芍炮制研究的不断发展，白芍中芍药苷的提取还可以采用微波炉酒制白芍法进行提取，即在微波炉上中低火加热3min，即可得到最佳炮制白芍，成品外观质量优于传统法和烘法，且节约能源。其芍药苷的含量生品>微波加热品>烘品>传统品。表明白芍经过炮制后其主要成分芍药苷的含量有不同程度的降低，但是微波加热法降低的最少。【81】

除此之外，还可以借鉴食品膨化原理，采用PH—42型谷物膨化机对白芍进行膨化处理对白芍进行膨化炮制。对生白芍，炒白芍，酒白芍和进行膨化炮制后的进行TLC鉴别，方法：取白芍炮制品粉末各0.5g，分别加乙醇10ml，振摇5min，过滤蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷标准品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为标准品溶液。吸取上述溶液各10ul，分别点同一硅胶G薄层板上，以氯仿--乙酸乙酯—醋酸（12：15：3：0.6）为展开剂，展开，取出晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，热风吹至显色清晰，各样品和标准品在同一Rf值（0.33）处均显紫色斑点的数目、色泽、Rf值亦均匀相似，结果图2所示：

白芍膨化后质地松脆，硬度显著降低，有利于有效成分芍药苷的浸出，经药学实验后知，膨化白芍加水煮沸浓缩液与传统炮制品的抗炎镇痛作用相同。【82】

六、白芍与赤芍

白芍为毛茛科植物芍药Paeonia sterniana Fletcher in Journ.的干燥根，但易于与同属的植物赤芍混淆，赤芍为植物赤芍Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch 的干燥根。主要从以下方面对其进行鉴别：白芍的干燥根呈圆柱形，两端粗细近于相等，稍弯曲，长10～36cm，径约6～19 mm。表面暗褐色或暗棕色，粗糙，有横向凸起的皮孔及根痕，具粗而深的纵皱纹，手搓之则外皮易脱落，显出白色或淡棕色的皮层。质硬而脆，易折断。断面平坦，粉白色或黄白色，皮层窄，呈类粉红色，中央髓部小，本质部射线明显，有时具有裂隙。气微香，味微苦涩。以根条粗长，外皮易脱落，皱纹粗而深，断面白色，粉性大者为佳。而赤芍的鉴别如下：呈圆柱形，稍弯曲，长5～40cm,直径0.5～3cm。表面棕褐色，粗糙，有纵沟及皱纹，并有须根痕及横向凸起的皮孔，有的外皮易脱落。质硬而脆，易折断，断面粉白色或粉红色，皮部窄，木部放射状纹理明显，有的有裂隙。气微香，味微苦、酸涩。只有正确的鉴定出药材才能更好的进行药理药效的研究。

白芍和赤芍的炮制方法有所差别——白芍的炮制品有：生白芍、酒白芍、炒白芍，白芍的炮制品：赤芍、炒赤芍、酒赤芍。现代化学研究和药理研究表明白芍和赤芍的化学成分和药理作用也有所不同：白芍含有芍药甙、牡丹酚、芍药花甙，亦含有苯甲酰芍药甙、芍药内酯甙、氧化芍药甙、芍药吉酮．尚含有苯甲酸、β-谷甾醇、没食子鞣质等。此外还含有挥发油、脂肪油、树脂、糖、淀粉、黏液质、蛋白质和三萜类成分。赤芍中含芍药甙、芍药内酯甙、氧化芍药甙、苯甲酰芍药甙、芍药吉酮、芍药新甙、胡萝卜甙．亦含有赤芍精（d-儿茶精,）及没食子鞣质，并分离出苯甲酸．尚含挥发油、脂肪油、树脂、糖、淀粉、黏液质、蛋白质等．由于相似的化学成分的异同，使得它们的活性成分也有相似和不同之处。现代药理研究表明：白芍的药理作用有:对中枢神经系统有抑制作用、芍药甙对狗的冠状血管及后肢血管有扩张作用、芍药甙能抑制大鼠的胃液分泌，并能预防发生大鼠应激性溃疡病、对平滑肌的作用、抗炎作用、抗肝损伤、对免疫的影响。赤芍的药理作用:有抗血栓形成作用、抗血小板聚集作用、降血脂和抗动脉硬化作用、对心血管系统的影响、保肝作用等。

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