空气细菌数量的检测
空气细菌数量的检测
引言：与外界相通的各个空间的空气中均有大量的细菌存在，且种类繁多，而这些微生物中绝大多数对我们人体来讲都是有益的，但其中也有一部分微生物往往是实验室各种实验材料、实验菌种污染的祸根，也是引起人类各种传染性疾病的祸根。因此，对空气进行细菌学检验，目的在于调查气溶胶扩散的范围、滞留时间及浓度；确定空气中病原体种类；研究呼吸道传染病传播机制及气雾免疫的应用；考核空气卫生学及消毒效果，树立“处处有菌”和严格的消毒与灭菌观念。而处于学院的我们来说，学院空气质量的好坏与师生们的生活与学习息息相关，通过沉降法检测细菌总数来判断空气中的卫生状况与污染程度并了解空气质量显得至关重要。
材料与方法：
（一）仪器与材料
1、普通营养琼脂平板（由中山大学新华学院医学实验室提供）
2、恒温培养箱（中山大学新华学院医学实验室提供）
（二）采样地点
按照《室内空气质量标准》的要求进行采样布点，选取新华学院的图书馆、西门口、校道、教学楼以及微生物实验室。
（三）采样时间及方法
采样时间为2014年9月1日下午两到四点，采样天气为晴朗无雨，
采样方法为自然沉降法。沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下降的原理，将平板平放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37摄氏度孵育24小时，计算菌落数。
实验方法：
a.取用普通营养琼脂平板5个（直径7cm），在皿底做上标记；
b.采用自然沉降法收集细菌，采用地点为新华学院的各个指定地方。将平板打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴露于空气中20分钟，然后盖好。并注明采样的地点和暴露的时间；
c.平板放置于37℃的恒温培养箱培养24小时后取出后观察，计算出所生长的菌落数和数量。
（四）菌落数计算
按下列公式可得出空气中细菌总数。每立方米细菌数=50,000N/AT
A:所用平板面积（平方厘米）；T:平板暴露于空气中的时间（分钟为单位；N：平板上的菌落数
实验结果
使用实验室提供的营养琼脂平板，在学校各个地方收集空气中的细菌，培养空气中的细菌，并经过实验室的空气细菌培养24h后，得出以下数据：
样本号1
2
3
4
5
6
7
8 采样地点
图书馆
西门口
校道
微生物实验室厕
所
微生物实验室楼
梯
教学楼
微生物实验室
微生物实验室办
公室
采样时间/min
20
20
20
25
15
20
20
15
平板上菌落数
2
5
15
12
3
4
7
1、由上述数据可知校园内的空气质量较好；
2、各采样点的空气菌落对比：
校道>微生物实验室厕所>微生物实验室>西门口>教学楼>微生物实验室楼梯>图书馆>微生物实验室办公室。
3、由表格可知，微生物实验室办公室的菌落数为0，反应出空气中的细菌含量少。校道的菌落数最多，菌落数为15。
三讨论
1.细菌个体微小，常以微米为测量单位，必须借助光学显微镜放大上百倍甚至千倍才能看到。所以单纯用肉眼是看不出空气中的细菌含量。细菌生长繁殖需要各种营养成分和生长条件，水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等是细菌生长繁殖的必需条件，充足的营养物质、合适的酸碱度、合适的温度、合适的气体环境是细菌生长繁殖的必要条件。使用普通琼脂平板来培养从空气采集到的细菌，并检测空气里的细菌含量。
2.空气中并没有微生物生长繁殖的营养物质和充足的水分，还有日光中有害的紫外线的照射，因此空气不是微生物生存的良好场所，但一般的大气环境仍含有数量不少的细菌、霉菌和酵母菌等。这是由于土壤、水体、各种腐烂的有机物以及人和动植物体上的微生物，都可随着气流的运动被携带到空气中。微生物个体微小，能随空气流动到处传播，空气中的微生物种类与数量随条件不同变化较大，如有活跃人群之处比人少的地方微生物多，不洁的房间比清洁的房间多。
3.从上述表格的数据和图片来看，校道空气中的细菌含量最多，且细菌种类不一样，有白色的表面长毛的霉菌和金黄色的表面光滑的圆形的细菌，原因是校道每天的人流量最多，导致细菌种类多，加上校道两旁花草树木多，空气湿度大，利于细菌的传播。这种金黄色的细菌叫金黄色葡萄球菌，是一种常见的致病菌。微生物实验室的人流量很少，空气湿度低，不利于细菌的传播，所以难以采集到细菌。在厕所采集到的细菌经过培养，数目相对较多，原因是厕所空间小，空气不
流通，湿度大，温度适宜，而且厕所不干净，容易滋生细菌，如大肠杆菌，痢疾杆菌。
4.空气中含有的细菌是不是都会致病呢？不是的。人体有三道免疫防线，能够预防和清除入侵的病源微生物。只有人体免疫能力下降了，同时吸入空气里的致病菌，才会让病源菌趁虚而入，导致生病。
5.空气中的微生物主要有各种球菌，芽胞杆菌，产色素细菌以及对干燥和射线有抵抗力的真菌孢子等。空气中也可能有病原菌，如结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌等，犹其在医院及其周围。凡须进行空气消毒的场所（如手术室、病房、微生物实验室等），可采用紫外线杀菌、甲醛熏蒸的方法。
4.细菌的传播方式主要有：空气传播，粪口传播，体液传播等。其中，空气传播是最常见的传播方式。所以，空气中细菌含量的多少直接关系到人体健康。而学校作为学生学习的主要场所，校园里的空气质量在一定程度上对学生的健康发展有一定的影响，根据实验测量结果，学校应该加强和保持校内的空气质量，保障学生的健康发展。学生应尽量不要在人流多的地方停留，以保障自身的健康发展。
5.空气的是一种重要的疾病传播媒介，链球菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、等细菌会经飞沫进行传播，容易引发传染病。在医院，病人的排泄物和分泌物，如飞沫、痰液、浓汁和粪便等携带大量的微生物，可严重污染空气，影响患者疾病的转归。医院应该对空气进行经常性的卫生监督，加强消毒和灭菌，预防医院感染，使患者疾病早日转归。
建议：1）经常打开门窗通风，保持室内空气清新；
2）定期消毒空气，可采用消毒水等雾化消毒方法；
3）及时清理室内积水，防止细菌滋生；
4）提倡湿化清洁，减少尘埃飞扬。
细菌总数测定操作规程
细菌总数检测操作规程 1 原理 试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g（mL）试样中所含细菌总数。 2 试剂与仪器 2.1 所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器 2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 2.3 所用试剂和培养基 营养琼脂 取营养琼脂32.0g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 3、操作步骤 3.1配制0.85%生理盐水。 称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。 3.2三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关） 3.3将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121℃灭菌30min。（注意计算数量）3.4将枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。（1-3步需提前一天完成） 3.5对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。 3.6用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。 3.7另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支灭菌吸头。 3.8选择2个~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。 3.9稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀（从稀释试样到倾注培.
细菌总数的测定
细菌总数的测定 水与人类的生产活动和日常生活息息相关。经济建设的高速发展，往往会使生活用水的水源水受到水中有害有毒物质的污染；而生活污水、人、畜粪便会使甚或用水的水源水受到腐生性微生物的污染。被污染的水都不宜饮用。当水体中含大量的病原问生物是往往会引起传染病的发生，人体和动物体的肠道中大约有400多种细菌，虽然，其中的腐生菌进入水体不会引发人类的疾病，但随着粪便一起排除的致病菌，如霍乱弧菌、伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、阿米巴虫、脊髓灰质炎病毒和传染性感染病毒等致病性微生物，则会引发人体的肠道传染病。为保护人体健康，防止因水源水污染而造成的疾病发生和流行，必须对生活用水及其水源水进行严格的水中细菌学检查。 测定水样是否合乎引用标准，一般包括：水中细菌总数测定和大肠菌群测定。本实验以自来水和天然水为水样进行细菌总数的测定 一、实验目的 （1）学习水样的采取和水样中细菌总数测定的方法 （2）了解和掌握平板菌落计数的原则 二、试验原理 水中的细菌数可反映出水体被有机物污染的程度。细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高，本试验应用平板菌落计数来测定水样中的细菌总数。由于水中细菌的种属不一，它们对营养成分和生长条件的要求差别很大，不可能设计出一种培养基在同一固定的条件下，能满足水中所有细菌的营养要求使其都能生长繁殖，形成菌落。然而，肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在营养丰富的牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长，出现肉眼可见的菌落，虽然这样设计出来的水中细菌的总数实际上是一种近似值，但它基本上能代表水样中细菌的数量。故而水中的细菌总数的测定和计算是指：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，1ml水样，经37℃，24h培养后所生出来的总菌数（包括腐生和致病细菌），我国饮用水的 卫生学指标规定：在1ml自来水中细菌总数不得超过100个（1×102）。 三、试验材料和用具 （1）培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （2）用具灭菌三角烧杯（体积为50ml或100ml），具玻塞的试剂瓶（体 积为250ml，需灭菌），灭菌培养基（Ф=9cm ），灭菌吸管或灭菌的 塑料吸嘴，稀释水样用无菌水（在Ф16mm×160mm试管中加9ml 蒸馏水，灭菌），酒精 四、试验方法 （1）以无菌操作、用10倍稀释法稀释水样。 （2）用平皿倾注制备待测水样平皿。 五、实验内容 1、水样的采取 （1）自来水先将自来水龙头用火焰（酒精灯火用长柄镊子夹酒精棉球）灼烧2-3min灭菌，再开启水龙头水水流出5min。以灭菌三角烧杯接取水样，待测（为节约用水，自来水龙头一次灭菌后，试验者依次采取水样）。 （2）池塘水、河水或湖水应取距水面10-15cm的深层水样。先将已灭菌具玻
方法确认报告及原始记录空气微生物细菌总数
百度文库- 让每个人平等地提升自我 北京大学环境工程实验室 检测方法确认报告 检测项目空气微生物细菌总数的测定 确认时间确认地点环境大楼222室 检测方法?GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法 ?HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气中细菌总数的测定方法撞击法 方法类型?非标准方法 ?超出预定范围使用的标准方法?新增项目的标准方法 ?补充和修改过的标准方法 ?自编方法 方法验证形式?使用国家有证标准物质进行确认?与标准方法比较 ?不同人员或仪器比对 ?实验室间比对 方法实施细则空气微生物分析检测实施细则 方法验证结果符合标准要求，可在本实验室执行该标准。学术委员会意见 批准人签字：颁布实施日期：
北京大学环境工程实验室 检测方法确认原始记录表 年月日需确认的检测方法空气微生物细菌总数的测定 方法选用依据GB/T 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物细菌总数撞击法/自然沉降法 HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气 中细菌总数的测定方法撞击法 检测设备 采样用FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器； 生化培养箱培养 仪器主要工作参数FA-1型采样器采样流量min。生化培养箱温度设置36±1℃ 原始记录： 1. 试剂制备 琼脂培养基 （1）成分：A 蛋白胨10g，B 牛肉膏3g，C 氯化钠5g；D琼脂10-20g；E 蒸馏水1000mL。 （2）制备方法：将上述成分ABCE（即琼脂先不加）按比例混匀（可适当加热），用40 g/L NaOH和1:10 （体积比）HCl调节pH到（尽量避免回调），分装于500玻璃三角瓶中，每瓶装250 mL，然后分别加对应的琼脂粉-5 g，用8层纱布包住瓶口加上牛皮纸（或报纸）后用橡皮筋封好。放入高压蒸气灭菌器中kPa（121℃，151 b）20 min高压灭菌，储存于于冷暗处备用。 灭菌铝箔，裁剪比平皿大一些的铝箔，然后灭菌，烘干备用。 琼脂平皿 配制灭菌后的琼脂培养基趁热（50℃-55℃）倾倒平皿，每皿24-30mL（不可超过，以免造成距离采样器吸气孔太近。），生化培养箱37℃倒置培养24h，观察有无杂菌生长，选取无杂菌生长平皿备用。 配置75%酒精一酒精壶。镊子棉球和棉棒若干。 2. 采样及培养步骤 撞击法 检测人检测日期 校验人校验日期
紫外线照射与开窗通风对病室空气中细菌含量的对比研究
紫外线照射与开窗通风对病室空气中细菌含量的对比研究 标签：紫外线；细菌含量；开窗通风 中图分类号R187.4 文献标识码 A 文章编号1674-6805(2012)10-0131-01 空气是人类赖以生存的必要条件之一，清新的空气有利于人类的生存和健康，随着时代的发展人们越来越重视医院内感染预防与控制，医院这个特殊的环境，是病原菌与易感人群相对集中场所，如何有效地对医院病室空气进行净化，一直以来是人们关注的问题。目前，病房空气净化普遍使用紫外线照射，而紫外线照射的消毒效果受诸多因素影响，且存在对人体伤害等缺点[1]。因此，寻求一种便捷而有效的医院病室内空气净化方法是十分必要的。随着人们对室内空气净化观念有较大转变，认识到开窗通风可以保证病室内空气的卫生质量。 1 资料与方法 1.1 一般资料 病室选择：选择心内科、骨外科、呼吸内科、胸外科的普通病室，所有入选对象新病房楼病室病室面积为13.6 m2，旧病房楼病室为12 m2。患者出院后均清洁病室。分试验组(开窗通风组)和对照组(紫外线照射组)进行消毒及采样。实验组和对照组在病室选取上差异无统计学意义(P>0.05)。均于上午进行采样比较。 1.2 方法 1.2.1 消毒方法试验组采用开窗通风方法消毒；对照组采用紫外线照射方法消毒。紫外线照射均采用北京海淀空后高温负荷材料制造厂生产的活动紫外线车灯进行照射。 1.2.2 采样方法均于做完病室清洁半小时后消毒前、消毒30 min后、消毒停止后1 h、2 h、3 h 5个时间段采样。 1.2.3 细菌检测方法用直径9 cm营养琼脂平板，分别在房间内、中、外布3点，根据规定其采样高度在100~150 cm，打开皿盖，暴露5 min后立即关盖，置37 ℃温箱培养48 h，参照卫生部《消毒技术规范》计算细菌数[2]。对监测采样制定严格采样时间段及方法。每次采样分时间段两组同时进行。培养皿采用哥伦比亚营养琼脂平板(9 cm，温州康泰)。 1.3 实验室质量控制 对分析使用全部容器、量具清洗干净消毒后使用。每批检测样品在测定之前，必须使用标准品校准曲线。实验的设备和试剂均符合国际质量标准。
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g B牛肉膏 0.3g
菌落总数测定
菌落总数的测定 基础知识： 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每g（mL）检测样品所生长出来的细菌菌落总数。由于厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际其中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数、需氧菌数等。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生长过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。中国国家标准是国内常用的检验方法。 菌落总数测定的卫生学意义： 食品本身的新鲜程度 加工、贮存运输过程中是否受到污染 卫生学指标：食品中菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全 面的评价。 细菌在平板计数琼脂上的菌落特征蔓延菌在平板计数琼脂上的菌落特征方法来源：
GB 4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 1、范围 本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定。 2、术语和定义 菌落总数aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 3.2 冰箱：2℃~5℃。 3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。 3.4 天平：感量为0.1g。 3.5 无菌袋。 3.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。 3.7 无菌培养皿：直径90mm。 3.8 放大镜或/和菌落计数器。 4、培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基 按照称取23.5g培养基溶于1000mL蒸馏水的比例进行配置，分装到锥形瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2 0.85%无菌生理盐水 称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水。一般用1000mL锥形瓶配置，称取6.8g的氯化钠，加入800mL蒸馏水，121℃高压灭菌15min。
水中细菌总数的检测
水中细菌总数的检测 1. 实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2. 菌落总数standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 3. 培养基与试剂 2.1 营养琼脂成分 2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经10 3.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 4. 仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。 5. 样品采集 自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。 纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。 地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6. 检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1°C条件下连续培养48 h，进行菌落计数，即为1 ml水样中的菌落总数。 水源水：以无菌操作方法吸取1 ml充分混匀的水样，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:10稀释液。 吸取1:10稀释液1 ml，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。用灭菌吸管吸取1 ml未稀释的水样和2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，
环境空气中细菌总数和霉菌总数监测方法的研究[1]
收稿日期:2007208227 作者简介:翁建中(1953-),男,江苏苏州人,高级工程师. [29]段洪涛,张柏,宋开山等.查干湖叶绿素a 浓度高光谱定量模型研究[J ].环境科学,2006,27(3):5031～5071 [30]段洪涛,张柏等.长春市南湖富营养化高光谱遥感监 测模型[J ].湖泊科学,2005,17(3):282～2881 [31]李云梅,黄家柱等.湖泊富营养化状态的地面高光谱 遥感评价[J ].环境科学,2006,(2):1770～17751 环境空气中细菌总数和霉菌总数监测方法的研究 翁建中,徐恒省,王亚超,赵凌宇 (苏州市环境监测中心站, 江苏苏州215004) 摘 要:分别对环境空气中细菌和霉菌监测的不同采样仪器、采样方式、培养条件的结果进行对比分析,并进行差异显著性检验。结果表明,FA -1型和FA -2型采样器的采样结果无显著性差异;细菌和霉菌监测的采样时间以5min 为最佳;细菌的培养以48h 、37℃±1℃为优,霉菌的培养为96h 、28℃±1℃为宜;对实验结果进行精密度检验,均达到了质量控制的要求。 关键词:监测方法;空气;微生物;细菌总数;霉菌总数 中图分类号:X 83012 文献标识码:A 文章编号:100226002(2008)0420028203 Study on Monitoring Method for Detecting Total B acteria and Mildew in the Air WE NGJian 2zhong ,et al (Suzhou Environmental M onitoring Centre ,Suzhou 215004,China ) Abstract :The com parative results of the tests were analyzed and contrasted in sam plers ,sam pling and culture methods of bacteria and mildew in the air.The results of significance test results indicated that no differences in air microorganism capture function of FA -1and FA -2sam plers.The suitable sam pling time was 5minutes ,culture tem perature for Bacteria 37℃±1℃and for mildew 28℃±1℃,culture time for bacteria 48hours and for mildew 96hours.The accuracy examinations of the tests meet the quality control requirements.K ey w ords :M onitoring method ;Air ;M icroorganism ;T otal bacteria ;T otal mildew 空气中的微生物数目、菌谱是评价环境空气质量及其危害人体健康程度的重要指标,因此对 空气中的微生物进行监测就显得尤为重要[1-3] 。目前,在采样方法、使用仪器、采样时间及体积、培养时间和温度等方面的室外空气微生物监测标准 方法尚不统一[4-9] ,对空气微生物监测方法开展研究很有必要。2005年3月至2006年3月对空气中细菌和霉菌的监测方法和实验室质量保证方面进行了分析,为建立可靠和实用的空气细菌和霉菌监测方法进行了尝试。 1 实验部分 111 仪器与试剂 FA -1型和FA -2型安德森(Andersen )固体 撞击式采样器;营养琼脂培养基;马丁霉菌培养基。 112 样品采集 悬浮在空气中的菌体撞击到各级营养平板上,分别用两种采样器在监测点采集空气微生物。采样器在采集前用酒精灯火焰灭菌,在采样5min 或10min 后及时关闭采样器(精确到秒)。样品采 集后应及时、安全送至实验室[4,9] 。113 微生物培养 空气微生物采样后分别在28℃和37℃恒温条件下培养。细菌在37℃±1℃连续培养4d ,每24h 记录1次结果。霉菌在28℃±1℃连续培养5d ,每24h 检测和记录1次结果。用菌落计数器或放大镜立即进行平皿菌落的计数[10] 。114 方法 运用SPSS1115处理软件对经不同采样仪器、采样方法、微生物的培养条件获得的结果进行t 检验,比较不同处理方式的微生物结果的差异性。 第24卷 第4期2008年8月 中 国 环 境 监 测 Environmental M onitoring in China V ol.24 N o.4 Aug.2008
沉降法检测空气中微生物数量
环境科学与工程学院 生物工程10（1）班 叶智源 3110007848 实验二 沉降法检测空气中微生物数量 （一） 实验目的 1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物 2．了解空气中微生物的分布状况 （二）实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。空气中也不例外。虽然空气不是微生物栖息的良好环境。但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。（三)实验器材 1． 试剂 牛肉蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 5.0g, 蛋白胨 10.0g ，NaCl 5g, 水1000ml ，pH 7.2~7.4 马铃薯培养基配方： 马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方： 淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品 高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等 （四）实验方法 1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。 2．暴露取样 在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。 3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。 4.计算1m 3 空气中微生物的数目 奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2 的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。 X= X ：每m 3 空气中的细菌数 N ×100×100 πｒ2
3M细菌总数测试片操作以及判读
3M细菌总数测试片操作以及判读一、测试细菌总数操作方法 1、未开封时，冷 藏于≤8℃（≤46 ℉），并在保存期 内用完，高温度时， 凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2、已开封的，将封口以胶带封紧。 3、保存再封的袋 于≤25℃（≤77 ℉）和温度<5 0％，不要冷藏已 开启的包装袋，并于一个月内使用完。 4、制备1：10和更 大稀释的食物样品 稀释液，0称取或吸 取食物样品，置入适 宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内. 5、加入适量的无 菌稀释液,包括Bu ffered peptone Buffer(IDF pho psphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7. 2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法68 87) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579)、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite -free letheen broth或蒸馏水. 不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。 6、搅拌或均质样品。 样品的稀释液调PH 6.5－ 7.2 对酸性样品的稀释 液用IN NaOH 对碱性样品用IN HCL调PH 7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。8、使用吸管将1mL 样液垂直滴加在测试片的中央处。 9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。 13、测试片的透明 面朝上，可堆叠至 20片，对有一定 湿度养箱能保持最 少份损失是需要的。14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。 15、可以分离菌落 作进一步鉴定，即 掀起上层膜，由培 养胶上挑取单个菌 落。 二、测试细菌总数判读方法 Aerobic bacter ia coun t=152 测试片 中含有 一种红 色指示 染剂可 使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之). Count=0 在petrifil m AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长. Count= 16 图3示有不多的菌落. Count=1 43 Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25 -250,见图 4
空气中细菌种类的测定
培养基的制备与空气中微生物的检测 一、实验目的与要求 1、了解并掌握微生物所需的营养成分以及培养基的类型。 2、学习并掌握牛肉膏蛋白胨培养基的配制原理，配制方法以及熟悉实验步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌器的原理以及了解其操作步骤。 4、空气中微生物的检测。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 三、实验内容 1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备。 2、高压灭菌。 3、空气中微生物的检测。 四、实验步骤 1、查配方 牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏 1g；蛋白胨 2g；NaCl 1g；琼脂粉 4g；蒸馏水 200mL；pH 7.0—7.2。 2、称量 3、配制 先将牛肉膏、蛋白胨溶入烧杯中搅拌至完全溶解，再加入其他成分一次溶解，倒入500mL的锥形瓶中，加水至200mL，加入琼脂粉，拿报纸封口。 4、高压灭菌 5、分装，凝固 6、暴露取样：在指定的地点：一楼、三楼、五楼、七楼各放2皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露10min，时间一到，立即合上皿盖。 7、培养观察：把培养皿置于生化培养箱培养，于48h后记录所生长的菌落数。
细菌总数的检验方法
细菌总数的检验方法 1 试验器材: 样品、无菌水、制备好的营养琼脂培养基200 ml 装于三角瓶、装有三、四十粒玻璃珠的三角瓶一个、平板数套、1 ml 吸管、计数器、试管。 2. 试验步骤: 2.1 在无菌条件下取样品10ml。 2.2 用1 ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml ，置于9 ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀成1:100稀释液。 2.3 另取1 ml灭菌吸管吸，按上述操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml 灭菌吸管。 2.4 根据对样品的污染程度选择2到3个适宜的稀释度分别在作10倍递增稀释液的同时,即以吸取该稀释度的吸管,吸取1ml 稀释液，置于灭菌平板内，每个稀释度作2个平板。 2.5 稀释液移入平板后，立即将冷却至45°C的营养琼脂基约15 ml倾入平板中,并转动平板使混合均匀。 2.6待琼脂凝固后翻转平板,置于37°C 恒温培养箱内培养24小时或48小时，计算平板内菌落数目，将细菌菌落乘以稀释倍数，即得每毫升样品中所含菌落总数。 3 菌落计数方法: 3.1 平板内菌落计数时，可用肉眼观察,必要时用放大镜。 3.2 在记下各菌落数后，求出同稀释度的各平板的平均数。 4 菌落计数的报告 4.1平板菌落数的选择:选取菌落数在30到300之间的平板作为菌落数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板内的菌落平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时。不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而其余部分又很均匀,则可计算半个平板后乘以2以代表全平板的菌落数。 4.2 稀释度的选择 4.2.1 应选择平均菌落数在30到300之间的稀释度，乘以稀释倍数来报告它。 4.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30到300之间，应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数。若大于2，则报告其中较小的数字。 4.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数来报告它。 4.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数来报告它。 4.2.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30到300之间，其中一大部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数来报告。 4.3菌落数的报告 4.3.1 菌落数在100以内时，按实有数报告。 4.3.2 大于100时,采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。 4.3.3 为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示它。
空气细菌总数的测定教案资料
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露 5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g
细菌数量的测定方法
细菌数量的测定方法 1、计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重
细菌总数的测定法
细菌总数的测定法 一、细菌数测定的基本概念 药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。 药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。 平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。在试验操作中应考虑到这此问题。 二、设施、设备、仪器及器皿 1、设施 细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。 2、设备、仪器 恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定） 菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。 3、器皿 锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。 玻璃器皿用前应洗涤干净，无残留抗菌物质。吸管上端距0 .5 cm 处塞入约2 cm 左右的适当疏松棉花，装入吸管筒内或牛皮纸口袋中。锥形瓶、量筒、试管塞（硅氟塑料塞），再用牛皮纸包扎。使用的器皿应采用经验证合格的方法进行灭菌。 4、用具 大、小橡皮乳头（置干净带盖的容器中并应定期用5%来苏尔溶液浸泡），无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后用布袋或牛皮纸包严）灭菌，备用。也可使用一次性无菌衣、帽、口罩。接种环(白依金或镍铬合金）、乙醇（酒精）灯、乙醇棉球或碘伏锦球、灭菌剪刀、镊子或灭菌的手术刀、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔等。 二、培养基、稀释剂 除另有规定外一般使用营养肉汤琼脂培养基, 可按处方配制亦可采用干燥脱水培养基。 主要稀释剂有0. 9％无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液（供试品稀释用），0.9%无菌氯化钠溶液（对照菌稀释用）。 三、检验方法 1、试验前的准备 1）、将试验用灭菌的器皿、稀释剂及供试品外包装去掉，内包装消毒后移至无菌室内。每
微生物检测菌落总数测定方法(精)
微生物学检验菌落总数的测定 1 原理 微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列 不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL ）样品中的活菌数量。 2 材料和仪器 2.1 平皿：φ90mm 。 2.2 无菌锥形瓶：容量250mL ，500 mL 。 2.3 无菌吸管：1mL （具0.01mL 个度）,10mL （具0.1mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.4 灭菌锅。 2.5 恒温培养箱 2.6 涂棒。 2.7 酒精灯。 2.8 超净工作台。 2.9 磁力搅拌器。 2.10 漩涡振荡器 3 检验程序 菌落总数的检验程序见下图。 方法①↙ ↘方法② ↘ ↙
4 操作步骤 4.1 培养基和试剂的配制 4.1.1 平板计数琼脂培养基：LB培养基（最常用） 牛肉膏5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂20g 蒸馏水1L pH 7.0～7.2 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH值，分装锥形瓶中，121℃高压灭菌30分钟。 4.1.2 无菌生理盐水的配制： 称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。 4.2 样品的稀释： 4.2.1 固体样品：称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中（内装 数粒无菌玻璃珠），在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，制成1：10的样品均液，即10-1稀释液。 4.2.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品均液1mL（吸取前需要摇匀1：10稀 释液），缓慢加入盛有9mL无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液面），用漩涡振荡器振荡，混合均匀，制成1：100的样品稀释均液。 4.2.3按照4.2.2操作程序，制备10倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次1mL 无菌吸管或吸头。 4.2.4 根据对样品活菌数量的估计，选择3~4个适宜稀释度的样品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀释液）。 4.2 平板接种与培养 接种方法1： 用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中（每个稀释度做三个重复），再在培养皿中分别倒入10～15mL已融化并冷却至45~50℃的培养基，盖好平皿盖子，趁热轻轻转动培养皿，使菌液与培养基充分混合均匀，冷凝后在恒温培养箱中倒置培养24～２８ｈ，培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。 注：比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-8，10-9，10-10。 接种方法2： 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取0.2ｍＬ稀释液均液于计数培养基平板上，将稀释液涂布均匀，吸附，在恒温培养箱中倒置培养24～２８ｈ，培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。（计算时需要把0.2mL的倍数也计算在稀释倍数内） 注：比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-7，10-8，10-9。 ４.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时借用放大镜或菌落计数器，以防遗漏。记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）表示 4.3.1 选取菌落数在30~300之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用3个平行平板的平均数。
115.室内空气中菌落总数复习试题(撞击法)
室内空气中菌落总数复习试题 （撞击法） 一、填空题 1.制备培养基用一般设备有：，，pH计或精密。答：量筒；三角烧瓶；pH试纸。 2.测定室内空气中菌落总数时，采样点的数量根据监测室内和而确定，以期能正确反映室内空气污染物的。 答：面积大小；现场情况；水平。 3.测定室内空气中菌落总数采样时，先将采样器，按仪器使用说明书进行采样。一般情况下采样量为，应根据所用仪器性能和，酌情增加或减少空气采样量。 答：消毒；30～150L；室内空气微生物污染程度。 4.营养培养基的制法：将各成分混合，，校正pH值至，过滤分装，℃， min高压灭菌。 答：加热溶解；7.4；121；20。 5.样品采完后，将带菌营养琼脂平板置恒温箱中，培养，计算菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成中的菌落总数，以报告结果。 答：36±1℃；48h；每立方米空气；cfu/m3。 二、判断题 1. 室内空气质量标准中规定室内空气中菌落总数的标准值为2000 cfu/m3。（） 2.撞击法测定室内空气中菌落总数需要高压蒸汽灭菌器。（） 答：1.× 2.√ 三、选择题 1.下列成分中不是配制测定空气中菌落总数的营养培养基的是。 A、蛋白胨； B、牛肉浸膏； C、乳糖； D、琼脂 答：C 2.下列仪器设备中，不是撞击法测定室内空气中菌落总数所需要的。 A、干热灭菌器； B、冰箱； C、恒温培养箱； D、显微镜
答：D 四、问答题 1.撞击法的定义是什么？ 答：撞击法是采用撞击式空气中微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37℃、48h培养后，计算出每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。 2.撞击法测定菌落总数对采样器有何要求？ 答：（1）对空气中细菌捕获率达95%； （2）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。 3.配制营养琼脂培养基的成分有哪些？ 答： 蛋白胨20g 牛肉浸膏3g 氯化钠5g 琼脂15～20g 蒸馏水1000mL