支原体的培养方法
支原体培养检验操作程序
一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。3、将混有标本的培养液各100μL加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。培养基不变色为阴性。B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24 小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。
结果二：第24 小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24 小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
结果五：第24、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无支原体生长或浓度极低，报告未培养出解脲及人型支原体。
支原体的培养技巧
一般培养比较多的是肺炎支原体（MP），解脲脲原体(UU）是耐酸不耐碱的，UU培养的原理是在于其菌体中含有脲酶，而UU培养基中含有尿素，UU的生长需要其本身的脲酶分解尿素益提供其自身生长所需要的营养物质，UU培养基中含有指示剂酚红，由于尿素被分解释放出氨从而使培养基变碱而使培养基由黄变红，但是这种红是一种清亮的红色，透明澄清无浑浊，UU其适宜的PH值为6.2-6.5，由于尿素分解产氨是PH上升，UU在PH值大于7的条件下会迅速死亡，因此，在培养时要随时观察其液体培养基的PH 值，一旦看到培养基变红，要立即取出，以防培养基PH上升导致UU死亡，一般UU需要在培养至对数生长期时是活力最强的时候（培养基呈橙红色变化）。一般UU生长需要24小时。
UU的计数也和普通细菌不同，采用颜色单位改变法（CCU法），因为UU的生长是澄清清亮透明的，因此无法用一般的比浊法来计数！
UU的保存：在UU生长到对数生长期时，采用甘油保存法，甘油和菌液的比例为3：7，（甘油高压灭菌），采用程序降温法，献4度1小时，在－20度2小时，最后放到－80度，但是在－80度最长不要超过半年，因此需要每隔2－3个月将菌株复苏一次到对数生长期后再保存！
另外，UU生长所需要的培养基的成分一般每隔单位有所不同，但是有一点肯定，就是需要小牛血清。
器具泡酸的目的是为了去除杂质，一般在做细胞培养是需要泡酸，做细菌方面的工作要求不需要如此严格的，只需要洗干净，高压消毒就可以了，在配培养基时用的是三蒸水，把培养基配好后，最后再加入血清，然后调到所需的PH值，不可以高压，只能用0.22um的滤膜过滤除菌！培养基配好后，4度放半年没问题！没有从动物身上分离UU，但是刚一开始做时，是从病人的临床分泌物中分离，临床分离株需要纯化，因为临床株常常含有很多杂质，这些杂质会影响UU的生长，导致UU的CCU常常达不到10的3次方，因此对临床株需要纯化，可以在固体平板上见到油煎蛋样菌落，用灭菌小刀切取菌落琼脂块，移入液体培养基中压碎进行培养，等到培养基变黄后，用液体培养基稀释培养物到10的-4或-5次方，再取0.2-0.4ml于固体平板上，这样反复2-3次，就可以得到支原体的纯种。
CCU一方面和细菌本身浓度有关，另一方面，确实与培养基成分有很大关系，如果培养基营养成分差，很难作出来，如果培养基中只含有盐成分的话，高压是没问题的，如LB培养基，但是如果里面含有小牛血清或糖类等物质的话，绝对不可以高压，因为这样会破坏营养成分，只可以过滤除菌！
解脲脲原体培养基配制：（在自制培养基基础上加：）PH：6。13
小牛血清：30ml/250ml
10％尿素：12 ml/250ml
0．2％酚红：4。5 ml/250ml
青霉素G：50万U/250ml
酵母：6。25 g/250ml
磷酸二氢钾：0。375 g/250ml
天门冬素：0。025 g/250ml
自制培养基包括：新鲜牛肉浸液：90毫升
蛋白胨：1克
氯化钠：0。5克
磷酸二氢钾：0。15克
（此自制培养基可以高压灭菌）。
加琼脂配成固体，一般1％即可！
支原体是能够在无生命培养基上生长的最小微生物，其生长特点是在液基中是清亮的，因此他的计数无法通过比浊法，其对数生长期在液体中的表现是表现为橙红色，这是支原体的代谢活力旺盛，如果颜色呈现桃红色或深红色，这时UU的活力就会下降，因为UU的最合适PH为6.0-6.5,这时培养基的PH偏碱，UU 可能已死亡。为了区分颜色，可以用一管液体培养基作为颜色改变对照，黄色和橙红色还是比较好区分的！
Uu的最适生长PH在6.0－6.1之间，这可能与培养基的配制有关。关于Uu的计数，CCu是最好的方法：200ul菌液加入第一瓶1.8ml液态培养基中混匀，然后从中取出200ul加入第二瓶1.8ml液体培养基中，混匀，以此类推，10倍稀释11瓶，做3组平行试验，求平均值即可。注意，每步操作都要换枪头。
对于Uu的保存，其实方法也很简单：
1、用液体培养基培养15－17h（溶液有桔黄色变为橙红色，而且基本在对数生长期左右），直接放入0度或－20度，2个月是没问题的，如果不放心的话，可隔一个月检查一下活性。
2、如果条件允许的话，可将培养至对数生长期的阳性液先预冻，然后抽真空即可。保存几年是没问题的。复苏的时候，直接向其中加入Uu培养基培养即可。
细胞培养中支原体污染
细胞培养中的支原体污染的预防及处理 Mycoplasma国内主要有三种译名，医学文献译为“支原体”（分枝原体，枝原体，类菌质体），动物医学文献译为“霉形体”或“支原体”，台湾、香港则译为微浆菌。 支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。自然界分布广泛，种类多，有80余种，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。 支原体无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分枝，营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。 细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（https://www.360docs.net/doc/e25917509.html,idlawii），为牛源性。国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。 支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染，等等。 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。 由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中的抗生素抗污染能力有限，因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞手到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等。 组织细胞培养工作中，可以从以下几方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养
解脲支原体检查方法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 解脲支原体检查方法 导语：解脲支原体很有可能会出现感染的现象，而这个是男性体内的一种激素，如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话，在报告结果中是会 解脲支原体很有可能会出现感染的现象，而这个是男性体内的一种激素，如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话，在报告结果中是会表现出来的，而解脲支原体的检查方法有是有很多的，一般在做这个检查的时候都是很多男性出现了尿多尿急尿频繁的现象，所以才到医院做检查，那么解脲支原体检查方法有哪些？ 解脲支原体的检查方法主要有三种，第一种检查方法就是血液检查，主要是通过抽血化验。第二种检查方法就是通过口腔的涂片的培养来进行检查。第三种检查方式就是PCR的技术检测，这种检查方式可以检查出igm的抗体情况，然后再判断感染的情况。这种疾病的治疗可以使用四环素，比如米诺环素、多西环素等等，但是建议最好两种到三种的抗生素结合一起使用，治疗效果更好。 支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3～0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。它不同于细胞，也不同于病毒，种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大，给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中，5种对人有致病性，即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体，生殖支原体及发酵支脲解支原体属含脲解支原体等体、脲解支原体及人型支原体等对人有致病性。 男性支原体检查方法有哪些？男性支原体检查方法如下： 1、血常规：周围血白细胞计数一般正常嗜酸性粒细胞增多。 2、血清学检全：采用补体结合试验着恢复期血清抗体效价比急性预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
支原体培养及药敏阳性什么意思
支原体培养及药敏阳性什么意思 支原体培养及药敏呈现阳性，这说明感染了支原体，如果是已婚人士，一定要夫妻同治，在转阴以后说明彻底治好，但是要及时复查，避免出现反复发作的情况，治疗选择一些敏感的药物是比较重要的，这样对于治疗的效果会更好，除了治疗以外，平时要加强调养，注重饮食保健，保持充分的休息，在治疗期间不能有性生活。 ★支原体的治疗方法：1：需使用敏感抗生素，足量治疗(一般青霉素类没有作用)。2：必须治疗达到足够的时间。一般7-10天。同时注意，预防二次感染。(保持内裤干净，性伴侣同时治疗，禁忌酒和刺激性食物)。最好能在疾病治愈以后再要小孩。解脲支原体是一种通过性接触传播的疾病。3 四环素类及大环内酯类药物效果较佳，尤其是后者。二种或三种药物联合治疗为最好的方案。希舒美首剂1.0g，后0.5g/日，qd，5天1个疗程+美满霉素首剂200mg，后100mg，7天1个疗程+肤阴洁坐浴，1周后，复查白带培养及肝、肾功能。 4 及早到正规医院治疗，并且遵照医嘱定期复查，才能取得良好的疗效。
★支原体阴道炎的患病途径很多 包括性接触、直接接触、自体感染、医源性感染等。有不少女性检查出支原体感染属于携带者，也有些是自体感染(支原体)会寄生人体。解脲支原体感染主要通过性生活传播，多见于年轻性旺盛时期，尤多见于不洁性交后。当泌尿生殖道发生炎症，粘膜表面受损时解脲支原体易从破损口侵入，引起泌尿生殖道感染。解脲支原体感染后，患者大多无明显症状，因此，很难被患者觉察，也易造成医生漏诊。 解脲支原体可侵犯尿道、宫颈及前庭大腺，引起尿道炎、宫颈炎与前庭大腺炎;上行感染时，可引起子宫内膜炎、盆腔炎、 输卵管炎，尤其输卵管炎多见。解脲支原体感染造成的女性生殖器官病理性改变，是不孕不育的重要原因。 因此，女性一定要洁身自爱，注意养成良好的生活卫生习惯，杜绝支原体感染，发现患上支原体阴道炎后要及时到医院接受正规的治疗。
1医学检验毕业论文 (三种肺炎支原体检测法的临床应用分析)
毕业论文 题目：三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日
三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对研究
目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误！未定义书签。
细胞支原体污染相关知识简介
细胞支原体污染相关知识简介 （2016年10月16日） （1）支原体简介： 支原体（Mycoplasma）是一种没有细胞壁的原核生物，大小约0.1 - 0.6微米。目前，已发现的支原体品种有100多种。其中，有近20种曾经在各种细胞培养体系中检测到，但超过98%以上的支原体污染是由6-8种引起的（注：具体的支原体种类，上海易色的《一步法恒温支原体检测试剂盒》说明书中有详细介绍）。而且同一种细胞经常被多种支原体污染。 （2）支原体污染细胞的途径： 由于支原体直径较小，经常可以穿过实验室常规的0.20微米孔径的除菌滤膜，高压过滤时，甚至可以穿过0.10微米孔径的除菌滤膜,造成细胞的支原体污染。 细胞培养的支原体污染来源主要有：（1）细胞之间的交叉污染，这是支原体污染的最主要原因；（2）细胞培养操作人员的口腔、皮肤等。（3）细胞培养用的组分，如血清、培养液等。 （3）细胞支原体污染的隐蔽性： 由于支原体体积比细菌小很多，通常支原体污染密度非常的高，可达107-9/mL培养液，但即使这么高密度的支原体污染也无法通过普通显微镜的肉眼观察进行判断。 而且，轻度到中度的支原体污染并不会导致细胞形态或生长速度的明显改变，也不会明显改变培养液的浑浊度或培养液的pH值。 以上两个原因就导致体外培养的细胞即使被支原体污染了，一般的科研工作者也不会觉察到。也就是说：如果不进行支原体的常规检测，你甚至不知道你培
表1，细胞支原体污染统计结果，数据来自参考文献 [4]
3. Edward Burnett and Liz Penn, European Collection of Cell Culture (ECACC?). Mycoplasma Detection and Elimination. Don Finley, Market Segment Manager, Sigma? Life Science. Biofiles, Vol. 8, No. 18 4. John Ryan (2008). "Understanding and Managing Cell Culture Contamination". Corning Incorporated. p. 24.
支原体感染与药敏分析
来自：杨传松,胡雪飞,廖晚珍. 2379例女性患者支原体感染情况与药敏分析[J]. 实验与检验 医学,2010,01:77-78. 2379例女性支原体感染情况与药敏分析 杨传松⒈胡雪飞⒉廖晚珍⒉ 【摘要】目的了解女性生殖道支原体（Mycoplasma）感染（主要为南昌地区）与药物敏感试验情况，为临床治疗提供依据。方法采用支原体试剂盒对2379例疑诊为生殖道感染女性患者的宫颈分泌物进行支原体培养、鉴定及药敏试验。结果2379份标本中，支原体检测阳性1503例，阳性率63.2%，其中解脲支原体（UU）46.0%（1094/2379），UU+ MH（人型支原体）混合感染及MH分别为15.4% (367/2379)、1.8%（42/2379）。药敏结果：支原体对强力霉素（Dox）、交沙霉素（Jos）、美满霉素（Min）的敏感率均在70%以上,另外,UU对克拉霉素（Cla）、四环素（Tet）也较敏感，分别为92.3%、84.7%，但Cla在MH及UU+ MH混合感染时，敏感率较低,仅为2.4%和7.4%；耐药率较高的是环丙沙星（Cip）、壮观霉素（Spe）等。结论本地区女性生殖道支原体感染以UU 为主，其次是UU+ MH混合感染，较敏感的抗菌药为：Dox、Jos、Min，仅UU 感染时还可选用Cla。为减低支原体的耐药率，建议临床根据药敏结果用药。 【关键词】支原体感染药敏非淋球菌尿道炎 支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态上呈高度多形性，能通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞微生物，由于它们能形成有分枝的长丝，故称之为支原体［1］。感染人类的支原体有十余种，女性生殖道以人型支原体(MH)及解脲支原体（UU）最常见。MH感染多引起阴道炎、宫颈炎和输卵管炎，UU多引起非淋球菌性尿道（non-gonococcal urithritis,NGU）。支原体多与宿主共存，不表现感染症状，仅在某些条件下引起机会性感染，且常和其他致病菌共同致病［2］。大量的研究证明UU与自然流产、先天缺陷、死胎和不孕症有关［3］。支原体感染还是一种性传播疾病，近年来其发病率日趋上升且耐药株增多，受到医务工作者的关注。为了解本地区女性生殖道支原体感染与耐药情况，为临床用药提供参考，作者对来我院就诊的2379位女性患者宫颈分泌物做支原体检测，现将结果报告如下： ----------------------------------------------------- 作者单位：1. 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系 2. 南昌大学第一附属医院检验科 作者简介: 杨传松(1984.04.21),男, 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系学生. 通讯作者: 胡雪飞,E-mail:hxf123666@https://www.360docs.net/doc/e25917509.html, 1资料与方法 1.1一般资料选自2009年1月~6月来我院妇产科门诊及住院的2379例女性 患者，进行宫颈分泌物检测。
支原体检查
附录XIIB支原体检查法 主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞法（DNA染色法）。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体，必要时，亦可采用指示细胞法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法 第一法培养法 推荐培养基及其处方 （1）支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 氯化钠2.5g 牛肉浸液（1:2）500ml 葡萄糖 5.0g 酵母浸粉5.0g 酚红0.02g pH值7.6±0.2。于121℃灭菌15分钟。 （2）精氨酸支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 牛肉浸液（1:2）500ml 葡萄糖 1.0g 酵母浸粉5.0g L-精氨酸2.0g 酚红0.02g 氯化钠2.5g pH值7.1±0.2。于121℃灭菌15分钟。 （3）支原体半流体培养基按（1）项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。 （4）支原体琼脂培养基按（1）项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。 培养基灵敏度检查（变色单位试验法）（1）菌种肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714），由国家药品检定机构分发。 （2）操作将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后，将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基
内。每个稀释度接种3支试管，置36℃ 士1℃ 培养7～14天，观察培养基变色结果。 ( 3 )结果判定以接种后培养基管数的2 / 3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15531 )应达到10-8，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。 检查法（1）供试品如在分装后24小时以内进行支原体检查者可贮存于2～8℃ ；超过24小时应置一20℃ 以下贮存。 ( 2 )检查支原体采用支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基（或支原体琼脂培养基）。支原体半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10～15分钟，冷却至56℃ 左右，然后加人灭能新生牛血清（培养基与血清体积比为8:2 )，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。 取每支装量为10ml的支原体半流体培养墓（已冷至36℃ 士1℃ ）和支原体肉汤培养基各4支，每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃ 士1℃ 培养21天。于接种后的第7天从4支中取2支进行次代培养，每1支培养基转种支原体半流体培养基及支原体肉汤培养基各2支，置36℃ 士l℃ 培养21天，每隔3天观察1次． ( 3 )结果判定培养结束时，如接种供试品的培养基均无支原体生长，则供试品判为合格；如疑有支原体生长，可取加倍量供试品复试，如无支原体生长，供试品判为合格，如仍有支原体生长，则供试品判为不合格。 【附注】质量检定部门应会同培养基制造部门定期抽检支原体培养基灵敏度。 第二法指示细胞培养法（DNA染色法） 将供试品接种于指示细胞（无污染的Vero细胞或经国家药品检定机构认可的其他细胞）中培养后，用特异荧光染料染色。如供试品污染支原体，在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。 试剂（1）二苯甲酰胺荧光染料浓缩液称取二苯甲酰胺荧光染料5mg，加人100ml不含酚红和碳酸氢钠的Hank 's平衡盐溶液中，室温下用磁力搅拌器搅拌30～40分钟，使完全溶解，-20℃ 避光保存。 （2）二苯甲酰胺荧光染料工作液无酚红和碳酸氢钠的Hank ' s溶液100ml中加人二苯甲酰胺荧光染料浓缩液lml，混匀。 （3）固定液醋酸:甲醉（体积比1:3）混合溶液。 （4）封片液量取0.1mol / L枸橼酸溶液22.2ml、0.2mol / L磷酸氢二钠溶液27.8ml、甘油50.0ml，混匀，调pH值至5.5。 培养墓及指示细胞（1） DMEM完全培养基。 ( 2 ) DMEM无抗生素培养基。
男性解脲支原体阳性怎样检查和治疗
男性解脲支原体阳性怎样检查和治疗 男性解脲支原体发病率越来越高，要治疗，我们得先了解它，支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3～0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。它不同于细胞，也不同于病毒，种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大，给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中，4种对人有致病性，即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体，生殖支原体，在泌尿生殖系统感染中，男性解脲支原体感染相对高发。那么男性解脲支原体检查方法有哪些？解脲支原体的检查方法主要有三种： 第一种、血液检查，主要是通过抽血化验。 第二种、通过口腔的涂片的培养来进行检查。 第三种、PCR的技术检测，这种检查方式可以检查出抗体情况，然后再判断感染的情况。 男性解脲支原体的治疗 1、西药治疗 西药抗生素是西医治疗支原体、衣原体感染的主要方法，但由于支原体、衣原体对作用于细胞壁的抗生素耐药，所以西医只能用抑制膜蛋白和胞浆蛋白合成药物，如喹诺酮类、四环素和红霉素等抗生素来治疗。然而虽然支原体、衣原体对这类抗生素敏感，但由于抗生素具有抗药性、耐药性等副作用，所以患者如果长期服的话容易导致体内的菌群失调，因此在治疗时要注意治疗时长和用量。一般服用2~3
个疗程后即可治愈，否则就要及时更换治疗方法。 2、中药治疗 中药在治疗支原体、衣原体感染时，主要是通过改变支原体、衣原体在患者体内的生存环境和提高患者自身的抵抗力，来达到去病固本的效果。多年来专利中药利尿消炎丸就对支原体、衣原体的治疗取得了显著地效果。 中药利尿消炎丸的配方中含有滑石、桃仁、赤芍、红花、瞿麦、当归、萹蓄、鱼腥草、车前子、王不留行等五十几味中药成分，这些中药成分不但使利尿消炎丸具有极强的杀菌作用，能够有效的杀灭各种细菌、病毒、病原体、使支原体、衣原体、淋病转阴，而且还使其具备了清热解毒、活血行气止痛和利尿通淋的功效，因此不但能够针对性地治疗支原体、衣原体感染，而且还可以同时治疗由支原体、衣原体感染引发的其他并发症。 此外中药治疗还有一个最大的优势，就是不会产生任何的副作用。但需要提醒大家的是由于中药主要是通过对患者进行全面的调理来达到治疗的效果，所以治疗时间上就会比西药长一点，因此患者在治疗时一定要有耐心，千万不可操之过急，半途而废。 以上就是对男性解脲支原体怎么检查和治疗的详细介绍，希望能够帮助到大家，祝大家早日康复。
第六节 支原体药敏
第六节支原体 支原体是一类目前所知能在无生命培养基中独立生活，自行繁殖的最小微生物。支原体感染的范围非常广泛，包括人，动物，植物，昆虫及组织培养的细胞。人体可分离出十几种支原体，其中一些对人有致病性如：肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体、生殖支原体、及发酵支原体等。能引起生殖泌尿系感染的支原体主要有两种，即解脲支原体和人型支原体。肺炎支原体主要引起呼吸道的感染。 支原体的体外药敏试验最早是在上世纪60年代提出。在过去的40多年中，很多研究采用肉汤稀释法和琼脂为基础的方法报道了支原体的抗菌活性，但一直没有一个公认的、标准的参考方法。在过去的几年，有关支原体体外药敏试验方法学的研究也有一些报道，但仍存在着一些不足。直至2011年CLSI M43指南出现，规范了支原体体外药敏实验的方法（微量肉汤法和琼脂稀释法）、明确了质控菌株及对不同抗生素的MIC范围、建立了临床用于支原体治疗药物的折点。因支原体培养时间较长，临床治疗支原体感染很难依靠培养及药敏的结果，基本上采用经验抗菌药物的治疗，因此支原体体外药敏试验对于临床分离株的耐药性监测以及新药的研发更具意义。 一、药敏的适应征 1.临床分离的支原体通常不需要进行药敏试验，可经验性使用抗菌药物治疗。 2.当临床经验性抗菌药物治疗效果不好时，而可用于支原体感染治疗的药物又非常的有限，需要进行支原体的体外药敏试验。目前，已知可能的耐药包括： 1）人型支原体、脲原体的某些种对四环素类药物的耐药。 2）人型支原体、脲原体的某些种对氟喹诺酮类药物的耐药。 3）肺炎支原体、脲原体某些种对大环内酯类药物的耐药。 4）人型支原体对克林霉素耐药。 这时就要考虑可用于治疗的药物中那些还可以用于耐药菌株的治疗。 3. 从无菌体液或生殖道以外的部位中分离的人型支原体、脲原体应做药敏，尽管人型支原体、脲原体的某些种常常是泌尿生殖道的致病菌。特别是从有播散性感染的患者如：新生儿或免疫低下患者的无菌部位分离的人型支原体、脲原体应进行体外药敏试验。 二、方法学 （一）肉汤稀释法 1. 微量肉汤稀释法 1）方法 在无菌的96孔板上，加入一定量的液体培养基（含有酚红指示剂），将测试的抗生素倍比稀释。加入终浓度为104～105CFU/ml新鲜培养物到不同抗生素浓度孔中。另外设立3个对照孔：阴性对照（只加培养基）；药物对照（肉汤 + 含抗生素肉汤）；阳性对照（肉汤 + 培养物）。加样完毕，在每孔里面滴加3到5滴无菌液体石蜡，防止长时间培养液体挥发影响实验结果准确性。盖上板盖，在适宜的温度和气体环境中培养，阳性对照孔正常生长后读取MIC。
儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较
儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较 发表时间：2016-05-09T11:40:39.230Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2016年1月第2期作者：王玉琪 [导读] 比较2种检测方法的优缺点。结论：MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标，为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 王玉琪 浙江大学医学院附属儿童医院浙江杭州 310052 【摘要】目前：通过对肺炎支原体（MP）RNA检测及抗炎支原体抗体（MP-IgM）的研究，探讨两种检测方法在临床中的应用。方法：对208例肺炎住院患儿行呼吸道分泌物MP-RNA及血清MP-IgM测定，比较2种检测方法的优缺点。结论：MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标，为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 【关键词】肺炎支原体；抗体检测；RNA检测 肺炎支原体是（MP）是小儿呼吸道感染常见的病原体之一，可引起上呼吸道及下呼吸道感染，尤其是社区获得性肺炎（CAP）的重要病原[1]。MP的实验室检测方法有很多，血清学检测是目前MP感染的常规实验室手段[1]，利用酶联免疫吸附试验，如检测持续高滴度MP-IgM或恢复期抗体滴度较急性期4倍或4倍以上变化可诊断。近年随着分子生物学技术的发展，RNA恒温扩增实时荧光检测（SAT）技术应用于临床，为MP感染的早期诊断提供了新的检测方法。本研究对本院208例疑似肺炎支原体肺炎患儿分别采集呼吸道分泌物及血清同时检测患儿的MP RNA及MP-IgM，现将结果报告如下。 1资料与方法 1.1 一般资料 选择2015年6月1日~2015年12月1日在本院住院的疑似MP呼吸道感染的患儿208例，其中男性106例，女性102例，年龄1个月~13岁。根据年龄分为两组，A组（0~3岁，n=128），B组（3~12岁，n=80）。两组患者的一般资料具有可比性（P<0.05）。 1.2 仪器与试剂 杭州……………… 1.3方法 采集患静脉全血，常规分离血清后检测肺炎支原体抗体（MP-IgM），同时用灭菌棉签采集受试者咽部样本（大于1岁患儿）或痰液（小于1岁）行MP RNA检测。操作方法均严格按照试剂盒说明书进行。 1.4 肺炎支原体肺炎临床诊断标准：持续咳嗽，可伴有发热，白细胞计数正常或稍高，X线提示两肺均匀一致改变的片状阴影或大叶性肺炎改变。 1.5 统计学处理采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 208例患中，MP-IgM阳性率34.1%（71/208），MP RNA检测结果阳性共率31.2%（65/208），两者比较差异无统计学意义 （P>0.05）。 3 讨论 肺炎支原体（MP）是引起儿童呼吸道感染，尤其是社区获得性肺炎的常见病原体之一，临床表现为干咳、发热，部分患儿可出现胸腔积液、肺纤维化，肺外损害，如皮肤、胃肠道、血液系统损害、骨关节肌肉、中枢神经系统、心血管系统等[2-4]。MP感染症状可持续或迁延数周或数月，常可引起慢性咳嗽和反复呼吸道感染，还可能引起喘息。MP感染患儿临床表现常不典型，常规抗生素治疗效果欠佳，因此，早期诊断对临床治疗有着重要意义。目前，多种检测方法针对MP-IgM，具有灵敏度高，特异性强，操作简便快速的特点，已作为早期诊断MP感染的客观指标而应用于临床。本研究结果显示，208例患儿中，痰液标本或咽拭子SAT法，MP RNA阳性率34.6%，ELASA法测定MP-IgM阳性率29.3%，两者比较有统计学意义（P<0.05），这可能与血清标本留取时间有关，MP感染后约7d可在血清中检测出MP-DNA抗体，疾病早期可呈假阴性[5]。同时，在组内两种检测手段也呈现了不同结果。A组中的MP RNA的阳性率高于MP-IgM的检测 （P<0.01），这可能由于婴儿免疫系统发育不完善，当MP感染后不能产生或产生效价较低的抗体而导致漏诊，提示MP RNA方法更适于年幼儿和免疫损害患儿的MP感染的早期诊断[5]；而核酸检测受年龄影响较小，故阳性率较高。B组中，两种检测方法阳性率分别相比较无统计学意义（P>0.05），说明咽拭子MP RNA检测方法同样具有较高的敏感性，但同时需结合MP-IgM检测结果，以除外假阳性结果。综上所述，MP-IgM检测及MP RNA检测在诊断MP感染均有较高的价值，二者联合应用可提高检测的准确性，为临床诊断提供有力的依据。 参考文献： [1]Vervloet LA，Marguet C，Camargos PA．Infection byMycoplasma pneumoniae and its importance as an etiologicalagent in childhoodcommunity-acquired pneumonias[J]．Braz J Infect Dis，2007，11（5）：507—514． [2]Gaillat J，Elahault A，deBarbeyrac B，et https://www.360docs.net/doc/e25917509.html,munity epidemiology of Chlamydiaand Mycoplasma pneumoniae in LRTI in France over 29 months[J].Eur JEpidemiol，2005，20（7）：643-651. [3]Blasi F．Atypical pathogens and respiratory tract infee—tions[J]．Eur Respir J，2004，24（1）：171—181． [4]Hansbro PM，Beagley KW，Horvat JC，et a1．Role ofatypical bacterial infection of the lung in predisposition／protection ofasthma[J]．Pharnlaeol Ther，2004，101（3）：193-210． [5] Kim NH，Lee JA，Eun BW，et a1．Comparison of poly-merase chain reaction and the indirect particle agglutinationantibody test for
PCR法支原体检测
PCR法支原体测定PROTOCOL 生效日期（年-月-日） 有效期至（年-月-日） 分发部门：质量部
1.目的 规范PCR法支原体检测的操作方法。 2.范围 适用于项目研发过程样品、原液、成品及中间体的分析。 3.责任 质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。 4.定义 N/A 5.设备、材料和试剂 5.1设备、材料 设备名生产商型号/货号备注PCR仪Thermo ARKTIK5020 N/A VORTEX IKA GENIUS 3 N/A 小型台式冷冻离心 机Thermo HERAEUS Fresco 21 N/A 单道移液器 (10ul,20ul,100ul) Eppendorf Research plus N/A 多功能水平电泳槽Tanon HE-120 N/A 凝胶成像系统BIORAD ChemiDoc? XRS+ System N/A 5.2试剂 试剂名称生产商货号TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set TaKaRa 6601 TaKaRa Ex Taq? TaKaRa RR001A Regular Agarose G-10 Biowest N/A Goldview 国产N/A
10×Loading Buffer TaKaRa 9157 DL5000 DNA Marker TaKaRa 3428A 内毒素检查用水厦门鲎试剂实验厂有限公司 6.溶液配制 6.1 50× TAE Buffer 称取242.0g Tris，37.2g Na2EDTA·2H2O于1L烧杯中，向烧杯中加入约800ml 超纯水，充分混匀，加入57.1ml冰乙酸，充分溶解，加入超纯水定容至1L，室温保存。有效期6个月。 6.2 1× TAE Buffer 量取10ml 50× TAE Buffer，加入490ml超纯水，充分混匀。有效期6个月。 7.操作步骤 用于检测支原体的样品是接种后进行3-6天细胞培养的培养上清液。如果使用常用的细胞培养基时，培养上清可直接加入到PCR反应液中，如果使用细胞悬浊液作为样品，则需要提取DNA，再进行PCR反应。如果样品中含有PCR 反应阻碍物，需要对DNA进行抽提，再添加到PCR反应液中，为了确认样品中是否含有反应阻碍物，在样品中加入Control Template进行正对照反应。 7.1 1st PCR反应 7.1.1按下表顺序配制反应混合液（50ul体系） 试剂用量（ul） 内毒素检查用水37.75~38.75 10× PCR Buffer 5 dNTP Mixture 4 MCGp F1 Primer 0.5 MCGp R1 Primer 0.5
肺炎支原体检测方法的选择
肺炎支原体检测方法选择的几个注意点 肺炎支原体（MP ），主要引起咽炎及支气管炎，少数累及肺。以其顶端结构与宿主细胞上受体结合粘附于上皮细胞上，一般为表面感染，除穿透支原体外（艾滋病人感染）大多不侵入血液。产生有毒代谢产物如外毒素或过氧化氢等引起发热及局部细胞损伤。 选择检测方法的注意事项： 1.临床常用全血（指尖血）或血清（橘黄管）检测IgM 来判定肺炎支原体的感染，但是，抗体检测只是各种实验室方法的一种，尚有其他方法可用，如培养及DNA 检测，每种方法各有利弊，对不同病程各有针对性。 2.每一种实验结果都需要另外一种实验结果来验证，正常人咽部或支气管可携带MP ，所以不能用一种实验数据来下诊断。 3.初次感染时， IgM 、IgG 都会产生，再次感染时，有时IgM 不产生。 4.儿童由于初次感染几率大，常能产生IgM ，成人由于机体可能感染过多次，常不产生IgM 。 5. 检测方法的选择需要根据病程确定： <6个月 6-12个月 1-9岁 IgM + IgM — 年龄对IgM 抗体产生的影响
抗体 抗原 MP感染不同时段产物的比较 由此图可以看出： a.感染早期，7天之内以检测抗原为主，宜培养或DNA检测： 培养为“金标准”，据国内文献显示，快速培养法阳性率为24%；PCR--DNA检测为96%。美国一篇文献显示，培养阳性率为5%，DNA为57%。 b.早期未产生抗体，导致延误治疗，后期抗体阳性，病原体消失，导致过用抗生素。 c.7天之后可检测IgM抗体； d.IgM可持续较长时间，感染后三个月抗体浓度依然较高，有的可以终生阳性，如果短时间内检测抗体，常不能分辨是否为MP现症感染或其他感染。 e.感染早期宜病原体筛查，此时抗体尚未产生，可导致延误治疗；中后期适宜抗体检测，主要用于回顾性验证试验，此时病原体消失，可导致过用抗生素。
女性泌尿生殖道解脲支原体检测及药敏分析
女性泌尿生殖道解脲支原体检测及药敏分析【摘要】目的了解解脲支原体(Uu)的感染情况及对抗菌药物的耐药性，指导临床合理用药。方法用Uu培养、鉴定和药敏一体化试剂盒，取宫颈分泌物进行检测和药敏试验。结果 258例疑为非淋菌性泌尿生殖道感染的女性患者中，共检出Uu133例，检出率为51.55％。9种抗菌药物药敏试验结果显示，Uu对强力霉素（91.73%）、交沙霉素（84.96%）、阿奇霉素（84.96%）、林可霉素（84.21%）敏感性较强，对红霉素（48.12%）、罗红霉素（27.07%）、氧氟沙星（20.30%）具有较高的耐药性。结论 Uu是非淋菌性泌尿生殖器官炎症的重要病原体，临床应重视对它的筛查，并根据药物敏感性试验结果合理选用抗生素，以达到更好的治疗效果。 【关键词】女性泌尿生殖系统疾病；解脲支原体；微生物敏感性试验 解脲支原体（Uu）是寄生在女性泌尿生殖道常见的病原体之一，常引起非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等炎症，并与异位妊娠、不孕、流产等疾病密切相关。近年来，由其引起的泌尿生殖道感染呈现逐年上升的趋势。为了解本地区女性泌尿生殖道分泌物Uu的感染情况，做到早发现并指导用药，我们对258例女性患者的泌尿生殖道分泌物标本进行支原体培养和药敏试验，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源 2006年7月～2007年3月在我院妇产科就诊疑为非淋菌性泌
尿生殖道感染的女性患者，年龄20～52岁，平均33岁。均采用无菌拭子取宫颈分泌物，且取材前1周内均未使用过抗生素。 1.2 试剂 采用Uu培养、鉴定和药敏一体化试剂盒，由上海奥普生物医药有限公司提供。 1.3 方法 操作方法、结果判断均严格按照试剂说明书进行。 2 结果 2.1 258例样本中检出Uu 133例，检出率为51.55％。其中单一Uu感染102例，占39.53%；单一人型支原体(Mh)感染7例，占2.71%；Uu+Mh混合感染24例，占9.30％。 2.2 药物敏感试验结果 133例支原体感染患者对9种抗生素的药敏试验结果表明，Uu对强力霉素、交沙霉素、阿奇霉素、林可霉素敏感性较强，敏感率>80%；对红霉素、罗红霉素、氧氟沙星耐药性较高，见表1 。 表1 Uu对9种抗生素的药敏试验结果（略） 3 讨论 Uu是一类菌体大小介于细菌与病毒之间的微生物，它寄居于人体泌尿生殖道。近年来非淋菌性泌尿生殖器官炎症的发病率逐年上升，已占性传播疾病的第三位，这其中有20%～30％是由Uu感染引起的［1］。Uu可引起女性尿道炎、阴道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎和盆腔炎，孕妇被它感染了可引起自然流产、不孕症，甚至早产、死胎。进行泌尿生殖道分泌物的支原体培养、鉴定、药敏一体化检查，
肺炎支原体培养及药敏检测的临床意义
肺炎支原体培养及药敏检测的临床意义 一、支原体 支原体：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。 二、肺炎支原体 肺炎支原体（M.Pneumonia），MP,是支原体的一种，是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。MP感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。（2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。（3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。（4）WBC正常或升高。（5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。（6）实验室MP检验有1项或1项以上阳性具备以上2个条件或以上者可初步诊断为MP感染。更多时候，临床医生为了尽快缓解患儿的症状，需根据患儿的症状、体征和病史做MP感染的诊断性治疗，但应与肺结核相互鉴别。 三、肺炎支原体的诊断方法比较及临床意义 1、PCR法 咽拭子PCR法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过这一技术可从患儿痰中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小心。统计结果显示，该法的阳性率为67.76%（103/152），高于快速培养法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。但是此法操作复杂，对设备及标本要求比较高。
细胞培养中常见的污染的处理
细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液 一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养 液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应的抗生素处理 2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的 消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期 清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。 预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就 要注意操作 3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体 感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。 用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用 8ug/ml的浓度。 4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。 5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。 6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
支原体培养检验操作程序
支原体培养检验操作程序 一、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。 二、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照；2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。3、将混有标本的培养液各100μL 加入A排余下及B排各孔中；4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。 第24、48小时分别观察记录结果。结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。培养基不变色为阴性。B1孔阳性为解脲支原体阳性；B2孔阳性为人型支原体阳性。药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感；高浓度不变色低浓度变红为该药物中介；高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。 结果一：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。 结果二：第24小时B1孔不变色示解脲支原体阴性；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。 结果三：第24小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断；第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。 结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断；第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。 结果五：第24、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无支原体生长或浓度极低，报告未培养出解脲及人型支原体。