各种细胞用快速支原体检测试剂盒和方法优缺点比较

各种细胞用快速支原体检测试剂盒和方法优缺点比较
各种细胞用快速支原体检测试剂盒和方法优缺点比较

各种细胞用快速支原体检测试剂盒和方法优缺点比较

(2016年10月16日)

具体选购步骤:

首先,您应该根据自己实验室的仪器情况,进行选择。如果您实验室拥有发光检测仪(Luminometer)或者具有发光检测功能的多功能酶标仪以及-80 ℃低温冰箱,我们强烈建议您选购《发光法支原体检测试剂盒》。《发光法支原体检测试剂盒》具有检测时间短、支原体检出率高、不会产生假阳性和假阴性、可以区分死活支原体等优点。如果您的实验室没有上述条件,您只能选择《一步法恒温支原体检测试剂盒》或者《PCR法支原体检测试剂盒》。

其次,您可以根据检测时间长短、产品价格、支原体识别率、假阳性和假阴性概率、样品是否需要前处理等进行

综合选择。

最后,作为支原体检测领域的共识:单独使用目前市面上的任何一种支原体检测试剂盒,都无法做到100%正确,既不会漏检(假阴性),也不会多检(假阳性)。严格的支原体检测,至少需要使用两种,最好使用三种不同原理的支原体检测方法同时进行检测,才能使检测结果接近100%正确。

如果您想得到100%正确的支原体检测结果(比如,开展细胞治疗的客户,进行干细胞培养的客户,生产血清、胰酶、培养液的客户,出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等),任选上海易色《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR 法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测,将会得到比较满意的结果,检测的正确率应该在99.9%以上。如果同时使用这三种试剂盒进行检测,检测的正确率应该在99.99%以上。

《PCR法支原体检测试剂盒》选购注意事项

《PCR法支原体检测试剂盒》选购注意事项 (2016年10月16日) 目前,PCR法支原体检测仍然是支原体快速检测领域被客户选购最多的方法。目前,商业化的PCR法支原体检测方法就有好几种,各优缺点分述如下: ●方法(1):不带内参基因的普通PCR法支原体检测试剂盒。该试剂盒含 有2条引物,不带内参基因。通过30-35轮的普通PCR直接检测。需要通过琼脂糖电泳分析检测结果,整个检测过程耗时3-4小时。缺点:无法区分真阴性样品和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品(二者,支原体特异条带均为阴性)。 ●方法(2):带内参基因的普通PCR法支原体检测试剂盒。该试剂盒含有 2条引物,带内参基因。通过30-35轮的普通PCR直接检测。需要通过琼脂糖电泳分析检测结果,整个检测过程耗时3-4小时。优点:可以区分真阴性样品(内参条带为阳性而支原体特异条带为阴性)和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品(内参条带和支原体特异条带均为阴性)。 ●方法(3):巢式PCR法支原体检测试剂盒。该试剂盒含有4条引物,一 般不带内参基因。第一轮,用2条外引物通过30轮的PCR扩增后;第二轮,取少量第一轮的扩增产物作为模板,用2条内引物再进行30轮的PCR 扩增。需要通过琼脂糖电泳分析检测结果,整个检测过程耗时6-8小时。 缺点:耗时太久,容易产生假阳性。 ●方法(4):定量PCR法支原体检测试剂盒。该试剂盒含有2条引物,不 带内参基因。通过40轮的定量PCR检测。无需通过琼脂糖电泳分析检测结果,整个检测过程耗时2-3小时。缺点:无法区分真阴性样品和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品(二者,均显示为没有扩增)。

解脲支原体检查方法

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢 解脲支原体检查方法 导语:解脲支原体很有可能会出现感染的现象,而这个是男性体内的一种激素,如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话,在报告结果中是会 解脲支原体很有可能会出现感染的现象,而这个是男性体内的一种激素,如果通过检查发现这个解脲支原体有什么异常现象的话,在报告结果中是会表现出来的,而解脲支原体的检查方法有是有很多的,一般在做这个检查的时候都是很多男性出现了尿多尿急尿频繁的现象,所以才到医院做检查,那么解脲支原体检查方法有哪些? 解脲支原体的检查方法主要有三种,第一种检查方法就是血液检查,主要是通过抽血化验。第二种检查方法就是通过口腔的涂片的培养来进行检查。第三种检查方式就是PCR的技术检测,这种检查方式可以检查出igm的抗体情况,然后再判断感染的情况。这种疾病的治疗可以使用四环素,比如米诺环素、多西环素等等,但是建议最好两种到三种的抗生素结合一起使用,治疗效果更好。 支原体是细胞外生存的最小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状,分枝状等多种态。它不同于细胞,也不同于病毒,种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中,5种对人有致病性,即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体,生殖支原体及发酵支脲解支原体属含脲解支原体等体、脲解支原体及人型支原体等对人有致病性。 男性支原体检查方法有哪些?男性支原体检查方法如下: 1、血常规:周围血白细胞计数一般正常嗜酸性粒细胞增多。 2、血清学检全:采用补体结合试验着恢复期血清抗体效价比急性预防疾病常识分享,对您有帮助可购买打赏

1医学检验毕业论文 (三种肺炎支原体检测法的临床应用分析)

毕业论文 题目:三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日

三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道(非细菌性)感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,每患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab检测,对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例,阳性率为51.3%,病程为(4.5±2.6)天;PCR法检测出阳性103例,阳性率为67.8%,病程为(6.2±3.5)天;MP-Ab法检测出阳性127例,阳性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性,临床医生应根据患儿病程选取检测方法,以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体,快速培养法,咽拭子聚合酶链反应,血清抗体,配对研究

目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误!未定义书签。

人型支原体阴性正常吗

人型支原体阴性正常吗 可能当我们偶尔听到人型支原体这一名字时会十分陌生,其实人型支原体是一种微生物,而如果人体感染了这种微生物的话就会引起一系列的不适,如果不及时治疗还会给身体造成很多的危害。因此对有相关症状的患者要做及时检查,那么人型支原体阴性正常吗? 人型支原体阴性正常吗 人型支原体阴性是正常的。人型支原体(M.hominis,MH),人型支原体是支原体的一种,它存在于泌尿系和生殖器中,可以引起泌尿系的感染和生殖器的炎症,如果您担心的话,可以来院做相关检查,明确是否有感染。 无细胞壁及前体,细胞器极少。DNA的G+C含量低,菌体内具有非常小的染色体组,其分子量约为45×108,菌体细胞大小约为0.2-0.3μm,很少超过1.0μm。由三层蛋白质和脂质组成的膜样结构以及一层类似毛发结构组成。支原体由二分裂繁殖,形态多样。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性。 人型支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长。用培养基培养。营养要求比细菌高。由于它没有细胞壁,因此对影响细胞壁合成的抗生素等不敏感,可抑制或影响支原体的蛋白质合成,特别是含PHMB杀菌成分的洁阴洗液有杀伤支原体作用,支原体对热抵抗力差,通常55℃经15分钟处理可使之灭活。石碳酸,来苏儿易将其杀死。在培养基中置入脲素并以硫酸锰作指示剂极易与其他支原体作出鉴别。 人型支原体感染有什么危害 支原体是非淋性尿道炎的一种特殊类型,是微生物。支原体感染临床表现为:“尿黄,尿道口微红,尿频,尿不尽,尿道痛,烧灼感”等症状。人型支原体,其特点是生长时需要类固醇物质。人型支原体菌落较大,直径在300~1000微米,典型的菌落具有“油煎蛋”的外观。长期的或反复的衣原体和支原体感染会破坏子宫颈和输卵管内的内膜层,造成不孕。衣原体和支原体的感染大多数是通过性行为传染的,有杜绝互相传染而反复感染,就应该对性伴侣同时治疗。 人型支原体感染后会导致患者身体出现多种不适的症状,人型支原体阴性的检查结果就说明了患者并没有真正的感染上这种微生物,这是一件值得高兴的事情。并且在生活中我们也要注意做好这种疾病的预防,这样才能远离疾病给我们身体带来的危害。

两种梅毒检测方法对比

第20卷第12期航空航天医药2009年12月29 两种梅毒检测方法对比 于晓明,胡雪峰,迟丽娜 (中航工业哈尔滨二四二医院,黑龙江哈尔滨150066) 摘要目的:比较甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、螺旋体明胶颗粒凝集试验(11PPA)两种梅毒血清学试验的检测结果。方法:将2008~2009年性病门诊138例确诊梅毒患者血清同时用甲苯胺红不加热血清试验 7musT试验、螺旋体明胶颗粒凝集试验7rPPA试验检测,比较两种梅毒检测实验方法的灵敏度和特异性。结果:138份血清中,98份血清TRUST阳性,17份经抗梅毒治疗血清TRusT阴性,TPPA试验132份血清为阳性。结论:TRUsT试验可作为梅毒的人群筛查、疗效、复发或再感染的检测指标,嗍试验是检测梅毒螺旋体抗体的特异性方法,主要作为梅毒的确证试验。两种不同方法同时进行梅毒检测,将减少漏诊、误诊率,为梅毒的确诊提 供参考依据,并且在判定梅毒的发展、痊愈及药物疗效方面都具有十分重要的意义。 关键词梅毒;甲苯胺红不加热血清试验(TRUST);螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA) 中图分类号:R446.11文献标识码:A文章编号:1005—9334(2009)12—0029—02 ComparisonoftheDifferentMethodsExamingTreponema/YUX/ao—ming,HUXue一乃ng,CHI 厶一//Harbin242HospitalofAVIC,Harbin150066,China Abstract0bjL吣tive:toselectthebestscreeningmethodsuitingforblooddonorsbyassessingthevalidityof TRUSTandTPPA.Methods:TRUSTWasusedtoscreenpatientswithsyphihsfromblooddonors。andTPPAWagusedto confirmedpositiveresultsdetected byTRUST.Results:thesensitivity.falsepositiverateandfalsenegativerateofTRUSTwere39.02%,3.03%,and60.98%respectively.111esensitivity,falsepositiverateandfalsenegativerateofEUSAwere 98.73%。20.59%and1.22%.Conclusions:ThecombinationofTRUSTandELISAisthefirstchoiceto∞reenpatientswithsyphilisfromblooddonors.Moreovertllisscreeningcontributestobloodsafety. KeywordsTreponema:TRUST;TPPA l材料与方法 1.1一般资料138例患者均为性病门诊确诊者,其中男83例,占印.14%,女55例,占39.86%。I期梅毒68例,Ⅱ期梅毒51例,Ⅲ期梅毒19例。年龄18~72岁,平均32岁。 1.2试剂TRUST试剂为上海荣盛生物技术有限公司提供。TPPA试剂为日本富士瑞必欧株式会社提供。试剂均在有效期内使用。 1.3方法TRUST试验:室温下,生理盐水稀释至l:32,每孔滴加心磷脂抗原,100次/min振荡器上水平振荡8min,观察凝集结果,确定其阳性滴度。TPPA试验:室温下,在U型板上用稀释液将血清稀释,分别加入致敏和未致敏的明胶颗粒,孵育2h观察结果。 2结果 结果判定:TRUST过筛试验在漆圈中出现肉眼可见红色凝集块为阳性;若红色颗粒均匀分布未见凝集为阴性。TPHA确证试验(凝集)++++:红细胞形成膜状覆盖整个孔底,边缘形成皱褶;(凝集)+++:形成膜状覆盖部分孔底;(凝集)++:形成膜状,边缘成圆环;(凝集)+:成薄膜状,周围边有粗大圆环;(可凝)±:成纽扣状,中心稍薄;(不凝集)一:成光滑扣状结果表1。表l138例梅毒患者的TRUST和TPPA试验结果(例%) 从表1两种方法检测为阳性的138份样本中。TRUST法检出111份,占80%(11138);TPPA法检出133份,占96.4%(133/138);抗TPPA法阳性检出率明显高于TRUST法。 3讨论 从表1中可看出68例I期梅毒血清,TPPA阳性64例,阳性率94.1%,与顾伟鸣悼1报道的96.3%结果相近,TPPA对I期梅毒的敏感度为94.1%,对I期梅毒的敏感度高于TRUST。TRUST具有操作简便、报结果快、价格便宜等优点,可作为梅毒的人群筛查、疗效、复发或再感染的检测指标,当梅毒患者经抗梅毒治疗后,血清滴度下降,可作为疗效观察的指标。TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇组成,中,结果清晰易读,稳定性好:缺点是许多因素影响结果,高脂皿症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰出现假阳性结果,而且该试验在非淋菌性尿道炎患者中存在生物学假阳

《支原体清除试剂》使用说明书

《支原体清除试剂》使用说明书 关于支原体 支原体(Mycoplasma)是一种没有细胞壁的原核生物,大小约0.1 - 0.6微米。目前,已发现的支原体品种有100多种。由于支原体直径较小,经常可以穿过实验室常规的0.20微米孔径的除菌滤膜,高压过滤时,甚至可以穿过0.10微米孔径的除菌滤膜,造成细胞的支原体污染。 细胞培养的支原体污染来源主要有:(1)细胞之间的交叉污染,这是支原体污染的最主要原因;(2)细胞培养操作人员的口腔、皮肤等。(3)细胞培养用的组分,如血清、培养液等; 哺乳动物细胞的培养,支原体污染是个世界性的问题。目前,世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%,有些国家甚至高达80-90%。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测,以保证所用的细胞没有支原体污染。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。 科佰产品 货号名称规格价格货期CBP50044 支原体清除试剂(1000x)1ml 900.00 现货 产品用途 该产品专用于消除那些被支原体和某些无细胞壁的细菌感染的细胞系。在小型或大型细胞培养中,也可以直接添加到液体培养基中来预防支原体及常见的细菌污染。该产品仅用于基础研究,非临床用品。 运输和储存 该产品在2-8℃下运输,收到产品后请放于-20℃保存,该条件下,至少可以保存2年。推荐分装保存于-20℃。 使用方法 1) 从-20C冰箱中取出支原体去除试剂,室温融化; 2) 将50-100万个细胞铺到60 mm的细胞培养皿内,加入4 mL含支原体清除试剂的正常 细胞培养液(按1:1000比例加入); 3) 每2-3天更换细胞培养液,加入新鲜的含支原体清除试剂的正常细胞培养液。期间如 果细胞密度过大,请保持细胞密度适当(贴壁细胞可能需要胰酶消化),并更换新的培养皿; 4) 处理15天后,可以用支原体检测试剂盒(恒温法#CBP50041;PCR法#CBP50042; 发光法#CBP50043)进行检测,检测支原体是否杀灭完全。如果仍有支原体残留,可以考虑再处理6天;

支原体检查

附录XIIB支原体检查法 主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时,应同时进行培养法和指示细胞法(DNA染色法)。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体,必要时,亦可采用指示细胞法筛选培养基。也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法 第一法培养法 推荐培养基及其处方 (1)支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 氯化钠2.5g 牛肉浸液(1:2)500ml 葡萄糖 5.0g 酵母浸粉5.0g 酚红0.02g pH值7.6±0.2。于121℃灭菌15分钟。 (2)精氨酸支原体肉汤培养基 猪胃消化液 500ml 牛肉浸液(1:2)500ml 葡萄糖 1.0g 酵母浸粉5.0g L-精氨酸2.0g 酚红0.02g 氯化钠2.5g pH值7.1±0.2。于121℃灭菌15分钟。 (3)支原体半流体培养基按(1)项处方配制,培养基中不加酚红,加入琼脂2.5~3.0g。 (4)支原体琼脂培养基按(1)项处方配制,培养基中不加酚红,加入琼脂13.0~15.0g。 培养基灵敏度检查(变色单位试验法)(1)菌种肺炎支原体(ATCC 15531)、口腔支原体(ATCC 23714),由国家药品检定机构分发。 (2)操作将菌种接种于适宜的支原体培养基中,经36℃±1℃培养至培养基变色,盲传2代后,将培养物接种到待检培养基中,做10倍系列稀释,肺炎支原体稀释至10-7~10-9,接种在支原体肉汤培养基内;口腔支原体稀释至10-3~10-5,接种在精氨酸支原体肉汤培养基

内。每个稀释度接种3支试管,置36℃ 士1℃ 培养7~14天,观察培养基变色结果。 ( 3 )结果判定以接种后培养基管数的2 / 3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度:肺炎支原体(ATCC 15531 )应达到10-8,口腔支原体(ATCC 23714)应达到10-4。 检查法(1)供试品如在分装后24小时以内进行支原体检查者可贮存于2~8℃ ;超过24小时应置一20℃ 以下贮存。 ( 2 )检查支原体采用支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基(或支原体琼脂培养基)。支原体半流体培养基(或琼脂培养基)在使用前应煮沸10~15分钟,冷却至56℃ 左右,然后加人灭能新生牛血清(培养基与血清体积比为8:2 ),并可酌情加入适量青霉素,充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外,使用前亦应同样补加上述成分。 取每支装量为10ml的支原体半流体培养墓(已冷至36℃ 士1℃ )和支原体肉汤培养基各4支,每支培养基接种供试品0.5~1.0ml,置36℃ 士1℃ 培养21天。于接种后的第7天从4支中取2支进行次代培养,每1支培养基转种支原体半流体培养基及支原体肉汤培养基各2支,置36℃ 士l℃ 培养21天,每隔3天观察1次. ( 3 )结果判定培养结束时,如接种供试品的培养基均无支原体生长,则供试品判为合格;如疑有支原体生长,可取加倍量供试品复试,如无支原体生长,供试品判为合格,如仍有支原体生长,则供试品判为不合格。 【附注】质量检定部门应会同培养基制造部门定期抽检支原体培养基灵敏度。 第二法指示细胞培养法(DNA染色法) 将供试品接种于指示细胞(无污染的Vero细胞或经国家药品检定机构认可的其他细胞)中培养后,用特异荧光染料染色。如供试品污染支原体,在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。 试剂(1)二苯甲酰胺荧光染料浓缩液称取二苯甲酰胺荧光染料5mg,加人100ml不含酚红和碳酸氢钠的Hank 's平衡盐溶液中,室温下用磁力搅拌器搅拌30~40分钟,使完全溶解,-20℃ 避光保存。 (2)二苯甲酰胺荧光染料工作液无酚红和碳酸氢钠的Hank ' s溶液100ml中加人二苯甲酰胺荧光染料浓缩液lml,混匀。 (3)固定液醋酸:甲醉(体积比1:3)混合溶液。 (4)封片液量取0.1mol / L枸橼酸溶液22.2ml、0.2mol / L磷酸氢二钠溶液27.8ml、甘油50.0ml,混匀,调pH值至5.5。 培养墓及指示细胞(1) DMEM完全培养基。 ( 2 ) DMEM无抗生素培养基。

支原体染色试剂盒

支原体染色检测试剂盒 简介: 支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA 荧光染色法检测支原体污染的试剂盒,其原理是当细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst 染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白。 Leagene Hoechst Staining Kit 经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。 组成: 自备材料: 1、 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜 2、 PBS 或生理盐水 3、 载玻片、盖玻片 4、 预冷固定液:预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛 操作步骤(仅供参考): (一)贴壁细胞 1、取洁净盖玻片在乙醇中浸泡,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS 或生理盐水洗涤3次,再用细胞培养液洗涤。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内,接种细胞培养过夜,使融合率约为50%~80%。 2、加入干预条件使细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入Hoechst 固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。 3、去除固定液,用PBS 或生理盐水洗,每次3min ,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。 4、加入Hoechst 染色液,孵育。也宜用摇床,或手动晃动数次。 5、弃染色液,PBS 或生理盐水洗2次,每次3min ,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手 编号 名称 DA0140 100T Storage 试剂(A): Hoechst 固定液 50ml RT 试剂(B): Hoechst 染色液 50ml -20℃ 避光 试剂(C): 荧光封片剂 5ml 4℃ 避光 使用说明书 1份

儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较

儿童支原体RNA检测及肺炎支原体抗体的比较 发表时间:2016-05-09T11:40:39.230Z 来源:《中国医学人文》(学术版)2016年1月第2期作者:王玉琪 [导读] 比较2种检测方法的优缺点。结论:MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标,为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 王玉琪 浙江大学医学院附属儿童医院浙江杭州 310052 【摘要】目前:通过对肺炎支原体(MP)RNA检测及抗炎支原体抗体(MP-IgM)的研究,探讨两种检测方法在临床中的应用。方法:对208例肺炎住院患儿行呼吸道分泌物MP-RNA及血清MP-IgM测定,比较2种检测方法的优缺点。结论:MP-RNA、MP-IgM均是诊断MP感染的有效指标,为临床诊断及治疗提供了有力的依据。 【关键词】肺炎支原体;抗体检测;RNA检测 肺炎支原体是(MP)是小儿呼吸道感染常见的病原体之一,可引起上呼吸道及下呼吸道感染,尤其是社区获得性肺炎(CAP)的重要病原[1]。MP的实验室检测方法有很多,血清学检测是目前MP感染的常规实验室手段[1],利用酶联免疫吸附试验,如检测持续高滴度MP-IgM或恢复期抗体滴度较急性期4倍或4倍以上变化可诊断。近年随着分子生物学技术的发展,RNA恒温扩增实时荧光检测(SAT)技术应用于临床,为MP感染的早期诊断提供了新的检测方法。本研究对本院208例疑似肺炎支原体肺炎患儿分别采集呼吸道分泌物及血清同时检测患儿的MP RNA及MP-IgM,现将结果报告如下。 1资料与方法 1.1 一般资料 选择2015年6月1日~2015年12月1日在本院住院的疑似MP呼吸道感染的患儿208例,其中男性106例,女性102例,年龄1个月~13岁。根据年龄分为两组,A组(0~3岁,n=128),B组(3~12岁,n=80)。两组患者的一般资料具有可比性(P<0.05)。 1.2 仪器与试剂 杭州……………… 1.3方法 采集患静脉全血,常规分离血清后检测肺炎支原体抗体(MP-IgM),同时用灭菌棉签采集受试者咽部样本(大于1岁患儿)或痰液(小于1岁)行MP RNA检测。操作方法均严格按照试剂盒说明书进行。 1.4 肺炎支原体肺炎临床诊断标准:持续咳嗽,可伴有发热,白细胞计数正常或稍高,X线提示两肺均匀一致改变的片状阴影或大叶性肺炎改变。 1.5 统计学处理采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析,资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 208例患中,MP-IgM阳性率34.1%(71/208),MP RNA检测结果阳性共率31.2%(65/208),两者比较差异无统计学意义 (P>0.05)。 3 讨论 肺炎支原体(MP)是引起儿童呼吸道感染,尤其是社区获得性肺炎的常见病原体之一,临床表现为干咳、发热,部分患儿可出现胸腔积液、肺纤维化,肺外损害,如皮肤、胃肠道、血液系统损害、骨关节肌肉、中枢神经系统、心血管系统等[2-4]。MP感染症状可持续或迁延数周或数月,常可引起慢性咳嗽和反复呼吸道感染,还可能引起喘息。MP感染患儿临床表现常不典型,常规抗生素治疗效果欠佳,因此,早期诊断对临床治疗有着重要意义。目前,多种检测方法针对MP-IgM,具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速的特点,已作为早期诊断MP感染的客观指标而应用于临床。本研究结果显示,208例患儿中,痰液标本或咽拭子SAT法,MP RNA阳性率34.6%,ELASA法测定MP-IgM阳性率29.3%,两者比较有统计学意义(P<0.05),这可能与血清标本留取时间有关,MP感染后约7d可在血清中检测出MP-DNA抗体,疾病早期可呈假阴性[5]。同时,在组内两种检测手段也呈现了不同结果。A组中的MP RNA的阳性率高于MP-IgM的检测 (P<0.01),这可能由于婴儿免疫系统发育不完善,当MP感染后不能产生或产生效价较低的抗体而导致漏诊,提示MP RNA方法更适于年幼儿和免疫损害患儿的MP感染的早期诊断[5];而核酸检测受年龄影响较小,故阳性率较高。B组中,两种检测方法阳性率分别相比较无统计学意义(P>0.05),说明咽拭子MP RNA检测方法同样具有较高的敏感性,但同时需结合MP-IgM检测结果,以除外假阳性结果。综上所述,MP-IgM检测及MP RNA检测在诊断MP感染均有较高的价值,二者联合应用可提高检测的准确性,为临床诊断提供有力的依据。 参考文献: [1]Vervloet LA,Marguet C,Camargos PA.Infection byMycoplasma pneumoniae and its importance as an etiologicalagent in childhoodcommunity-acquired pneumonias[J].Braz J Infect Dis,2007,11(5):507—514. [2]Gaillat J,Elahault A,deBarbeyrac B,et https://www.360docs.net/doc/9e13992948.html,munity epidemiology of Chlamydiaand Mycoplasma pneumoniae in LRTI in France over 29 months[J].Eur JEpidemiol,2005,20(7):643-651. [3]Blasi F.Atypical pathogens and respiratory tract infee—tions[J].Eur Respir J,2004,24(1):171—181. [4]Hansbro PM,Beagley KW,Horvat JC,et a1.Role ofatypical bacterial infection of the lung in predisposition/protection ofasthma[J].Pharnlaeol Ther,2004,101(3):193-210. [5] Kim NH,Lee JA,Eun BW,et a1.Comparison of poly-merase chain reaction and the indirect particle agglutinationantibody test for

生物发光法和qPCR法检测支原体

支原体检测试剂盒(MycoAlert Mycoplasma Detection Kit) 定义:支原体(mycoplasma),又称霉形体,没有细胞壁的原核生物,为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。它对许多抗生素具有抗性,如类胸膜肺炎微生物。 一.支原体污染成为细胞培养的重大隐患: 1.研究表明,世界范围内超过15%的培养细胞都有支原体污染。2.支原体污染会对细胞造成多方面的影响,包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变。 3.支原体污染会影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性。 4.支原体难以检测,同时也很难消除。支原体能轻易地通过标准滤膜,同时也能拮抗绝大多数的抗生素,给细胞培养造成巨大损失。 二.常规检测才能有效避免细胞支原体污染: 1.常规性的进行支原体检测是保证细胞培养中不受到支原体污染影响的唯一途径。 2.传统的支原体检测方法需要在特殊的选择性培养基作用下对样品进行培养,时间往往达数周,费时,费力并且无法获得足够的灵敏度和特异性。 三检测原理 美国Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原体检测试剂盒是利用支原体酶的这一特定活性,进行选择性的生物化学检测。这些酶的存在提供了一种快速的筛选操作,能灵敏地检测出样本中的

支原体污染。这些存活的支原体被溶解,然后释放出来的酶与支原体检测试剂盒中提供的底物发生催化反应,将ADP转化成ATP。通过测量样品中添加底物前后ATP的含量,可以得到一个比率,该比率指示支原体是否存在。如果这些酶不存在,第二次读数相对于第一次读数就没有增加;如果酶与底物进行特异性反应,就会导致ATP含量上升。ATP含量的上升通过生物发光化学反应可以检测到,其公式如下:Luciferase ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT 这个反应的发生是在室温(18°C~22°C)进行的,也是荧光素酶反应的最佳温度。 在支原体检测试剂盒的检测原理中,最后通过分光光度计读数,由于发出光的强度与ATP的浓度成线性关系,因此可检测支原体的污染问题。

人型支原体感染是什么

人型支原体感染是什么 我们常说支原体衣原体,其实这是性/病的一类,在划分细点,支原体还可以分为解脲支原体、人型支原体、肺炎支原体,而衣原体中最多见的是沙眼原体。临床很多的患者被检查出有解脲支原体,而检查出有人型支原体的比较在少数。于是很多人对自身检查出人型支原体阳性不懂是什么意思? 人型支原体感染,和解脲支原体一样是生殖道支原体感染的一种,主要可以通过血培养和生殖泌尿道分泌物培养而检测出,若是为阳性就是表明有感染,其中,分泌物的培养多准确点,以MH-DNA阳性表现有感染。若是有症状的患者或是无症状的备孕夫妻是需要治疗的,治疗上可服用妇炎丸治疗。 人型支原体既不是细菌也不是病毒,是介乎于细菌和病毒之间的病原体,是人类泌尿生殖道最常见的寄生菌,同时也是一种条件致病菌,就是在特定的环境下可以致病。这里的特定的环境下,可以是在人体抵抗力差的时候致病,也可以是在长期的抗生素大剂量使用下,导致体内的菌群失调下致病。 人型支原体感染是怎么得的? 人型支原体主要通过性接触或分娩时经产道感染人体,前者多是在有过多人性/交史或者有过不洁性/交史的成人身上,后者多是有过人型支原体感染的孕妇顺产的婴儿身上。 人型支原体感染有什么危害的? 人型支原体由于只对粘膜细胞敏感,尤其是对男性的尿道粘膜和女性的宫颈粘膜、尿道粘膜敏感,它不侵入机体组织与血液,而是在泌尿生殖道上皮细胞黏附并定居后,通过不同机制引起细胞损伤,引起粘膜发生炎性反应和炎性细胞浸润,从而导致一些类的生殖道疾病、泌尿道疾病,甚至是直接减低男女的生育能力。 女性有人型支原体感染,前期表现是支原体宫颈炎,此时经过妇炎丸治疗多是会取得满意的效果。若是此阶段没有重视或是治疗方法不对,支原体会继续感染,进入生殖道后可附着于细胞膜受体上,引起粘膜发生炎性反应和炎性细胞浸润,以巨噬细胞及中性粒细胞等炎性细胞为主,被激活的巨噬细胞产生大量的肿瘤坏死因子和干扰素、白介素等细胞因子,使宿主细胞结构和机能受损,造成子宫颈管内膜的慢性炎症,且易逆行传播至子宫内膜及输卵管粘膜使其受损。 人型支原体的治疗,若是经抗生素治疗效果不佳或者已经产生耐药性,建议转为中药的治疗同时,需要多注重个人生活卫生,保持良好的个人卫生!最好不好进行房事,以免交叉感染!

两种血沉检测方法的比较分析

两种血沉检测方法的比较分析 发表时间:2012-02-01T09:20:22.603Z 来源:《中外健康文摘》2011年第38期供稿作者:杨占甲[导读] 统计学处理将所得数值导入2003版的EXCEL,并对其进行Student-t检验和相关性分析。 杨占甲(河南省郑州人民医院河南郑州450000) 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)38-0080-01 【摘要】目的采用传统的魏氏法和倾斜管法两种方法来测定红细胞的沉降率,并对两种血沉检测方法进行比较分析。方法随机采集100例血液标本,对这100例血液标本同时采用倾斜管法和魏氏法两种方法进行红细胞沉降率的测定,并对两种血沉检测方法进行统计比较和分析。结果对两种血沉检测方法进行比较分析,两种方法测定的红细胞沉降率差异并不显著(P>0.05),没有统计学意义,相关性很好。结论采用倾斜管法对红细胞的沉降率进行测定是一种简单、便捷的方法,可以在特点的条件下使用,具有推广价值。【关键词】魏氏法倾斜管法红细胞沉降率相关性分析 红细胞沉降率是指在一定条件下,红细胞沉降速度的指标,简称为血沉,英文表示为ESR。一个健康人红细胞沉降率通常在一个比较狭窄的范围内上下波动,不会有大幅度的升降变化,而在很多病例情况的干涉下,红细胞沉降率会表现出明显的增快。血沉检查时非特异性试验的一种,但即使如此,将血沉结果与临床资料相互对照显示,血沉检查在临床上很可以有很多应用,可以辅助判断患者机体是否有炎症,患者病变是否有活动性等等,可以为临床检查提供参数具有很重要的参考价值,临床上也常常采用血沉检测的方法来作为试验诊断的方式。在进行红细胞血沉率的测定时,一定要及时进行,只有这样才不会影响记过,所以可以理解,在医院中,采集患者血液样本进行血沉测定时,并不是有专业的医务人员在实验室进行检测和诊断,而是当护士对患者抽血后,立刻将血液移到无菌处置室来进行血沉测定的,但是不可避免的是,护士可能同时有很多工作需要去处理,便不能保证在准确的时间1h读取血沉值,可能晚些甚至将其以往,有鉴于此,本文介绍另一种测量血沉的方法:倾斜管法,并在此将倾斜管法和魏氏法进行血沉比较分析。魏氏法是国际血液学标准化委员会推荐的常规方法,将倾斜管法与魏氏法进行比较分析更具有说服力。 1 资料与方法 1.1一般资料在2006年~2011年诊科病房的患有不同性质疾病的患者中,随机抽取100例患者的血液标本,其中男53例,女47例,年龄53~81岁,平均年龄67岁。 1.2方法清晨,在患者空腹的情况下从患者身上抽取血液,抽取患者的3.2ml的血液,并将其与3.8%枸橼酸钠溶液混合,枸橼酸钠溶液的体积控制在0.8ml,与此同时向其中注入两支魏氏血沉管至“0”刻度,结束后,将其分别放置在两个魏氏血沉架上,在放置时,两支试管放置的方式不同,其中一个按照常规方法放置,即垂直放置,1h后要低于血浆段的高度进行读取并记录,另一个要放置在特定的自制的等腰直角三角形架子上,保持倾斜45°角,并于10min后将血沉值读取。 1.3统计学处理将所得数值导入2003版的EXCEL,并对其进行Student-t检验和相关性分析。 2 结果 经过1h后采用魏氏法测得的血沉值平均为33.12±32.556mm/h,而经过10min后采用倾斜管法测得的血沉值平均为33.39±32.509mm/h,用统计学方法对两组数据进行Student-t检验,结果表明两种方法检测结果没有统计学意义(t=0.59,P=0.52>0.05),对两组结果进行相关性分析,分析结果显示两种方法的检测结果呈正相关,相关系数为r=0.97,数据显示两者相关性较好。 3 讨论 测量红细胞沉降率在临床上应用很广泛,将血沉结果与临床资料相互对照显示,血沉检查在临床上很可以有很多应用,可以辅助判断患者机体是否有炎症,患者病变是否有活动性等等,可以为临床检查提供参数具有很重要的参考价值,临床上也常常采用血沉检测的方法来作为试验诊断的方式。魏氏法是最经典最传统最常规最可靠的检测血沉的方法,魏氏法也是国际血液学标准化委员会推荐的常规方法,但是在实际应用中,魏氏法的过程比较复杂,需要手工操作,而且对观察记录的时间也有比较严格的要求,人们近年来一直在寻求一种更简便、更省事的测量血沉方法,比较熟悉的是采用自动电子血沉仪,这种电子血沉仪虽然更加便捷,且检测的时间也不长,但所得的检测结果受到很多外界因素的影响,但是仪器的成本比较高,并不是所有的医院都可以普及。倾斜管法对仪器并没有新的要求,而且检测的时间短,仅需10min便可,且检测结果可以直接读出来而并不需要进行换算,从两种血沉检测方法的比较分析中,倾斜管法与魏氏法几乎没有差别,相关性较好,对于血沉增高患者结果更加明显,所以倾斜管法适用于血沉增高患者或者需要经常复查血沉的患者,可以对其进行动态检测。 参考文献 [1]陆金春,李春德,黄宇烽.临床检验报告速查手册[M].上海:上海第二军医大学出版社,2009. [2]卢雁英,赖桂凤,郑丹丹.血液标本采集对检验结果的影响[J].包头医学院学报,2011(3):14-15. [3]马翠萍,魏以壁.二级医院检验科生物安全管理现状及对策[J].医学理论与实践,2011(10):132-133. [4]李恵,高洪国,张元梅.两种红细胞沉降率检测方法的比较[J].齐齐哈尔医学院学报,2011(7):67-68.

PCR法支原体检测

PCR法支原体测定PROTOCOL 生效日期(年-月-日) 有效期至(年-月-日) 分发部门:质量部

1.目的 规范PCR法支原体检测的操作方法。 2.范围 适用于项目研发过程样品、原液、成品及中间体的分析。 3.责任 质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。 4.定义 N/A 5.设备、材料和试剂 5.1设备、材料 设备名生产商型号/货号备注PCR仪Thermo ARKTIK5020 N/A VORTEX IKA GENIUS 3 N/A 小型台式冷冻离心 机Thermo HERAEUS Fresco 21 N/A 单道移液器 (10ul,20ul,100ul) Eppendorf Research plus N/A 多功能水平电泳槽Tanon HE-120 N/A 凝胶成像系统BIORAD ChemiDoc? XRS+ System N/A 5.2试剂 试剂名称生产商货号TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set TaKaRa 6601 TaKaRa Ex Taq? TaKaRa RR001A Regular Agarose G-10 Biowest N/A Goldview 国产N/A

10×Loading Buffer TaKaRa 9157 DL5000 DNA Marker TaKaRa 3428A 内毒素检查用水厦门鲎试剂实验厂有限公司 6.溶液配制 6.1 50× TAE Buffer 称取242.0g Tris,37.2g Na2EDTA·2H2O于1L烧杯中,向烧杯中加入约800ml 超纯水,充分混匀,加入57.1ml冰乙酸,充分溶解,加入超纯水定容至1L,室温保存。有效期6个月。 6.2 1× TAE Buffer 量取10ml 50× TAE Buffer,加入490ml超纯水,充分混匀。有效期6个月。 7.操作步骤 用于检测支原体的样品是接种后进行3-6天细胞培养的培养上清液。如果使用常用的细胞培养基时,培养上清可直接加入到PCR反应液中,如果使用细胞悬浊液作为样品,则需要提取DNA,再进行PCR反应。如果样品中含有PCR 反应阻碍物,需要对DNA进行抽提,再添加到PCR反应液中,为了确认样品中是否含有反应阻碍物,在样品中加入Control Template进行正对照反应。 7.1 1st PCR反应 7.1.1按下表顺序配制反应混合液(50ul体系) 试剂用量(ul) 内毒素检查用水37.75~38.75 10× PCR Buffer 5 dNTP Mixture 4 MCGp F1 Primer 0.5 MCGp R1 Primer 0.5

支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)

支原体检测试剂盒使用说明书 1.试剂:支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。 2.实验方法: 巢式PCR的方法检测支原体污染: A.待检细胞汇合率在90%以上时取100 μL细胞上清液到离心管内 B.95o C孵育5分钟 C.短暂高速离心15秒钟左右 D.试剂盒里的组份: 引物混合物(Primer Mix) 20 μL 阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 μL 阴性对照(Internal Control DNA) 20 μL 巢式PCR一共需要做2轮PCR,本检测方法不受其他来源(如所培养细胞)DNA的影响,不但提高了检测的灵敏度,同时也提高了特异性。 (1)第一轮PCR: PCR 混合物: 向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分, 盖紧管盖,轻弹管壁混匀,稍加离心。 E.热循环程序: 将准备好的PCR管放入PCR仪,运行如下程序。 PCR 混合物: 向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分,

盖紧管盖,轻弹管壁混匀,稍加离心。 F. 热循环程序: 将准备好的PCR 管放入PCR 仪,运行如下程序。 试验结果: 2% 琼脂糖凝胶电泳,TBE 缓冲液,PCR 产物及Marker 均点样10μL ,于50V 下电泳1hr ,EB 染色15min ,紫外灯下观察。 电泳结果见下图: 图中泳道M 为DNA Marker ,1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st ),3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物,2、4为阴性对照PCR 产物。 阳性对照管在200bp 左右,和300-400 bp 处各有一条带,证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一,大概在200-400 bp 之间)。 M 1 2 3 4

人型支原体感染有什么症状

人型支原体感染有什么症状 随着现在的精神文化生活日渐丰富,人们的思想观念与西方日益接轨,人型支原体这种主要依赖于性传播的疾病日渐猖獗,在成人男女中发病率特别高,特别是女性朋友,感染人型支原体的几率和感染的严重程度都比男性要高。那么人型支原体感染有什么症状,缘何爱盯上女性呢? 女性人型支原体感染症状 其实女性人型支原体感染是一种妇科炎症,主要通过性接触传播。一般来说,女性如果有支原体感染的情况,会有以下症状: 1、早期的女性人型支原体感染,患者会出现尿道口红、肿、痒、刺痛、白带增多的情况;少数患者无明显症状; 2、女性人型支原体感染一段时间后,可引起宫颈炎、子宫内膜炎或输卵管及卵巢炎,这时候,患者会出现畏寒、发热、恶心、呕吐、纳差、腹痛、腹泻及白带增多等情况;有些患者伴有尿急、尿痛及尿频。 3、如果女性患人型支原体感染时间较长,没有得到及时治疗,膝、腕、踝及肘等关节会有肿胀、疼痛及活动受限的情况,严重的话甚至可能发生脓毒性关节炎。 4、人型支原体感染严重者,或者免疫力异常低下的女性,还可伴发心肌炎、心内膜炎及淋菌性脑膜炎等。 5、女性人型支原体感染,若前庭大腺受侵,可出现外阴红肿、疼痛及破溃流脓等情况。 女性感染人型支原体后,症状还是比较明显的,一旦出现了早期感染症状,要及时去医院检查治疗,以免耽误治疗,引发严重的后果。那么女性为什么容易感染人型支原体,症状为何比男性重,其实这是由于女性的生理结构决定的,我们继续往下看。 人型支原体感染爱盯上女性的原因 1、女性尿道短,仅约3~5cm,直而宽,尿道括约肌薄弱,且尿道口大,细菌易上行侵入膀胱。而女性膀胱排空不如男性完全,残余尿量较多,尿液在膀胱内停留时间过长,有利于细菌滋生。 2、女性尿道口距阴道、肛门近,尿路上皮细胞对细菌粘附性及敏感性较男性为高,月经血也是细菌良好的培养基,如不注意外阴清洁则细菌容易滋生,受到外界的感染。

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