(完整版)免疫检测点介绍
（一）免疫检测点简介
“免疫检验点”，为抑制受体和抑制信号通路，这些“检验点”在正常情况下能抑制T 细胞的功能，同时在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸。
PD-1 、PD-L1、CTLA-4、B 和T 细胞衰减器（B and T cell attenuator，BTLA）、T 细胞免疫球蛋白以及Tim-3 等分子均属于“检验点”分子，在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸，它们通过控制胞外以及胞内信号来控制细胞周期进程。
淋巴细胞活化基因3（LAG-3）是表达在活化T细胞、NK细胞及B细胞上的免疫抑制检验点分子。目前已知的唯一配体是MHC-II分子。
NK细胞表面存在杀伤抑制受体（KIRs，可抑制NK细胞的杀伤作用），在肿瘤微环境中可能会被诱导表达，从而抑制NK细胞的杀伤功能。因此，KIRs也被认为是免疫抑制检验点，通过阻断其信号可增强NK细胞的杀伤肿瘤的功能[53]。目前已有针对KIRs单抗进入临床实验（lirilumab单抗治疗急性粒细胞白血病已进入I期临床实验）很多免疫抑制检验点在肿瘤细胞中与PD-1/PD-L1共表达，另一方面，免疫抑制检验点的联合阻断中可供选择的目标增多有利于筛选出最佳组合从而达到最佳效果。
（二）临床常用的检测点
“程序性死亡分子1”（programmed deah-1，PD-1）和“细胞毒T淋巴细胞相关抗原4”（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4，
CTLA-4）表达在T细胞表面，同属于抑制性共刺激分子，在免疫系统中扮演着类似“刹车”的角色。
CTLA的配体（即CD80和CD86）只表达在抗原递呈细胞上，而非肿瘤细胞表面，因此CTLA-4抑制T细胞活化发生在次级免疫器官（淋巴结）内，而不是肿瘤微环境中。同时CTLA-4主要表达在CD4+ T细胞而非CD8+ T细胞，CTLA-4单抗的抗肿瘤作用可能是通过增强CD4+ T细胞间接促进CD8+ T细胞的功能。
不同于CTLA-4的是，PD-1的配体PD-L1在肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞上均有表达，而不是在抗原递呈细胞上，因此PD-1/PD-L1抑制T细胞活化主要在肿瘤微环境中[5-7]。目前，在肺癌领域研究得比较多的免疫检验点抑制剂有抗PD-1（Nivolumab，Pembrolizumab）和PD-L1单抗（MPDL3280A和MEDI-4736）。
PD-L1仍然是现阶段PD-1/PD–L1类药物最有前景的预测疗效的生物标记物之一
在黑色素瘤相关研究中发现，抗PD-1抗体的疗效要好于抗CTLA-4抗体。在NSCLC，CTLA-4抗体单药治疗鲜有疗效，而PD-1/PD-L1阻断剂的单药均表现出肿瘤活性。
PD-1有两个配体，PD-L1和PD-L2；PD-L1有两个受体PD-1和CD80（B7.1）。所以，尽管抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体都作用于PD-1/PD-L1信号轴，但阻断PD-1并不等同于阻断PD-L1。抗PD-1抗体能阻断PD-1与PD-L1、PD-L2结合，却不能阻断PD-L1与CD80相互作用，而抗PD-L1抗体能阻断PD-L1与PD-1、CD80结合，却不能阻断PD-1与
PD-L2的结合。
抗PD-1单抗的代表性药物有Nivolumab和Pembrolizumab（MK-3475）。
1，Nivolumab是一种抗PD-1受体的人源化Ig G4型单克隆抗体。
百时美-施贵宝公司产品PD-1抑制剂，商品名“opdivo “(Nivolumab “纳屋单抗“)
美国默沙东公司研制PD-1抑制剂，商品名“Keytruda”（药品名：Pembrolizumab 派姆单抗，MK-3475）
2，Pembrolizumab（MK-347），是另一种人源化Ig G4-κ型单克隆抗体，高选择性阻断PD-1，其作用机理类似Nivolumab。
二，Ipilimumab（一种抗CTLA-4抗5体），商品名yervoy（Ipilimumab 易普利姆玛，也叫“依匹单抗”），和opdivo一样，都是由百时美施贵宝公司生产。
三，罗氏旗下基因泰克公司研发的“MPDL3280A”是人源化抗PD L -1的IgG4型抗体。
MEDI-4736是另一个Ig G1-k型抗PD-L1单抗。
（三）PD-1与PD-L1
PD-1（programmed death-1）作为T 细胞抑制受体，在肿瘤细胞中可限制T 细胞效应子的功能，在肿瘤免疫逃逸中具有重要作用。
人PD-1 基因位于染色体的2q37.35，虽然PD-1被认可为CD28 超家族成员，但PD-1 蛋白质结构与CD28、CTLA-4 及ICOS存在明显差异。
与其他的共刺激分子仅表达于T淋巴细胞不同，PD-1 持续性表达于T、B 淋巴细胞、骨髓细胞并上调于活化的T细胞表面。
PD-1 是免疫球蛋白超家族CD28 家族成员，为50 ~ 55 k D 的Ⅰ型跨膜糖蛋白，由类似Ig G V 的结构域、跨膜结构域以及胞质尾部结构域组成。Ig G V 的结构区是从质膜中分离的20个氨基酸区域，与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-4）、CD28 及共刺激因子具有22% ~ 33%的同源性；胞质尾区具有 2 个酪氨酸基序，即免疫受体酪氨酸抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM）和免疫受体酪氨酸转换基序（immunoreceptor tyrosine-based switch motif，ITSM）。ITSM 对于PD-1发挥免疫抑制功能十分必要［8］。
PD-1 的表达与细胞凋亡无关但与淋巴细胞活化相关。
PD-1 与肿瘤的免疫逃逸相关，其被T 细胞受体（T cell receptor，TCR）信号诱导，并在慢病毒感染及癌症中上调无衰竭T 细胞［9］。
PD-L1（B7-H1）和PD-L2（B7-DC）是PD-1 结合配体，属于B7 家族蛋白成员［10］。
人B7-H1与B7-1，B7-2 及ICOS 的同源性约为21 至23%。
PD-L1 在T 细胞、B 细胞、巨噬细胞、DCs 以及一些非免疫细胞中表达。
与其他的B7 家族成员仅表达于造血细胞不同，PD-L1 可上调表达于活化的T 细胞、B 细胞、DC、巨噬细胞、单核细胞，或经IFN-γ刺激的角质细胞、内皮细胞及成肌细胞表面。此外，PD-L1也低水
平的表达于非淋巴器官如心脏、胎盘、骨骼肌、肺、肝、脾及胸腺等器官。
而PD-L2 表达仅局限表达于造血系统来源的细胞如树突细胞、巨噬细胞、单核细胞并上调表达于活化的T 细胞、B 细胞及其他组织来源的免疫细胞表面。
B7-H1 在维持外周耐受发挥主要作用，B7-DC 主要是在淋巴结的免疫应答中有重要的功能[4]。
PD-L1 配体涉及宿主免疫系统的逃逸及肿瘤抗凋亡的活性［8 ］。PD-L1 的广泛表达表明PD-1／PD-L1 在调解效应T 细胞应答中具有重要作用。
与PD-L1相同，IFNγ、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage-colony sti-mutaing factor，GM-CSF）以及白细胞介素-4 （inte-rleukin-4，IL-4）等炎症信号可加强PD-L2 的表达。PD-Ls 在肿瘤中的表达可调解适应性Tregs 导致肿瘤诱发的免疫抑制，包括CD8+ T 细胞效应功能的抑制。
PD-1／PD-Ls 的Ig V 区域与T 细胞的抗原受体及抗体相似，提高了PD-1／PD-Ls 复合物结合其他分子的可能性。
活化诱导的细胞死亡
PD-1通过PD-L1 或PD-L2 募集PD-1，导致细胞周期停滞，使在G0／G1期的细胞大量积累。研究表明，外源IL-2 可减弱PD-1 聚集导致的细胞周期停滞。
PD-1 可能通过调节IL-2 的转录影响T 细胞的活化和增殖［26］。
乳腺癌的标本都有不同程度的B7-H1及B7-DC 的阳性细胞。尤其在低分化的小叶癌表达最为显著。B7-H1的表达与患者的预后呈负相关。
目前有 5 种处于临床试验阶段的抗体可作为阻断剂阻断PD-1／PD-Ls 信号通路，分别为
1，MDX-1106 ／BMS-936558 ／ONO-4538（全人Ig G4抗PD1单抗，BMS）
2，CT-011（人源化Ig G1 抗PD1 单抗，Cure Tech／Teva）、
3，MK-3475（全人Ig G4抗PD1单抗，Merck）
4，BMS-936559（人源化PD-L1 Ig G4 单抗，抑制PD-1 和B7.1）5，AMP-224（B7-DC／Ig G1 融合蛋白，GSK）
MDX-1106／BMS-936558／ONO-4538 是人IgG4抗体
CT-011 为另外一种PD-1 阻断剂抗体，研究证明，其对血液恶性肿瘤是有效的，对固体瘤及直肠癌的研究仍在进行中。
MK-3475（Lambrolizumab）是人源抗PD-1 单克隆Ig G4 抗体
BMS-936559为全长人Ig G4 抗体，其结合PD-1通路中的PD-L1。
AMP-224 为融合蛋白，包含抗体Fc 区域及PD-L2，是由治疗癌症和慢性感染的Amplimmune 发展来的，可结合共刺激受体和PD-1 活化T细胞。该抗体作用的最终目的是在肿瘤环境中还原免疫功能，另一方面通过中期因子相关的侵润性T淋巴细胞达到抑制效果。其可消除高水平表达的PD-1，但不能作用于低水平表达PD-1的细胞。
(整理)临床免疫检验项目介绍.
临床免疫检验项目介绍 临床免疫组是我院检验科的一个重要组成部分，与生化、临检相同，在检验科这个大家庭内茁壮成长，但他们都有着各自不同的使命。现将他展现在大家面前，做个“自我介绍”。 我室目前所检测项目大致分为四类，分别包括：1、传染病类，项目包括乙肝五项（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb），人类免疫缺陷病毒抗体HIV，梅毒特异性抗体TP，丙型肝炎抗体ant-HCV等，是术前检查必做的项目。2、内分泌类，项 目包括甲状腺功能七项（T3，T4，FT3，FT4，TSH,ATP,ATG），性激素六项（雌二醇E2、泌乳素PRL、促卵泡激素FSH、黄体生成素LH、孕酮Progest、睾酮TT），人绒毛膜促性腺激素HCG ，C肽，胰岛素，药物浓度（卡马西平、丙戊酸）及新增项目全段甲状旁腺激素iPTH等。3、肿瘤标记物类，项目包括CEA、AFP、CA125、CA15-3、CA19-9、CA724、CYRA21-1、NSE、Ferr、SCC、ProGRP、PSA、FPSA等。4、其他项目包括结核抗体，快速梅毒血清反应素试验RPR，TPPA等。 下面介绍一下这些项目的临床应用及检测前注意事项。免疫类检测基本都是用黄头管，最好是空腹采血，这样可以尽量减少脂血、胆红素等干扰因素对结果的影响。注意事项：如果不是清晨空腹采血而所查项目又是内分泌类的，那么一定要注意时间段，因 为人体在一天之内各个时间段分泌的激素是有差别的，在进行复查比对的时候尤其要 注意。 免疫类各项的临床应用： 一、传染病类 着重介绍一下乙肝五项： HBsAg乙型肝炎表面抗原为乙肝感染的一个特异性标志，是乙肝首先出现的病毒标志物。在急性乙肝的潜伏期，血清中HBsAg即可出现阳性，持续5-6周，于发病后4-5 个月内转阴。若阳性结果持续6个月以上，则为慢性乙肝感染状态。 HBsAb乙型肝炎病毒表面抗体通常用于监测乙型肝炎病毒疫苗是否接种成功。乙型肝 炎表面抗体对防止乙肝病毒感染十分重要。诸多研究已经表明乙型肝炎病毒疫苗刺激 免疫系统产生HBs抗体以及防止HBV感染的有效性。乙型肝炎病毒表面抗体项目也用于监测乙肝病毒感染病人的恢复和康复。急性乙型肝炎病毒感染后出现HBs抗体及乙
免疫组织化学抗体试剂及检测试剂盒注册申报资料的基础要求
免疫组织化学抗体试剂及检测试剂盒注册申报资料的基本要求 2013-01-04 01:48 免疫组织化学抗体试剂及检测试剂是指一类利用免疫学原理结合酶催化底物显色的化学方法，检测组织标本中抗原的检测试剂。此类试剂为待测抗原特异性单克隆或多克隆抗体，或抗体与显色系统、对照试剂、质控片及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂盒。该类产品检测项目繁多，应用广泛，检测过程为多步骤检测，影响因素多，在临床上主要用于检测细胞的特异性抗原以确定细胞的表型。该类产品的预期用途与诊断、鉴别诊断、预后判断、指导用药相关，按照三类体外诊断试剂管理。 基于该类产品临床应用的重要性及特殊性，根据目前注册申报工作的需要、依据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》、《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》以及《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的相关规定，结合临床及病理检测中的应用实践、临床病理专家和生产企业的建议，现对免疫组织化学抗体试剂及检测试剂盒注册申报资料提出以下基本要求（对于本要求未提及的部分，申请人均应依据相关法规要求提交注册申报资料）。 本《要求》是在目前科学技术认识水平及现阶段免疫组化类产品技术审评基础上形成的，审评人员会密切关注相关技术的最新进展，随着认识的提高将适时调整。由于该类产品种类繁多，《基本要求》不能涵盖所有该类产品的特殊情况，如某些要求不适用，申请人也可采用其他方式证明产品的技术性能，建议申请人对此进行详细说明，并
提交相应的性能验证资料。 依据免疫组化不同标志物的临床应用情况，将其分为二个大类：A类：Her2/Neu、ER、PR、ALK、CD117、c-met、CD20、EGFR等与临床治疗、用药密切相关的标志物；其他全新标记物，具有新的临床意义。 B类：临床使用多个指标综合诊治的标志物之一，与辅助诊断、鉴别诊断、病情监测、预后相关标志物：如：Ki67、CK5/6等。 一、产品说明书 1. 【产品名称】：单独的第一抗体试剂通用名称建议采取以下命名方式：待测抗原特异性抗体+试剂（免疫组织化学法）。抗体与显色系统、对照试剂、质控片及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂盒通用名称建议采用以下命名方式：待测抗原+检测试剂盒（免疫组织化学法）。如：雌激素受体抗体试剂（免疫组织化学法）、孕酮受体检测试剂盒（免疫组织化学法）。 2. 【预期用途】：应明确检测的样本类型（冰冻和/或石蜡包埋等）；明确抗体的类型、克隆号、阳性着色特点；明确临床用途（诊断、鉴别诊断、预后判断、指导用药）；指明“对任何阳性或阴性结果的解读，应
临床常规检验项目及其临床意义
正常值 临床常规检验项目： 一：红细胞记数RBC： 临床意义：诊断各种贫血和红细胞增多症正常参考值：男（4.0-5.5）T/L 女（3.5-5.0）T/L 二：血红蛋白HGB 临床意义：同上 正常参考值：110-160g/L 三：红细胞比积HCT 临床意义：同上 正常参考值：0.37-0.49 四：平均红细胞体积MCV 临床意义：判断贫血的类型 正常参考值：82-92fl 五：平均红细胞血红蛋白含量MCH 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：27-31pg 六：平均红细胞血红蛋白浓度MCHC 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：320-360g/L 七：红细胞体积分布宽度RDW 临床意义：RDW增加可见于营养缺乏性贫血 正常参考值：11.6-14.8 八：白细胞记数WBC 临床意义：增高见于感染、组织损伤、白血病；降低见于血液病、自身免疫病、脾功能亢进等 正常参考值：4-10G/L 九：白细胞分类DC 临床意义：用于血液病等疾病的诊断和判断感染轻重程度。中性粒细胞增高见于感染、白血病；降低见于某些感染、自身免疫疾病、脾亢等 嗜酸性粒细胞（EOS）增高见于过敏性疾病、某些皮肤病及传染病的早期；降低见于使用肾上腺皮质激素后等。 正常参考值：分叶核粒细胞GRAN 50-70% 嗜酸性粒细胞EOS50-300G/L（G=106）淋巴细胞LYM 20-40% 单核细胞MID 3-8% 十：血小板记数PLT 临床意义：检测凝血系统的功能 正常参考值：100-300G/L 十一：平均血小板体积MPV 临床意义：判断血小板减少的原因 正常参考值：6.8-13.5fl 十二：血小板压积PCT 临床意义：同PLT 正常参考值：0.1-0.3% 十三：血小板分布宽度PDW 临床意义：PDW增加见于血小板降低 正常参考值：15.5-18.0% 十四：网织红细胞记数RC 临床意义：判断骨髓增生情况，评价疗效 正常参考值：0.5-1.5%
常见微生物检验项目及临床意义
细菌培养与其它检验项目的临床意义 卫生部规定接受抗菌药物治疗的住院患者微生物检验样本送检率不低于30%（卫办医政发〔2011〕56号）。特介绍微生物检验项目，方便统计与分析点评。细菌检验为感染性疾病诊断和治疗提供依据： 目标性治疗：提高微生物的送检率与检出率，有利于诊断与使用抗菌药。 经验治疗：根据本地区病原菌类型时间、区域、耐药谱等使用抗菌药。 调整治疗方案针对性用药：获得准确病原菌和细菌药敏结果。 细菌培养的临床意义 细菌培养与其它检验项目不同，由于其样本采集易受杂菌的干扰和培养条件的限制，因而造成检测结果有时与临床不完全一致，故在分析细菌培养报告时应明白：细菌培养阴性不代表无细菌感染、细菌培养阳性不代表该菌一定是病原菌，应结合患者具体情况而定。 1、血液和骨髓培养 目前血液培养仍然是菌血症和败血症的细菌学检验的基本方法，并且广泛地应用于伤寒、副伤寒及其它细菌引起的败血症的诊断。菌血症系病原菌一时性或间断地由局部进入血流，但并不在血中繁殖，无明显血液感染临床征象。常可发生在病灶感染或牙齿感染，尤以拔牙、扁桃体切除及脊髓炎手术后等多见。败血症是指病原菌侵入血流，并在其中大量生长繁殖，造成身体的严重损害，引起显著的全身症状（如不规则高热与全身中毒等症状），它多继发于组织器官感染，尤其是当机体免疫功能低下、广谱抗生素和激素的应用及烧伤等。 单次的血培养结果，对临床无鉴别指导意义，应多次多部位采集血液进行培养，才可判定检出菌究竟是病原菌还是污染菌。 抽血时应特别注意皮肤消毒和培养瓶口的灭菌。 2、脑脊液培养 正常人的脑脊液是无菌的，故在脑脊液中检出细菌（排除操作中的污染）应视为病原菌。引起脑膜炎的细菌种类不同，化脓性脑膜炎病原菌多为脑膜炎奈瑟菌，除此之外尚有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌等。 3、尿液培养 尿液细菌培养对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值，对于尿道、前列腺以及内外生殖器的炎症也有一定价值。尿液中出现细菌通常称为菌尿症，如果尿液本身澄清但培养出细菌，一般为标本采集时未彻底消毒尿道口引起。如果细菌培养阳性同时伴有脓尿出现，则提示有尿路感染的可能（需指出轻度感染时可无脓尿出现）。泌尿系感染常见菌为大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌等，除结核分枝支杆菌外，这些细菌又是尿道口常驻菌，极易引起标本留样污染，应注意鉴别。某些真菌疾病，如曲菌病在播散时也可造成肾脏感染，且尿中也能检查到。
免疫细胞化学常用试剂分解
免疫细胞化学常用试剂 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamb oni’s(Stefanini’s)液 试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸 150ml Karasson-Schwlt’s PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。 该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其对组织的穿透力和固定效果，保存更多的组织抗原。固定时间为6～18h。 5．PLP液PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液 （Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）
血清学检测意义 1
猪血清学检测的意义及注意事项（一）抗体的检测 姜杰 QQ:3157394188 血清学检测分析作为从猪体和猪场取得信息的一个有效途径正变得越来越重要并日趋广泛，临床兽医或养殖场主在养猪生产中，对于血清学检测结果进行正确地分析和判断，非常有助于我们获取有效的信息并依此做出正确的决策以及改进。 血清学检测，通常是指在体外进行的抗原抗体反应，其基本原理就是利用抗原可与相应的抗体特异性结合的特性，利用已知的抗原来检查血清中是否含有相应的抗体，或者利用已知的抗体来捕捉相应抗原的血清学方法。 血清学检测作为解决猪病所必需的工具已经得到了广泛认可，但大多数的养殖场对血清学的检测目的、检测结果分析和判断存在一定的认识误区。现将检测意义和注意事项及其实际应用介绍如下： 1.免疫评估 监测疫苗接种方案的效果：应用血清学检测方法来评估畜群免疫后的抗体水平，从而判定选用的疫苗是否质量可靠、免疫方式是否确凿有效、免疫程序是否合理。 预测接种时间：在临床上，恰当的免疫接种时间往往是有效免疫的关键，目前，大家都能够认识到，在使用疫苗尤其是活苗的时候，一定要考虑在母源抗体(MDA)的影响，最可靠和可行的方法就是通过血清
学检测方法来测定母源抗体的消长，确定首免最佳时机并为以后的免疫打好坚实的基础。 例如：A场猪瘟抗体结果如下： 结果OD值 日龄10日龄 15头 15日龄 15头 20日龄 15头 25日龄 15头 2.599 1.87 1.350.971 2.5560.7380.4060.39 1.0670.8050.529 1.082 1.1360.7380.5010.294 2.061 2.1070.7470.453 2.0110.9830.4180.421 1.261 1.2360.3040.356 2.6370.8380.3850.438 2.7580.9930.4220.408 1.991 2.7640.5510.317 1.414 1.8360.4260.305 1.946 1.4150.3760.710 1.712 1.5380.2790.392 1.59 1.1850.4910.557 1.587 1.3080.7310.386 平均值 1.89 1.357 0.528 0.499 （表一） 分析：由上表可以看出10-25日龄平均值分别为1.89,1.357,0.528,0.499抗体水平依次下降 由表一可以看出适合防疫日龄20天 下面就需要检测的内容简要说明如下： 1.仔猪：15,20,30日龄检测猪瘟抗体 30,45,50日龄检测伪狂犬抗体 ,口蹄疫抗体， 60.90 日龄检测口蹄疫抗体
免疫检查包括哪些项目
免疫检查包括哪些项目 对于免疫力，我们最为熟悉了。因为免疫力低者，容易生病。最常见的是平时生活中，我们经常感冒发烧，是由于自身免疫力低。然而，我们想知道自己的免疫力如何，那么就要通过一定的检查。那么免疫检查包括哪些项目呢？ 免疫检查包括哪些项目 1. 激素六项。判断体内激素水平是否正常，可帮助诊断月经紊乱，不孕，习惯性流产等妇科疾病。 2. 风湿三项。主要用于风湿病、炎症性感染、急性心梗、恶性疾病的辅助诊断。免疫球蛋白全套。 3. 甲功三项。检查甲状腺的基本功能，判断是否有甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退或其它异常。 4. 血沉检查。用于各类炎性疾病，系统疾病，如：风湿、红斑狼疮及结核病的诊断依据之一。 5. 电解质测定。检测电解质是否紊乱。 6. 糖尿病检测。用于糖尿病分型的诊断和评估胰岛β细胞功能。 7. 微量元素六项。检测铜、镉、钙、镁、铁、锌在体内水平，观察近期营养情况。 8. 艾滋梅毒抗体测定。检查是否有艾滋病病毒及艾滋病。 9. 肿标六项。甲胎蛋白(AFP)主要是对原发性肝细胞性肝脏重大疾病的筛查。肿标筛查(CEA)主要是对胰腺、结肠、肺、乳腺等重大疾病的筛查。 哪些运动可以提高免疫力 1、健步走。健步走可以调节免疫力,提高抗病能力,加快病后康复速度。不太习惯锻炼和平时很少运动的人,最初要避免过量运动,运动时间不要超过2小时。 2、瑜伽。瑜伽的许多体式和呼吸法都有刺激胸腺的功能,通过刺激胸腺的分泌,提高身体的免疫能力。 3、游泳。游泳时,由于温水对皮肤的刺激,使得皮肤的血管急剧收缩,血管一次大力收缩后,随之是一次相应的舒张,这样一张一缩血管就能得到锻炼,从而调节人体免疫力,提高抵抗力。 4、慢跑。在室外慢跑能增强体质,加强呼吸系统对气温的适应,提高抵抗力,调节血液中白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等比例,而它们能吞噬人体内可能有的癌细胞。 免疫检查包括哪些项目？除了以上那几项，还有很多。详细的检查，还需要到医院做一次全套的免疫检查，可以知道自身的身体状况，从而进行调理。当知道自己免疫力低的时候，可以通过运动，也可以通过食物来不断增强自身免疫力。
免疫全项检测的临床意义
免疫全项检测各项的临床意义 1、DNP抗体： 对人血清中与SLE相关的抗脱氧核糖核蛋白（anti-DNP）抗体进行定性。几乎所有活动期的SLE均可检出此种ANA，多种自身免疫病时此种抗体检出率也达20~30%。 [局限性] ①硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎患者及各种结缔组织病患者血清在 SLE玻片上也可能产生凝集反应。 ②象肼苯达嗪、异烟肼、普鲁卡因胺以及抗惊厥药物所引起系统性红斑 狼疮综合症。 ③污染的、血脂高的或明显溶血的血清可能产生非特异性反应。 ④极高水平的抗体会影响凝集反应程度。 2、ANA抗体： ANA抗体是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。对SLE等自身免疫疾病有重要的诊断价值，SLE初诊阳性率为91.4%，活动期可达100%（内科学讲SLE中约80~95%病例ANA呈阳性），多次检测ANA抗体阴性可排除SLE。 ANA抗体阳性的其它疾病：肝脏疾患、溃疡性结肠炎、巨球蛋白血症、高球蛋白血症性紫癜、淋巴瘤、特发性自身免疫性贫血、恶性贫血、淋巴细胞性甲状腺炎、恶性肿瘤、重症肌无力、血管炎、结核等。 ANA抗体阳性与激素的关系：SLE病人用激素治疗后，ANA变化37.5%转为阴性，而62.5%的病人虽然阳性但效价大大降低。 ANA抗体滴度：SLE 92.5% ANA在1∶40以上，活动期在1∶160以上（1∶60 ~ 1∶2560之间）。SLE以外疾病78%在1∶10左右，其它结缔组织病的ANA滴度都在1∶80以下。 3、as-DNA： 抗DNA抗体检测是诊断SLE的特异性较强的试验，高滴度的DNA 抗体几乎仅见于SLE病人。as-DNA抗体的特异性较差，除系统性红斑狼疮外，其它结缔组织病、药物诱导的狼疮、慢性活动性肝炎也可检出。DLE等未见阳性。 抗DNA抗体同SLE患者病情变化有关：首都医院测得活动期SLE 病人阳性率为93%，非活动期阳性率则为7%。狼疮肾炎恶化时，抗DNA
免疫血清鉴定
兔抗牛血清白蛋白免疫血清的制备及鉴定 【摘要】目的：制备兔抗牛血清白蛋白血清，并对其进行效价的鉴定。方法：由牛血清和石蜡油、羊毛脂、卡介苗等进行研磨制成弗氏完全佐剂，对兔子不同部位进行一周一次连续四周的抗原免疫，采取颈动脉放血收集并分离血清，再通过双向免疫扩散实验进行血清效价的鉴定。结果：：双向琼脂扩散在BSA0．5g/mL 的浓度时，测得抗血清效价为1：8结论：BSA免疫家兔可获取效价较高的抗血清。【关键词】牛血清白蛋白（BSA）、效价、免疫 Preparation and identification of rabbit anti-BSA serum Abstract: Objective The antisera of BSA (bovine serum albumin) was prepared and the titer was identified. Methods The Freund’s adjuvant was grinded with the BSA, paraffin oil, lanolin and bacille Calmette-Guerin (BCG）. Then the rabbit was immunized for four times in a month. After a week carotid bloodletting had been done to get the antisera from the rabbit. At last the titer was identified by double immunodiffusion test. The titer of antiserum was 1:8 in double immunodiffusion .Conclusion:The higher titer of antiserum is obtained by immunizing rabbits with BSA KEY WORDS Bovine serum albumin(BSA),Titer,lmmunity 可溶性抗原（入血清、细胞浸出液、外毒素等）和相应抗体结合，在食量电解质存在下，经过一定时间，在二者比例适当时形成肉眼可见的沉淀物。可分环状沉淀实验，絮状沉淀实验，琼脂扩散实验（单向琼脂扩散实验。多向琼脂扩散实验），免疫电泳。由于沉淀反应抗原多系胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所组成，制备可溶性抗体的物质有很多，但处理的方法繁琐或价格昂贵，并且效价不高。因此，寻找简单、快速、易操作的方法提供教学单位实际应用具有重要的现实意义。在免疫学的教学中，沉淀反应是必不可少的，而在本科学生中此实验的操作又必列其中。目前市场上生物制品缺乏某种可溶性抗原与可溶性抗体的配备供应，且价格昂贵。为了节约经费，使用方便，采用牛血清白蛋白(BSA）免疫家兔，
临床检验项目满足临床需要DOC
临床检验项目满足临床需要 一、按照《医疗机构临床实验室管理办法》的要求，全院临床实验室集中设置，统一管理，资源共享。检验科设有临床检验室、生化检验室、免疫检验室、微生物检验室、细胞室等。 二、现有19名具备丰富经验的专业技术人员，主管技师4人，检验师2人，检验员1人。其中本科学历5人。 三、按照卫生部印发《医疗机构临床检验项目》的通知，常规开展检验项目近400项，具有前沿性，能够保证疑难疾病的诊断，基本覆盖医院各临床科室所诊治的病种，包括临床输血学、临床血液学、临床化学、临床免疫学、临床微生物学，分子生物学等。 1、开展ABO血型鉴定、Rh（D）血型鉴定和不规则抗体检查。 2、开展各种标本（血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液、浆膜腔积液、精液、阴道分泌物等）的物理、化学、涂片检查；开展血常规、溶血、骨髓细胞形态（组化、免疫分型）、凝血、血流变等试验；尿沉渣分析仪有复检标准，复检有记录并报告；血常规检查有镜检标准，镜检有记录并报告。 3、临床化学检测包括：蛋白、酶类、脂类、电解质、激素、血气等，有危急值报告制度。 4、临床免疫检测包括：体液免疫、细胞免疫、病原体血清学、肿瘤标志物、自身抗体、特定蛋白等，传染病三项ELISA法以酶标仪比色测定结果，保存原始记录。
5、临床微生物检测：开展项目包括涂片、培养、鉴定、药敏等试验及耐药性的检测、常见细菌鉴定要求到种，药敏试验用药的选择有制度和依据，细菌培养阳性率≥30%。 6、参加省临检中心室间质评的血细胞分析、尿干化学、细菌鉴定和药敏、生化25项、免疫（乙肝五项、丙肝抗体、HIV抗体）、凝血等项目年年优秀，均获得质评合格证书。 附：检验科检测项目列表
免疫检测方法
免疫学检测方法 免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。随着学科间的相互渗透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。免疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法，也为众多学科的研究提供了方便。本章将从抗原、抗体、免疫细胞和细胞因子检测等方面概括介绍试验的基本类型、原理和主要用途，并对分子生物学技术(分子杂交、转基因、多聚酶链反应)在免疫学领域的应用作一简要介绍。 第一节检测抗原抗体的体外方法 抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之为血清学反应(serological reaction)。 一、抗原抗体反应的特点 (一)抗原抗体结合的特异性 抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补，发生特异性结合。同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇，若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇，则与抗体反应时可出现交叉反应(cross reaction)。 (二)抗原抗体结合的可逆性 抗原抗体结合除以空间构型互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合，结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离，回复抗原抗体的游离状态。解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。 (三)抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性 抗原与抗体的结合能否出现肉眼可见的反应，取决于两者的比例。若比例合适，则可形成大的抗原抗体结合物，出现肉眼可见反应现象；反之，虽能形成结合物，但体积小，肉眼不可见。由于这种分子比例的差异，分别形成了三种区带现象。等价带表示抗原与抗体比例最合适，形成大而多的结合物，此时在反应体系中测不出或有极少游离的抗原或抗体；抗体过剩带(前带)和抗原过剩带(后带)皆表示抗原与抗体的比例不合适，所形成的结合物少且小，其反应体系中存在着游离的抗原或抗体。抗原抗体分子的比例与结合物大小的关系如图18.1所示。小分子可溶性抗原，因其表面积大，容易导致后带现象；而细胞等颗粒性抗原，在与抗体反应时则易出现前带现象。因此在抗原抗体检测中，为能得到肉眼可见的反应，在了解抗原的物理性状之后，对抗原或抗体进行稀释，以调整二者的比例。
专业实验III 临床免疫检验
可能作为名词解释来考的以红色标注 抗血清的制备 【原理】：用抗原刺激机体可以产生抗体，抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原，经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。 【注意事项】 ①制备佐剂时，一定要顺着同一方向用劲磨。 ②检查油包水的方法：培养皿内加水，滴入混匀液，不散开即可。如果第1次检查不合格，第2次检查必须重新倒水在平皿。 ③免疫动物皮内注射时，可以在足垫、腋下、背部等处多点注射，总剂量1ml/只。 凝集反应 颗粒性/ 可溶性Ag（Ab）与载体颗粒结合成的致敏颗粒，与相应Ab（Ag）发生特异性反应。在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。 一、直接凝集反应：颗粒性Ag，与相应Ab直接结合。在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。 （1）玻片法凝集反应： 【原理】：颗粒性Ag（细菌、红细胞等）与相应Ab直接结合，在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。 【意义】：①定性试验，可用已知抗体的诊断血清来测未知的抗原。②可用于细菌分型、ABO 血型鉴定等。 【结果观察】： ①对照区不发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。 ②试验区，伤寒菌液（Ag）与相应的Ab发生反应，出现肉眼可见的凝集块，为阳性。如与对照相同则为阴性。 （2）试管法凝集反应： 【原理】：用已知细菌作为一定浓度的悬液Ag，与一系列稀释的受检血清混合，经静置保温后观察每管内颗粒性Ag的凝集程度。 【结果观察】： ①先看对照管，应无凝集现象，轻摇试管，细菌分散均匀，混浊。再从第1管开始看。 ②根据凝集度打“+”。 —：管底无沉淀,液体混浊，细菌分散均匀。 ++++：管底有沉淀,上液澄清，细菌全部凝集。 +++：管底有沉淀,液体稍混, 细菌1/4不凝集。 ++: 管底有沉淀,液体混浊，细菌1/2不凝集 +: 管底仅少量有沉淀,液体混浊。 效价判断：以出现“++”凝集的最大稀释度，为该血清的凝集效价。 二、间接凝集反应：必须借助颗粒性载体，将可溶性Ag（Ab）致敏载体，成致敏颗粒，再检测标本中相应的Ab（Ag）。 间接凝集反应（胶乳凝集抑制试验）： 【定义】间接凝集反应：将可溶性Ag挂在一个无关免疫的载体(聚苯乙烯胶乳)上，制备成颗粒Ag,与其相应的Ab相结合,为间接凝集反应。
常用实验试剂配制
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
产前检查免疫检验项目简介
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/e318596235.html, 产前检查免疫检验项目简介 作者：蒲晓丽 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第08期 【中图分类号】B711;;;;;;【文献标识码】A; ;;;;【文章编号】1672-3783（2019）08-0010-01 对于妊娠期孕妇而言，产前检查尤为必要，对于是否存在高危妊娠征兆予以辨别，及时发现与纠正并发症与合并症，属于一种必须检查的项目。近年来，在产前检查中，免疫检验项目属于产前检查的重点，本研究对几项重点免疫检验项目进行分析，现总结如下： 1 肝炎病毒检查 1.1急性病毒性肝炎（HAV） HAV属于一种急性病毒性肝炎，亚临床或隐性感染是其典型症状，只有小部分人为急性甲型肝炎。该疾病大多数通过治疗后可完全治愈，不得恶化为慢性感染，也不会出现慢性携带的情况。粪—口是该疾病传播的主要途径，临床症状表现为急性黄疸型感染，预后效果良好，患者可拥有持久的免疫力，长期携带病毒的人数较少。急性病毒性肝炎可分为IgM型、Ig G 型两种， HAV-Ig M是临床免疫检验的主要项目，如果结果呈阳性，则说明产妇已经被感染。这一疾病的潜伏期大约为一个月，发病2—3周后，随着血清中特异性抗体 Ig G的出现，血液与粪便传染性便会越来越弱。 1.2 乙肝病毒（HBV） HBV是一种典型的 DNA 病毒，属于嗜肝 DNA 病毒科。以免疫检验HBV标志物判断作 为临床检验的重点依据。HBV的抗原分为表面抗原（HBs Ag）、核心抗原（HBc Ag）和 e 抗原（HBe Ag）三种。其中，因人体血液中HBs Ag含量较高，可作为免疫检验HBV感染的重要标志，且滋生出大规模的保护性的抗-HBs 中和抗体，这一抗体可作为 HBs Ag 免疫成功的标志;HBc Ag被 HBs Ag 覆盖，所以血液循环中难以被检出，可产生强大的体液免疫和细胞免疫，刺激人体出现抗-HBc。高滴度抗 -HBc阳性说明病毒具有较强的传染性，低滴度的抗—HBc则说明存在乙肝病毒感染史;HBe Ag具有较强的传染性，如果存在期>十周，则恶化成慢性，等到 HBe Ag转阴后，则会出现大量的抗 -HBe，这充分说明了预后效果良好。 1.3 丙肝病毒（HCV） HCV往往诱发急慢性感染，出现大规模的抗 HCV。通过PCR 测试抗HCV是否呈阳性是HCV是否感染判断的有效标志，HCV—RNA是HCV感染检测的主要依据。检测过程中，如果HCV—RNA为阳性，则表明HCV具有一定的传染性;HCV—RNA相比于-HCV产生的更
免疫细胞化学常用试剂介绍.
免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。
养细胞过程所用的试剂简介
1.pbs缓冲液 PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2，以提供双价阳离子。 注：PBS不是磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PB） 配制方法为： 称取磷酸二氢钾(KH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，氯化钠(NaCl)，氯化钾(KCl)，吐温－20 ，加水。 PBS:Phosphate Buffered Saline PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g， 磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g， 氯化钠(NaCl)：8g， 氯化钾(KCl)0.2g， 加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L 保存方法 高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。 PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 10mmol/L，KH2PO4 2mmol/L PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。 1x PBS缓冲液就是0.01M的PBS,可直接使用,2x PBS就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。0.1M的PBS一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。
临床常规检验项目及英文缩写
一、临床常规检验项目及检查指标的临床意义 血常规： 1、红细胞记数RBC： 临床意义：诊断各种贫血和红细胞增多症 正常参考值：男（4.0-5.5）T/L 女（3.5-5.0）T/L 2、血红蛋白HGB 临床意义：同上 正常参考值：110-160g/L 3、红细胞比积HCT 临床意义：同上 正常参考值：0.37-0.49 4、平均红细胞体积MCV 临床意义：判断贫血的类型 正常参考值：82-92fl 5、平均红细胞血红蛋白含量MCH 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：27-31pg 6、平均红细胞血红蛋白浓度MCHC 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：320-360g/L 7、红细胞体积分布宽度RDW 临床意义：RDW增加可见于营养缺乏性贫血 正常参考值：11.6-14.8 8、白细胞记数WBC 临床意义：增高见于感染、组织损伤、白血病；降低见于血液病、自身免疫病、脾功能亢进等 正常参考值：4-10G/L 9、白细胞分类DC 临床意义：用于血液病等疾病的诊断和判断感染轻重程度。中性粒细胞增高见于感染、白血病；降低见于某些感染、自身免疫疾病、脾亢等 嗜酸性粒细胞（EOS）增高见于过敏性疾病、某些皮肤病及传染病的早期；降低见于使用肾上腺皮质激素后等。 正常参考值：分叶核粒细胞GRAN 50-70% 嗜酸性粒细胞EOS50-300G/L（G=106） 淋巴细胞L YM 20-40% 单核细胞MID 3-8% 10、血小板记数PLT 临床意义：检测凝血系统的功能 正常参考值：100-300G/L 11、平均血小板体积MPV 临床意义：判断血小板减少的原因 正常参考值：6.8-13.5fl 12、血小板压积PCT
血液免疫学检验项目及意义
实验名称参考范围临床意义 乙型肝炎表面抗 原（HbsAg） 阴性感染乙肝病毒，为乙肝病毒携带者 乙型肝炎表面抗 体（HbsAb） 阴性保护性抗体，感染乙肝病毒康复后或注射疫苗后乙型肝炎E抗原 （HbeAg）阴性 反映HBV的复制和判断传染性强弱，急性乙肝HbeAg短暂 阳性，持续阳性提示转为慢性。 乙型肝炎E抗体 （HbeAb） 阴性出现于急性乙肝后期、慢性HBV感染时。乙型肝炎核心抗 体（HbcAb）阴性 出现于急性乙肝急性期，恢复后仍可持续阳性数年或更长 时间。 丙型肝炎病毒抗 体（抗HCV）阴性 阳性为丙肝病毒（HCV）感染。抗HCV阳性持续六个月以 上预示转为慢性丙肝的可能性较大。 戊型肝炎病毒抗 体（抗HEV） 阴性阳性为戊型肝炎病毒（HEV）感染。庚型肝炎病毒抗 体（抗HGV）阴性 病人感染庚型肝炎病毒（HGV）。可引起急性和慢性肝炎， 病人病毒血症可长期持续9年，HGV可通过输血传播。 抗双链脱氧核糖 核酸抗体（dsDNA）阴性 对系统性红斑狼疮（SLE）有较高的特异性，但敏感度稍 差，抗dsDNA抗体滴度的升降与SLE疾病的活动程度相关， 因此可监测 SLE的病情变化。其他结缔组织病患者，dsDNA 亦可阳性。 肥达氏反应（Widal`s）TYO<1:80 TYH<1:160 PA<1:80 PB<1:80 1.H及O效价均增高时可诊断为伤寒，O及A、B、C（其 中之一项）效价达1:80以上时，可诊断为副伤寒甲或乙 或丙，如效价随病情逐渐上升，诊断价值更大。 2.伤寒病人发病第一周后才出现肥达氏反应,第一周内阳 性率为50%,第四周可达90%。 11
常用溶液配方
附录一免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液