HPLC法测定3种杂交翠菊花色苷的含量
总花色苷含量测定
总花色苷含量测定—分光光度法 1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]: (1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时, 计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620) (2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定: a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。 计算公式为: A = Amax 直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。 b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。 计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。 2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。 计算公式为: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m ) 式中: A0 、A1 —分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值 V —提取液总体积(mL ) n —稀释倍数 M —cy-3-glu (矢车菊- 3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4) ε—cy-3-glu的消光系数( 29600) m —样品质量( g)
花色苷纯化分离及鉴定研究进展.
收稿日期 :2013－11－20; 修稿日期 :2013－12－04 基金项目 :国家自然科学基金 (31271836 ; 湖南省研究生创新课题 (CX2012B290 作者简介 :魏一枝 (1990－ , 女 , 硕士 , 研究方向为农产品加工及贮藏工程。通信作者 : 邓洁红 (1967－ , 女 , 教授 , 博士生导师 , 研究方向为园艺产品深加工理论与技术 , 通信地址 :410128湖南长沙市芙蓉区湖南 农业大学食品科技学院 , E-mail :hongjiedeng@163．com 。花色苷纯化分离及鉴定研究进展 魏一枝 1, 邓洁红 1, 2, 王维茜 1, 刘永红 3 (1．湖南农业大学食品科技学院 , 长沙 410128; 2．食品科学与生物技术湖南省重点实验室 , 长沙 410128; 3．湖南生物机电职业技术学院 , 长沙 410127 摘要 :花色苷是高等植物中最重要的水溶性色素。因其种类繁多、来源广泛、安全无毒并有一定的 营养和保健功效而引起国内外的广泛关注 , 具有十分重要的开发价值和广阔的应用前景。文中介绍了国内外花色苷分离纯化 (层析法、高速逆流色谱、膜分离法、固相萃取、以及花色苷鉴定 (高效液相色谱 -串联质谱法 , 核磁共振法的研究方法 , 并对各种方法进行了分析评价。对全面认识和开发利用花色苷具有一定的参考价值。 关键词 :花色苷 ; 纯化 ; 分离 ; 鉴定
中图分类号 :TS264．4文献标志码 :A 文章编号 :1005－1295(2014 01－0050－ 05doi :10．3969/j．issn．1005－1295．2014．01．013 Ｒesearchon Isolation and Identification of Anthocyanins WEI Yi-zhi 1, DENG Jie-hong 1, 2 , WANG Wei-qian 1, LIU Yong-hong 3 (1．College of Food Science and Technology , Hunan Agricultural University , Changsha 410128, China ; 2．Key Laboratory of Food Science and Biological Technology of Hunan Province , Changsha 410128, China ; 3．Hunan Biological and Electromechanical Polytechnic , Changsha 410127, China Abstract :Anthocyanins are the most important water-soluble pigment in plants．It caused widespread concern at home and abroad because of its variety and wide range of sources , safety and rich in nutrition and health effects , it has a very important development value and broad application prospects．The present paper mentioned some methods for anthocyanin separation and purification (chromatography , high-speed countercur-rent chromatography , membrane separation , solid phase extraction , and identification (high performance liq-uid chromatography-tandem mass spectrometry , nuclear magnetic resonance spectroscopy ． Key words :anthocyanin ; purification ; separation ; identification 0引言 随着人们对食品安全意识的提高 , 开发和应
花青素含量测定
花青素含量测定 实验目的：掌握花青素含量测定的简单方法。 实验原理：花青素又称花色素，是苯并吡喃衍生物，属于多酚类化合物，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，也是树木叶片中的主要呈色物质，在植物细胞液泡不同的pH 条件下，呈现不同的颜色。大量研究表明：花色苷具有很强的抗氧化作用，可以清除体内的自由基；降低氧化酶的活性；可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平，改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢；抑制胆固醇吸收，降低低密度脂蛋白胆固醇含量；抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。苹果花青素主要存在于果皮中，是果皮颜色形成的重要物质。苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成，同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成，分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响，特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率，因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段，其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 ％～98％J。 器材与试剂： 实验仪器:分光光度计，电子天平，恒温箱，剪刀，烧杯，量筒，移液管 实验试剂：0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇，蒸馏水 实验材料：苹果 实验内容： 1、作标准曲线：采用l ％盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液，浓度分别为100、20．0、10．0、5．0、2．5、1．0 ~g／m L 。用分光光度计测出OD值（波长530nm），计算出标准曲线。 2、选2个苹果，把苹果皮削出，称取5g的果皮加入10m L l ％盐酸甲醇溶液匀浆，在40 ℃下提取1h，离心后取上清液在波长530nm测出OD值。 3、计算出苹果中花青素的含量。
植物花色苷含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
植物花色苷含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC1380 规格：50T/24S 产品内容： 提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。 产品说明： 花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。 根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。 操作步骤： 一、样本处理： 按照样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样品，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL。12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。 二、测定步骤： （1）可见分光光度计预热30min，蒸馏水调零。 （2）加样表：
试剂名称（μL）测定管1测定管2 样品100100 试剂一900- 试剂二-900充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。 三、花色苷含量计算： 1、按样本鲜重计算： 花色苷含量（μmol/g鲜重）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。 2、按样本蛋白浓度计算： 花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷（Cpr×V提取）=0.037×ΔA×F ÷Cpr。 F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm； W：样品质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104mL/mmol/cm； V提取：提取液总体积，1mL；103：单位换算系数，1mmol=103μmol； Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。 注意事项： 1、如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如50μL上清液和950μL试剂一（相当于 稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如500μL上清液和500μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。 2、因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。
液相色谱使用方法(花色苷)
一、摘要 ⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多, 葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒，且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义 ⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫 酸脱色法、色谱法，本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。 ⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理，再测定 其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷，标定是否合格以及是否符合国家标准。 二、关键词 ⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计 三、正文 引言 花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取，微波是一种频率300～300 000 MHz的电磁波。在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分 被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生，萃取的选择性较差，只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得，同时又受限于溶解能力和扩散系数，效果不够理想；微波因其能对
萃取体系中不同组分进行选择加热，因而能使目标组分直接从基体分离萃取。微 波萃取受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多。另外，微波加热则利用 分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热，避免了传统加热过程因热传导、 热辐射造成的热量损失，加热效率高、升温快速均匀，缩短了萃取时间。具有设 备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等 特点。用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷，用等度及梯 度检测花色苷的存在来判断其营养成分。 ⑴、材料及方法 ①仪器及试剂 材料：葡萄皮 仪器：超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相 色谱仪 试剂：甲醇、甲酸、水 ②实验方法 葡萄皮花色苷提取液的制备 干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液 称取 1g 粉碎过的干葡萄皮，按 1:40（g/mL）的料液比加入酸性乙醇提取液，用超声波清洗器辅助提取。超声波辅助提取条件定为：频率 40KHZ，功率 500W，工作状态 100%。超声波辅助提取 40min 后过滤得到花色苷提取液，用722可见光分光光度计在530nm下测定吸光值，以吸光值为考察指标，确定提取效果。 在提取液乙醇浓度为 60%，提取液 pH 1.0 的条件下，于 30℃、40℃、50℃、
花青苷(花色苷)种类、提取及检测
花青苷种类、提取及检测 一.种类 花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合物(如图)，根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色素((Pelargonidin)、矢车菊色素((cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3＇-甲基矢车菊色素)、飞燕草色素(delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(3＇,5＇-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)( 3＇,5＇-二甲基飞燕草色素)。不同植物中花色素发生糖苷化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异，及酞化程度的不同使植物中存在着不同的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基本结构(Grotewold，2006)。 二.提取 国内外学者对花青苷的提取做了大量研究，提取目的及目标花青苷不同，提取方法略有差异。花青苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、pH值、金属离子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。 提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效率高于乙醇及水溶液。花青苷一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积分数为1%的乙醇溶液。采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青苷的降解。随着盐酸被浓缩，pH 值升高，导致花青苷的降解。为获得更接近于天然状态的花青苷，采用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中性溶剂一般采用丙酮作提取剂。粗提后的花青苷提取液浓度很低，浓缩时一般不超过40℃，时间也不宜太长。 1. 2. 花青苷含量的测定：用0.1%的盐酸甲醇浸提叶片2 h后,测657nm、530nm处的吸光度。 3.
花色苷研究
花色苷的研究状况 引言 花色苷又称花青素，属酚类化合物中的类黄酮，是构成花瓣、果实等颜色的主要水溶性色素，自然界中已知的花色素有22大类。食品中重要的花色素有矢车菊色素、天竺葵色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛色素和锦葵色素等6类[1]。花色苷作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定的营养和药理作用，在食品、化妆品和医药领域有着巨大应用潜力[2]。花色苷对人体具有许多保健功能如清除体内自由基、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、预防糖尿病、减肥、保护视力等。目前花色苷作为一种天然色素，安全、无毒，且对人体具有许多保健功能，已被应用于食品、保健品、化妆品、医药等行业，随着人们崇尚自然消费观念的转变，花色苷必将得到更加广泛的应用。 摘要 本文对花色苷的资源分布、结构性质、稳定性研究、提取、定性定量分析方法以及发展前景进行了综述。 1.花色苷的资源分布 花色苷广泛存在于被子植物的花、果实、茎、叶、根器官的细胞液中，分布于27 个科，72 个属的植物中。广泛存在于紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子皮、樱桃、红橙、红莓、草莓、桑葚、山楂皮、紫苏、黑(红)米、牵牛花等植物的组织中。 2.花色苷的结构及性质
花色苷的结构如右图所示， 不同的R1、R2代表不同的花色苷类型。食品中重要的6中花色苷如表1。 表1 花色苷溶于水和乙醇，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，花色苷在酸性溶液中存在4种平衡转换如图1：
自然界中的游离态花色苷极其少见，通常常与 1 个或多个葡萄糖（glucose）、鼠李糖（rhamnose）、半乳糖（galactose）、木糖（xylose）、阿拉伯糖（arabinose）等通过糖苷键连接形成花色苷，3-单糖苷、3-双糖苷、3，5-二糖苷和3，7-二糖苷是4类最常见的花色素配糖形式，其中矢车菊素-3-葡萄糖苷在自然界中分布最广[3]。 3.花色苷的稳定性研究 影响花色苷稳定性的因素有很多，pH值、氧气、温度、花色苷浓度和结构、光、金属离子、酶，以及其他辅助因素等均能使花色苷的颜色产生变化。 3.1 PH 在较低的 pH时（pH＜2），花色苷主要以红色的花色烊阳离子形式存在，当pH 为3～6 时，花色苷主要以无色的甲醇假碱和查尔酮假碱的形式存在，而在中性或者微酸环境下花色苷以紫色或浅紫色中性的醌式碱的形式存在，当 pH 上升到 8～10 时，主要以蓝色离子
植物花色苷含量试剂盒说明书
货号：MS1515 规格：100管/96样 植物花色苷含量试剂盒说明书 微量法 正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素，属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中，使其呈现由红到紫等不同颜色，是植物主要的呈色物质。 测定原理： 采用pH示差法测定花色苷含量，当pH为1.0时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在530处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同pH 下的530nm和700nm处的吸光度值。pH示差法减少了溶液pH和溶剂差异的影响，排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：液体100 mL× 1瓶，4℃保存； 试剂一：液体20 mL× 1瓶，4℃保存； 试剂二：液体20 mL × 1瓶，4℃保存； 花色苷的提取： 按照烘干样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g烘干样品，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，提取液定容至1 mL，盖紧后4℃浸提24 h，8000 g，常温离心10 min，取上清液待测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上；试剂一和试剂二25℃（室温）预热10min以上； 2、取20 μL上清液和180 μL试剂一（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm 和700nm处的吸光值，分别记为A1和A2。 3、取20 μL上清液和180 μL试剂二（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm 和700nm处的吸光值，分别记为A3和A4。 4、计算△A=(A1-A2)-(A3-A4) 注意：如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积200 μL不变，如10 μL上清液和190 μL 试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100 μL上清液和100 μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。 花色苷含量计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 花色苷含量（μg/g干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W V：提取液体积，1×10-3L；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿 第1页，共2页
果汁、饮料、天然着色剂及其酒中总花色苷含量的测定
37.1.68 AOAC Official Method 2005.02 Total Monomeric Anthocyanin Pigment Content of Fruit Juices, Beverages, Natural Colorants, and Wines pH Differential Method First Action 2005 (Applicable to the determination of monomeric anthocyanins in fruit juices, beverages, natural colorants, and wines within the range of 20–3000 mg/L as cyanidin-3-glucoside equivalents.) See Table 2005.02 for the results of the interlaboratory study supporting acceptance of the method. A. Principle Monomeric anthocyanin pigments reversibly change color with a change in pH; the colored oxonium form exists at pH 1.0, and the colorless hemiketal form predominates at pH 4.5. The difference in the absorbance of the pigments at 520 nm is proportional to the p i g m e n t c o n c e n t r a t i o n. R e s u l t s a r e e x p r e s s e d o n a cyanidin-3-glucoside basis. Degraded anthocyanins in the polymeric form are resistant to color change regardless of pH and are not included in the measurements because they absorb at pH 4.5as well as pH 1.0. B. Apparatus (a ) pH meter .—Standardized with pH 4.0 and 7.0 standard buffer solutions. (b ) Visible spectrophotometer .—Performance of the spectrophotometer at 520 nm should be verified with reference standards for wavelength accuracy, photometric accuracy,photometric linearity, and stray light. (c ) Glass or disposable cuvets for spectrophotometer .—1 cm pathlength. (d ) Volumetric flasks .—50 mL. C. Reagents (a ) pH 1.0 buffer (potassium chloride, 0.025M).—Weigh 1.86 g KCl into a beaker and add distilled water to ca 980 mL. Measure the pH, and adjust pH to 1.0 (±0.05) with HCl (ca 6.3 mL). Transfer to a 1 L volumetric flask, and dilute to volume with distilled water.(b ) pH 4.5 buffer (sodium acetate, 0.4M).—Weigh 54.43 g CH 3CO 2Na·3H 2O in a beaker, and add distilled water to ca 960 mL.Measure the pH, and adjust pH to 4.5 (±0.05) with HCl (ca 20 mL).Transfer to a 1 L volumetric flask, and dilute to volume with distilled water. D. Preparation of Test Solution Perform all dilutions in 50 mL volumetric flasks, B (d ). Use volumetric pipets for addition of the test portion. The maximum test portion added should be ￡10 mL (1 part test portion, 4 parts buffer)so as not to exceed the buffer capacity of the reagents. Determine the appropriate dilution factor by diluting the test portion with pH 1.0 buffer, C (a ), until absorbance at 520 nm is within the linear range of the spectrophotometer. (For most spectrophotometers, the absorbance should be between 0.2 and 1.4AU.) Using this dilution factor, prepare 2 dilutions of the test sample, one with pH 1.0 buffer and the other with pH 4.5 buffer. E. Determination Determine absorbance of test portion diluted with pH 1.0 buffer,C (a ), and pH 4.5 buffer, C (b ), at both 520 and 700 nm. The diluted test portions are read versus a blank cell filled with distilled water.Measure absorbance within 20–50 min of preparation. Note : The reason for measuring the absorbance at 700 nm is to correct for haze. However, if the diluted test portion is excessively turbid, clarify by centrifuging or filtering before measurement. Use a filter (e.g., Millipore TM membrane filter, ￡1.2 m m pore size,Millipore Corp., Bedford, MA) that will not absorb the anthocyanins. ? 2006 AOAC IN T ER N A T IONAL Table 2005.02. Interlaboratory study results for the determination of total monomeric anthocyanin pigment content by the pH differential method Material Mean, mg/L a No. of labs, a (b) b s r c RSD r , %d s R e RSD R , %d r f R g HorRat Cranberry juice cocktail 13.610 (1)0.57 4.16 1.098.00 1.59 3.050.74Red wine 201.611 (0) 5.29 2.6215.997.9314.81 44.76 1.10Natural colorant 640.811 (0)11.97 1.8736.52 5.7033.52 102.25 0.94Strawberry juice 63.610 (1) 2.43 3.82 6.4410.12 6.8118.03 1.18Raspberry juice 336.711 (0)10.80 3.2117.62 5.2330.24 49.320.79Elderberry juice 3006.8 10 (0)31.78 1.06191.84 6.3888.97 537.15 1.33Standard 44.8 11 (0) 0.53 1.19 1.20 2.69 1.49 3.37 0.3 a Expressed as cyanidin-3-glucoside equivalents. b a = Number of laboratories retained after removal of outliers; (b) = number of laboratories removed as outliers. c s r = Repeatability standar d deviation.d RSD = Relativ e standard deviation.e s R = Reproducibility standard deviation. f r = Repeatability value.g R = Reproducibility value.
不同品种红葡萄酒 CIELab参数及总花苷含量的相关性研究
贺兰山东麓不同品种红葡萄酒 CIELab参数及总花苷含量的相关性研究 摘要 本实验采集宁夏贺兰山东麓产区年份、酒龄以及陈酿方式相同的5种红葡萄酒品种的10个样品，通过光谱扫描分析计算 CIELab 颜色空间参数；通过pH示差法测定分析葡萄酒颜色各参数与总花色苷关系。结果表明10个葡萄酒样品色调呈紫红色，明度大，彩度较大，颜色较为鲜艳，色相角靠近0度即颜色接近红色，色度分布图比较集中，总色差△E*ab感觉强烈。总花色苷（ACY）与参数L* 、a*、Cab均具有强相关性，与Hab中度相关，与b*不具有相关性。其中与L*和Hab负相关，与a*、b*、Cab正相关。 关键词：CIELab参数总花色苷贺兰山葡萄酒 Analysis of CIELab Parameters of red wine in the East of Helan Mountains And Anthocyanidinsof Different Red Wines Abstract The experiment collected 10 samples from five kinds of different wine in the same age and same vintage way. Through the spectrum method to analysis the CIELab color space parameter.Through the ph-differential method to test the total content of anthocyanin.Then analyze the relationship between the parameters of wine and total anthocyanin.The results showed that 10 samples present violet hue,tall lightness, biger saturation and color is more bright-coloured, Hue Angle is close to zero shown that is approximate red color,the chromaticity diagram is concentrate.
花色苷研究进展_李安文
2010年第12期（总第250期） 吉 林 农 业 JILIN AGRICULTURAL NO.12，2010 （CumulativetyNO.250） 花色苷是一类具有苯并吡喃结构的类黄酮化合物，具有预防心脏病、抗大脑炎症、抑制癌症、延缓衰老、抑制血小板凝集、抗辐射、清除自由基、抗氧化[1-3]等多种功效，主要用于食品、化妆品、医药保健等行业。对于花色苷，国内外已经有大量研究，主要有源自葡萄皮、紫甘薯、桑葚、紫甘蓝、越橘等中的花色苷，文章就目前国内外越橘花色苷研究现状进行概述。 1花色苷的稳定性 花色苷极不稳定，pH、温度、光照条件等都对其稳定性影响极大，此外离子强度、存放时间以及添加剂等因素都与其稳定性有极为密切的关系。石光等[4]研究了蓝莓花色苷的稳定性与pH 关系，认为适量添加柠檬酸、苹果酸、醋酸有利于提高花色苷的稳定性。R.Lo scalzo[5]等研究紫色花菜和紫甘蓝花色苷稳定性与加热提取处理的关系，发现结构不同的花色苷单体在热处理条件下稳定性存在差异。Cortes[6]等研究碱液对紫玉米花色苷的稳定性的影响，发现Ca(OH) 2 的浓度对总花色苷的含量有显著影响，而且对花色苷组分比例也存在明显影响。Veridiana V. De Rosso [7] 等比较研究金虎尾（含较高V c ）和巴西莓（无V c ）花色苷的稳定性， 认为抗坏血酸可能对花色苷的稳定性存在一定的影响。此外氧化 剂（如H 2O 2 ）、还原剂、离子强度和离子类型等都能对花色苷的 稳定性产生影响。 2花色苷的提取工艺 国内外在花色苷提取方面已有许多研究[8-13]。采用何种提取方法，主要与提取目的有关。一般来说，如果仅仅用于试验研究则可以采用盐酸甲醇法；在生产上，由于甲醇有较大的毒害性，改用盐酸乙醇法较为适合。单从提高提取效率方面考虑，向提取试剂中加入酶制剂特别是纤维素酶是一种比较好的手段，但是提取过程也会更加复杂而成本也将随之提高。另外引入的酶制剂可能会造成产品污染，这也将成为考察关注的新问题。为了避免污染，学者还比较了微波和超声波辅助提取两种效果，认为超声法是一种比较适合提高提取效率的方法。此外提取产品中的果胶也是一个值得注意的环节，它直接关系到后面纯化工序的效率。目前对于果胶问题，有人提出了采用超滤法进行，但是超滤膜清洗将又会成为新的课题，会直接导致生产成本的提高。 3花色苷的分离纯化 早期在花色苷分离纯化方面的研究，主要有纸层析、薄层色谱、毛细管电泳等方法，如1997年Bridle等人曾用毛细管电泳法对草莓和接骨木中的花色苷进行过分离。目前，花色苷的分离纯化主要采用色谱法，较为经典的是柱层析法[14，15]；此外HSCCC方法[16]和制备液相方法也是比较常用的方法，特别是HSCCC具有纯化率高，操作简单实用等优点。 PC、TLC、毛细管电泳等传统方法，从技术上说已经相当成熟了，成本也相对低廉，而且对花色苷某些组分的研究具有很好的指导性，但是这仅限于试验分析而不能应用于实际生产。目前的柱分离方法，还没有找到一种专一的树脂，所以产品的纯度还不能较大的提高，只能够快速循环的对粗产品进行纯化。因此探寻新的树脂，将成为下一步研究的新目标，这也是关系到生产上纯化水平的一个关键控制点。Yunyun Jiang等[17]采用二维制备液相色谱法对射干中的类黄酮进行了分离纯化，不仅溶剂用量大大减少，而且纯化时间显著缩短，这为我们分离复杂的花色苷组分既提供了新的思路。 4花色苷的分析检测方法 4.1花色苷含量的研究 对于花色苷含量的研究，主要有色价法、pH示差法、RP-HPLC等方法。色价法方便快捷，不需要标样就能够直观对总花色苷含量定性分析。pH示差法具有准确度高的特点，Jungmin lee[18]等运用HPLC和pH示差法测量七种果汁花色含量，得出两种方法数据（同一标样）呈高度相关的结论，认为pH示差法是一种经济、准确的检测方法。目前国内外主要采用此方法。 孟凡丽（2003）比较了中式越橘总花色苷的含量，徐璐、郑建仙（2005）也曾测过欧洲越橘（Vaccinium myrtillus L.）中花色苷含量，Marja P Kahkonen等人[19]采用HPLC测得bilberry、blackcurrant 、cowberry总花色苷含量分别为6000、2360、680mg/kg。 由于不同品种的越橘组分存在较大的差异，而采用不同的标样，所得总量也会发生变化，比如，采用锦葵色素葡萄糖苷就要比矢车菊色素葡萄苷所得值要高。因此，在对总量测定时，最好依据越橘花色苷指纹图谱选择合适标样进行测定。当前国内外对该资源指纹图谱研究还相当少，而这一步恰恰是此资源开发的关键，因而对不同品种越橘花色苷指纹图谱也将成为将来开发研究的重点，这也对组分研究提出了更高的要求。 4.2花色苷分子组分研究 在研究花色苷组分这方面，采用较多的主要是色谱法，包括传统的PC、TLC、毛细管电泳。为了更准确、快速确定花色苷组分，现代仪器中引入了HPLC和HPLC/ESI-MS联用技术，结合波谱和光谱性质综合分析，这大大的提高了人类对花色苷性质的认识深度。 Severine Talavera[20]等用HPLC分析，测得欧洲越橘花色苷15种组分。Kaisu Riihinen[21]等对越橘果肉、果皮、叶花色苷组分进行了比较研究。Marja P Kahkonen等人[19]用HPLC/ESI–MS 技术分析得出blackcurrant的四种糖苷，cowberry的三种单糖苷， 花色苷研究进展 李安文1，廖寅平2，徐小江1，肖文军1* （1.湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128；2.柳州市农业技术推广中心，广西 柳州 545001） 摘要：作为一种很好的植物功能成分，越橘花色苷具有抗癌、除自由基等多种特殊功效。文章主要对越橘花色苷资源开发研究中各种方法进行概述，讨论了目前在其开发过程中还存在的多种问题，为越橘花色苷资源的有效利用提供了参考。 关键词：越橘；花色苷；研究 中图分类号：TS202.3 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-12-0087-2 JILIN AGRICULTURAL 87
紫色马铃薯皮花色苷结构鉴定
紫色马铃薯皮花色苷的结构鉴定 方芳，吴奇辉，郭慧，蒋益虹 （浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江杭州 310058） 摘要：为纯化、鉴定紫色马铃薯（Solanum tuberosum L.）皮中的花色苷组分，采用2%柠檬酸水和D101大孔树脂对紫色马铃薯皮花色苷进行提取分离，利用高效液相色谱外标峰面积法测定花色苷的含量为207.33 mg/g 冻干粉，并通过HPLC-DAD-ESI-MS/MS 联用技术鉴定紫色马铃薯皮花色苷的组成。紫色马铃薯皮花色苷冻干粉共检出14种花色苷，以矮牵牛素-3-O-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷含量最为丰富。所有花色苷中，4种花色苷以花色素-3-O-芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷形式存在，9种花色苷以花色素-3-O-对香豆酰（或咖啡酰或阿魏酰）芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷的形式存在，除此之外，存在一种花色苷可能采取C 3,C 7-位双糖基取代。紫色马铃薯皮中所含花色苷绝大多数为酰化双糖基取代花色苷，结构稳定，因而紫色马铃薯皮作为一种食品加工副产物具有良好的开发前景和利用价值。 关键词：紫色马铃薯皮；花色苷；结构鉴定；HPLC-DAD-ESI-MS/MS 文章篇号： 1673-9078(2014)5-92-97 Identification of Anthocyanins from the Peel of Purple-fleshed Potato FANG Fang, WU Qi-hui, GUO Hui, JIANG Yi-hong (School of Biosystems Engineering and Food Science, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China) Abstract: This research aimed at the purification and identification of anthocyanins from the peel of purple fleshed potato (Solanum tuberosum L.). By using 2% citric acid solution and D101 macroporous resin, anthocyanins were extracted from the peel of purple fleshed potatoes. The anthocyanin content was 207.33 mg/g freeze-dried powder measured by the external standard method of HPLC. Then, the anthocyanin composition was characterized by HPLC-DAD-ESI-MS/MS. Fourteen kinds of anthocyanin were found, and 3-O-p-coumaroylrutinoside-5-O-glucoside of petunidin was the main ingredient. Four kinds of anthocyanins which existed in the form of aglycon-3-rutinoside-5-O-glucoside, and nine in the form of aglycon-3-coumaroyl (/caffeoyl/feruloyl) rutinoside-5-O-glucoside. Besides, an anthocyanin was inferred with substitutions at C 3 and C 7 sites. Most of the anthocyanins in the peel of purple fleshed potatoes were acylated with organic acids and substituted with disaccharide residues, which greatly increased the stability. As a byproduct in food processing, the peel of purple fleshed potatoes has good development prospects and high value in use. Key words: peel of purple fleshed potato (Solanum tuberosum L.); anthocyanin; structural characterization; HPLC-DAD-ESI-MS/MS 马铃薯（Solanum tuberosum L .）块茎的皮和肉一般呈白色、黄色或橘黄色，也有部分马铃薯块茎皮和/或肉的颜色呈现红色、紫色、蓝色或橙色，称之为“特色马铃薯”（special potato ）或“彩色马铃薯”（colored potato 或pigmented potato ）。马铃薯块茎皮和肉的颜色主要由类胡萝卜素和花色苷两类化合物决定，前者决定马铃薯呈现黄色或白色，后者于块茎皮或肉中积累则呈现特殊色彩。紫色马铃薯是块茎皮和肉均呈紫色的特殊马铃薯，外皮富集多种花色苷。花色苷是一种 92 收稿日期：2013-12-06 基金项目：宁波市重大（重点）科技攻关计划(2008C10026) 作者简介：方芳（1989-），女，硕士研究生，从事食品功能因子及其功效研究 通讯作者：蒋益虹（1972-），女，博士研究生，副教授，主要从事食品功能因子和功能性食品的研究 水溶性的色素，安全无毒，广泛分布于植物体内使其 呈现多种色彩，大量研究表明，马铃薯花色苷具有抗氧化[1]、抗癌[1]、抗糖尿病[2]等生理功能，并且具有较好的稳定性。而在马铃薯加工过程中，马铃薯皮作为副产物一般不予利用，存在着一定程度的浪费。因此，研究特色马铃薯皮花色苷对于促进天然抗氧化剂和着色剂的开发以及资源的充分利用等具有重要意义。 目前对于紫色马铃薯花色苷成分的研究国内鲜有报道，而国外对其研究较多，已相继鉴定了多种花色苷。其所含花色苷主要以六种花色素（矢车菊素、天竺葵素、飞燕草素、矮牵牛素、锦葵素、芍药素）的对香豆酰-5-葡萄糖苷-3-鼠李糖葡萄糖苷形式[3, 4]存在，同时存在少数花色苷的酰化基团为阿魏酰基或咖啡酰基，但也存在未进行酰基取代的花色苷。花色苷结构鉴定常用的方法涉及纸层析法、紫外-可见光谱