常用组培培养基及特点

1、常用的培养基

自1937年White建立第一个植物组织培养培养基以来,许多研究者报道了各种培养基，其数量很多，配方各异。根据营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基也就是通常所说的培养基，主要有MS、White、B5、N6、改良MS、Nitsh、Miller、SH 等，其配方见植物组织培养常用培养基配方表。完全培养基是在基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质。如植物生长调节物质和其他复杂有机添加物等。

2、几种常用基本培养基的特点

（1）MS培养基

1962年Murashige和Skoog为培养烟草组织时设计的，是目前应用最广泛的一种培养基。其特点是无机盐浓度高，具有高含量的氮、钾，尤其是铵盐和硝酸盐的含量很大，能够满足迅速增长的组织对营养元素的需求，有加速愈伤组织和培养物生长的作用，当培养物久不转移时仍可维持其生存。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求比较低的植物，尤其不适合铵盐过高易发生毒害的植物。

与MS培养基基本成分较为接近的还有LS、RM培养基，LS培养基去掉了甘氨酸、盐酸吡哆醇和烟酸；RM培养基把硝酸铵的含量提高到4950mg/L，磷酸二氢钾提高到510 mg/L。（2）White培养基

1943年由White设计的，1963年做了改良。这是一个低盐浓度培养基，它的使用也很广泛，无论是对生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。

（3）N6培养基

1974年由我国朱至清等学者为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。

（4）B5培养基

1968年由Camborh等设计的。它的主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用，但它适合于某些双子叶植物特别是木本植物的生长。

（5）SH培养基

1972年由SchenkHid和Hidebrandt设计的。它的主要特点与B5相似，不用（NH4）2SO4，而改用NH4H2PO4，是无机盐浓度较高的培养基。在不少单子叶和双子叶植物上使用，效果很好。

（6）Miller培养基

与MS培养基比较，Miller培养基无机元素用量减少1/3~1/2，微量元素种类减少。无肌醇。（7）VW培养基

1949年由Vacin和Went设计，适合于气生兰的培养。总的离子强度稍低些，磷以磷酸钙形式供给，要先用1mol/L HCl溶解后再加入混合溶液中。

植物组培实验室配置清单

植物组培实验室建设目录 1、功能简述 (1) 1)准备室 (1) 2)灭菌室 (1) 3)缓冲间 (2) 4)无菌操作室 (2) 5)培养室 (2) 6)驯化室 (3) 7)温室 (3) 8)辅助实验室（非必要） (3) ①细胞学实验室 (3) ②生理生化分析室 (4) 2、设备及耗材清单 (4) 1)试验设备清单 (4) 2)常备试剂清单 (6) ①MS培养基必备试剂 (7) ②常备激素及辅助试剂 (7)

植物组培实验室建设 1、功能简述植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。 1)准备室用途：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、晾置、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、落水架、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平（0.1g、0.0001g分度各一台）、干热消毒柜（可省去）、蒸馏水器（可省去）、酸度计(又称pH计，为节约成本和减少维护可用pH试纸代替)、过滤灭菌器、培养皿、培养瓶、三角瓶、试管、电磁炉、水浴锅、漏斗、量筒、刻度移液管（为操作简便起见可购买移液枪1ml、5ml各一个代替）、玻璃棒、酒精灯、镊子、试管架、琼脂、纱布、棉塞、封口膜、大量元素、微量元素、蔗糖、有机物和植物激素的母液（详细内容见附表）、NaOH、盐酸、滤纸、脱脂棉、橡皮筋、牛皮纸等。图1 准备室图2 灭菌室 2)灭菌室用途：完成各种器具的保存、培养基的灭菌等。 1

植物组培培养基的成分

植物组培培养基的成分培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地

用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。

组培苗的炼苗方法

试管苗的炼苗和移栽一、目的要求熟练掌握组培苗移栽驯化技术。二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。三、方法与步骤（一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。（二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。（三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。（四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。（五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。四、作业记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部

几种常见培养基作用

1.中国蓝平板：含有牛肉粉、蛋白胨、乳糖、琼脂、氯化钠、中国蓝、玫瑰红等成份。是一种弱选择性（亦有学者称为无抑制性）选择培养基。成份中的中国蓝为指示剂，玫瑰红为弱抑制剂，仅能抑制革兰阳性菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用，发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。根据菌落形态，可做出相应的处理或报告。例如：大肠埃希菌菌落呈蓝色；痢疾志贺菌呈淡红色；鼠伤寒沙门菌呈淡红色。 2.巧克力平板：普通营养琼脂成份添加进氯化血红素，万古霉素，辅酶A。用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，不能用血平板来替代。巧克力平板含有嗜血杆菌生长需要的营养因子X因子和V因子。其原理为：绵羊血中的V因子通常处于被抑制状态，加热到80～90℃12Min即可破坏红细胞膜上的不耐热抑制物，可使V因子释放，故嗜血杆菌在加热的血琼脂培养基即巧克力琼脂培养基上生长较佳。 3. TCBS：含酵母膏粉蛋白胨氯化钠柠檬酸钠硫代硫酸钠胆酸钠牛胆粉蔗糖柠檬酸铁溴麝香草酚兰麝香草酚兰琼脂；其中：氯化钠可刺激弧菌的生长；蔗糖是可发酵的糖类；胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH（8.6）可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群；霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长；硫代硫酸钠与柠檬酸铁反应作为检测硫化氢产生的指示剂；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰是pH指示剂。利用指示剂来区分是否发酵蔗糖：副溶血性弧菌不发酵蔗糖，菌落呈蓝绿色。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。TCBS常用于致病性弧菌的选择性分离，是GB2008、SN标准指定培养基。 4.MAC平板：即麦康凯琼脂培养基，用于大肠杆菌和大肠菌群的分离培养(05药典)，主要成分：蛋白胨脙胨猪胆盐(或牛、羊胆盐) 氯化钠琼脂乳糖1%结晶紫水溶液0.5%中性红水溶液。麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用．利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开．沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落． SS培养基 2.原理培养基中牛肉膏、蛋白胨等为营养物;煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等抑制非病原菌生长,而胆盐能促进某些病原菌生长。因大肠埃希菌等能迅速分解乳糖产酸并与胆盐结合成胆酸,故形成中心混浊的粉红色菌落;病原菌不能分解乳糖。菌落呈透明无色,枸橼酸铁能指示硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色。硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌及沙门菌的有害作用并中和煌绿和中性红染料的毒性作用,且能使大肠埃希菌的红色菌落颜色鲜明。 3.用途用于分离肠道致病菌。 SS琼脂培养基是分离沙门菌及志贺菌属的强选择性培养基,它对大肠埃希菌有较强的抑制作用,而对肠道病原菌则无明显抑制作用。因此,可以增加粪便等标本的接种量,从而提高病原菌的检出率,是目前公认比较满意的培养基。附注:大肠埃希菌属细菌在此培养基虽不易生长,但亦不被杀灭,故挑选病原菌菌落时,应仅挑取菌落的中心部分,否则易将其四周的杂菌一并挑入,影响结果。

组培实验室管理制度

组培实验室管理制度组培实验室是重要的研发场所，为了让实验室更好的运转，提高研发能力，加强实验室科学化管理和规范实验室工作人员行为规范，特制定本规章制度。研发人员的管理制度：一、工作人员必须严格遵守公司规章制度，按时上下班，如需请假应按照公司请假流程上报经上级领导同意后方可，未经上级领导同意私自离岗或不到岗的，视为旷工。不得在工作时间早退、迟到、串岗、脱岗等，违反者按公司的奖罚条例处理。二、研发技术人员是公司宝贵的人才，在完成工作任务的同时，不断努力学习，查阅专业文献，了解业内最新研究进展，部门会定期组织专业技术交流会, 提高自己的业务水平和专业技术水平。三、工作人员应树立严谨的科学发展观，养成实事求是、戒骄戒躁和严肃认真的科学态度和培养良好的工作态度。四、工作人员进接种室之前，要在缓冲室换拖鞋，在接种室里面，要更换实验服，配戴一次性帽子、口罩以及手套，以免造成污染。接种的时候注意酒精灯，以免造成烫伤或者严重的着火。五、工作中应养成细心观察和及时记录的良好学习精神和习惯，在公司指定的实验记录本上记录每天实验内容和问题，并及时整理项目资料，完善公司数据库。六、定期进行工作总结和汇报，同事之间，上下级之间及时了解实验进展, 对遇到问题及时处理和解决七、实验室内一切用具和物品不得擅自带出实验室，建立健全设备仪器登记建档和领用手续，工作人员不得将个人物品以及食物带入接种室。

八、作为研发人员，谨记保密条例，工作笔记一律不得带出公司。九、实验室不得私自接待参观学习的人员。非实验室工作人员不得随意进出实验室。十、实验室担负着苗木科学研发的科研工作，工作人员开展工作时应本着严谨、严肃和专注的工作态度与敬业精神，上班时间不做与工作无关的事情，如闲聊、听音乐、刷微信、看微博、打游戏等。实验室的管理制度：一、随时保持工作场所清洁和干燥，贵重仪器专人看护，责任到人，使用后及时清理、擦拭，定期维护和保养，做到台面、桌面、地面、水槽、仪器五净。二、仪器、药品、工具等用后要立即归还原位，随时保持工作场所的整洁，节约用水，用电及消耗性药品、试剂，定期盘查常用药品及试剂，定期申购。三、定期整理培养架，每个培养架的擦拭，根据植物不同、每个阶段不同而适当的开灯管。不用的灯管及时关掉，以免浪费并且造成培养室温度增高。一旦发现污染瓶苗应及时清理，严令禁止在培养室内打开污染器皿。注意培养室的清扫以及消毒，四、凡属技术文件、药剂配方资料、技术专项辅导资料、新技术新品种创新研发等相关资料，按公司保密条例统一交由指定人员负责管理，未经批准，任何个人不得泄露、篡改和与其他人员或部门传阅，对于各自使用的实验记录本，定期由上一级领导批示，签名，用完后交由指定人员保管并领取下一本，严格做好保密工作，如有违规，公司将追究行政及经济责任。五、高压灭菌器等危险仪器，正常工作时间外不得使用，若实验任务紧急确需使用时，应事先得到实验室负责人批准方可。当高压灭菌器处在高压工作时，工作人员不

培养基成分及其作用

培养基成分及其作用植物生长发育需要多种营养和生长调节物质，当其缺乏时，生长发育受阻，形态不正常。在植物组织快繁过程中，培养物生长发育所需的营养和生长因子，主要靠培养基供给。因此，完全培养基的成分除了水分外，还要包括无机营养、有机物营养、生长调节物质及其他附加物等。一、无机营养物无机营养物即无机盐是植物生长发育所必需的，根据植物对无机盐需要的多少，将其分为大量元素和微量元素。 1. 大量元素大量元素在植物体内含量占干物重的0.1-10%，其浓度一般大于0.5mmol/L，包括氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)，若加上碳(C)、氢(H)、氧(O)，则有9种元素。在离体培养中，其C、H、O三元素是从人工加入的糖类获得的，H、O元素也可以从培养基所含的水分中获得，而其余6种矿质元素要从加入的适量的无机盐类来获取。无机氮常以硝态氮(如KNO3)和铵态氮(如NH4NO3)两种形式供应，多数培养基都是二者兼而有之。 2. 微量元素植物所需的微量元素包括铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(Mo)、氯(Cl)等，植物对其需要量极微，在植物体内含量占干物重的0.01%以下，起生长发育所需的浓度一般小于0.5mmol/L，稍多则产生毒害。碘(I)虽不是植物生长的必需元素，但几乎在所有的培养基中都含有碘元素，有些培养基还加入了钴(Co)、镍(Ni)、钛(Ti)、铍(Be)，甚至铝(Al)等元素。 3. 铁盐铁是用量较多的一种微量元素，是许多重要氧化还原酶的组成成分，在植物叶绿素的合成过程中起到重要的作用。若以硫酸铁和氯化铁为供铁源，培养基的pH值会达到5.2以上，形成氢氧化铁沉淀，使培养物无法吸收而出现缺铁症，故在培养基配制时，常用硫酸亚铁和EDTA二钠配成螯合态铁，成为有机态铁方被培养物吸收和利用;也可用EDTA铁盐，作为铁的供应源。这些元素参与培养物机体的建造，构成植物细胞中的核酸、蛋白质、叶绿体、酶系统和生物膜所必需的元素。二、有机营养成分

植物组织培养技术

三．组培苗生长环境有何特点？如何针对这些特点提高移栽成活率？ 1.组培炼苗是组培过程较为重要的一个环节，是一个较为复杂的技术体系，提高炼苗成活率是决定组培成败和降低组培成本的关键。试管苗一般在高湿（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒温（25℃）下培养， 2.1组培苗的特点叶片无保护组织（角质层、蜡质、表皮毛等），加之细胞间隙大，气孔开张大，因此水分散失较快，易于萎蔫。根无根毛或极少，并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组织不相同，因此吸水能力较弱。 2.2提高移栽成活率的方法而当炼苗移栽时，环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。具以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿度较低，叶片蒸腾急速增加，此时基质温度上不去，根系吸水能力不够，造成蒸腾大于吸水的失衡状态，从而萎蔫死亡。要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题，一方面提高出瓶苗的质量，提高其抗逆性，生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键；另一方面就得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境，比如保证空气湿度，平衡空气和基质的温度平衡关系等。四、生长素类分裂素类调节剂在主培中有哪些生理作用？在快速繁殖的起始，芽增殖及生根培养阶段应该如何使用？培养中生长素一方面用于诱导愈伤组织的形成和生根，另一方面是与一定量的细胞分裂素配合使用共同诱导不定芽的分化，侧芽的萌发与生长以及某些植物胚状体的诱导。在植物组织培养中的细胞分裂素的主要功能是促进细胞的分裂和分化，打破顶端优势，诱导芽的分化和增殖，促进组织和器官的不定芽发育。当培养基中的细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的分化，反之，诱导根的分化。快速繁殖的起始阶段培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素类芽增殖阶段向培养基中加入较多的细胞分裂素类的物质促进芽的分化生根培养阶段向培养基中加入较多的生长素类物质促进根的分化五．利用组织培养技术生产苗木及次生代谢物的手段有哪些？培养对象分别是什么？培养新品种的手段有哪些？培养对象分别是什么？

大樱桃组培苗炼苗技术

大樱桃组培苗炼苗技术摘要:根据大樱桃的生物学特性,通过多年大樱桃组培试管苗炼苗的试验,总结出了大樱桃组培试管苗炼苗前后的一系列管理技术。结果表明,试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段的工作非常重要。基质选用细沙与蛭石6:4混合为宜,试管苗温室训化生根壮苗与开瓶炼苗时间以10～15d为宜,移入沙床后定期喷洒营养液和杀菌液,按照此方法进行试管苗炼苗可获得很高的成活率。关键词:大樱桃;组培;炼苗;技术方法试管苗的炼苗移栽是组织培养过程中重要的环节,这个环节最需要的是操心和细心,即对大棚温湿度操心,对瓶苗移栽各管理环节的细心,若稍有疏忽,则会造成大批幼苗死亡,使整个组培工作前功尽弃,造成巨大的损失。通过几年的实践,总结出了大樱桃试管苗炼苗的关键技术,从试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段进行了详细介绍,为天水市优良大樱桃品种的工厂化生产提供了科学依据和技术支持。 1苗床及基质的选择 1.1苗床的制作苗床在日光温室内要做成凹畦,长6m,宽2m,畦深15~20cm为宜,将畦整平拍实后,喷洒杀虫剂500倍液,在畦内将细砂、蛭石混匀后用木板刮平,并用800倍液多菌灵液将沙床洒透,在畦上搭建小拱棚,可用扁竹或圆竹搭建,高度保持在1.50m 左右,上遮盖遮阳网。 1.2栽种试管苗的基质栽种试管苗的基质要具备透气、保湿、容易灭菌处理、不利于杂菌滋生的特点,选用珍珠岩、炉渣、蛭石、锯末、草炭土等多种基质进行试验,结果表明,最适合大樱桃组培苗生长的基质为:细沙与蛭石6:4混合,细砂为颗粒为0.10~0.20mm 的面砂。 2试管苗的移栽方法 2.1试管苗的驯化试管苗从培养架上长好后,将试管苗小心从培养架上取下,要轻取轻放,迅速转移到日光温室中,在日光温室中将瓶苗均匀地摆在地上,温度控制在15~25℃,光照强度为3 000Lx,每天中午在瓶苗周围喷洒多次雾水,达到保湿降温的效果,移到

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。表1大量元素母液（配1L20倍的母液）序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

实训五常用培养基的制备

实训五常用培养基的制备目的要求熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH。仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、标准比色管、精密pH试纸、纱布、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、氯化钠、氢氧化钠、脱纤绵羊血等。方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH→过滤→分装→灭菌→无菌检验→备用。 (一)肉膏汤培养基 1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。 2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加水后，加热溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸汽灭菌器内，121.3℃20min灭菌即成。 3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。 (二)营养琼脂培养基 1．成分肉膏汤1000ml，琼脂粉20～30g。 2．制法将琼脂粉加入肉膏汤内，煮沸使其完全溶解，矫正pH7.4～7.6，过滤分装于试管或三角烧瓶中，以121.3℃灭菌20min。可制成试管斜面、高层培养基或琼脂平板。此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。 (三)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。 (四)半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或细菌运动性观察。 (五)肉渣汤(疱肉)培养基于每支试管中加入2～3g牛肉渣及肉膏汤5～6ml，液面盖以一薄层石蜡油，经121.3℃20～30min灭菌后保存冰箱备用。此培养基用于厌氧菌的培养，必须注意，此培养基在使用时，将肉渣培养基置水浴锅煮沸10min，以驱除管内存留的氧气。 (六)pH的测定与矫正 1．精密pH试纸法取精密pH试纸一条，浸入欲测的培养基中，半秒后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1mol/L氢氧化钠中和酸。在滴加1mol/L氢氧化钠后，应充分摇匀，再用试纸测定，直至调到pH在所需的范围内。 2．标准比色管法 (1)取与标准比色管大小一致的试管2支，按(实图5-1)每管内加入不同的溶液。①培养基5ml(对照管)；②标准比色管；③培养基5ml加0.02%酚红指示剂0.25ml；④蒸馏水管。 (2)对光观察比较两侧观察孔内颜色是否相同，培养基若为酸性(一般呈酸性)，则向③管中慢慢加0.1mol/L氢氧化钠，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至③④两管

植物组织培养的培养基

植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因：（1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。（2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。（3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。所以用蔗糖更简单动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因: 1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用 2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞. (2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.

植物常用培养基附加配制说明

备注：培养基和激素母液配制方法（1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶，不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。（2）200×Fe盐溶液称取1.39g FeSO4?7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2?EDTA溶于热水（B液）；将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。（3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解；加水定容至100ml，4℃保存。如果出现沉淀，需要重新配置。（4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m l，4℃保存。（5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。（6）100mM乙酰丁香酮（As）的配制称取196.2mg As，用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml，过滤灭菌后，分装入无菌小管，-20℃冰冻保存。使用前加入灭菌培养基。（7） 0.5mg/ml KT和ABT的配法称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量1N KOH溶解，再用水稀释定容至100ml，4℃保存。（8）其他附加物的溶解及配制 A、称取吗啉乙磺酸（MES）5g溶于水中，定容至10mL。4℃保存。 B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏水稀释定容至10mL，现用配制。4℃保存。 C、称取850mg硝酸银，用蒸馏水溶解后定容至100mL。4℃保存。 D、头孢霉素（cefotaxime）2500mg，用蒸馏水溶解后定容至10mL。4℃保存。 E、潮霉素（Hyg B），商品已溶解，筛选时一般加5、8、12mg/L梯度浓度。

植物组织培养实验室(组培室)规划设计

植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成 (一基本实验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。

实验一植物组织培养基母液配制的若干关键环节

实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求：熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍数称取量/ mg 母液定溶体积/ml 配1LMS培养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1

组培苗的炼苗方法图文稿

组培苗的炼苗方法集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-

试管苗的炼苗和移栽一、目的要求熟练掌握组培苗移栽驯化技术。二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。三、方法与步骤（一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。（二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。（三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。（四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。（五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。四、作业记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为 50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬

或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部（因为残留的蔗糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基，洗不净容易引起移栽苗烂根死亡），并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%~0.3%的高锰酸钾或多菌灵等杀菌剂溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床或盆钵，也可用水清洗后用多菌灵溶液浸泡10~30分钟后移栽，栽后淋足定根水。炼苗在塑料薄膜（或玻璃）温室内或遮阴网室内进行，使用温室或温棚时应注意设置通风口，防止浇水后高温引起萎蔫及高湿引起烂苗。生长基质应当具有适合的pH值、多空隙、良好的排水和通气性能，如一般用珍珠岩、蛭石、草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。这些基质在使用前应高压灭菌，或用至少小时烘烤来消灭其中的微生物。由于移出的试管小植株极容易感染病，所以生长环境的卫生状况和病害防治对移栽能否成功十分关键。通常对生长基质、培养容器和苗床进行消毒处理，采用新的培养容器或聚乙烯薄膜效果都很好，必要时可喷施稀的杀菌剂。 4、移栽后的管理。移出的试管苗一般在炼苗前4周遮阴要达到50%~90%，并采用喷雾洒水保持一定的湿度（85%左右），之后逐渐降低湿度和增强光照。湿度降低幅度及光照增加量依不同植物而定，总体上应促使老叶缓慢衰退并同时产生新叶。如果降低或增加过快，会使叶片褪绿和灼伤，缓苗期延长，甚至导致移栽苗死亡。但是，只要小植株能够忍受，尽可能高的光照水平是有利的。温度不应低于20℃，最好达到25~30℃。但温度湿度过高易于滋生杂菌，造成苗霉烂或根茎处腐烂，因此应对温度加以控制。遮阴和调节湿度（喷雾或塑料薄膜覆盖）也有助于控制温度。在炼苗时可适当施用大量和微量元素，如采用1/4或

组培培养基本操作步骤

实验一、贮备液的配制和保存实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选取培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS 培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。实验仪器设备和试剂冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉 NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2?EDTA?2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水实验方法 ⑴MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约800ml，放入1000ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将

溶液倒入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑵MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4 ?4H2O，ZnSO4?7H2O ，H2BO3 ，KI ，NaMoO4?2H2O，CuSO4?5H2O，CoCl2?6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑶MS铁盐母液配制把FeSO4?7H2O和Na2?EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解，然后将2种溶液混合，把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1－2min，在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑷MS有机化合物母液的配制按配方表中用量依次称取：维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑸植物生长物质母液的配制 2，4-D母液：准确称量后先用少量（1-3ml）95%乙醇完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 MS培养基母液配方

细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略

常用培养基及基本特性 1、RPMI-1640 Medium RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。 3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 5、DMEM/F12 DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。 6、McCoy’s 5A McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。 7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM) Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。 8、M-199 Medium

组培实验室岗位职责

岗位职责一：制剂室岗位职责 1、根据生产计划采购所需试剂耗材，定期检查试剂药品储备，查缺补漏，保障日常生产工作顺利进行； 2、特殊试剂（强腐蚀性、有毒的）单独存放，专人保存，使用后做好纪录； 3、制剂器皿摆放要整齐有序，使用过的器皿要及时清洗干净； 4、配制母液或培养基时，一定要仔细核对配方和药剂的名称，准确称量； 5、认真填写实验记录，保证记录的原始性、完整性和真实性，妥善保管及归档资料； 6、保持室内环境卫生、整洁，做好门、窗、水、电、试剂等的安全工作。二：无菌操作室岗位职责 1、接种人员要严格按照无菌室工作时间，按时上下班，不准迟到、早退；上午7：00 打开工作台电源和紫外灯 7：30——11：30 关闭紫外灯，进行无菌操作下午14：00打开工作台电源和紫外灯 14：30——18：30关闭紫外灯，进行无菌操作 2、接种人员要严格按照技术操作规范进行操作，遵守纪律，服从安排； 3、接种人员进入无菌室前，需使用清洁剂清洗手面，然后更换工作服和拖鞋，戴上口罩和帽子，方可进入无菌室； 4、在进行无菌操作前，要提前确认工具是否齐全，酒精灯内的酒精是否充足，然后用酒精抹布将工作台和即将使用的器具擦拭一遍；

5、操作过程中除特殊情况外，禁止在无菌室内说话、走动，禁止在无菌室内接听电话； 6、操作完成后，关闭工作台电源，盖上酒精灯，将操作器具和工作台擦洗干净，工具摆放整齐，离开无菌室，将操作过程中产生的废弃材料一起带出； 7、要随时保证无菌室的绝对整洁卫生，每周要对无菌室进行一次清扫，每两周要对无菌室进行一次熏蒸灭菌。三：培养室岗位职责 1、按时开关灯和空调，做好各个培养室的温湿度记录，妥善归档保存；开关灯时间：7:30——18:30、温度：25℃——28℃ 2、提前为无菌操作人员挑选母苗，并及时将转接好的种苗分类摆放，记录数量，做好统计工作； 3、监督无菌操作人员是否按照规范要求操作，检查瓶苗质量是否合格； 4、定期对培养室生产苗进行观察，对出现有污染现象的培养物要及时清理出来，并做好登记，发现有异常现象要及时汇报，尽早处理；四：灌装、灭菌岗位职责 1、根据生产计划，按时完成培养基的灌装和灭菌工作； 2、严格遵守灌装和灭菌程序的操作规程，安全生产； 3、定期对灌装机和灭菌锅等设备仪器进行维护保养，发现设备有异常现象要及时汇报，尽早处理； 4、严禁在灭菌过程中，擅自脱岗。