微生物学实验教学大纲(最新整理)
课程编号：
《微生物学实验》教学大纲
学时数：108 讲课：108
学制：四年制本科
适合专业：生物科学相关专业
一、本课程的性质和任务
（一）课程的性质：
微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。
（二）课程的任务：
微生物学实验是生物学重要的基础课之一，要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。
二、本课程与其他课程的联系：
1. 通过教师示范、讲解与学生实际操作相结合方法，使学生牢固树立无菌概念，掌握显微镜的使用、生物染色技术、形态学观察的方法、微生物计数、培养基的配置和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技能，基本了解常用的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的注意事项，树立严谨求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力，培养勤俭节约、爱护公物和相互协作的优良作风。
2. 本实验课内容包括验证性实验、综合性实验两个部分。验证性实验主要
通过光学显微镜镜检观察方法进行教学，综合实验在教师指导下学生根据所掌握的理论基础和实验技能，由学生自己动手完成。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据、结果，分析实验现象并认真填写实验报告。
三、教学内容
（一）实验一实验室安全教育与微生物学实验室常用的器皿
目的要求
掌握实验室安全规则，了解微生物学实验所用的器皿，因其大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此了解其质量、洗涤和包装方法的要求。
实验内容
一、器皿的种类、要求与应用：
1、试管
大试管(约18mm×180mm) :可装倒平板用的培养基；可作制备斜面用；装液体培养基用于微生物的振荡培养
中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用；用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。
小试管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。
2、容量瓶
主要用于准确配制一定浓度的溶液，它是一种细长颈、梨形的平底玻璃瓶，配有磨口塞，瓶颈上刻有标线。
3、量筒
用来量取液体体积的一种玻璃仪器，外壁上有刻度。常用量筒的规格有
5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、250ml等。
4、三角瓶
用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。
5、烧杯
呈圆柱形，顶部的一侧开有一个槽口，便于倾倒液体，有些烧杯外壁标有刻度，可以粗略地估计烧杯中液体的体积，这种烧杯叫印标烧杯，也叫刻度烧杯，其分度并不十分精确，允许误差一般在±5%。
6、烧瓶
通常具有圆肚细颈的外观，因瓶口很窄，不适用玻璃棒搅拌，若需要搅拌时，可以手握瓶口轻微转动手腕即可顺利搅拌混匀。烧瓶随其外观的不同分为圆底烧瓶和平底烧瓶两种，通常平底烧瓶用在室温下的反应，而圆底烧瓶则用在较高温的反应，这是因为圆底烧瓶的玻璃厚薄较均匀，可承受较大的温度变化。
7、三角烧瓶（锥形瓶）
锥形瓶瓶体较长，底大而口小，盛入溶液后，重心靠下，极便于手持振荡，故常用于容量分析中作滴定容器。也可以供加热、煮沸、贮存、消毒各种液体用，常用容量有：100ml、250ml、500ml、1000ml等。
8、烧杯
用来配制培养基与各种溶液等。
9、离心管
常用的有0.5ml、1.5ml、10ml、15ml、20ml等规格，其上有刻度，专供离心机使用。主要用于微生物分子生物学实验中，小量菌体的离心，DNA或RNA
的检测和提取等。
10、移液管和吸管
均用于吸取和转移少量液体。移液管上刻有标线，在标明的温度下，当吸取溶液至弯月面与标线相切后，让溶液自然放出，此时所放出溶液的体积即等于管上所标的体积。常用的移液管有1mL、2mL、5mL、1OmL等。吸管常用的规格有两种：一种为无刻度的毛细管；另一种为有刻度吸管，管壁有精细的刻度。一般长为25cm，常用的容量为0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL、1OmL。
11、染色缸
有方形和圆形两种，方形的较大，可放10张载玻片，圆形的较小，可放5张载玻片，供细菌、血液及组织切片的标本染色用。
12、漏斗
分短颈和长颈式两种。漏斗直径大小不等，有60mm、100mm和150mm等几种不同规格，供分装溶液或者上垫滤纸、纱布、棉花作过滤杂质用。
13、滴瓶
有橡皮帽式和玻塞式，分无色和棕色，容量有30mL和60mL等，供储存试剂或染色液用。
14、下口瓶
分为有龙头和无龙头两种。容量有2500mL、5000mL两种规格。供存放蒸馏水或常用的消毒药液用。
15、培养皿
由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径90 mm，高15mm,皿底皿盖均为玻璃制成。在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板，可用于分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。
16、载玻片及盖玻片
载玻片主要用于微生物涂片、染色，做形态观察等。另有凹玻片，就是在一块厚玻片当中有一圆形凹窝，做悬滴观察活细菌及血清学试验用。盖玻片为极薄的玻片，用于标本封闭及悬滴标本等。
17、德汉氏小管
观察细菌在糖发酵培养基内产气情况时，一般在小试管内再套一倒置的小套管（约6mm×36mm），此小管即为德汉氏小管，又称发酵小套管。
18、双层瓶
由内外两个玻璃瓶组成，内层小锥形瓶放香柏油，供油镜观察微生物时使用，外层瓶放二甲苯，用以擦净油镜头。
19、接种工具
接种工具有接种环，接种针，接种钩，接种铲，玻璃涂布器等。为细菌学检验工作中接种、分离细菌或挑取菌落制作涂片所必不可少的工具。接种环常装于铝质的握柄上，用坏后可随时更换。
二、玻璃器皿的洗涤方法
1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。
2、旧玻璃器皿的洗涤
（1）试管、培养皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗。
A 装有固体培养基：刮掉，洗涤。
B 带菌的器皿：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时或煮沸
0.5小时，然后洗涤。
C 带病原菌培养物的器皿：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物。
（2）玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗。
A 吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自来水的容器中浸泡，实验后集中冲洗。
B 塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗。
C 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时然后洗。
D 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗。
洗净后的试管倒置于试管筐内，三角瓶倒置于洗涤架上，培养皿的皿底和皿盖分开，依次压着皿边排列倒扣在桌上,晾干。
洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水冲洗。
三、各种器皿的包扎
1、培养皿的包扎：
培养皿常用旧报纸紧紧包裹（也可用金属筒包装），一包7～10套，包好后干热或湿热灭菌。
2、吸管的包扎：
在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避免将外界或嘴中杂菌吹入管内，或不慎将菌液吸出管外。然后用4～5 cm宽的长纸条包扎。
3、试管和三角瓶等的包扎：
试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞；用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更好），进行干热或湿热灭菌。试管较多时，一般7个或10个一组，再用双层报纸包扎。
附：棉塞的制作：
棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水份的蒸发，故在微生物工作中一直普遍使用着。
做棉塞的要求：松紧适中，不能太松也不能太紧，太松达不到滤菌的目的，并且易脱落，太紧通气不好，操作不便，做到手拿不掉，又易转动；深浅适度，棉塞总长1.5寸左右，约有1/3在试管外，2/3在试管内，顺时针方向塞入。
棉花要求采用普通棉花，它能防潮不易吸水，不要用脱脂药棉，它易吸水又昂贵。（由教师示范）
实验材料和用品
以上所有器皿。
（二）实验二环境微生物的检查
目的要求
1、证明实验室环境与体表存在微生物；
2、比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型；
3、观察不同类群微生物的菌落形态特征；
4、体会无菌操作的重要性。
实验原理
平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2d内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
实验内容
1、环境微生物的检测：倒平板、接种环境微生物；
2、灭菌器皿的准备：学习包扎平皿、移液管。
实验材料和用品
1、材料：环境中各种微生物；
2、用品：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌平皿、移液管、平皿、酒精灯、牛皮纸、记号笔。
（三）实验三显微镜的构造、性能和使用方法
目的要求
1、学习掌握油镜的规范使用方法；
2、复习掌握光学显微镜的基本结构及使用方法。
实验原理
油镜工作原理：
1、增加照明亮度；
2、显微镜的分辨力：指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与接物镜的数值孔径成正比，与光的波长成反比。
分辨力=（1/2光波长度）/数值孔径
实验内容
1、复习显微镜的使用方法；
2、油镜的使用原理、操作要点（包括清洁方法）；
3、当堂考核油镜使用方法，合格方能通过。
实验材料和用品
学生显微镜、细菌三型装片；双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸。
（四）实验四细菌的简单染色与显微观察
目的要求
1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；
2、初步认识细菌的个体形态、菌落形态特征；
3、巩固显微镜(油镜)的使用方法和无菌操作技术。
实验原理
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，
适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电
离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
实验内容
1、微生物菌落形态的观察：几种代表类型微生物菌落形态特征了解、辨识；
2、细菌简单染色及个体形态的观察：无菌接种操作；涂片、干燥、固定、染色、水洗、干燥、镜检。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、环境微生物检测平板；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和
乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)。（五）实验五革兰氏染色
目的要求
1、学习并初步掌握革兰氏染色法；
2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，是1884年由丹麦病理学家Christain Gram氏创立的，而后一些学者在此基础上作了某些改进。该染色法
能将细菌分为G－菌和G＋菌，是基于这两类细菌的细胞壁结构和成分不同。
G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G＋菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
实验内容
1、革兰氏染色法基本步骤：制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检；
2、染色成败原因分析；
3、实验操作考核一。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、番红液)。
（六）实验六细菌的芽孢染色法
目的要求
1、学习并掌握芽孢染色法。
2、观察芽孢的形态特征：形状、大小及着生位置。
实验原理
芽孢染色法是利用芽孢和菌体对染色体的亲合力的不同的原理，用不同的染色体进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚，透性低，着色、脱色均较困难，所以我们必须采取着色力强、浓度高的孔雀绿染液（5%）进行染色：染色过程中延长染色时间，10分钟（一般为2～3分钟）并
且在加热条件下进行染色。进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再利用复染液进行复染，此时菌体就被染成红色，而芽孢难以着色，仍呈绿色。
实验内容
1、涂片：将培养24小时枯草杆菌作涂片、干燥、固定。
2、染色：涂片上盖上一张2.5×2cm滤纸片，在上面滴加5～6滴孔雀绿（不易过多，以铺满滤纸为宜），用镊子加在载玻片在火焰上徐徐加热，使燃料冒蒸汽（但不沸腾），切勿使燃料蒸干，随时添加染色液，保持10分钟（从冒蒸汽时开始计时）。
3、冲洗：取下冷却，取掉滤纸，冲洗至孔雀绿不再退色为止。
4、复染：用番红液复染1～2分钟，水洗，气干。
5、镜检：待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
实验材料和用品
1、材料：枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物；
2、用品：5％孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、无菌水、香柏油、二甲苯；普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、试管夹等。
（七）实验七细菌鞭毛染色及运动性观察
目的要求
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征；
2、学习用压滴法观察细菌的运动性。
实验原理
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01～0.02微米，所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
实验内容
1、硝酸银染色法染色；
2、压滴法观察细菌的运动性。
实验材料和用品
1、材料：变形杆菌；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；鞭毛染色液(鞭毛染色液A、鞭毛染色液B)。
（八）实验八酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
实验内容
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别。
实验材料和用品
1、材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环；0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液。
（九）实验九霉菌的形态观察
目的要求
1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；
2、初步了解霉菌的形态特征。
实验原理
霉菌的形态结构观察：霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
实验内容
霉菌的观察（试管直接观察法）。
实验材料和用品
1、材料：细黄链霉菌或青色链霉菌、黑曲霉、根霉；
2、用品：学生显微镜、体视镜、酒精灯、载玻片、镊子等。
（十）实验十培养基的配制与灭菌
目的要求
1、了解培养基的配制原理；
2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤；
3、了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
干热灭菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
实验内容
1、配制牛肉膏蛋白胨等培养基；
2、高压蒸汽灭菌方法灭菌。
实验材料和用品
1、试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂粉；
2、用品：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、移液管、高压蒸汽灭菌锅等。
（十一）实验十一微生物的分离与纯化
目的要求
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。
实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生
物的分离与纯化。微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须
从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。
分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进行一定的稀释，并
使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单
菌落。
分离纯化常用的方法有：
1、简易单细胞挑取法
它需要特制的显微操纵器或其他显微技术，因而其使用受到限制。
2、平板分离法：
选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物
微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成
的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可
通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。
实验内容
1、土样样品的采集；
2、倒平板；
3、平板涂布法；
4、制备土壤稀释液；
5、稀释倾注法。
实验材料和用品
1、材料：校园土、牛肉膏蛋白胨培养基（12ml）；
2、用品：无菌培养皿、无菌刮铲、1ml无菌吸管、盛9ml无菌水试管
6支、盛90ml无菌水三角瓶一个、酒精灯等。
（十二）实验十二微生物的培养特征
目的要求
1、了解不同的微生物在琼脂平板、斜面上、和液体培养基中的生长特点。
2、懂得微生物接种技术的重要性与应用面；
3、能描述微生物在琼脂平板、斜面上、和液体培养基中的培养特征。
实验原理
微生物的培养特征是指微生物在固体、半固体和液体培养基中生长后所表现出的群体形态特征。不同的微生物有其固有的培养特征，这些特征一般用固体、半固体和液体培养基来进行检测。
实验内容
1、斜面接种；
2、穿刺接种；
3、液体培养基接种；
4、培养；
5、细菌在固体斜面培养特征的观察与描述；
6、细菌在半固体培养基培养特征的观察与描述；
7、细菌在液体培养基中培养特征的观察与描述。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；
2、用品：牛肉膏蛋白胨培养基、接种环、接种针、无菌吸管、酒精灯
等。
（十三）实验十三菌种保藏
目的要求
学习并掌握菌种保藏的基本原理，比较几种不同的保藏方法。
实验原理
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
1、传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3、冷冻保藏法
可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）
和液氮（-196℃）等保藏法。
4、冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
实验内容
1、斜面低温保藏法；
2、液体石蜡保藏法；
3、液氮冷冻保藏法；
4、冷冻干燥保藏法。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、酵母菌，放线菌和霉菌；
2、用品：肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0.5×1.2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管,冰箱，低
温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。
（十四）实验十四微生物数量的测定
目的要求
1、学习平板菌落计数的基本原理和方法；
2、了解光电比浊计数法的原理，学习、掌握光电比浊计数法的操作方法；
3、了解血细胞计数板计数的原理，掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
实验原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony -forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度--菌数标准曲线。因此，对于不同微生物的菌悬液进行光电比浊计数应采用相同的菌株和培养条件制作标准曲线。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
实验内容
1、平板计数法；
2、光电计数法；
3、直接计数法(显微镜)；
4、实验操作考核二。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌；
2、用品：学生显微镜、血细胞计数板、计数器、分光光度计、盖玻片、无菌毛细滴管、无菌平皿、无菌试管、无菌移液管、酒精灯、涂棒、镊子、记号笔等；牛肉膏蛋白胨培养基、无菌生理盐水。
（十五）实验十五理化因素对微生物的影响
目的要求
1、了解常用化学消毒剂对微生物的作用；
2、了解紫外线对微生物的作用；
实验原理
常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下可抑制细菌生长。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使
空气中的氧电离成［O］，再使O2氧化生成自臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成过氧化氢(H2O2)。O3和H2O2均有杀菌作用。
实验内容
1、化学因素对微生物的影响；
2、物理因素对微生物的影响；
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；
2、用品：酒精灯、接种环、记号笔、紫外灯等；牛肉膏蛋白胨平板；0.1%升汞、10%石炭酸、75%酒精、1%来苏尔、0.05%龙胆紫。
（十六）实验十六生物因素对微生物的影响
目的要求
了解抗生素对微生物的作用原理，学习抗菌谱试验的基本方法。
实验原理
生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之间的拮抗现象是普遍存在于自然界的，许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其它微生物的作用，不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用。
实验内容
1、生物因素对微生物的影响；
2、实验操作考核三。
实验材料和用品
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；
2、用品：酒精灯、接种环、记号笔、紫外灯等；牛肉膏蛋白胨平板；氨苄青霉素。
四、作业（略）
《微生物学实验》教学大纲说明
一、本课程的重难点和广度
（一）课程的重点：
微生物学实验课程要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。
（二）课程的难点：
微生物学实验课程的难点是与微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。。
（三）课程的广度：
微生物学实验是生物学重要的基础课之一，特别是随着分子生物学的发展与拓宽，微生物学方法与技术显得尤为重要。此外，医学、农学、林学等学科，甚至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术。
二、考核办法：
考试占30％，平时占70％。
三、学时分配：
总学时：108 讲课：96
课程内容课时分配讲课实验一实验室安全教育与微生物学实验66
室常用的器皿
实验二环境微生物的检查66
实验三显微镜的构造、性能和使用方法66
实验四细菌的简单染色与显微观察66
实验五革兰氏染色66
实验六细菌的芽孢染色法66
实验七细菌鞭毛染色及运动性观察66
66实验八酵母菌的形态观察及死活细胞的
鉴别
实验九霉菌的形态观察66
实验十培养基的配制与灭菌66
实验十一微生物的分离与纯化66
实验十二微生物的培养特征66
实验十三菌种保藏66
实验十四微生物数量的测定66
实验十五理化因素对微生物的影响66
实验十六生物因素对微生物的影响66
机动66
考试66
总学时108108
四、参考书目：
《微生物学实验》第4版、沈萍主编、高等教育出版社、2007年。
《微生物学实验教程》第2版、周德庆主编，高等教育出版社、2006年。
《微生物学实验教程》第2版、黄仪秀主编、北京大学出版社、2008年。《微生物学实验指导》第2版、黄秀梨主编、高等教育出版社、2008年。
《图解微生物实验指南》(附光盘)、J.P.哈雷(著)、谢建平等(译)、McGraw-Hill／科学出版社、2012年。
编写：
审核：
批准：
微生物学实验知识点总结与实践应用
微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或
环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于
微生物学实验教学大纲
课程编号： 《微生物学实验》教学大纲 学时数：108讲课：108 学制：四年制本科 适合专业：生物科学相关专业 一、本课程的性质和任务 （一）课程的性质： 微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。 （二）课程的任务： 微生物学实验是生物学重要的基础课之一，要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。 二、本课程与其他课程的联系： 1. 通过教师示范、讲解与学生实际操作相结合方法，使学生牢固树立无菌概念，掌握显微镜的使用、生物染色技术、形态学观察的方法、微生物计数、培养基的配置和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技能，基本了解常用的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的注意事项，树立严谨求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力，培养勤俭节约、爱护公物和相互协作的优良作风。 2. 本实验课内容包括验证性实验、综合性实验两个部分。验证性实验主要
通过光学显微镜镜检观察方法进行教学，综合实验在教师指导下学生根据所掌握的理论基础和实验技能，由学生自己动手完成。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据、结果，分析实验现象并认真填写实验报告。 三、教学内容 （一）实验一实验室安全教育与微生物学实验室常用的器皿 目的要求 掌握实验室安全规则，了解微生物学实验所用的器皿，因其大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此了解其质量、洗涤和包装方法的要求。 实验内容 一、器皿的种类、要求与应用： 1、试管 大试管(约18mm×180mm) :可装倒平板用的培养基；可作制备斜面用；装液体培养基用于微生物的振荡培养 中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用；用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 小试管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。 2、容量瓶 主要用于准确配制一定浓度的溶液，它是一种细长颈、梨形的平底玻璃瓶，配有磨口塞，瓶颈上刻有标线。 3、量筒 用来量取液体体积的一种玻璃仪器，外壁上有刻度。常用量筒的规格有5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、250ml等。 4、三角瓶 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。 5、烧杯 呈圆柱形，顶部的一侧开有一个槽口，便于倾倒液体，有些烧杯外壁标有刻度，可以粗略地估计烧杯中液体的体积，这种烧杯叫印标烧杯，也叫刻度烧杯，其分度并不十分精确，允许误差一般在±5%。 6、烧瓶 通常具有圆肚细颈的外观，因瓶口很窄，不适用玻璃棒搅拌，若需要搅拌时，
微生物学实验指导
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --
-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板
微生物学实验
微生物学实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天 平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒 压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零 取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是 无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基 四、实验内容
微生物学实验教学大纲
微生物学实验教学大纲 课程名称：微生物学实验课程编码：0431030706 英文名称：Microbiological experiment 学时：36学分：2 适用专业：制药工程及相关专业课程类别：必修 课程性质：专业基础课先修课程：微生物学 参考教材：杜连祥，路福平主编。《微生物学实验技术》，中国轻工业出版社，2005，8. 一、制定本大纲的依据 本教学大纲是根据教学目的、要求以及实际教学学时制定的，课程总学时为36学时。在不妨碍教学内容的系统性与逻辑性的前提下（包括前后实验内容的衔接关系），主讲教师可以按照自己的具体教学情况或经验，适当地将某些内容的次序加以变更或调整。 二、本实验课程的具体安排 实验项目的设置及学时分配（表）
三、本实验课在该课程体系中的地位与作用 微生物学实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法。通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对微生物学理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。 四、学生应达到的实验能力与标准 通过本课程的教学，使学生掌握进行常规常见微生物检测的实验原理和基本方法，具有独立进行微生物学检测实验方案的设计、初步具备利用微生物学手段分析和解决发酵生产过
程中有关实际问题和从事有关科学研究工作的能力。 要求学生了解实验室的布置以及实验室的规则；使学生熟练掌握显微镜的使用技术并熟悉显微镜的使用技术并熟悉显微镜的构造及保养方法；学会干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱的使用；具有选择和制备培养基的能力；掌握基本染色原理和方法以及制片技术；熟悉细菌、酵母菌、霉菌的基本形态结构、生理生化特征和血清学特性，具有菌种初步鉴定的基本技能；通过实验，使学生学会无菌操作方法，掌握微生物的分离、筛选和育种的基本知识和技能，了解菌种保藏的一般方法。 五、讲授实验的基本理论与实验技术知识 实验一细菌培养基的配制与灭菌 1.实验内容与要求： （1）了解加热灭菌的基本原理，掌握实验室常用的几种加热灭菌技术 （2）了解配制培养基的基本材料，学习配制肉汤培养基的方法并掌握其要点。 2.实验材料： （1）培养基组成牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH值7.2，固体时加琼脂2%。（2）试剂 6mol/lHCl、10%NaOH。 （3）其它工具：台秤、量筒、试管、三角瓶、烧杯、分装架等。 实验二细菌的接种与培养 1.实验内容与要求： （1）掌握无菌操作的概念和基本操作技术； （2）了解细菌常用的培养基以及培养条件； （3）了解平板划线分离菌种的原理和操作要点。 2.实验材料： （1）菌种：大肠杆菌(Escherichia coli)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，八叠球菌(Sarcina sp.)。 （2）培养基：肉汤固体斜面（2个/菌），肉汤液体试管（2管/菌），平板划线接种肉汤固体培养基（10-15ml/皿，2块/菌），平板点接肉汤固体培养基（10-15ml/皿，3支菌用1块），穿刺用肉汤半固体培养基（2管/菌）。 （3）其它工具：接种针，接种环，酒精灯或煤气灯，消毒酒精棉球，镊子，试管架，标签纸，培养箱（37℃）
综合实验在微生物学实验教学中的应用
综合实验在微生物学实验教学中的应用 发表时间：2011-04-01T09:09:19.763Z 来源：《学园》2011年02月上旬供稿作者：易弋刘昭明黎娅程谦伟[导读] 本文同时分析了实验开展过程中存在的问题，为进一步对微生物学实验教学模式进行改革积累了经验。易弋刘昭明黎娅程谦伟广西工学院生物与化学工程系 【摘要】在微生物学实验教学中开展综合性实验，是一种有效的培养学生综合素质的教学方式，学生在实验的开展过程中通过资料查阅、方案设计、方案评审以及方案实施等步骤，提高了分析问题和解决问题的能力。本文同时分析了实验开展过程中存在的问题，为进一步对微生物学实验教学模式进行改革积累了经验。 【关键词】微生物学综合实验教学改革 【中图分类号】G642 【文献标识码】A 【文章编号】1674－4810（2011）02－0010－02 一引言 生物工程是由微生物学、化学、生物化学、化学工程、计算机等学科交叉结合发展而成的一门新兴复合学科，被视为人类21世纪三大前沿学科之一。在短短的几十年，生物工程学科发展迅速，已成为新世纪推动社会进步的关键技术之一，而生物工程产业亦逐步成为推动国民经济发展的新经济增长点。近年来，高校生物工程专业呈现出一片欣欣向荣的景象，但学生毕业后却常常发现工作难找，而用人单位却往往找不到自己所需的人才，出现这类现象的主要原因在于高校的人才培养与就业需求脱节。一方面高校专业和课程的设置与市场需求相脱节；另一方面，由于受传统教育“重理论轻实践”观念的影响，现在的学生在动手能力、实验技能、创新能力等方面还远不能满足社会对生物工程领域人才的要求。在教学过程中通过与学生的交流，我们也发现学生在找工作的过程中深深体会到实践动手能力和基本科研素质的重要性。作为一门新兴技术，生物工程是一门实验性和实践性都很强的学科，实践教学不但是生物工程专业本科教学的重要组成部分，而且是培养具有创新精神和实践活动的高素质工程技术人才的重要环节。因此，如何有效地进行实验教学改革，是当前生物工程专业建设需要重点解决的问题。 微生物学实验是生物工程专业的一门核心实验课，是连接生物化学、分子生物学、发酵技术、酶工程等主干课程及其相关实验的枢纽。此外，由于微生物学实验大多与实际生活密切相关，易激发学生的学习兴趣，从而便于训练学生的实验操作技能，培养他们的综合能力。因此，微生物学实验的改革是生物工程专业的实验教学改革的核心内容。近年来，为了培养出符合社会需要的人才，我系对生物工程专业的微生物学实验进行了一系列的改革，开展综合实验便是其中一个重要内容。 二开展综合性实验的必要性 传统的微生物实验教学模式属于“填鸭式”和“保姆式”的教学，通常以教师为中心，由教师选定实验教材，讲解实验原理、目的、方法和步骤，学生只是被动地按照实验要求和操作步骤依样画葫芦。这种以老师为主、学生为辅的做法，使实验流于形式，效果很差，学生缺乏兴趣，既不能调动学生学习的积极性和主动性，又不能提高学生的实验设计能力和动手能力，更不能起到培养学生创新意识与实践能力的目的。而且实验内容侧重于理论教学中经典理论或定律的验证，综合性、设计性实验很少，知识更新节奏缓慢。在这种教学模式下，学生的思维被局限在相应的理论课程中，办事循规蹈矩，缺乏创新精神和开拓能力，已不适应现代社会对人才的需要。为了改革现有的微生物实验教学模式，将传统的“以教师为主体”的教学模式转变为“以学生为主体，教师为主导”的教学模式，在学生掌握了微生物学实验的基本操作后，开展了微生物综合实验。在综合实验实施的过程中，学生根据自己的兴趣选择实验题目，亲自参与资料查阅、方案设计、方案评审、方案实施、实验报告等工作，有效地激发了他们的学习兴趣，培养了他们的创新能力以及发现问题、分析问题、解决问题的能力。 此外，微生物实验是一个连续、系统的知识体系，如培养基配置、灭菌、接种、培养、生化性能测定等实验本是一个环环相扣的整体，但由于传统教学的安排，这些实验都成了一个个独立的项目，失去了内在联系，在这种情况下学生很难牢固地掌握所学的知识。开展综合性实验使学生从最简单的洗刷玻璃器皿开始，逐步深入地开展实验，有利于从整体上把握实验教学的内容及要求，易于学习和记忆。随着社会经济的发展，微生物在农业、工业、食品、医学等领域的实际应用越来越广泛，学生们除了需要掌握微生物的基础实验手段外，还需要具有整体试验的安排能力。开展综合实验使学生经历了一个类似于科研工作的流程，初步培养了他们从整体上把握实验进展的能力，对提高他们今后的就业竞争力大有益处。 三综合实验的实施步骤 1．选题 教师提前公布拟开展的实验题目，所选题目尽可能与日常生活以及工厂的实际生产相关。我系根据自身以及生物工程专业的特点拟定了若干个不同的题目供学生选择，如“不同原料的沼气发酵”、“木薯淀粉酒精浓醪发酵”、“谷氨酸发酵”以及“土壤中酵母菌的分离及其总蛋白的提取”等实验题目。此类实验容易激发学生的积极性，加深学生对工厂生产工艺的了解。学生根据自身的兴趣、爱好自由选择实验题目。为提高学生相互交流的效果，参与每项实验的人数不宜过多，也不宜过少，以3～5人为宜，并由学生推选组长。 2．方案设计 选题完成后，学生以小组为单位针对所选实验题目查阅资料，并在规定的时间内整理出一条合理的实验路线。路线制定后，由教师对学生所提出的路线进行评审，评审的内容包括：路线的正确性、可行性，是否有其他更好的方案以及实验过程中需要重点注意的问题等。学生根据教师的意见对实验路线进行修改，直至合理。 3．方案实施与完成 最终方案制定后，教师在约定的时间内开放实验室，学生按照制定的路线，逐步完成实验，并撰写实验报告。方案实施过程中，每天均应有教师及实验人员值班，一是保障实验室的安全，二是监督学生的实验操作，帮助学生对遇到的问题进行分析、解决。整个过程中，教师只提供指导性的意见，具体的实验操作及进展均由学生自己掌握。 值得注意的是，在整个实验过程中，我们要明确地告诉学生，实验的目的不只是得到一个好的结果，更重要的是为了锻炼能力。出现问题并不是坏事，相反，为我们提供了一个机会来锻炼自己分析、解决问题的能力。我们鼓励学生根据问题和现象去查找原因，进行组内讨论，相互启发，分析现象的本质，然后根据分析结果动手解决问题。在实验报告中我们也强调对实验结果进行讨论，每次实验报告不能简单地列举实验数据，而必须对实验结果及操作过程中遇到的问题进行分析。当结果不好时，更应要求学生将可能的原因列出，并根据所查阅的资料逐一分析，从而极大地启发他们的思维，增强他们勇于克服困难的决心。
《微生物检测技术》教学大纲
《微生物检测技术》教学大纲 一、基本信息 二、教学目标及任务 教学目标：通过36个学时的教学，努力使学生了解微生物检验检测中的基本技术体系，了解微生物检测技术在研究工作中的用途和新技术的发展动态，使学生在微生物检验检测方面能够提高认识，并对技术体系有一定的了解，以适应就业后在动植物检验检疫、食品品质检测等方面的微生物检验检测业务的需要，也能适应学生今后在进一步的研究和开发过程中所需要用到的研究性检测业务。 三、学时分配 四、教学内容及教学要求 绪论我国粮食生产、我国农业的发展趋势及其和微生物的关系。 重点介绍我国粮食生产的趋势和供需关系，使学生理解微生物检验检测的重要性 无难点 了解微生物检验技术的重要性
第一章微生物在自然界的分布、作用和特征 第一节微生物在自然界的分布 第二节微生物在自然界的作用 第三节微生物在自然界的特征 本章重点介绍微生物的多样性、微生物分布的普遍性和检测特定的微生物的难点 无难点 了解技术对微生物检验的重要性 第二章微生物检验技术和社会 第一节微生物检验技术和植物检疫 第二节微生物检验技术和食品安全 第三节微生物检验技术和研究 本章重点介绍微生物检验检测技术在植物检疫、食品安全、资源开发以及研究活动中的作用和意义 无难点 理解微生物检验技术对国民经济和国民生活安全的重要性，了解微生物检验技术作用范围 第三章微生物检测技术概述 第一节可培养微生物的检测 第二节VBNC的检测技术 第三节其它的微生物检测技术 针对本课程以各项技术为中心展开，缺乏系统性的特点，本章首先给各种微生物检测技术进行概述，尽量给学生提供一个整体观和一些关键技术的信息。 难点在于理解VBNC的检测 理解各种常用的微生物检验技术和方法 第四章样品的采集和处理 第一节气体的采样和处理 第二节液体的采样和处理 第三节固体的采样和处理 从实际出发，本课程设置了采样技术，对用于微生物检验检测的样品的采集进行细致的介绍。 难点在于理解各种采样设备和工具（缺乏实物） 使学生注意到采样行为对微生物的检测结果带来的误差，并培养学生在自己今后的工作中尽量减少采样造成的误差的意识。 第五章微生物检测技术 第一节可培养微生物的检测 以国标为蓝本，介绍可培养微生物的检测方法 学生实验中有一定的基础，应无难点 使学生了解微生物检测的国家标准在实际工作中的应用，使学生学会如何利用国标。 第二节VBNC的检测技术 以最新的研究或最经典的研究例子为蓝本，介绍VBNC检测的各种方法 难点在于理解检测的理论原理和实际操作之间的差距 使学生了解VBNC的检测的方法及其特征，在必要的时候能选择使用。 第六章微生物分离和培养技术 第一节微生物的分离 介绍可培养以及难培养的微生物的分离方法，着重介绍菌根菌的分离 难点在于对于微生物的分离效果的理解 希望学生能掌握基本的微生物分离方法 第二节可培养微生物的培养 1 病原物的培养 2 非病原物的培养 介绍可培养微生物的培养方法，着重介绍病原菌培养时的注意事项 难点在于对于如何传达培养病原微生物时的临场感
食品微生物学实验技术思考题答案
食品微生物学实验技术思考题答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比. 2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察 答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。 答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。 6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节 7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌 8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对
微生物学实验报告
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
微生物学实验教案
微生物实验教案 实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察 一、实验目的 以染色玻片为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。 二、实验原理 1显微镜油镜使用的原理 （1）光学部分 : 接目镜、接物镜、照明装置 ( 聚光镜、虹彩光圈、反光镜等 ) 。它使检视物放大 , 造成物象。（ 2）机械部分 : 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转 移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。 2 显微镜的放大倍数和分辨 率（ 1）放大倍数 =接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 （2）显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公 式表示为： D=λ /2n ·sin(α/2 ) 式中 D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 λ：可见光的波长（平均0.55 μ m） n:物镜和被检标本间介质的折射率。 a：镜口角（即入射角）。 3 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。三、实验材料1显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、酒 精灯、火柴、玻璃铅笔、蒸馏水等。 2枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的玻片染色标本。 四、实验方法与步骤 （1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 （ 2）调节光亮度。 （ 3）低倍镜观察：先粗调再微调至物象清晰。 （ 4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。 （ 5）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油， 使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 （ 6）绘出所观察到的细菌形态图像。 （ 7）、换片：另换新片观察，必须从（3）步开始操作。
食品微生物学实验教学大纲
《食品微生物学实验》课程教学大纲 课程名称：食品微生物学实验 课程编号： 课程组长： 总学分值：1分 总学时数：16学时 适用专业：酿酒工程 一、实验教学课程性质和目的：食品微生物检验技术实验课是与微生物学理论课同学期开设的一门重要的技术基础课。通过本课程的教学，使学生较熟练的掌握微生物学实验的基本操作技术和初步掌握研究微生物的基本方法。通过对具体微生物材料的观察、分析，进一步加深和巩固对食品微生物检验技术理论课所学知识的理解并提高学生分析和解决实际问题的能力。 二、实验教学目的和要求： 1.能够正确制备显微试片，并能独立操作显微镜进行微生物的显微分析； 2.能够通过固体培养的菌落特征，区分真核细胞型微生物和原核细胞型微生物的特点； 3.能在独立进行各种实验材料的准备、实验器皿、培养基的灭菌； 4.能够正确选择符合要求的目的菌株，并进行纯培养和简单的种类鉴定。 5.熟悉从自然界中分离筛选微生物、鉴定微生物的基本方法。 三、实验配套的主要仪器设备及台（套）数
四、实验项目内容和要求
1．考核的内容 ①实验的基本操作； ②实验报告，注重考察学生实验的主动性、分析问题和解决问题的能力； ③实验纪律与实验卫生； ④实验出勤。 2．对实验报告评阅，主要是看学生是否能按实验的要求独立完成实验，报告撰写是否能反映出学生的能力和素质。 3．考核评分，总分100分。 七、实验开出率 实验操作50%，实验报告50% 八、主要教材及参考书 教材：刘素纯，食品微生物学实验，化学工业出版社，2013.4 参考资料： [1] 沈萍，范秀荣，李广武主编．微生物学实验[M].北京:高等教育出版社，1996，6 [2] 周德庆主编．微生物学实验手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1986 [3] 林稚兰，黄秀梨主编. 现代微生物学与实验技术[M]．北京：科学出版社，2000 [4] 周阜棣，俞子牛，何绍江主编．农业微生物学实验技术[M]．北京：中国农业出版社，1996 [5] 徐孝华主编．普通微生物学[M]．北京：北京农业大学出版社，1992 [6] 武汉大学，复旦大学生物系微生物教研室编．微生物学（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，1987 [7] 徐岩,等译.James M.Jay 编著. 现代食品微生物学[M]. 北京: 中国轻工业出版社, 2001.7 [8] 赵斌，何绍江主编，《微生物学实验》，科学出版社，2002。 执笔人：朱玲审核人： 2017年2月22日
微生物学实验
实验一实验室和人体表面微生物的检查 一实验目的 1 证明实验室环境与体表存在微生物 2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 3 体会无菌操作的重要性 二实验原理 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。 三、器材 1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板 2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。 四、操作步骤 1、写标签 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。 注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。 2、实验室细菌检查 （1）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。 （2）实验台 ①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。 ②取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞，并将空试管放在试管架上。 ③弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。 ④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围。 ⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下），立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
《临床微生物学及检验》课程实验教学大纲
《临床微生物学及检验》课程实验教学大纲 课程名称：临床微生物学及检验 英文名称：Clinical Microbiology and Inspection 课程编号：22010000实验课性质：专业基础 课程负责人：姚苹、宋艳艳开放实验项目数：13 大纲主撰人：宋艳艳大纲审核人：王志玉 一、学时、学分 课程总学时：80 实验学时：40 课程总学分：4 实验学分：1.5 二、适用专业及年级 预防医学四年级 三、实验教学目的与基本要求 通过实验巩固相关理论知识，实践与理论相结合，达到融会贯通的目的，培养学生主动解决问题和创新意识。 要求每个同学掌握各种临床标本的处理和接种技巧、常见致病菌的分离与鉴定、常规药敏实验方法等；要求每个同学操作规范、基本操作熟练，并能自己设计完成一个完整检验。 四、主要仪器设备 生化培养箱、CO2培养箱、电冰箱、电冰柜、超净工作台、生物安全柜、显微镜、高压灭菌器、微波炉、多媒体幻灯机 五、实验课程内容和学时分配
六、考核方式 （1）试验报告：要求内容完整，书写认真，对试验结果进行合理讨论。 （2）考核方式：采用课堂提问、实验操作、实验报告、笔试。实验课成绩占课程总成绩的20％。 七、实验教科书、参考书 （一）教科书 1．张卓然主编.《临床微生物学和微生物检验》. 人民卫生出版社. 2003年 2．洪秀华主编.《临床微生物学微生物检验实验指导》.人民卫生出版社. 2003年（二）参考书： 1．李影林主编.《临床微生物学及检验》. 人民卫生出版社. 1995年 2．黄贞祥主编.《病毒学基本原理与技术》.人民卫生出版社.1990年 3．巫向前主编.《临床检验结果的评价》.人民卫生出版社.1999年 4．王庸晋主编.《现代临床检验学》.人民军医出版社. 2001年
微生物学实验技术指导书
实验须知 普通微生物学实验课的目的是，训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基础知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严谨认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的作风。 为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项： 1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。 2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。 3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。 5.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。 6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。 7.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石碳酸液覆盖0.5小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前需浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。 8.每次实验需进行培养的材料，应标明姓名、组别及处理方法，放于教师指定的仪器内培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。 9.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。 10.实验结束后，整理桌面，物归原处，留人打扫室内卫生。 11.离实验室前，将手洗净，注意关闭火、煤气、灯、水管等。
医学微生物学实验教学方法的改进
医学微生物学实验教学方法的改进 医学教育不仅是教授医学知识，更重要的是引导医学生探索未知领域，提高其创新能力。但目前医学教育对医学生创新能力的培养仍属于薄弱环节。由于实验教学是人才培养的重要教学环节[1]，医学微生物学作为一门重要专业基础课程，其研究对象病原微生物与临床感染性疾病关系密切，具有很强的实践性和应用性。为此，我们可以深化实验教学改革，提高实验教学效果，培养医学生创新能力。 1更新实验教学理念，开展多种形式的实验教学改革 由于长期以来对实验教学重视不够，对实验教学研究不足，造成实验教学观念落后[2]，在教学目标上，实验教学被看做是对理论的验证；在实验内容上，以验证性实验为主，综合设计性、研究创新性实验比例偏低，且实验内容陈旧，更新速度慢，这些问题严重制约了医学生创新性实践能力的发展。为此，我们必须从根本上转变实验教学依附于理论教学的传统观念，对实验教学进行改革，应以实践能力（包括实验方法、操作能力、分析和解决问题的能力）为中心，改革实验教学内容，搭建基础性、综合性和设计性实验教学平台，注重对医学生科学思维、创新能力的培养，将验证性、单纯操作性实验教学变为综合性、设计性、创新性实验教学。 针对医学微生物学不同实验内容，我们采用不同教学方法，如启发提问式教学，传统的实验教学模式中，教师讲的太多，学生无暇思考，学生往往是只知其然而不知其所以然。为了能使学生在课前对实验目的、实验意义和实验方案做到心中有数，我们首先课堂提问，督促学生预习，并鼓励学生提出自己的见解或疑问，启发学生互相解答。这样的互动局面不仅给了学生思考的机会，更激发了学生的学习热情。如”哪些细菌可以引起化脓性感染？感染后的临床症状如何？这些细菌对哪些抗生素敏感？”，通过实验课药物敏感试验，学生可以直观地看到抗生素的抑菌环，通过抑菌环的大小来判断哪种抗生素对此病原菌敏感，从而指导临床用药，即复习了理论知识，又可以讲解实验原理，学生也感到学以致用，极大增长了学习兴趣。再如以病例为中心讨论微生物的致病、诊断和防治，医学微生物学是一门基础学科，也是一门桥梁学科，与临床学科联系非常紧密。根据课程安排，医学微生物学在基础医学课的后期进行。此时学生尚未接触临床，但对与临床相关的知识非常感兴趣。如何从”微”入”宏”，将微生物知识与临床知识融会贯通呢？我们在实验中引入一些临床典型病例，要求学生由微生物知识入手进行分析，如：”5岁患儿，高热、咽痛、伴膝关节游走性疼痛。查体：T39.5℃，咽峡充血，表面有脓性分泌物，颌下及颈淋巴结肿大，右膝关节红肿，小腿内侧可见数个轮廓清晰的环形红斑。血常规：WBC 11×109/L，NEU 0.85，C反应蛋白阳性。”让学生讨论临床诊断为何病？如何通过微生物学和免疫学实验证实该诊断？防治原则有哪些？用一系列问题组织学生自学和讨论，启发学生学习病原微生物学的主要微生物学性状与致病、实验室诊断和疾病控制等问题，训练学生的思维能力。