乙型肝炎病毒
乙型肝炎预防教案
1、教学内容
学生们在此之前已经学习了微生物概述及病毒概述，此次课是由面到点的学习，其重点更加突出，并且通过此次课的学习，也为护生们将来学习相关传染病临床及护理学知识奠定了基础，可谓承上启下。
2、学情分析
中学生年龄较小，文化基础薄弱，而在学生们所要接触的大多是“看不见、摸不着”的病原生物，理论知识专业性强且较为抽象，学生们普遍反映难学、难懂、过于抽象化，甚至有部分学生出现厌学情绪。所以，如何将抽象的内容形象化，如何将生涩的专业术语通俗化，如何激发学生的学习兴趣，发挥学生主动性，从而达成教学目标，完成预防乙型肝炎。
3、教学目标
（1）【知识目标】
①了解乙型肝炎病毒的防治原则。
熟悉乙型肝炎病毒的致病性及免疫性。
（2）【能力目标】
①通过观察与思考，培养和提高学生的自学能力、观察能力、分析能力、归纳能力。
②通过学习使护生对乙型肝炎病毒以及乙肝的了解更深入，培养学生的临床思维能力以及一定的传染病的职业防护意识。
（3）【情感目标】
①通过身边的故事与情景设臵，激发学习的兴趣。
②通过学习，培养护生职业防护意识。
4、教学重点和难点
为了达成上述目标，对本节内容我设计的重、难点是：
（1）重点：乙型肝炎病毒的生物学特性。
（2）难点：乙型肝炎病毒的抗原抗体及其临床意义。
5、教学准备
（1）教师准备：有关乙型肝炎病毒的图片和视频资料，制作相关多媒体课件；提前将学生分组布臵探究性活动。
（2）学生准备：分组探究以下几个问题了解自己周围乙型肝炎病毒的感染现状，了解自己或他人对乙肝病人的看法，了解自己或他人接种乙肝疫苗的现状。阅读教材并关注以下几个问题：
问题1：目前我国及全球乙肝病毒感染现状。
问题2：乙型肝炎病毒的传播途径有哪些？与乙肝患者进餐会不会感染乙肝病毒？
问题3：如何知道自己是否感染乙型肝炎病毒？
问题4：什么是乙肝大三阳、乙肝小三阳？
问题5：怎样防治乙肝？
目的：乙肝是学生在日常生活中及临床上经常碰到的疾病，如此让学生先进行课前预习为下次导入新课意在激发他们对本节内容的学习兴趣和愿望。
教学过程：
1导入：故事（插入视频）：乙肝病毒携带者“锄草”走遍各大城市征集饭友共餐的事迹。“你愿意和我一起吃饭吗，我是乙肝表面抗原携带者。”“锄草”举着“征人吃饭”的牌子对一名男孩微笑着发出邀请。
并引出以下问题：你了解乙型肝炎么？你了解乙型肝炎病毒么？你身边有乙肝病人或乙肝病毒携带者么？乙型肝炎病毒是否会通过共餐而引起传播？分组讨论，并由此引出目前全球及我国乙型肝炎病毒感染的现状。以问题串的方式，充分调动学生已有的生活经验、经历，激发学习的兴趣，引入教学主题。
阅读教材，呈现乙型肝炎病毒结构图，让学生读图，总结、归纳乙肝病毒的结构。
多媒体教学等直观手段，引入图片及视频，动与静相结合，形象生动突出重
点，易化难点。通过学生自己的亲身体会来获取感性认识。在此基础上发现问题，
提出疑问，激发学生探索知识的兴趣。
提出：乙型肝炎病毒有哪些形态？是否都具有传染性？乙型肝炎病毒属于
DNA病毒还是RNA病毒？
2授新课：
提出：与乙肝病人共餐是否会被传染？从而引出乙肝病毒的三大传播途径，
在解析三大传播途径时引入生活中或临床上的事例，激发学生的学习兴趣和探究
热情。
视频导入，形象展示乙型肝炎病毒入侵人体感染肝细胞，从而解析乙肝病毒
的致病性。直观的呈现更易于学生理解。
问题导入，联系实际，引起关注，刺激学习欲望。
提出问题：如何知道自己是否感染乙肝病毒？引入“乙肝两对半”检测，即
分析乙肝病毒抗原抗体系统及其临床意义，通过列表、对比、举例子、动画解析
的方式形象的向学生们进行展示，易于理解。并要求学生学以致用，分析乙肝两对半检查结果。
传播途径
乙型病毒性肝炎( 简称乙型肝炎) 是由乙型肝炎病毒( HBV) 引起的肝脏炎性损害,
是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。因此了解其传染途径尤为重要。
(1)．血液或血制品
其中医源性感染占首位。注射器的针头、手术器械，尤其是输血和血制品，可使乙肝病毒侵入体内。所以主要途径是“病从血入”。
(2)．母婴围产期传播
①. 宫内感染
②. 羊水、血、阴道分泌物而引起感染(产时感染)
③. 母乳喂养感染(分娩后感染)
④. 生殖遗传传递
(3)．性接触亦可可能传播乙肝
近年国外报道对性滥交、同性恋和异性恋的观察肯定: 乙型肝炎的性传播是性伙伴感
染的重要途径, 这种传播也包括家庭夫妻间的传播。
(4)．生活密切接触传播:
与乙型肝炎患者或病毒携带者长期密切接触, 唾液、尿液、血液、胆汁及乳汁, 均可污染器具、物品, 经破损皮肤、黏膜而传播乙型肝炎。[5]
防御措施：
要求学生在了解乙肝病毒的致病性后，有针对性的提出预防乙肝病毒的措施：1、掐断传播途径措施为：①注射器、针头、针灸针、采血针等应高压蒸气消毒或煮沸20min；②预防接种或注射药物要1人1针1筒，使用1次性注射器；③严格筛选和管理供血员，采用敏感的检测方法；④严格掌握输血和血制品。
2、计划免疫与人工被动免疫。乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白（HBIG）的应用在目前HBsAg 携带者广泛存在，传染源管理十分困难的情况下，控制和预防乙型肝炎，关键性措施是用乙肝疫苗预防。我国已将乙肝疫苗接种纳入计划免疫，此外下列人群亦为乙肝疫苗接种的适应症：①HBsAg阳性，特别是HBeAg同时阳性母亲所生的新生儿；②乙肝高发区3岁以下幼儿；③医务人员，接触血液的人员；④多次接受输血及血制品的患者；⑤HBsAg阳性者家庭成员，尤其是配偶，凡是患有急性或慢性疾病或对福尔马林和抑菌剂硫柳汞过敏者禁用。并设臵情境，进行角色扮演，要求学生扮演护士及病人，要求护士对病人进行乙型肝炎病毒的健康宣教。通过这样的方式既巩固学生的知识点，也锻炼了学生的能力，使学生能够学以致用，最终树立其自信心、责任心，呼应了情感目标。
反馈练习
我通过布臵基础知识题、分析思考题考查学生对教学内容的掌握情况，根据反馈情况，了解到学生对本节课的重点和难点知识基本掌握，达到预期教学目标。
3归纳总结
用提问的方式进行小结，把各个知识点以提问的方式进行重现，重点突出，方便记忆。
4布臵作业及预习
作业：写预防感言
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性疾病。发展中国家发病
率高，据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者(HBsAg携带者)超过2.8亿，我国约占1.3亿。多数无症状，其中1/3出现肝损害的临床表现。目前我国有乙肝患者3000万。乙肝的特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见。无黄疸型HBsAg持续阳性者易慢性化。本病主要通过血液、母婴和性接触进行传播。乙肝疫苗的应用是预防和控制乙型肝炎的根本措施。
一、乙肝病毒的四大特性
(1).嗜肝性。
乙肝病毒感染人体后，随着血流进入肝脏，通过肝细胞膜上的乙肝病毒受体直接与肝细胞膜结合，先脱去外壳，其核心进入胞浆；然后脱去核壳，其病毒基因进入吒扣胞核内复制(即相当于繁殖)。治疗药物必须是小分子才能进入细胞内，而且还要对肝细胞无毒性作用。
(2).泛嗜性。
随着检验技术的进步，发现乙肝病毒可以感染淋巴细胞不能达到的组织,如周围血单核细胞、脾；骨髓、淋巴结、小肠、胰腺、肾上腺、睾丸、卵巢等。一般人认为将乙肝病毒引起的肝硬化或肝癌手术切除，换一个无乙肝感染的正常的肝全好些。其实不然，近年肝移置术后结果提示，在没有采取任何预防乙肝预防措施的前提下，乙肝病毒相关性肝病行肝移植术后，乙肝病毒的再感染率高达90%。采取乙肝高价免疫球蛋白和拉米呋定联合抗病毒措施，可使其再感染率降低至30%。可见患者体内其他组织潜伏病毒，是术后肝脏再感染的来源。
(3) .变异性。
乙肝病毒是一种易于变异的病毒,为了逃避机体对其消除和杀伤而发生的变异，可在乙肝病毒结构不同部位发生，变异可自发或在药物治疗后发生。变异的乙肝病毒不仅对人体致病性发生改变，还将影响对乙型肝炎的诊断、治疗和预防。发生变异的乙肝病毒对首次有效的药产生抵抗力；从而降低疗效或产生耐药现象。
(4) .不可杀性。
乙肝病毒进入人体的肝细胞内，在细胞酶的作用下，最后形成共价闭合环状基因(CCCDNA),它是形成乙肝病毒的原始模板，稳定的生存于细胞核内，不断的复制乙肝病毒。当今尚未研究出一种杀灭这种模板的药物。目前使用的药物主要是抑制模板的复制，一旦停药解除抑制作用，这种模板又会重新复制乙肝病毒。
二、传播途径
乙型病毒性肝炎( 简称乙型肝炎) 是由乙型肝炎病毒( HBV) 引起的肝脏炎性损害,
是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。因此了解其传染途径尤为重要。
(1)．血液或血制品
其中医源性感染占首位。注射器的针头、手术器械，尤其是输血和血制品，可使乙肝病毒侵入体内。所以主要途径是“病从血入”。
(2)．母婴围产期传播
母婴传播是HBSAG家庭聚集性的起因。母亲受乙型肝炎病毒感染后，尤其HBEAG（+)和HBV-DNA（+）时婴儿受染十分常见。[1]
①. 宫内感染
以往认为乙肝病毒很少通过胎盘。有关胎盘在HBV宫内感染中的作用报道不多,且结论不一。但近几年较多资料证明宫内感染率较高,通过胎盘引起的宫内感染约5% ~ 10%。胎盘生理是胎儿与母体间进行物质交换的主要器官, 是胚胎与母体组织的结合体。由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿血液每分钟500ml流量经胎盘。胎儿血液是经脐动脉直至绒毛毛细血管。经与绒毛间隙中的母血进行物质交换,两者并不直接相通,而是隔着绒毛毛细血管壁、绒毛间质及绒毛表面的细胞层。靠的是渗透、扩散和细胞选择力,再经脐静脉返回胎儿体内,母血则经底蜕膜螺旋小动脉开口通向绒毛间隙内,再经开口的螺旋小动脉返回孕妇体内。胎盘内进行物质交换的部分主要在血管合体膜(VSM ), 由5部分组成: 1)合体滋养细胞; 2)合体滋养细胞基底膜; 3) 绒毛间质; 4)毛细血管内皮细胞; 5)毛细血管基底膜。目前普遍认为HBV宫内感染是通过胎盘,具体机制尚不清楚。大多数认为HBV宫内感染主要是由于HBV 使胎盘屏障受损或通透性改变所致。[2]
②. 羊水、血、阴道分泌物而引起感染(产时感染)
目前认为,HBsAg阳性的产妇分娩时,胎儿可能通过产道吞进羊水、血、阴道分泌物而引起感染, 即使胎儿,出生时血清学检测阳性,但2~ 4个月以后有60%发展为HBsAg阳性,符合乙型肝炎的潜伏期。[3]
③. 母乳喂养感染(分娩后感染)
关于乙肝血清指标阳性的孕妇能否哺乳, 国内外争议较大。文献报道, 乙肝血清HBsAg 阳性者,母乳有56. 14% ~ 71. 00%HBsAg阳性。血清中三阳和HBeAg阳性、抗- HBc阳性者初乳中HBV- D A 阳性率100%,提示不宜喂母乳。但若初乳中单纯抗-HBs或(和)抗-HBe阳性者,其排毒率为0,可以哺乳。虽纯母乳喂养是被视为世界性解决儿童健康问题的主要途径,应大力提倡。但已证实通过母乳可传播给婴儿时,对于HBV复制活跃的母亲应及时阻断这种传播途径,应终止母乳喂养。
④. 生殖遗传传递
已有报道在父亲HBV 阳性而母亲HBV 阴性的引产胎儿发现HBV感染, 也有报道在父亲HBV 阳性而母亲HBV阴性的活产婴儿出生时即检出HBV感染标志。这种遗传传递在HBV 的传播中的地位及遗传传递小儿将来的转归都是未知的问题。如果遗传传递确实存在,无疑为全面控制HBV感染增加了新的困难。[4]
(3)．性接触亦可可能传播乙肝
近年国外报道对性滥交、同性恋和异性恋的观察肯定: 乙型肝炎的性传播是性伙伴感染的重要途径, 这种传播也包括家庭夫妻间的传播。
(4)．生活密切接触传播:
与乙型肝炎患者或病毒携带者长期密切接触, 唾液、尿液、血液、胆汁及乳汁, 均可污染器具、物品, 经破损皮肤、黏膜而传播乙型肝炎。[5]
三、防治
(1)应采取以疫苗接种和切断传播途径为重点的综合性措施。
乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白（HBIG）的应用在目前HBsAg携带者广泛存在，传染源管理十分困难的情况下，控制和预防乙型肝炎，关键性措施是用乙肝疫苗预防。我国已将乙肝疫苗接种纳入计划免疫，此外下列人群亦为乙肝疫苗接种的适应症：①HBsAg阳性，特别是HBeAg同时阳性母亲所生的新生儿；②乙肝高发区3岁以下幼儿；③医务人员，接触血液的人员；④多次接受输血及血制品的患者；⑤HBsAg阳性者家庭成员，尤其是配偶，凡是患有急性或慢性疾病或对福尔马林和抑菌剂硫柳汞过敏者禁用。
接种乙肝疫苗因人而异我国应用的免疫剂量和程序；①HBsAg阳性孕妇的新生儿用30μg免疫3针；②HBsAg阴性孕妇的新生儿第1针为30μg，第2、3针各为10μg；③高危人群，如肾透析患者和其他职业性与乙肝密切接触者用20μg免疫3针；④其他一般易感人群（包括儿童、成人）10μg免疫3针。以上均按0、1、6月免疫程序，但新生儿第1针应在出生后24小时内接种，免疫效果更好。也有用0、1、2月免疫程序者。目前多主张对高危人群（尤其HBsAg阳性，同时HBcAg阳性孕妇的新生儿；意外受HBV感染，如被HBsAg 阳性血液污染的针头刺伤或被HBsAg阳性血液溅入眼结膜或口腔粘膜或输入HBsAg阳性血液、手术刀损伤皮肤等），一般应立即（24小时之内）肌肉注射乙肝免疫球蛋白。如HBIG 每毫升含抗-HBs200IU以上者可注射0.5～0.7ml/kg。
目前国内生产的HBIG，其抗-HBs含量为每毫升60～160IU（多数100IU），因此用量为0.075～0.2ml/kg（依含量不同而定）。剂量以能使体内抗-HBs达100mIU/ml以上为度（有保护作用）。注射HBIG后，要接种乙肝疫苗3针，第1针30μg，第2、3针各10μg，按0、1、6月程序接种。乙肝疫苗注射部位以上臂三角肌肌肉注射为宜。乙肝疫苗副作用很轻，多为局部疼痛，偶有红肿或硬结，可有发热、疲乏者。>38℃者 1.8%，罕见引起格林-巴利综合征（0.5/10万）。关于加强注射问题，意见不一致。由于接种3针后抗体可维持3～5年，若测定抗-HBs≤10mIU/ml，加强1次（10或20μg），遇有下列情况应予加强免疫：如高危人群，包括医务人员，特别是血透析工作者；经常接受血制品者；配偶中一方为HBcAg阳性者，包括已注射过疫苗的另一方。
乙肝疫苗可与其他疫苗如百白破、卡介苗、麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗等任何一种计划免疫制品联合免疫，未见明显互相干扰作用。接种乙肝疫苗后，有5%～15%接种者无应答，不产生抗-HBs。是当前研究的一个热点。免疫无应答主要是于HBsAg孕妇的新生儿中。孕妇血清HBV-DNA含量高，是导致免疫失败的主因。也有认为无应答者已有HBV的感染。是否与HBV突变株有关，有待研究。
(2)切断传播途径重点在于防止通过血液和体液传播。
乙肝病毒不会通过日常生活传播。研究表明, 即使病毒进入正常人体的消化道和呼吸道, 它们也会被人体的皮肤、粘膜、胃液等非特异性免疫系统所阻隔, 而不发生感染。因此, 同事、同学之间由一般接触而传播乙肝病毒的可能性几乎为零, 人们歧视携带乙肝病毒的同事、同学缺乏医学依据。我们不应歧视乙肝患者。纠正歧视乙肝患者的现象, 有赖于政府部门的干预和加强健康教育。一方面, 政府部门应当根据科学研究的结论, 以政策、法规的形式保护乙肝病毒携带者的权益不受侵害。另一方面, 应当通过健康教育, 普及卫生知识, 使更多的人了解正确的乙肝防治知识。作为普通群众, 在遇到健康问题时, 应积极向卫生专业人员请教, 而不应当靠道听途说或想象来下结论。[6]
参考文献：
[1]乙肝病毒母婴传播的途径王清图,马振芝,修霞,郭永, 牟莹莹
[2]唐时幸,于光烈, 程绍尧. HBV宫内感染及其频率的研究
[3]王清图,修霞, 郭永, 等. 不同分娩方式堆母婴宫内传播的影响
[4]赵连三,刘小松,等.乙型肝炎病毒感染经精子传播的可能性研究。
[5] 乙肝病毒的传播途径山东协和肝病研究所供稿
[6]无知才有乙肝歧视广东省银行医院肝病中心主任杨炯
两种方法检测乙型肝炎病毒五项指标的结果对比
两种方法检测乙型肝炎病毒五项指标的结果 对比 作者：龙青文，何建军，马家驹，何秀琳，肖金平 【关键词】酶联；血清乳胶；定性分析 ［关键词］酶联；血清乳胶；定性分析 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、e 抗原(HBsAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)的检测在许多方面如诊断乙肝判断愈后、筛选献血员、乙肝的流行病学调查、判断人群对乙型肝炎的免疫水平，对食品、保育及饮水管理行业人员定期进行健康体检等起着重要的作用。故选择一种特异、敏感、稳定的实验室检测方法检测乙型肝炎病毒的五项指标显得尤为重要。现将56例检测者血清同时用酶联免疫法和血清乳胶层析法对比检测结果报告如下。 １材料与方法 1.1 标本来源56例受检者中，男29例，女27例，最大年龄72岁，最小年龄29岁，平均年龄46岁；来自健康体检人群15例，其中13例检测具有阳性结果，2例各项指标均为阴性、另41例为门诊检查结果有阳性的患者，均系血清标本。
1．2 方法酶联免疫法用乙型肝炎病毒(HBsAg，HBsAb，HBeAg、HBeAb，HBcAb)诊断试剂盒，由上海华泰生物工程实业有限公司生产，48人份，批号20040503，按说明书操作。乙肝两对半血清/血浆乳胶层析法检测试剂板由ACONLaboratories.Inc.SanDiegoCA92121USA提供，批号200407029，按说明书操作。 1.3 质量控制酶联免疫法每项检测项目均设阴、阳性对照各2孔，每空加入阴性对照(或阳性对照)各1滴，并设有空白对照1孔。乳胶层析法各项检删项目均设质控区(C)。 1.4 检测结果判定标准：酶联免疫法是根据颜色的变化，作定性分析。此法HBsAg、HBsAb、HBeAg呈黄色为阳性反应，无色为阴性反应，阳性对照为黄色，阴性对照为无色。HBeAb、HBcAb无色为阳性，黄色为阴性，阳性对照为无色，阴性对照为黄色。乳胶层析法HBsAG、HBsAb、HBeAg在测试区内(T)出现一条红色条带则是阳性结果，不出现红色条带则为阴性。HBeAb、HBcAb结果则相反，强阳性标本测试区内(T)将没有红色条带，弱阳性标本测试区内(T)将有一条非常弱的红色条带，阴性标本测试区(T)将会出现明显的红色条带。无论相应的待测物质是否存在于标本中，质控区(C)都会出现红色条带。两种检测方法结果对比分析用卡方检验两两比较进行统计学处理。
实验三 乙型肝炎病毒表面抗原检测
实验三乙型肝炎病毒表面抗原检测 一、目的 掌握ELISA原理和方法 二、实验原理 采用EIA双抗原夹心法检测人血清或血浆中的抗-HBs。并采用HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，进行孵育，当标本中存有抗-HBs 时，该抗-HBs与包被的HBsAg结合并与酶结合形成酶结合物HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物，洗去反应物，加入显色剂后，将有明显的颜色变化；当标本中没有抗-HBs时，加入底物后没有或只有很轻微颜色变化。 三、试剂与器材 1.试剂 酶结合物、抗-HBs阳性对照，浓缩洗涤液、显色剂A、显色剂B、终止液（2mol/L H2SO4）、7号待测样品、8号待测样品 2.器材 预包被反应板（9孔）、封板胶条、移液枪、摇床 四、操作步骤 1.取7号待测样品分别填装到4孔中，每孔50μL。同样取8号待测样品分别 填装到4孔中，每孔50μL。剩余一孔装填50μL抗-HBs阳性对照。 2.加酶结合物，每孔50μL，并充分混匀，贴上标签纸，置于37℃孵育30min。 3.手工洗板：弃去孔中液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液350μL灌注每孔， 静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复五次。 4.加显色剂：先加显色剂A，每孔50μL；再加显色剂B，每孔50μL；充分混 匀，放置37℃避光孵育15,min。 5.终止反应：每孔加入终止液50μL，混匀。
6.观察颜色变化。 五、实验结果分析 从实验结果看出7、8号待测样品皆无明显的颜色变化，但是阳性对照组再加入显色剂A、B后立即显现蓝色，再加入终止液后立即显现黄色。表明7、8号待测样品皆无抗-HBs。 而反应显色原因为底物过氧化氢脲溶液和TMB，在HRP酶的作用下，产生蓝色的阳离子根；加入终止液后，一方面，硫酸破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失，另一方面，pH降低，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。但本实验并未用上酶标仪，故测定联苯醌的消光系数也无法进行。
乙型肝炎病毒检测技术的研究进展
乙型肝炎病毒检测技术的研究进展 吴淑秋 [关键词] 乙型肝炎病毒检测技术 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是世界范围内严重的公共卫生问题之一,约5%的世界人口现行慢性感染，在我国乙型肝炎是常见的传染病和多发病之一，主要通过血液、血制品、性传播及母婴传播，是引起肝硬化和肝癌的常见病因。我国一般人群中HBsAg阳性率约为10％左右，乙型肝炎其传染性和病死率均居高不下[1]，已经成为现在最为严重的社会公共卫生问题，严重影响着人们的身体健康。所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。随着检测技术的不断发展，对乙型肝炎血清标记物的认识也在不断深入和更新。到目前为止, 乙型肝炎病毒病原学检测主要是电子显微镜技术、免疫学技术和分子生物学技术和基因芯片技术, 现将乙型肝炎病毒几种检测技术作一综述。 1电子显微镜技术 电子显微镜技术主要包括常规电镜法(electron micros-copy, EM)和免疫电镜法(immune electron microscopy,IEM)。 1.1 常规电镜法1970年英国学者Dane等在电镜下发现了完整HBV颗粒即Danes颗粒[2],R De V os等随后用电子显微镜观察18例HBsAg阳性的慢性肝炎患者的肝组织,发现了直径约25 nm的核心抗原(HBcAg)颗粒[3]。常规电镜法的优点是标本用量小、制样速度快、观察比较直观,不过因其观察灵敏度较低而要求病毒在标本中大量存在,所以本检测技术在观察HBV方面的应用受到限制。 1.2免疫电镜法免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。Takashi等[4]对96例HBsAg阳性患者的肝组织进行免疫电镜观察,发现在肝细胞胞浆和胞核中存在HBcAg和HBeAg。胡莲美等[5]在HBV转基因小鼠血清中发现直径约22 nm的球形HBsAg,以及少量直径约42 nm的Danes颗粒。免疫电镜法较常规电镜法的敏感性高,从而可增加HBV的检出率,但该检测技术的样本制备过程较复杂,对操作者的技能要求较高。 2 免疫学技术
乙型肝炎病毒
乙型病毒性肝炎 摘要：乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种病，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转化为肝硬化或肝癌。因此，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种病。乙型病毒性肝炎无一定的流行期，一年四季均可发病，但多属散发。近年来乙肝发病率呈明显增高趋势。本文叙述乙肝病毒的四大特性、传播途径、防治。 关键词：乙肝病毒特性传播途径防治 Abstract: Hepatitis B by hepatitis B virus (HBV) caused mainly by the liver inflammation and can lead to multiple organ damage in a disease mainly affects children and young adults, can be converted to a small number of patients with cirrhosis of the liver or liver cancer. Therefore, it has become a serious threat to human health worldwide disease, is the most widely popular in our country, the most serious dangers of a disease. The prevalence of hepatitis B with no fixed term, year-round disease, but mostly distributed. In recent years, the incidence of hepatitis B showed a rising trend. This paper describes four characteristics of hepatitis B virus, transmission, prevention and treatment. Keywords: prevention of hepatitis B virus transmission characteristics 乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性疾病。发展中国家发病率高，据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者(HBsAg携带者)超过2.8亿，我国约占1.3亿。多数无症状，其中1/3出现肝损害的临床表现。目前我国有乙肝患者3000万。乙肝的特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见。无黄疸型HBsAg持续阳性者易慢性化。本病主要通过血液、母婴和性接触进行传播。乙肝疫苗的应用是预防和控制乙型肝炎的根本措施。 一、乙肝病毒的四大特性 (1).嗜肝性。 乙肝病毒感染人体后，随着血流进入肝脏，通过肝细胞膜上的乙肝病毒受体直接与肝细胞膜结合，先脱去外壳，其核心进入胞浆；然后脱去核壳，其病毒基因进入吒扣胞核内复制(即相当于繁殖)。治疗药物必须是小分子才能进入细胞内，而且还要对肝细胞无毒性作用。 (2).泛嗜性。 随着检验技术的进步，发现乙肝病毒可以感染淋巴细胞不能达到的组织,如周围血单核细胞、脾；骨髓、淋巴结、小肠、胰腺、肾上腺、睾丸、卵巢等。一般人认为将乙肝病毒引起的肝硬化或肝癌手术切除，换一个无乙肝感染的正常的肝全好些。其实不然，近年肝移置术后结果提示，在没有采取任何预防乙肝预防措施的前提下，乙肝病毒相关性肝病行肝移植术后，乙肝病毒的再感染率高达90%。采取乙肝高价免疫球蛋白和拉米呋定联合抗病毒措施，可使其再感染率降低至30%。可见患者体内其他组织潜伏病毒，是术后肝脏再感染的来源。 (3) .变异性。
乙型病毒性肝炎
乙型病毒性肝炎 百科名片 乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病。乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙型病毒性肝炎分急性和慢性两种。急性乙型肝炎在成年人中90%可自愈，而慢性乙型肝炎表现不一，分为慢性乙肝携带者、慢性活动性乙型肝炎、乙肝肝硬化等。我国目前乙肝病毒携带率为7.18%，其中约三分之一有反复肝损害，表现为活动性的乙型肝炎或者肝硬化。随着乙肝疫苗的推广应用，我国乙肝病毒感染率逐年下降，5岁以下儿童的HBsAg携带率仅为0.96%。 西医学名：乙型病毒性肝炎 所属科室：内科- 消化内科 发病部位：肝脏 主要症状：不同类型症状不同 主要病因：乙型肝炎病毒感染 传染性：有传染性 传播途径：血液传播，母婴传播，性传播，皮肤粘膜破损传播，等 目录 疾病介绍 疾病分类 发病机制及病理生理 临床表现 疾病治疗 饮食注意 专家观点 疾病介绍 乙型肝炎感染呈世界性流行，不同地区HBV感染的流行强度差异很大，据世界性卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致肝肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌（HCC）。我国于2006年进行的乙型肝炎流行病毒调查结果表明，我国1-59人群乙肝表面抗原携带率为7.18%，5岁以下儿童的HBsAg携带率仅为0.96%，据此推算，我国现有的慢性HBV感染者约9300万人，其中有症状需要治疗的活动性乙型肝炎患者约为2000多万。乙型肝炎是血液传播性疾病，主要经血（如不安全注射史等）、母婴传播及性传播，皮肤粘膜破损传播也有一定比例，如纹身、扎耳洞、内窥镜检查等，血液制品现已严格控制，传播可能性大大减少，不规范输血及血制品时才有发生。医务人员工作中的意外暴露也不容忽视。随着乙肝疫苗在新生儿中的大力推广，及其它母婴阻断措施的实施，母婴传播得到极大控制。目前HBV-DNA阳性母亲分娩约有百分之九十通过干预成功阻断母婴垂直传播。HBV感染不经呼吸道、消化道传播，因此日常学习、
乙型肝炎病毒表面抗原检测
乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 1原理： 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。 2试剂： 2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit 2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2 SO4），封板膜，自封袋，说明书。 2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集： 取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可臵于4℃冰箱保存，如长期保存需臵于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。 4所需仪器 4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水 4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器 4.5 37℃恒温箱或水浴箱
4.6洗板机或洗瓶 5检验方法 5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配臵前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。 5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。 5.6温育：臵37℃温育60min。 5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。 5.8温育：臵37℃温育30min。 5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。 5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗臵30min。 5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。 5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD 值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。 6结果判定与分析 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD平均值*2.1；阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。 结果判定：样本OD值S/C.O.>=1者为HbsAg阳性样本OD值S/C.O.<1者为HbsAg阴性 阴性对照均值>0.1或阳性对照均值<0.4时，实验无效，应重新试验。 7质量控制
乙型肝炎病毒(HBV)实时荧光定量PCR
乙型肝炎病毒（HBV）实时荧光定量PCR [目的要求] 掌握血清中HBV-DNA的提取方法及原理；HBV-DNA实时荧光定量PCR的测定原理；HBV-DNA实时荧光定量PCR实验操作及结果分析 了解核酸测定引物设计原理；实时荧光定量PCR仪的工作原理及操作。 [教学时数] 讲授2学时，实验6学时。 [讲授内容] 血清中病毒DNA的提取方法和原理；实时荧光定量PCR的测定原理；核酸测定引物设计原理；HBV-DNA测定引物设计思路；HBV-DNA荧光定量PCR试剂组成、相应作用及反应混合液配制；实时荧光定量PCR仪的工作原理及操作 [实验内容] 分组提取血清中HBV-DNA；配制反应液并上机操作，实时观察，结果分析；实验结果讨论；实验总结 [自学内容] “感染性疾病的分子诊断” 实验指导（自编） 实验乙型肝炎病毒（HBV）实时荧光定量PCR 【原理】 Real time PCR 是普通PCR 的一项改进，使用了针对扩增DNA 的荧光物质，使得DNA 的数量与检测到的荧光强度成线性关系，大致得到DNA 的扩增曲线，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。即对DNA靶分子的起始拷贝数进行定量的核酸检测。该方法精确、灵敏、特异性强、污染途径小、自动化程度高、操作简单。是国际公认的核酸分子
定量的标准方法。它已逐渐代替了Northern blotting 以及semi RT-PCR技术。 本实验从HBV携带者或者乙型肝炎患者血清中抽提HBV基因组DNA，采用核酸扩增结合TaqMan荧光探针技术, 利用一对乙肝病毒特异性引物和一特异性结合于扩增区另一位点的TaqMan探针, 实现对乙肝病毒模板的扩增和检测。使用商品化试剂盒：HBV实时荧光定量试剂盒，深圳匹基公司（PG，Biotech.）。针对表面抗原S基因，设计一对引物和一个探针。TaqMan荧光探针技术中，两个荧光染料标记在探针上，一个叫报告基团（R），一个叫淬灭基团（Q）。当两个荧光基团都连在探针上时，报告基团的荧光被淬灭基团抑制。在延伸中，DNA聚合酶利用5’→3’外切酶活性把报告基团从探针上切下来。一旦和淬灭基团分开，报告基团释放出荧光。通过监测荧光信号的积累来反映乙肝病毒DNA的扩增.产物的积累，根据扩增反应的动力学特征使用外部标准曲线对初始模板定量（图4）。 图4：TaqMan荧光探针技术原理 R:荧光报告基团Q：荧光淬灭基团 【试剂与器材】 1．HBV-DNA检测试剂盒：DNA提取液1，DNA提取液2，PCR预混合液（含有Mg2+、PCR反应缓冲液、dATP、dUTP、dGTP、dCTP引物、荧光标记的探针）、Taq酶、UNG，强阳性对照血清、阴性对照血清、临界阳性血清，四种不同浓度的阳性参控品、双蒸去离子水。 2．荧光定量PCR仪 3．PCR反应管 4．移液器及移液器吸头 5．高速离心机 6．漩涡混合器
乙型肝炎病毒大蛋白检测及其临床意义
乙型肝炎病毒大蛋白检测及其临床意义 乙型肝炎病毒（HBV，hepatitis B virus）大蛋白存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与病毒复制密切相关，具有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放有关[1]。有研究表明HBV 大蛋白具有双重跨膜拓扑结构[2]，针对HBV大蛋白特殊构象制备的单克隆抗体，可以更准确地检测血清中乙肝病毒外膜大蛋白。为了解乙肝患者血清中HBV大蛋白与HBV DNA的相关性，我们对179例HBV感染者血清HBV大蛋白进行了检测。 1 材料与方法 1.1 研究对象179例病例为本院2008年6月-2009年11月住院患者，男性122例，女性57例，年龄17-65岁，平均年龄为36±1 2.5岁，诊断标准符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准。 1.2标本来源血液标本由真空采血管采集、分离血清后冻存于-20℃保存。 1.3主要试剂HBV DNA检测采用广州中山大学达安基因股份有限公司试剂；HBV“二对半”检测采用时间分辨荧光免疫分析法，试剂购置苏州新波生物技术有限公司；HBV大蛋白定量检测试剂由北京热景生物技术有限公司提供。 1.4主要方法HBV-LP检测试剂应用结构生物学和免疫学技术，筛选出针对乙型肝炎病毒大蛋白前S区立体构象型表位的高特异性、
高亲和力的单克隆抗体，并在微孔条上预包被，配以辣根过氧化物酶标记抗体，TMB显色，采用双抗体夹心法原理检测。 1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析，HBV-LP和HBV DNA阳性检出率比较采用配对计数资料x2检验。 2 结果 2.1HBV DNA与LP阳性率比较179例HBV感染者血清同步检测HBV DNA和HBV LP，HBV DNA（+）144例（80.4%），HBV LP（+）145例(81.0%)，其中HBV DNA（+）、HBV LP（+）126例，HBV DNA（+）、HBV LP（-）18例，HBV DNA（-）、HBV LP（+）19例，HBV DNA（-）、HBV LP（-）16例，以HBV DNA和HBV LP作为判断病毒复制的指标，差异无统计学意义 (x2=0.01,P>0.05)。 2.2 HBV LP与HBeAg阳性率的比较 144例HBV DNA阳性患者中，HBV LP（+）126例（87.5%），HBeAg（+）73例（50.7%）,其中HBV LP （+）、HBeAg（+）65例，HBV LP（+）、HBeAg（-）61例，HBV LP（-）、HBeAg（+）8例，HBV LP（-）、HBeAg（-）10例，以HBV DNA和HBeAg 作为判断病毒复制的指标，差异有统计学意义（x2=81.3,P<0.001）。 3 讨论 目前HBeAg和HBV DNA水平是反映患者乙肝病毒复制的主要指标，其中有HBV DNA定量检测对抗病毒治疗效果及预后判断尤其重要。但在实际过程中，往往出现HBV病毒变异，使得患者血清中保留着低水平的HBV DNA。Michael Bruns等[3]通过鸭肝模型研究也发现，含有嗜肝病毒血清的感染性不仅依赖于具有感染性的Dane颗粒的多少，
乙型肝炎病毒
乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科（hepa DNA vividae）。根形态与结构 HBV病毒颗粒图示 1．大球形颗粒：亦称Dane颗粒，它是一种由一个囊膜和一个含有DNA分子的核衣壳组成的病毒颗粒，直径约42nm.核衣壳为20面体对称结构。游离的核衣壳只能在肝细胞核内观察到。血中Dane颗粒浓度以急性肝炎潜伏期后期为最高，在疾病起始后则迅速下降。Dane颗粒表面含有HBsAg，核心中还含有双股有缺口的DNA链和依赖DNA的DNA多聚酶。目前认为Dane颗粒即完整的HBV。 HBV DNA的两链长短不一，长链（L）完整，为负链，长度恒定，约3200个核苷酸。短链（S）为正链，长度可变，约为长链长度的50～100%，链的增生按5′-3′顺序进行。在不同分子中短链3′端的位置是可变的，而短链和长链的5′端位置固定点为粘性末端，通过250～300个核苷酸碱基配对，以维持DNA分子的环状结构。在粘性末端两侧，两链5′端各有一个由11个bp组成的直接重复序列（Direct repeat DR）-5′TTCACCTCTCC，该DR位于第1824个核苷酸者称DR1，位于第1590个核苷酸者称DR2，在病毒复制中起作用。 2．小球形颗粒：直径约22nm的小球形颗粒是HBV感染后血液中最多见的一种。它由HBsAg，即病毒的囊膜组成。化学组成为脂蛋白，可按其特有的密度与正常血清蛋白部分分离。在此颗粒中未检出达DNA多聚酶活性。目前认为HBV的小颗粒不是HBV，可能是它感染肝细胞时合成过剩的囊膜而游离于血循环中。
3.管形颗粒：直径约22nm，长度可在100～700nm之间。实际上它是一串聚合起来的小颗粒，但同样具有HBsAg的抗原性。 基因结构 目前，已可从感染HBV病人的血清中及感染肝脏提纯的病毒核心中分离出环状双股DNA，从而确定HBV属DNA病毒。 研究Dane颗粒DNA结构发现，DNA分子含有约3，200个核苷酸。它包括两个链；一个长度固定的负链和另一长度不定的正链。由于DNA生物合成是在多聚酶作用DNA引物生长末端3′－OH 与加入的脱氧核苷酸的5'-磷酸基形成磷酸二脂键完成的，因此，链的增生按5'-3'顺序进行，而且加到链上的每种脱氧核苷酸是按模板DNA的碱基配对互补规律进行，长链在1，800或1，818核苷酸附近有一个制品。短链的5'-末端通过长达250-300个核苷酸的碱基配对而维持分子的环状结构。DNA多聚酶作用不断延长短链3′端以修补缺口。缺口可能与HBV的DNA在感染细胞内的整合有关。 目前，由于克隆化DNA完整核苷酸已经确定，现已证实HBsAg和HBcAg都是由Dane颗粒的DNA 所编码，并且二类基因存在同一DNA分子上。有人比较病毒基因编码能力和病毒多少，发现HBV DNA负链能编码全部已知的HBV蛋白质，而其正链开放读码区，不能编码病毒蛋白。 HBV DNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及X（图26-2），能编码全部已知的HBV蛋白质。S区可分为二部分，S基因和前S基因。S基因（核苷酸155～833）能编码主要表面蛋白。S基因之前是一个能编码163个氨基酸（2，848-154）的前S基因，编码Pre S1和Pre S2蛋白。C 区基因包括前C基因和C基因，分别编码HBeAg和HBcAg.P区最长，约占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。X区（核苷酸1，374～1，835）可能编码有154个氨基酸的碱性多肽，长链的裂口位于此区。 HBV的抗原组成 1.HBsAg：HBsAg是由HBV的基因组所特定的，为上述三种形态的颗粒所共有。 HBsAg抗原活性属于高浮力密度范围内的脂蛋白类。用CsCl密度梯度离心，表面抗原（小颗粒和管状颗粒）平均密度为1.20g/cm2.Dane颗粒的密度略高，为1.25g/cm2。纯化的22nm颗粒的平均沉降系数为33-54S，分子量约为24-2.5×106。 纯化的HBsAg含有类脂质、糖类、脂质、蛋白质及糖蛋白。它由8种多肽组成，定名为P1至P8.其中至少有二种或三种多肽过碘酸Schiff试验阳性，提示存在糖类结构。用紫外分光光度计检查提取的HBsAg，显示有典型的蛋白吸收光谱。蛋白占总量的70～90%以上，广义的HBsAg由三种蛋白组成：（1）主要表面蛋白（S蛋白，小分子HBsAg），由S基因编码的226个氨基酸组成。（2）中分子蛋白（中分子HBsAg），由前S2、S基因编码，在S蛋白226个氨基酸的N端附加一个含55个氨基酸的Pre S2蛋白组成，共281个氨基酸。（3）大分子蛋白（大分子HBsAg），由S，前S1和前S2基因编码，在中分子蛋白281个氨基酸的N端附加一个含119个氨基酸的Pre S1蛋白组成，共400个氨基酸。 S蛋白即狭义HBsAg，是HBV囊膜的主要表面抗原的主要成份，包括糖基化的GP27和非糖基化的P24两种形式，以二硫键相连形成二聚体，代表HBsAg的结构单位，具备完整的抗原性。如二聚体解离，则HBsAg抗原性将会明显下降。
乙型肝炎病毒
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）属于嗜肝DNA病毒科（Hepadnaviridae）正嗜肝DNA 病毒属（Orhtohepadnavirus），是乙型肝炎的病原体。HBV感染是全球性公共卫生问题，估计全世界HBV携带者高达3.5亿。我国人群HBV携带率约为10%，HBV携带者超过1.2亿。 （一）生物学性状 1.形态与结构电镜下HBV感染患者血清中可见三种形态的病毒颗粒，即大球型颗粒，小球型颗粒和管形颗粒。 （1）大球型颗粒：又称为Dane颗粒，是有感染性的完整的HBV，直径42mm，电镜下呈双层结构的球型颗粒。外层相当于病毒的包膜，由脂质双层和病毒基因编码的包膜蛋白组成，包膜蛋白包括HBV表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）,前S1抗原（Pre S1）和前S2抗原（Pre S2）。内层为病毒的核心，相当于病毒的核衣壳，呈20面体立体对称，核心表面的衣壳蛋白为HBV核心抗原（hepatitis B core antigen ,HBcAg）。病毒核心内部含病毒的双链DNA分子、DNA多聚酶等。 （2）小球型颗粒：直径为22nm，为一种中空颗粒，成分为HBsAg,是HBV 在肝细胞内复制时产生过剩的HBsAg装配而成，不含病毒的DNA及多聚酶，无感染性。这种小球型颗粒大量存在于血液中。 （3）管形颗粒：由小球型颗粒聚合而成，颗粒长100~500nm，直径22nm，成分与小球型颗粒相同，具有与HBsAg相同的抗原性。 2.基因结构与编码蛋白HBVDNA分子为不完全双链环状DNA，两链长短不一。长链是负链，约有3200个核苷酸，短链为正链，是长链长度的50%~100%。HBVDNA负链含4个开放阅读框（ORF），分别称为S,C,P,X区。其中S区有3个启动子，分别编码主蛋白（含HBsAg）、中蛋白（含PreS2Ag和HBsAg）和大蛋白（含PreS1Ag、PreS2Ag、HBsAg）。C区中有2个启动子，分别编码HBeAg和PreC蛋白和含HBcAg的C蛋白（衣壳蛋白）。P区最长，约占基因组的75%以上（与其他区重叠），编码DNA多聚酶（含反转录酶和RNA酶H 活性）。X区编码含154个氨基酸的碱性多肽（HBxAg）。RreS2和PreS1为病毒的主要吸附蛋白，可与肝细胞病毒受体结合。HBxAg可反式激活细胞内的原癌基因及HBV基因，与肝癌的发生、发展有关：长链的裂口亦位于此区。 3.培养特性黑猩猩是HBV的易感动物。HBV的组织培养尚未成功，目前采用的是DNA转染细胞培养系统，将病毒DNA导入肝癌细胞株，使这些细胞株可分泌HBsAg、HBcAg、HBeAg和Dane颗粒。DNA转染细胞培养系统可用于抗HBV药物的研究。 4.抵抗力HBV对外界环境的抵抗力较强，对低温、干燥、紫外线均有耐受性。不被70%乙醇灭活。高压蒸汽灭菌法、100℃加热10分钟可灭活HBV，0.5%过氧乙酸、5%次氯酸钠和环氧乙烷等常用于HBV的消毒。 （二）致病性与免疫性 1.传染源主要传染源为乙型肝炎患者或无症状HBV携带者。乙型肝炎患者潜伏期、急性期或慢性活动初期，其血清都有传染性。HBV携带者因无症状而不易被察觉，作为传染源的危害性比患者更大。 2.传播途径HB的传播途径主要有3中：①血液和血制品传播：极微量带HBV大球型颗粒的血经微小伤口进入人体即可导致感染。②垂直传播：多发生于胎儿期和围生期。HBV 也可通过哺乳传播。③性传播及亲切接触传播：从HBV感染者的精液和阴道分泌物中可检出HBV，HBsAg阳性的配偶较其他家庭成员更易感染HBV，表明HBV可以经性途径传播。 3.致病机制与免疫机制HBV的致病机制尚不完全清楚。目前认为：免疫病理反应以及病毒与宿主细胞间的相互作用是肝细胞损伤的主要原因。
乙型病毒性肝炎的诊断标准及处理原则GB 15990
乙型病毒性肝炎的诊断标准及处理原则GB 15990—1995 前言 乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的传染病。本病在我国广泛流行，人群感染率高，是危害人民健康最严重的常见传染病之一。 本标准的附录A和附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准起草单位：北京地坛医院、北京佑安医院、北京医科大学传染病教研组。 本标准主要起草人：林秀玉、徐道振、王勤环。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病监督管理办公室负责解释。 1 范围 本标准规定了乙型病毒性肝炎(简称乙肝)的诊断标准及处理原则。 本标准适用于各级医疗机构作为对乙肝患者的诊断及处理依据。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB 15982—1995 医院消毒卫生标准 3 乙型病毒性肝炎的诊断标准及处理原则 3.1 诊断原则 根据流行病学、临床症状、体征、实验室检查和/或肝活体组织检查等手段，进行综合分析，动态观察予以诊断。 3.2 诊断标准 3.2.1 急性肝炎 3.2.1.1 急性无黄疸型肝炎 a)流行病学资料：半年内接受过血及血制品或曾有其他医源性感染，生活中的密切接触，尤其是性接触而未采用避孕套者。 b)症状：指近期出现的无其他原因可解释的持续一周以上的明显乏力和消化道症状。 c)体征：主要指肝脏肿大，伴有触痛或叩痛。 d)肝功能检查：谷丙转氨酶(ALT)明显增高。 e)HBV标记物检测：符合急性乙肝的病原学标志，详见附录A(标准的附录)中A2。 f)病理组织学特点：如鉴别诊断需要，有条件者可作肝活检，详见附录B。 在以上各项中病原学指标、症状和肝功能异常为必备条件，流行病学资料和体征为参考条件。疑似病例：符合以上诸条中b)＋d)。 确诊病例：疑似病例＋e)。 3.2.1.2 急性黄疸型肝炎 a)同3.2.1.1.a)。 b)指近期出现无其他原因可解释的，持续一周以上的明显乏力、消化道症状及尿黄。 c)体征：皮肤巩膜黄染、肝肿大，伴有触痛或叩痛。 d)肝功能检查：ALT升高，血清胆红素(Bil)大于17.1μmol/L(大于1mg/dL)和/或尿胆红素阳性并排除其他疾病所致的黄疸。
乙肝病毒检测技术分析
乙肝病毒检测技术分析 【摘要】现代医学认为，乙肝是严重威胁人体健康的一种世界性传染疾病，其发病率和死亡率较高。乙肝病毒，是导致人体患染乙肝病症的病毒，主要通过血液、母婴和性接触进行传播。现代医疗技术条件下，针对乙肝病毒进行技术检测，是预防和控制乙型肝炎的重要前提。 【关键词】乙型病毒性肝炎病毒检测技术分析 近年来，由于人类生活环境的劣化，导致威胁人类身体健康的疾病呈现多样化趋向。乙型病毒性肝炎，作为严重侵害人类健康的传染性疾病，是由乙肝病毒引起的重要顽症，危害性极大。随着现代医疗技术的不断研发，针对乙肝病毒的实验室检测方法发展较快，为乙型肝炎的诊断、治疗和深入研究提供了重要依据。本文结合乙型病毒性肝炎疾病的病理特征，对乙型肝炎病毒的检测技术进行了分析。 1乙型病毒性肝炎 乙型病毒性肝炎，又称乙肝，是由乙肝病毒引起的，以肝脏炎性病变为主的，可引发人体多种器官功能损害的一种传染性疾病。本病主要通过血液、母婴和性行为等途径传播，主要侵犯儿童及青壮年人群，其临床表现为全身乏力、恶心呕吐、食欲减退、肝大厌油以及肝功能异常，部分病例伴有黄疸和发热现象，少数病例病程迁延可发展成为肝硬化或肝癌。 乙型病毒性肝炎的特点为发病迟缓，以慢性型肝炎较为常见，也有很多乙肝病毒携带者无明显症状表现。乙肝没有固定流行期，散发型发病率高，传染性强，已经成为严重威胁人类生命与健康的世界性传染疾病。 2乙肝病毒分析 乙肝病毒也叫乙型肝炎病毒，是指引起人类感染急性或慢性肝炎疾病的病毒，它是一种专一的嗜肝性DNA病毒，其传染性很强，人体一旦感染上乙肝病毒，肝脏就会发生炎性病变，肝细胞受损，对人体造成极大的危害。 乙肝病毒基因组长约3.2kb，为部分双链环状DNA，完整的乙肝病毒体型呈颗粒状，直径为42纳米，颗粒分为外壳和核心两部分。乙肝病毒对外界环境的抵抗力较强，于37℃下抗原性稳定，但在高温或高压环境中均可灭杀。 3乙肝病毒的检测内容 乙肝病毒DNA检测是判断乙肝病毒复制的常用手段。乙肝病毒的DNA为乙型肝炎病毒的主要成分，具有濡染性和复制性。临床上可操纵斑点杂交法和聚合酶链反应法从被浸染者的血清中检测到它。
乙型肝炎病毒感染现状分析
乙型肝炎病毒感染现状分析 乙型肝炎是一种严重危害人类健康的世界性传染病。我国亦为乙型肝炎病毒(HBV)高流行区，根据2006年全国乙型肝炎病毒感染血清流行病学调查资料，我国一般人群乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率为7．18%，5岁以下儿童HBsAg的携带率为0．96%［1］。目前HBV分为A～I共9个基因型，各基因型又可分为不同亚型。基因型的分布具有一定的地理特征，且与HBV感染后的临床表现、预后及治疗应答等都有密切关系，能影响HBV感染自然病史、乙肝e抗原(HBeAg)血清转换、抗病毒药物耐药性的发生和病毒变异的方式等。因此，了解HBV基因型的分布对于疾病的诊断、病情的判断和治疗方案的选择都有重要意义。目前研究HBV基因分型时，大多数的研究对象来自于临床，对自然人群感染HBV标本的基因分型进行研究的不多。在对深圳地区居民乙肝血清流行病学调查的基础上，对HBsAg阳性血清做进一步基因型分布研究，以初步了解本地区乙肝病毒基因型的流行特点，为指导乙肝防治工作提供科学依据。 1对象与方法 1．1对象按照国家科技重大专项“十一五”课题《艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治》的要求，以深圳市居民作为目标人群，采用多阶段整群随机抽样法，选择1岁～59岁深圳户籍人口和在深圳居住6个月以上的暂住人口作为抽样对象。 1．2仪器与试剂MultiskanMK3酶标仪(芬兰);ELx50型洗板机(Bio－Tek公司);7500型荧光PCＲ仪(ABI公司)。HBV血清学标志物试剂盒(北京万泰生物药业有限公司，批号：B20101102);HBVDNA检测试剂盒(深圳匹基生物工程有限公司，批号：20100501);HBV基因分型PCＲ检测试剂盒(广州华银医药科技有限公司，批号：20100910)。 1．3方法
乙型肝炎病毒
乙型肝炎预防教案 1、教学内容 学生们在此之前已经学习了微生物概述及病毒概述，此次课是由面到点的学习，其重点更加突出，并且通过此次课的学习，也为护生们将来学习相关传染病临床及护理学知识奠定了基础，可谓承上启下。 2、学情分析 中学生年龄较小，文化基础薄弱，而在学生们所要接触的大多是“看不见、摸不着”的病原生物，理论知识专业性强且较为抽象，学生们普遍反映难学、难懂、过于抽象化，甚至有部分学生出现厌学情绪。所以，如何将抽象的内容形象化，如何将生涩的专业术语通俗化，如何激发学生的学习兴趣，发挥学生主动性，从而达成教学目标，完成预防乙型肝炎。 3、教学目标 （1）【知识目标】 ①了解乙型肝炎病毒的防治原则。 熟悉乙型肝炎病毒的致病性及免疫性。 （2）【能力目标】 ①通过观察与思考，培养和提高学生的自学能力、观察能力、分析能力、归纳能力。 ②通过学习使护生对乙型肝炎病毒以及乙肝的了解更深入，培养学生的临床思维能力以及一定的传染病的职业防护意识。 （3）【情感目标】 ①通过身边的故事与情景设臵，激发学习的兴趣。 ②通过学习，培养护生职业防护意识。 4、教学重点和难点 为了达成上述目标，对本节内容我设计的重、难点是： （1）重点：乙型肝炎病毒的生物学特性。
（2）难点：乙型肝炎病毒的抗原抗体及其临床意义。 5、教学准备 （1）教师准备：有关乙型肝炎病毒的图片和视频资料，制作相关多媒体课件；提前将学生分组布臵探究性活动。 （2）学生准备：分组探究以下几个问题了解自己周围乙型肝炎病毒的感染现状，了解自己或他人对乙肝病人的看法，了解自己或他人接种乙肝疫苗的现状。阅读教材并关注以下几个问题： 问题1：目前我国及全球乙肝病毒感染现状。 问题2：乙型肝炎病毒的传播途径有哪些？与乙肝患者进餐会不会感染乙肝病毒？ 问题3：如何知道自己是否感染乙型肝炎病毒？ 问题4：什么是乙肝大三阳、乙肝小三阳？ 问题5：怎样防治乙肝？ 目的：乙肝是学生在日常生活中及临床上经常碰到的疾病，如此让学生先进行课前预习为下次导入新课意在激发他们对本节内容的学习兴趣和愿望。 教学过程： 1导入：故事（插入视频）：乙肝病毒携带者“锄草”走遍各大城市征集饭友共餐的事迹。“你愿意和我一起吃饭吗，我是乙肝表面抗原携带者。”“锄草”举着“征人吃饭”的牌子对一名男孩微笑着发出邀请。 并引出以下问题：你了解乙型肝炎么？你了解乙型肝炎病毒么？你身边有乙肝病人或乙肝病毒携带者么？乙型肝炎病毒是否会通过共餐而引起传播？分组讨论，并由此引出目前全球及我国乙型肝炎病毒感染的现状。以问题串的方式，充分调动学生已有的生活经验、经历，激发学习的兴趣，引入教学主题。 阅读教材，呈现乙型肝炎病毒结构图，让学生读图，总结、归纳乙肝病毒的结构。 多媒体教学等直观手段，引入图片及视频，动与静相结合，形象生动突出重
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒 （酶联免疫法） 【检验原理】 本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待测样品及酶标抗原（HBsAg-HRP）试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后为黄色。若样品中午乙型肝炎表面抗体时，不显色。 【检验方法】 1.配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。 2.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性 对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。 3.加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。 4.加霉：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。 5.温育：用封板膜封板后，置于37℃温育30分钟。 6.洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 7.显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光 显色15分钟。 8.测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。
没定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。 【注意事项】 1.本品禁用于体外检测，操作应按说明书严格进行。封板莫不能重 复使用，不同批号的酶标板，酶标试剂和阴阳性对照不可混用，不能与其他厂家实际混用。 2.避免在有挥发性物及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操 作。 3.使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟），实验请将试剂轻轻 震荡混匀，使用后立即放回2-8℃。未用完的微孔板条与干燥剂一起用封装袋密封2-8℃保存。过期试剂请勿使用。 4.加液时必须用加样器加样，并经常校对加样器的准确性。加入不 同样品或不同试剂组分时，应更换加样器吸头和加样槽，以及出现交叉污染。 5.洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗 板机应设定30-60秒侵泡时间。在洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 6.结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底 部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕都
乙型肝炎DNA测序指导原则
指导原则编号 乙型肝炎病毒DNA定量检测试剂注册申报资料技术指导原则 （征求意见稿） 二〇一二年四月
目录 一、前言 (1) 二、范围 (2) 三、注册申报要求 (4) （一）综述资料 (4) （二）产品说明书 (4) （三）拟定产品标准及编制说明 (10) （四）注册检测 (10) （五）主要原材料研究资料 (10) （六）主要生产工艺及反应体系的研究资料 (13) （七）分析性能评估资料 (14) （八）参考值（范围）确定资料 (22) （九）稳定性研究资料 (22) （十）临床试验研究 (23) 四、名词解释 (28) 五、参考文献： (29)
乙型肝炎病毒DNA定量检测试剂注册申报资料技术指 导原则 （征求意见稿） 一、前言 本指导原则旨在指导注册申请人对乙型肝炎病毒（以下简称乙肝病毒）DNA定量检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对乙肝病毒DNA定量检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容，可自行补充。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其它方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的