常用染色方法

过氧化酶染色法(POX) (2)

铁染色法 (2)

碱性磷酸酶染色法(NAP) (3)

糖原染色法(PAS) (4)

非特异性酯酶染色法 (5)

酸性磷酸酶染色法(ACP) (5)

苏丹黑B染色法 (6)

阿利新染色法 (6)

中性粒细胞中毒颗粒染色法 (7)

嗜碱性粒细胞染色法 (7)

嗜酸性粒细胞染色法 (7)

血红蛋白H包涵体染色法 (7)

T和B淋巴细胞酯酶标记鉴别法 (7)

抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(偶氮法) (7)

碘化钾过氧化酶染色法(pereira氏法) (7)

5-核苷酸酶染色法 (7)

过氧化酶染色法(POX)

一、溶液配制

第一液联苯胺 0.3g 待溶解后加入36%亚硝基铁氰化钠1ml （3.6g+6.4ml ）碱性复红 0.3g 95%酒精 100ml 第二液

3%H 2O 2 0.3ml （7滴）用时新鲜配制

蒸馏水

25ml

二、操作步骤

1、新鲜涂片加第一液 1分钟

2、再加等量第二液 4分钟

3、用蒸馏水冲洗后，再用95%酒精褪色，至红色褪掉为止

4、水洗后待干，再用瑞氏染液复染，时间为40-50分钟

5、水洗后待干，镜检

三、结果判定

若细胞具有POX ，用此染色即有黑色颗粒出现在细胞内，为阳性，无黑色颗粒为阴性。

1、粒细胞除早期原粒均为阴性

2、单核细胞为弱阳性反应，部分网状细胞呈弱阳性反应

3、淋巴细胞、巨核细胞、浆细胞为阴性反应

铁染色法

一、原理：幼红细胞胞浆内的铁，网状细胞及造血岛内铁粒在酸性条件下，可与亚铁氰化钾起反应，产生蓝色普鲁士蓝沉积。二、试剂配制

1、20%亚铁氰化钾溶液

2、36%浓盐酸

3、甲醇

4、0.2%核固红（配制：硫酸铝10g 溶于蒸馏水100ml 中，待溶解后加入核固红0.2g 混匀，并放在37℃水浴箱内1小时，时时振荡使其充分溶解后过滤使用）三、操作步骤

1、新鲜涂片甲醇固定10分钟，蒸馏水洗后晾干

2、(5份20%亚铁氰化钾，1份36%浓盐酸混合成清亮液)染色30分钟，蒸馏水洗后晾干

3、0.2%核固红复染20-30分钟，流水冲洗，晾干。四、结果判断

外铁：检查展开骨髓小粒，按以下标准记录

阴性（-）：未见铁颗粒

阳性（+）：少数铁颗粒或少数铁小珠阳性（2+）：较多的铁颗粒及铁小珠强阳性（3+）：很多铁小珠及少数铁块强阳性（4+）：很多铁小珠及铁块

细胞内铁：各型铁粒幼红细胞判定标准

Ⅰ型：含铁颗粒1-2颗 Ⅱ型：含铁颗粒3-5颗

Ⅲ型：含铁颗粒6-10颗，或1-4个粗大颗粒

Ⅳ型：含铁颗粒10颗以上，或5个以上粗大颗粒

环形铁粒幼细胞：含铁颗粒6颗以上，其中2/3的铁粒围绕于核周围排列呈环状。

碱性磷酸酶染色法(NAP)

原理：当细胞存在碱性磷酸酶活力时，在碱性的环境下，可将基质物质中的β-甘油磷酸钠水解产生PO 4，进而与钙结合，产生一种不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴起作用而成磷酸钴，最终与硫化铵起反应而形成黑色的沉淀于细胞浆中一、试剂配制

固定液和基质液配前均可在冰箱保存三月左右二、方法

1、涂片+固定液在4℃以下固定2分钟，蒸馏水冲洗

2、加入基质液放在37℃水浴中3小时（50℃以下），超过37℃时间可缩短，取出后用蒸馏水冲洗

3、浸入2%硝酸钴液中5分钟，蒸馏水冲洗

4、用新鲜配制的1/80硫化铵溶液作用作用10秒钟后用小水冲洗，待干

5、用甲绿复染20分钟三、结果

1、中性粒细胞胞浆内少数的小黑色颗粒 +

2、中性粒细胞胞浆内较多的棕黑色颗粒 2+

3、中性粒细胞胞浆内均匀分布黑色颗粒 3+

4、中性粒细胞整个胞浆内充满黑色颗粒 4+

根据以上加号数，+记为1分，依此类推，最高为4分，中性粒细胞所有分数加起来，为该病人的积分，胞浆呈淡红色（用0.5-1%伊红复染时），无灰色为阴性。正常值：血中成熟中性粒细胞：阳性率53.7%，积分81.9±6.4 骨髓成熟中性粒细胞：阳性率49.2% 积分84.9±9.8 临床意义:

1、固定液甲醛 10ml 混合

甲醇 90ml 2、基质液 10%巴比妥钠

6ml 左述液体混合后以0.2W 氢氧化钠纠正PH9.4-9.8，一般每100ml 基质液中加0.15-0.2ml 氢氧化钠 3.2%β-甘油磷酸钠 6ml 2%硝酸钙（或氯化钙） 9ml

2%硫酸铝 3ml

蒸馏水

33ml 3、2%硝酸钴溶液

4、1/80硫化铵溶液 0.5ml 硫化铵+40ml 蒸馏水

5、1%甲绿溶液

成熟中性粒细胞的碱性磷酸酶活性明显增高，见感染、出血、类白血病反应、真性红细胞增多症、骨髓硬化症，急淋、多发性骨髓瘤、再障等，在急性和慢性粒细胞白血病、病毒感染、PNH时，碱性磷酸酶活性显著降低，急单的酶活性亦低，因此，中性粒细胞碱性磷酸酶反应，有助于粒细胞性的白血病与类白血病反应的鉴别，有助于病毒感染和细菌感染的鉴别。

糖原染色法(PAS)

一、原理：过碘酸时一种氧化剂，它能打断各种物质内的C-C链，当乙二醇基（CHOH-CHOH）存在时，能使其变为二醛（CHO-CHO），醛再被进一步氧化而与雪夫氏试剂中的无色复红结合成红色的化合物，红色反应的深浅有赖于组织内α-醇基的多少。除糖原能与过碘酸反应的还有粘蛋白、粘多糖、糖蛋白、糖脂类、不饱和脂肪酸类和磷脂。但糖原能被唾液淀粉酶消化，其它阳性物质不被消化，故将经过唾液处理后的涂片，再经PAS染色可以鉴别之。

二、试剂

1、1%过碘酸（新鲜配制）：过碘酸0.5g+蒸馏水50ml

2、雪夫氏试剂

配制方法1：碱性品红2.6g（0.33g）放置于已加热60℃416ml（52ml）蒸馏水中使其全部溶解，偏重亚硫酸钠或重亚硫酸钾16g（2g），1N的HCL80ml（10ml），静置片刻后加活性炭4g（2g），振荡2-3分钟过滤后无色即可用。如仍有红色，再加适量活性炭。

（1N盐酸配制：8.6ml浓盐酸加蒸馏水至100ml）

方法2：

1）碱性复红：1g

2）当量盐酸：20ml（浓盐酸2ml）

3）无水亚硫酸钠：1g

4）活性炭：2g

5）蒸馏水：200ml

将蒸馏水煮沸后加入复红，冷至50℃时加入当量盐酸，再冷至25℃加入亚硫酸钠，摇匀将瓶盖塞紧，置于暗处，24小时后加入活性炭。振荡后过滤使用，盛于有色瓶中密封冷藏，可保存数月。

3、1%甲基绿：2g+蒸馏水200ml，充分溶解后放入分液漏斗中以每次少许氯仿，以除去甲基紫至氯仿无色为止。

三、操作

1、血片或骨髓片在空气中干燥后，用甲醇固定5分钟（或95%乙醇）

2、过碘酸作用10分钟

3、水洗5-10分钟

4、雪夫氏试剂作用30分钟（置暗处）

5、水洗5-10分钟

6、甲基绿复染30分钟

7、水洗待干镜检

四、结果

细胞核无色，浆与颗粒部分呈红色，复红颗粒色深浅及颗粒多少而决定积分。

细胞浆内无染色颗粒为0分

细胞浆内微红颗粒染色不显著或1-10颗粒，为1分或（+）

细胞浆内染浅红色，有少数染红色颗粒或10-20颗，为2分或（2+）

细胞浆内染深红色，有的成较粗的块状或20-30颗，为3分或（3+）

细胞浆内染深红色块状，颗粒在30个以上充满胞浆，为4分或（4+）

非特异性酯酶染色法

一、原理：α-乙酸茶酚酯酶将乙酸茶酚水解，再与重氮盐（如坚牢蓝B）偶联，生成不溶性的有色（灰色或棕黑色）沉淀

二、试剂配制

1、10%甲醛生理盐水

2、基质液制备

（1）0.05M磷酸盐缓冲液40ml

M/15 Na2HPO4Na2HPO4 5.97g

80ml 蒸馏水250ml

M/15 KH2PO4KH2PO4 2.268g

20ml 蒸馏水250ml

（2）重氮盐（可用固兰盐代替）40mg

（3）1%α-乙酸茶酚酯（用50%丙酮作溶剂）0.8ml

以上试剂混合后放入骨髓片或血片

三、操作步骤

1、新鲜涂片用10%甲醛生理盐水固定5分钟

2、蒸馏水洗后放入基质液中37℃孵育1小时

3、取出后用水冲洗后用甲基绿复染(不染色也可以)15分钟

4、水洗，干后镜检

四、结果判断

阳性时为絮状沉淀于胞浆中

灰黑色±

棕黑色+

深黑色2+

五、临床意义

1、原始单核细胞呈阳性反应，原始较晚及幼单以下呈阳性反应，随细胞成熟而增强。

2、血小板、巨核细胞浆内可出现阳性反应，其它血液成分均为阴性

注：氟化钠抑制试验：上述孵育液加入氟化钠60mg孵育1小时

酸性磷酸酶染色法(ACP)

酸性磷酸盐（ACP）染色分硫化铝染色法和偶氮偶联法，下面是硫化铝染色法。

一、原理

酸性磷酸酶在酸性条件下，能将甘油酸钠水解产生PO4-,进而与pb作用生成磷酸铅沉淀，附着于酶活性存在之处，再与硫化铵作用，生成黑色硫酸铅。

二、试剂

苏丹黑B染色法阿利新染色法

中性粒细胞中毒颗粒染色法

嗜碱性粒细胞染色法

嗜酸性粒细胞染色法

血红蛋白H包涵体染色法

T和B淋巴细胞酯酶标记鉴别法

抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(偶氮法) 碘化钾过氧化酶染色法(pereira氏法) 5-核苷酸酶染色法

常用染色剂及配制

常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。二、染液的配制在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。（一）苏木素染液的配制方法如下 1.Harris氏苏木素液甲液：苏木素1g 无水酒精10ml 乙液：硫酸铝钾20g 蒸馏水200ml 丙液：一氧化汞0.5g 经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于

细胞染色方法总结

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤 PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！ annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。 JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。 JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

染色方法概述

染色方法概述) 染色方法的实施是在染色设备上完成的按染色方法可分为：浸染机、卷染机、轧染机按被染物形态：散纤维染色机、纱线染色机、织物染色机、成衣染色机按染色温度及压力：常温常压染色机、高温高压染色机按设备运转方式：间歇式染色机及连续式染色机一匀染和移染广义的匀染是指染料在染色织物表面以及在纤维内各部分分布的均匀度染料在纤维内均匀分布，透染分为4种情况 (1)在纤维束及纤维内分布均匀，理想状态（2）在纤维束内分布均匀，但只分布在单纤维表面，纤维环染，近似匀染，染色结果较第一种情况浓（3）纤维束环染（白芯）（4）纤维束外围纤维环染或不均匀染色，内部纤维不染色影响匀染因素 (一)纤维及及其结构均匀性不同成熟度的棉不同产地、不同生长部位的毛化学纤维前处理（2）上染条件初染速率太高或上染速率太快浸染控制匀染手段缓染——控制上染速度和加入缓染剂移染——上染较多部位的染料通过解吸转移到上染较少的部位

轧染控制匀染手段浸轧均匀性防泳移散纤维染色：多用于混纺织物、交织物和厚密织物纱线染色：纱线制品、色织物或针织物成衣染色：小批量、交货短、适应变化原液着色：有色纤维，如丙纶根据把染料施加于染色物和使染料固着在纤维上的方式不同，染色方法可分为浸染（或称竭染）和轧染两种（一）浸染将纺织品浸渍于染液中，经一定时间使染料上染纤维并固着在纤维上的染色方法在染色过程中，染料逐渐上染纤维，染液中染料浓度相应地逐渐下降适用于各种形态的纺织品染色，尤其适用于不能经受张力或压轧的染色物浸染时，染液及被染物可以同时循环运转，也可以只有一种循环一般为间歇式生产，设备比较简单，操作比较容易，生产效率较低主要有：散纤维染色机、绞纱或筒子纱染色机、经轴染色机、卷染机、绳状染色机、喷射溢流染色机、气流染色机等浴比：浸染时，染液质量与被染物质量之比染色浓度：染料用量一般用对纤维质量的百分数（o.m.f.）表示影响染色因素：（1）保证染液各处的染料、助剂的浓度均匀一致（2）控制上染速率，通过调节温度及加入匀染助剂来达到调节温度使染浴各处温度均匀一致，升温速率必须与染液流速相适应加入匀染剂可控制上染速率，或增加染料的移染性能（3）浴比大小（4）消除织物内应力（二）轧染将织物在染液中经过短暂的浸渍后，随即用轧辊轧压，将染液挤入纺织物的组织空隙中，并除去多余染液，使染料均匀分

常见气体的检验方法

常见气体的检验方法知识小结：

火焰上方；（3）用内壁上沾有澄清石灰水的烧杯罩在火焰上。烧杯内壁有水珠。石灰水变浑浊。氮气将燃着的木条放在瓶中。燃着的木条熄灭。氯化氢将湿润的蓝色石蕊试纸放在瓶口。通入硝酸银溶液。变红。有白色的沉淀。氨气将湿润的红色石蕊试纸放在瓶口。变蓝。水将水蒸气接触无水硫酸铜粉末。无水硫酸铜粉末由白色变为蓝色。例题分析： 1、为了鉴别甲烷、氢气和一氧化碳三种无色气体，分别把它们燃烧后的产物依次通过右图装置。

（1）如果甲装置中无明显变化，乙装置中澄清石灰变浑浊，则燃烧的气体是。（2）如果甲装置中白色粉末变蓝，乙装置中澄清石灰水无变化，则燃烧的气体是。（3）如果装置中白色粉末变蓝，乙装置中澄清石灰水变浑浊，则燃烧的气体是。 2、现有六瓶无色气体，它们分别是氧气、氮气、氢气、二氧化碳、一氧化碳、甲烷，设计实验鉴别六瓶气体。简要写明实验方法、实验现象及结论。 3、某无色混合气体中可能含有一氧化碳、二氧化碳、氢气中的一种或几种。把混合

气体依次通过澄清石灰水、灼热的氧化铜和无水硫酸铜时，依次出现石灰水变浑浊，氧化铜由黑变红，无水硫酸铜由白变蓝的现象（假设每步反应完全）。由此可以推断：（1）混合气体中一定含有，其理由是。（2）混合气体中可能含有，其理由是。如果要确定它是否存在，需进行以下操作：。提高练习： 1、区别一氧化碳与二氧化碳的方法是，除去一氧化碳中混有的二氧化碳的方法是，除去二氧化碳中混有一氧化碳的方法是。

A：将气体通过氢氧化钠溶液；B：将气体通过灼热的氧化铜粉末； C：将气体通过澄清石灰水；D：将气体通过灼热的木炭。 2、有一混合气体可能由二氧化碳、一氧化碳、氢气、氮气组成，按下列顺序进行实验：（1）将混合气体通过澄清石灰水，石灰水变浑浊；（2）将余下气体点燃，火焰呈淡蓝色；（3）燃烧后的产物通入紫色石蕊试液中，试液不变成红色。混合气体中一定有；一定没有；可能含有。写出（1）（2）两个实验中有关化学反应方程式：。 3、为了鉴别氢气、一氧化碳、甲烷三种气体，

考题- 染色基本知识

第一章染色基本知识 1. 什么叫染色？它的目的和要求是什么？ 2. 物体为什么会有颜色？物体具有颜色的基本条件是什么？ 3. 什么叫染色牢度？常见的染色牢度有哪些？ 4. 什么叫浸染？什么叫轧染？各适用于何种织物的染色？第二章染色基本理论 TOP 1. 亲和力和直接性有何不同？ 2. 酸性染料染羊毛或聚酰胺纤维有无饱和值？用什么法其求出它？ 3. 何谓平衡吸附等温线？它分为哪几种类型？有何特点，方程式如何？ 4. 什么叫上染？上染过程分哪几个阶段？它和染色过程是否相同？ 5. 什么叫上染百分率？平衡上染百分率？它们在上染速率曲线上各有何特征？ 6. 染料在纤维中的扩散与染色效果有什么关系？影响扩散速率的因素有哪些？染料的扩散活化能大小对扩散有什么影响？ 7. 试从染料的扩散速率、扩散活化能以及平衡吸附等方面说明温度对上染的影响。 8. 什么扩散边界层？染色时染液的流动对其有何影响？ 9. 染料在水溶液中有几种存在形式？染色时染料是以何种形式上染色？ 10. 浓度、温度及中性电解质对染料在溶液中的聚集有何影响？ 11. 在一般上染过程中，△H0和△S0为何是负值？根据△H0、△S0和T的关系式，讨论染色温度T对平衡上染百分率的影响？ 12. 试说明某些酸性染料上染蛋白质纤维时，△S0为正值，即整个染色体系混乱度增加的原因。 13. 什么叫稳态扩散、非稳态扩散？写出对应的Fick扩散方程式及其物理意义。 14. 什么叫无限染浴、有限染浴？它们在染色过程中各有何特点？ 15. 什么叫半染时间？在不同的染色条件下，其变化和哪些因素有关？ 16. 何谓孔道扩散模型和自由体积扩散模型？根据其基本理论简述纤维微结构的差异对染料扩散速率的影响。 17. 什么叫初染率、移染性？染料的标准亲和力及染料的扩散性能对其有何影响？ 18. 为获得满意的染色效果，一般可通过哪些工艺条件来控制染料的上染速率。 19. 什么叫泳移、半匀染时间？第三章直接染料的染色 TOP 1. 直接染料染色时加入中性电解质的作用是什么？说明其作用原理。 2. 直接染料分为哪几个类型？各类有何特点？分别用什么方法来控制上染过程以纠正染色不匀的现象。 3. 直接染料为何须进行后处理，常用的固色剂及其固色原理如何？

细胞各种染色方法

细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。若细胞营养不良状况没有得到及时纠正，进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中。发现这种情况应及时处理，只有生长良好的细胞才能进行传代培养和实验研究。三、细胞的生长状态细胞培养时，经初代培养或传代培养，都有一长短不同的潜伏期，在培养过程中注意观察细胞增殖生长的状态极为重要。各种细胞增殖的时间不尽一致。传代细胞系，胚胎组织或幼体细胞潜伏期短，一般在接种培养第二天即可见细胞生长增殖，3～4天便可连接成片。成体组织的潜伏期长，老年组织和癌组织潜伏期更长，可达一周左右。原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞，这种细胞是从原代组织块中游走出来的，并不是细胞增殖产生。这种早期游出的细胞多以成纤维细胞为主，其易生长，适应性强，呈放射状或旋涡状分布，很快生长并互相连接成网状。传代细胞在传代后，一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期，对数生长期，细胞大量繁殖，逐渐相连成片而长满瓶底。一旦发现细胞长满瓶底80%就应及时传代，否则会影响细胞生长甚至脱落。悬浮细胞当发现生长显著、密度增大、分布稠密、培养液变黄时也应及时传代。四、微生物污染细胞接种、传代、换液加药后应经常观察，密切注意是否有微生物污染发生。一旦发现培养液混浊、液体内漂浮着菌丝或细菌，或生长明显变缓，胞质内颗粒增多，有中毒表现等

棉织物染色三种常见方法

棉织物染色三种常见方法棉织物是染整加工常见的面料。常采用：直接染料、活性染料以及硫化染料的染色加工方法。一、棉织物直接染料染色特性： 1、直接染料是一类能在中性染浴中，直接上染纤维素纤维的水溶性染料。 2、直接染料色谱齐全，应用方便、价格低廉、耐洗牢度不好，日晒牢度欠佳。常需要采用固色剂处理。

性能和方法： 1、染色性能： 1.1 直接染料都溶于水,溶解度随温度的升高而显著增大。 1.2 直接染料染色中经常使用的促染剂为食盐和元明粉。选用元明粉作促染剂能得到较鲜艳的色泽。 1.3 直接染料不耐硬水，必须采用软水染色。 2、染色方法 2.1 一般在普通绳状染色机上进行，染色浴比为1:15-30浅色的浴比要比深色的大些。 2.2 染色温度一般采用近沸点染色,以获得良好的移染性，（所谓移染是指染料从纤维上浓度高地方向浓度低的地方扩散）以及良好的色光和牢度。染色一般由常温开始（深色的可由60℃-80℃开始）。

3、直接染料的固色处理 1、利用阳离子固色剂，以固色剂Y 和固色剂M处理，来提高其牢度。棉针织物活性染料染色二、棉织物活性染料染色特性： 1、活性染料能溶于水，分子结构中含有活性基因，在一定条件下，能与纤维素纤维上的羟基，发生共价键结合。

2、活性染料具有色泽鲜艳，湿处理牢度和摩擦牢度较好，匀染性好，色谱较齐，应用方便，耐晒牢度较好。影响活性染料染色的主要因素： 1、亲和力的影响 1.1 在使用亲和力很大的染料进行染色时,具有比较高的上染百分率,有利于提高染料的利用率,但必须加强洗涤,否则会影响染色物的水洗和摩擦牢度. 2、浴比的影响 2.1 活性染料染色时，在不影响匀染的条件下，应尽量减少浴比，这一方面提高了固色率，同时也减少活性染料在染浴中的水解。 3、温度的影响 3.1 K型活性染料，就有必要在较高温度下染色。 X型活性染料，随着温度的升高，可促进染料的水解，则不能在高温

2017年主管检验技师考试临床血液学检验练习题第四章血细胞化学染色的临床应用

2017 第四章血细胞化学染色的临床应用一、A1 1、采用过氧化物酶染色鉴别急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的主要鉴别点是 A、急性粒细胞白血病阳性颗粒呈弥散分布，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒呈局灶分布 B、急性粒细胞白血病阳性颗粒较多且粗大，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒较小且细小 C、急性粒细胞白血病阳性颗粒较小且细小，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒较多且粗大 D、白血病性原始粒细胞呈阴性反应，原始、幼稚淋巴细胞均呈阳性反应 E、白血病性原始粒细胞呈阳性反应，原始、幼稚淋巴细胞均呈阴性反应 2、过氧化物酶染色呈阴性的细胞是 A、早幼粒细胞 B、中性中幼粒细胞 C、淋巴细胞 D、嗜酸性粒细胞 E、单核细胞 3、过氧化物酶染色阳性反应程度最强的是 A、中性分叶核粒细胞 B、嗜酸性粒细胞 C、嗜碱性粒细胞 D、单核细胞 E、淋巴细胞 4、过氧化物酶染色结果显示“颗粒较粗，局灶分布”，结果判断应为 A、（－） B、（＋） C、（＋＋） D、（＋＋＋） E、（＋＋＋＋） 5、属于细胞化学染色的是 A、瑞氏染色 B、革兰染色 C、墨汁染色 D、抗酸染色 E、铁染色 6、过氧化物酶染色中，被初生态氧氧化的物质是 A、酒石酸 B、重氮盐 C、过碘酸 D、四甲基联苯胺 E、亚铁氰化钾

7、关于氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，下列概念不正确的是（）。 A、其活性随粒细胞的成熟而增强 B、淋巴细胞、浆细胞和幼红细胞均呈阴性 C、单核细胞为阴性，个别呈弱阳性 D、急性粒细胞白血病原始细胞多呈阳性 E、原粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应 8、中性粒细胞碱性磷酸酶积分（NAP）在下列疾病的鉴别中，哪项是不正确的（）。 A、慢粒时NAP积分明显降低，而类白血病时则明显升高 B、急淋时NAP积分明显降低，而急粒时则明显升高 C、PNH病时NAP积分明显降低，而再障时则明显升高 D、真性红细胞增多症时NAP积分明显升高，而继发性红细胞增多症时NAP无明显变化 E、骨髓增生异常综合征，NAP积分值减低，骨髓纤维化NAP可增高 9、最适宜用于鉴别原粒和原淋的细胞化学染色是（）。 A、过氧化物酶 B、糖原 C、碱性磷酸酶 D、α-丁酸萘酚酯酶和氟化钠抑制试验 E、酸性磷酸酶 10、关于α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色，下述概念不正确的是（）。 A、粒细胞系统均为阴性反应 B、幼单核细胞为阳性反应，不被NaF抑制 C、组织细胞呈阳性反应，不被NaF抑制 D、非T非B细胞可呈颗粒状阳性 E、幼单核细胞为阳性反应，可被NaF抑制 11、中性粒细胞碱性磷酸酶活性增高主要见于（）。 A、多发性骨髓瘤 B、阵发性睡眠性血红蛋白尿 C、急性粒细胞白血病 D、慢性粒细胞白血病 E、细菌性感染 12、关于醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-D-NAE）染色，下述概念不正确的是（）。 A、急粒时，白血病细胞可呈阳性反应，且不被NaF抑制 B、急单时，白血病细胞可呈阳性反应，但被NaF抑制 C、红细胞系统均呈阴性反应 D、淋巴细胞呈弱阳性反应 E、急性粒-单核细胞性白血病，部分白血病细胞呈阳性反应，部分呈阴性反应 13、最适宜用来鉴别急性单核细胞白血病和急性粒细胞白血病的细胞化学染色是（）。 A、过氧化物酶 B、糖原

统计学常用检验方法

统计中经常会用到各种检验，如何知道何时用什么检验呢，根据结合自己的工作来说一说： t检验有单样本t检验，配对t检验和两样本t检验。单样本t检验：是用样本均数代表的未知总体均数和已知总体均数进行比较，来观察此组样本与总体的差异性。配对t检验：是采用配对设计方法观察以下几种情形，1，两个同质受试对象分别接受两种不同的处理；2,同一受试对象接受两种不同的处理；3，同一受试对象处理前后。 u检验：t检验和就是统计量为t,u的假设检验，两者均是常见的假设检验方法。当样本含量n较大时，样本均数符合正态分布，故可用u检验进行分析。当样本含量n小时，若观察值x符合正态分布，则用t检验（因此时样本均数符合t 分布），当x为未知分布时应采用秩和检验。F检验又叫方差齐性检验。在两样本t检验中要用到F检验。从两研究总体中随机抽取样本，要对这两个样本进行比较的时候，首先要判断两总体方差是否相同，即方差齐性。若两总体方差相等，则直接用t检验，若不等，可采用t'检验或变量变换或秩和检验等方法。其中要判断两总体方差是否相等，就可以用F检验。简单的说就是检验两个样本的方差是否有显著性差异这是选择何种T检验（等方差双样本检验，异方差双样本检验）的前提条件。在t检验中，如果是比较大于小于之类的就用单侧检验，等于之类的问题就用双侧检验。卡方检验是对两个或两个以上率（构成比）进行比较的统计方法，在临床和医学实验中应用十分广泛，特别是临床科研中许多资料是记数资料，就需要用到卡方检验。方差分析用方差分析比较多个样本均数,可有效地控制第一类错误。方差分析(analysis of variance,ANOVA)由英国统计学家，以F命名其统计量，故方差分析又称F检验。其目的是推断两组或多组资料的总体均数是否相同，检验两个或多个样本均数的差异是否有统计学意义。我们要学习的主要内容包括单因素方差分析即完全随机设计或成组设计的方差分析（one-way ANOVA）：用途：用于完全随机设计的多个样本均数间的比较，其统计推断是推断各样本所代表的各总体均数是否相等。完全随机设计（completely random design）不考虑个体差异的影响，仅涉及一个处理因素，但可以有两个或多个水平，所以亦称单因素实验设计。在实验研究中按随机化原则将受试对象随机分配到一个处理因素的多个水平中去，然后观察各组的试验效应；在观察研究（调查）中按某个研究因素的不同水平分组，比较该因素的效应。两因素方差分析即配伍组设计的方差分析（two-way ANOVA）：用途：用于随机区组设计的多个样本均数比较，其统计推断是推断各样本所代表的各总体均数是否相等。随机区组设计考虑了个体差异的影响，可分析处理因素和个体差异对实验效应的影响，所以又称两因素实验设计，比完全随机设计的检验效率高。该设计是将受试对象先按配比条件配成配伍组（如动物实验时，可按同窝别、同性别、体重相近进行配伍），每个配伍组有三个或三个以上受试对象，再按随机化原则分别将各配伍组中的受试对象分配到各个处理组。值得注意的是，同一受试对象不同时间（或部位）重复多次测量所得到的资料称为重复测量数据

血细胞化学染色检验

血细胞化学染色检验发表时间：2011-05-13T17:08:37.940Z 来源：《中外健康文摘》2011年第5期作者：张辉[导读] 中性、嗜酸性较细胞及单核细胞胞质能将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，生成蓝色颗粒。张辉 (黑龙江省林甸县中医院 166300) 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)5-0146-02 【关键词】血细胞检验染色 (一)过氧化物酶(POX)染色中性、嗜酸性较细胞及单核细胞胞质内含过氧化物酶(POX)，能将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，生成蓝色颗粒。 1.酶活性增高可见于再生障碍性贫血、急性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、放射病，嗜碱性粒细胞在慢性粒细胞白血病时可出现阳性。 2.酶活性减低可见于肿瘤、MDS、链球菌感染、风湿热等。 (二)中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞中的碱性磷酸酶(NAP)能使试剂中的成分产生一系列化学反应，形成棕黑色颗粒定位于胞质中。胞质中出现灰色到棕黑色颗粒为阳性反应，视反应强度可分为阴性反应，+～4+。由此可计算出NAP阳性细胞的百分率和阳性积分值。 1.NAP积分增高可见于①细菌性感染时，NAP活性明显增高，病毒性或寄生虫性感染时常无明显变化或减低，这有助于感染性质的鉴别；②真性红细胞增多症以及再生障碍性贫血；③类白血病，由化脓性球菌引起的白血病反应；④急性淋巴细胞性白血病；⑤多发性骨髓瘤时，NAP活性显著升高；⑥烧伤、中毒、手术、外伤等。 2.NAP积分降低可见于①慢性粒细胞性白血病时NAP活性明显降低，经治疗病情缓解时活性恢复正常，急变时活性增强，有助于对病情判断；②粒细胞缺乏症、脾功能亢进等疾病；③感染革兰阴性杆菌、结核、病毒感染以及立克次体病等。 (三)酸性磷酸酶染色血细胞中的酸性磷酸F(ACP)在酸性条件下水解试剂中的成分，产生的化学反应形成黑色颗粒定位于胞质中。 1.单核细胞、网状细胞、巨噬细胞、组织细胞中此酶呈阳性反应，有助于急性单核细胞性白血病、组织细胞性淋巴瘤及恶性组织细胞病的诊断。 2.毛细胞白血病时呈阳性反应，且不为左旋酒石酸所抑制，有助于毛细胞白血病的诊断。 3.高雪细胞呈阳性反应尼曼-匹克细胞细胞呈阴性反应，有助于两者鉴别。 (四)特异性酯酶染色特异性酯酶(SE)为粒细胞所特有，能将试剂成分形成不溶性红色沉淀定位于胞质中。急性粒细胞性白血病时，原粒及早幼粒细胞的SE活性显著增强；急性单核细胞性白血病时一般呈阴性反应；急性淋巴细胞性及单核细胞性白血病时均呈阴性反应。 (五)非特异性酯酶染色血细胞中的非特异性酚酶(NSE)能将试剂中的成分形成不溶性的有色沉淀定于胞质中。 NSE主要存在干单核细胞系，从原单核细胞到成熟单核细胞其活性逐渐增强，粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应，淋巴细胞系一般呈阴性反应。在急性单核细胞性白血病时呈强阳性反应，但其活性能被氟化钠抑制。急性粒细胞性白血病时，有部分病理可呈弱阳性反应，但其活性不被氟化钠抑制，有助于急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病的鉴别。 (六)糖原染色糖原染色又称过碘酸-雪夫(FAS)反应。过碘酸能将血细胞内的糖原氧化后与雪夫试剂反应形成紫红色化合物定位于细胞质中。胞质中出现红色颗粒或块状物质为阳性反应因细胞不同，其反应程度各异粒系细胞中原始粒细胞多呈阴性反应；早幼粒细胞以下各阶段随细胞成熟，阳性反应增强；红系细胞呈阴性反应；单核细胞呈弱阳性淋巴细胞多呈阴性；巨核细胞及血小板均呈阳性反应按阳性强度计算积分值。 1.鉴别良性与恶性淋巴细胞增生性疾病在良性淋巴细胞增生如传染性单核细胞增多症时，其淋巴细胞PAS阳性反应产物呈细小颗粒状，积分值正常；在恶性增生时如恶性淋巴瘤、急或慢性淋巴细胞性白血病时，其淋巴细胞中常呈粗颗粒或块状红细胞沉淀的阳性反应，积分值增高。 2.鉴别幼红细胞增生的性质在巨幼红细胞性贫血、溶血性贫血时，幼红细胞PAS反应积分值正常；在红血病、红白血病时则呈强阳性反应，积分值增高。 3.鉴别急性白血病的类型原始及幼稚粒细胞PAS反应呈阴性；原始淋巴细胞及幼稚淋巴细胞反应呈颗粒状或块状阳性；原始单核细胞及幼稚单核细胞反应呈弥漫性强阳性。 4.鉴别某些细胞类型如巨核细胞呈强阳性反应，尼曼-匹克细胞呈弱阳性或阴性，李-斯细胞一般为阴性或弱阳性反应。 (七)铁染色骨髓组织中的含铁血黄素(细胞外铁)和幼红细胞中的铁粒(细胞内铁)在酸性溶液中与亚铁氰化钾反应，生成蓝色沉淀定位于含铁部位及胞质中。 1.细胞内外铁消失或减低，见于铁原料摄入降低，铁吸收功能障碍或铁的丢失和消耗过度，使幼红细胞血红蛋白合成量减少或障碍，如临床常见的缺铁性贫血及能引起机体缺铁的相关疾病，如钩虫病、ITP等均能使机体细胞内外铁减少，产生贫血症状。 2.细胞内外铁增多，见于机体造血功能障碍，铁利用和转换能力下降或迟缓，临床常见的疾病有再生障碍性贫血、铁粒幼细胞贫血、骨髓增生异常综合征、溶血性贫血、白血病等。 3.铁染色与血清铁、总铁结合力联合检测，有助于了解机体内铁的动态变化以及铁剂治疗的效果，可评价骨髓代偿造血能力。参考文献

几种常用的染色方法

几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

数学建模常用各种检验方法及常用方法

数学建模各种检验方法 1.单个总体2 Nμσ的均值μ的检验: (,) 2 σ已知,关于均值的检验用ztest命令来实现. [h,p,ci]=ztest(x,mu,sigma,alpha,tail) 2 σ已知,关于均值的检验用ttest命令来实现. [h,p,ci]=ttest(x,mu,alpha,tail) 2.两个正态总体均值差的检验（t 检验）还可以用t 检验法检验具有相同方差的2 个正态总体均值差的假设。在Matlab 中由函数ttest2 实现，命令为： [h,p,ci]=ttest2(x,y,alpha,tail) 3.分布拟合检验在实际问题中，有时不能预知总体服从什么类型的分布，这时就需要根据样本来检验关于分布的假设。下面介绍2χ检验法和专用于检验分布是否为正态的“偏峰、峰度检验法”。 2 χ检验法 0 H ：总体x的分布函数为F(x) , 1 H : 总体x的分布函数不是F(x). 在用下述χ 2检验法检验假设0 H 时，若在假设0 H 下F(x)的形式已知，但其参数

值未知，这时需要先用极大似然估计法估计参数，然后作检验。偏度、峰度检验 4．其它非参数检验 Wilcoxon秩和检验在Matlab中，秩和检验由函数ranksum实现。命令为： [p,h]=ranksum(x,y,alpha) 其中x，y可为不等长向量，alpha为给定的显著水平，它必须为0和1之间的数量。p返回产生两独立样本的总体是否相同的显著性概率，h返回假设检验的结果。如果x和y的总体差别不显著，则h为零；如果x和y的总体差别显著，则h为1。如果p 接近于零，则可对原假设质疑。 5．中位数检验在假设检验中还有一种检验方法为中位数检验,在一般的教学中不一定介绍,但在实际中也是被广泛应用到的。在Matlab中提供了这种检验的函数。函数的使用方法简单，下面只给出函数介绍。 signrank函数 signrank Wilcoxon符号秩检验 [p,h]=signrank(x,y,alpha)

常用血细胞化学染色原理及应用

常用血细胞化学染色原理及应用 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX） [原理]粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。正常血细胞的染色反应： 1.粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。 2.单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。 3.红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS） [原理]过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。正常血细胞的染色反应： 1.粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性,至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。 2.单核细胞系---原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。 3.淋巴细胞系---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。 4.红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。

常用染色剂的配方

常用染色剂的配方常用染色剂的配方（一）天然染料 1、苏木精（Hematoxylin）苏木精是从南美的苏木（Haematoxylon campechianum）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红（Carmine）洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出胭脂红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 3、靛蓝洋红（Indigo carmine）是由木蓝（Indigofera）提出的靛蓝（Indigo）加上亚硫酸钠而成。为蓝色酸性染料，作为细胞质的染色剂。常与苦味酸合成苦味酸靛蓝洋红（picro-indigo-carmine），呈绿色，可与碱性品红作对比染色。 4、地衣红（Orcein）是由地衣（Lecanora parella）中取得的染料，可在酸性或碱性溶液中染色。植物细胞学中应用较多，尤其对于某些植物的染色体染色，效果比醋酸洋红更好。配制方法与洋红相似，通常也多溶入醋酸中（2.2％）染色。现在已多用其人工合成染料。（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色

实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。 6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA 固定液、Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing固定液等。