反相高效液相色谱法测定尿素中缩二脲的含量

摘要；建立一种测定尿素中缩二脲含量的反相高效液相色谱(HPLC)方法。以色谱柱L—column ODS，检测波长为190nm，水

一氨水一高氯酸为流动相。缩二脲的平均回收率为100．4％，RSD为1．55％。该方法简单、快速、重现性好，可用于尿素生产中缩

二脲的控制。

关键词：反相高效液相色谱法尿素缩二脲检测

尿素在工业、农业使用时对缩二脲的含量都有严格的要求，在农业使用时，缩二脲含量超标将会对农作物种子的发芽有抑制作用。在GB 2440—91尿素标准中，缩二脲是用分光光度法进行测定，操作繁琐，分析时间长。本文采用反相高效液相色谱法，利用了HPLC中紫外一可见测器的高灵敏度的特点，建立了尿素中缩二脲的分析方法，操作简便，灵敏，结果准确。

1，实验部分

1.1仪器与试剂日本岛津高效液相色谱仪(配有LC一10ATvP溶剂输送泵，SPD一10A VP紫外一可见检测器，CTO一10AS VP柱温箱，7725i进样器，

C—R8A数据处理器)。

缩二脲为分析纯，使用前需提纯。氨水(优级纯)，高氯酸(优级纯)；丙酮(优级纯)；尿素(农业用优等品)。水为二次蒸馏水，经0．45μm滤膜过滤。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件色谱柱L—column ODS 4.6mm*250mm；流速0.8mL／min；柱温5O℃；纸速0．5cm/min；检验波长190nm；流动相：99份的去离子水与1份的25％氨水(分析纯)混合，用高氯酸(分析纯)调节pH值为6.5。进样量1OμL 。

1.2.2 缩二脲标准溶液的配制缩二脲的提纯，先用氨水洗涤缩二脲，然后用水洗涤，再用丙酮洗涤以除去水，最后于105~C左右在干燥箱中

干燥。称取提纯的缩二脲0.0500g，溶于水的定容于250mL容量瓶中，移取5mL定容于200mL容量瓶中，此溶液中缩二脲浓厚度为5μg/mL。

1.2.3 尿素样品的配制称取尿素2.0000g，用水溶解后定容于250mL 容量瓶中，移取5mL定容于200mL容量瓶中，此溶液中尿素浓度为0.2mg ／mL。

1.2.4 测定方法分别取经0.45μm滤膜滤过尿素

样品溶液和缩二脲标准溶液各进样10μL，按外标法以

峰面积计算含量。其色谱图见图1和图2。

2 结果与讨论

2.1 测定波长的确定在波长为190nm 、195nm、200nm、205nm、240nm 下，将含有缩二脲5μg/mL溶液分别进10μL，结果见表l。随波长的增大，峰面积在减小。波长在190nm处，峰面积最大，确定检测波长为190nm。

2.2 流动相的选择因所测定

物质结构中含有胺根，选用高氯酸作为离子对试剂，用

氨水是为了调节流动相的pH值使之与测定溶液的pH

值相近。经多次试验，最终确定上述流动相的配制和

流速。

2.3 线性关系称取0.0500g缩二脲，溶解定容于

250mL容量瓶中，分别移取lmL、2mL、5mL、7mL、

10mL、15mL，定容于200mL容量瓶中，配制成每1 mL

含有1μg、2μg、5μg、7μg、10μg、15μg缩二脲，色谱进样量1Oμg，结果见表2。

A = 60189 C - 4989

相关系数为0．999。结果表明，缩二脲在1-15μg/mL范围内质量浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.4 精密度试验将5 μg/mL的缩二脲溶液和0.2mg／mL的尿素溶液分别连续进样，每次进样量1Oμg 。缩二脲峰面积的RSD(n=6)分别为

1.08％、0.18％。结果见表3。

2.5 回收率试验准确移取2ml的尿素样品(8rag／mL)6份于200mL容

量瓶中，其中一份作本底，另5份分别再移取1mL、2mL、5mL、7mL、10mL、12mL的缩二脲标准溶液(0.2mg／mL)，定容。按实验方法测定回收量，根据加入量与回收量计算回收率，结果见表4。说明HPLC法测定尿素产品中缩二脲的回收率良好。

2.6 分光光度法与反相高效液相色谱法检测3批不同尿素样品的结果比较。两种测定方法的平均绝对差值为0.03％，符合GB 2440—91尿素标准中规定的绝对差值不大于0.05％。

参考文献

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20o0

[5] 有机化工产品及试验方法标准汇编，中国标准出版社，

199I2

[6] 化验员实用手册，化学工业出版社，1999

作者简介：石立军，男，(1973一)，1995年7月毕业于宁夏大学

化学系化学分析专业，现就职于宁夏大荣化工冶金有限公司质

检科。

尿素测定方法

实验十七实验名称：尿素的测定实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒实验原理：尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。操作方法： 1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液 2、按下列顺序加入各试剂单位ml 空白标准样本蒸馏水0.01 —— 样本－－0.01 标准液－0.01 －工作液 1.0 1.0 1.0 3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA 实验现象与数据：记录ΔA 结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l）参考范围：1.7-8.3mmol/l 临床意义：实验十八实验名称：血清尿酸的测定实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。操作方法：按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.025 －标准液0.025 －－蒸馏水－－0.025 酶试剂 1.0 1.0 1.0 混匀37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A 结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L

尿素缩二脲分光光度法

FNCPFL0003 尿素缩二脲含量的测定分光光度法 F_NCP_FL_ 0003 尿素－缩二脲含量的测定－分光光度法 1 范围本方法适用于由氨和二氧化碳合成制得的工、农业用尿素中缩二脲含量的测定。 2 原理缩二脲在硫酸铜、酒石酸钾钠的碱性溶液中生成紫红色配合物，在波长为550nm处测定其吸光度。 3 试剂 3.1 硫酸铜溶液（CuSO4 · 5H2O），15g/ L 3.2 酒石酸钾钠碱性溶液(NaKC4H4O6 · 4H2O)，50g/L 称取50g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O)溶解于水中，加入40g氢氧化钠，稀释至1L。 3.3 缩二脲标准溶液，2g/ L 用氨水溶液(1+9)洗涤缩二脲(NH2CONHCONH2)，然后用水洗涤，直至除去氨水，再用丙酮洗涤除去水，最后在105℃左右干燥。称取2.00g缩二脲[(CONH2)2NH]，溶于约450 mL水中，用硫酸溶液(3+1000)或氢氧化钠溶液(4 g/L)调节溶液的pH为7，移入1000mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀。 4 仪器设备一般实验室仪器和 4.1 水浴，30℃±5℃； 4.2 分光光度计，带有3cm的吸收池。 5 分析步骤 5.1 标准曲线的绘制 5.1.1 标准比色溶液的制备按表1所示，将缩二脲标准溶液依次分别注入八个100 mL容量瓶中。表1 缩二脲标准溶液加入量缩二脲标准溶液体积，mL 缩二脲的对应量，mg 0 0 2.50 5.00 5.00 10.0 10.0 20.0 15.0 30.0 20.0 40.0 25.0 50.0 30.0 60.0 每个容量瓶用水稀释至约50mL，然后依次加入20.0mL酒石酸钾钠碱性溶液和20.0mL 硫酸铜溶液，摇匀，稀释至刻度，把容量瓶浸入30℃±5℃的水浴中约20min，不时摇动。 5.1.2 吸光度测定将30min内，以缩二脲为零的溶液作为参比溶液，在波长550nm处，用分光光度计分别测定标准比色溶液的吸光度。 5.1.3 标准曲线的绘制以100mL标准比色溶液中所含缩二脲的质量（mg）为横坐标，相应的吸光度为纵坐标作图，或求线性回归方程。 5.2 测定 5.2.1 试液制备

反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量

实验一反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量一．实验目的 1. 熟悉液相色谱仪的基本构造和操作方法 2. 学会利用外标法对物质进行色谱定量分析二．仪器与试药仪器：高效液相色谱仪（日本岛津10AVP型）、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器试药：甲醇、乙腈、超纯水、咖啡因对照品三、色谱条件色谱柱：C18（250×4.6，5um）流动相：甲醇-乙腈-水=45：10：45 （v/v）检测器及检测波长：紫外检测器280nm 流速：0.6ml/min 四、实验操作 1．对照品溶液的配制：准确称取咖啡因对照品适量，用乙腈：水（1:1）混合溶剂配制成1.0mg/mL 咖啡因储备液；分别移取10μL、20μL、30μL、40μL咖啡因储备液，用超纯水定容至5mL，配制成浓度为2.0μg/mL、4.0μg / mL、6.0μg /mL、8.0 μg/mL的一系列对照品溶液，备用。 2. 样品溶液的配制：准确称取0.035g茶叶, 加乙腈：水（1:1）混合溶剂8mL，超声提取10min，用超纯水定容至10mL，过滤并稀释20倍，备用。 3. 调用或创建咖啡因测定方法并运行方法 4. 测定：待基线平稳后，分别吸取25μL对照品溶液和样品溶液进样。五、数据处理及计算以对照品溶液峰面积与对应含量绘制工作曲线，根据样品溶液峰面积在曲线上查出其进样时含量，并计算得到茶叶中咖啡因的百分含量。六、思考题 1．液相色谱与气相色谱相比较有哪些不同？ 2. 如果用液相色谱法测定可乐中咖啡因，样品应该如何处理？

附：岛津10AVP型高效液相色谱仪操作一、开机 1．打开计算机。 2．开启高效液相色谱仪各部件电源开关（脱气机→A泵→B泵→检测器→柱温箱→主控器）。 3．待高效液相色谱仪各部件自检完毕，在计算机上启动化学工作站ClassVP 并点击Instrument ，输入用户名和密码，点击确定。二、实验参数的设置在Method下，进行操作： 1．单击溶剂瓶图标，设置所用溶剂瓶中溶剂量后，点击OK；单击高压泵图标，设置泵流速0.6mL·min-1，梯度洗脱溶剂B（水）0%，最高柱压设为2.0×107 Pa。 2．单击色谱柱图标，设置柱温箱温度为25℃。 3．单击检测器图标，设置检测波长为280nm，，数据采集时间7min。四、运行样品 1．打开Purge阀。 2．运行Instrument菜单下System On命令启动系统（或单击各图标的on图标启动系统）。 3．待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。 4．待基线稳定之后，单击single run, 进行样品信息编辑。 5. 用微量进样器进样后，扳动手动进样阀至Inject位置，仪器自动开始纪录。 6．待测物出峰完全后，按F8停止采集数据。五、实验数据处理 1．定性、定量分析参数的设定（1）一级校正表的建立 ①在Data Analysis界面下，点击File菜单下的Load Signal，调用低浓度标样的实验结果。 ②优化谱图：打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进入Signal Option编辑框，在Range选择中选择Use Range，输入适当的参数。 ③优化积分：在Data Analysis 界面下，单击Integration菜单，选择Integration Event，选择适当的参数，编辑积分项目。

饲料中尿素含量的测定——比色法

饲料中尿素含量的测定（非国标） ——比色法一、适用范围本方法适用于动物饲料及其原料中尿素含量的测定二、原理由于对-二甲胺基苯甲醛（DMAB，Ehrilich’S试剂）与尿素可形成有颜色的复合物，并可用分光光度计在420nm处进行比色，以求出尿素的含量三、仪器与试剂 1、分光光度计420nm，1cm吸收池本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 2、DMAB溶液溶解16g DMAB于1000mL甲醇中，再加入100mol/L盐酸，该溶液在1个月内是稳定的。 3、乙酸锌（Zn（Ac）2.2H2O）溶液称取22.0克乙酸锌溶于蒸馏水中，再加入3mL乙酸，然后稀释至100mL 。4、亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6.3H2O）溶液溶解10.6g 亚铁氰化钾于蒸馏水中，再稀释至100mL。 5、磷酸缓冲液（PH6—7.0）先分别溶解3.403g磷酸二氢钾和4.355g磷酸氢二钾100mL蒸馏水中，然后将两溶液合并在一起，再用水稀释至1000mL。 6、木炭Daroa G60 7、尿素标准溶液：称取5g（准确至1mg）尿素（试剂级）溶解于水，再稀释至1000mL作为储备液（5mg/mL）工作液：0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8和2.0尿素/5mL。吸收储备液各2 4 6 8 10 12 14 16 18和20mL 分别置于250mL容量瓶中，并用磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度。 8、参比溶液用含1.0mg尿素/5mL的标准溶液作为参比溶液。如置于24℃以下环境，该参

比溶液可稳定一周。四、标准曲线的制备吸取不同浓度的尿素工作标准溶液5mL ，分别置于20mmX150mm（25mL）的比色管中，各加入5mL DMAB溶液。另外，制备一空白对照液，即吸取5mL DMAB溶液和5mL磷酸缓冲液于25mL比色管中。然后，将所有比色管轻轻充分摇动，并置于25℃水浴中放置10min。然后，用空白对照调节吸光度0点。用1Cm 吸收池于420nm处读取各溶液的吸光度值。然后用吸光度对尿素浓度做图，得一条直线。否则，应将该批号的DMAB溶液重做一次。五、测定步骤称取1.00g粉碎的样品置于500mL容量瓶中，加入1g木炭，约250mL水，5mL乙酸锌溶液和5mL铁氰化钾溶液，机械振摇30min，并用水稀释至刻度，静置至沉淀下沉。用滤纸过滤，收集上清溶液。吸取5mL溶液于比色管中，加入5mLDMAB溶液，并充分振摇。每组样品均应带一参比标准（5mL参比溶液和5mL DMAB溶液）及一个空白对照液。于25℃水浴中放置100min。以空白对照液为对照，读取420nm的吸光度。六、测定结果的计算：由标准曲线查得的浓度（mg/5mL）X100 尿素（%）=-------------------------------------------------------- 样品重X1000/500 （1.0 X A样品）X1000 或尿素（%）=------------------------------------------- A标准X所测定的样品重（mg）

尿素的标准化学知识点归纳

尿素的标准化学知识点归纳尿素的标准化学知识点归纳尿素的标准 1主题内容与适用范围本标准规定了尿素的技术要求、试验方法、检验规则以及标志、包装、运输和贮存。本标准适用于由氨和二氧化碳合成制得的尿素。其主要用途为农业肥料、塑料、树脂、涂料、医药等工业部门的原料。分子式：CO(NH2)2 相对分子质量：60.055(根据1987年国际相对原子质量表) 2引用标准 GB/T2441尿素总氮含量的测定蒸馏后滴定法 GB/T2443尿素中缩二脲含量的测定分光光度法 GB/T2444尿素中水分的测定卡尔·费休法 GB/T2445工业用尿素铁含量的测定邻菲 GB/T2446工业用尿素碱度的测定容量法 GB/T2447工业用尿素水不溶物含量的测定重量法 GB/T2448尿素粒度的测定筛分法 GB8569固体化学肥料包装 GB/T13256工业用尿素硫酸盐含量的.测定目视比浊法 3技术要求

3.1外观：颗粒或结晶。 3.2尿素应符合表1的要求：表1尿素技术指标％指标名称:工业用农业用优等品一等品合格品优等品一等品合格品总氮(N)含量(以干基计)≥46.346.346.346.346.346.0 缩二脲含量≤0.50.91.00.91.01.5 水分(H2O)含量≤0.30.50.70.50.51.0 铁含量(以Fe计)≤0.00050.00050.0010 碱度(以NH3计)≤0.010.020.03 硫酸盐含量(以SO4-2计)≤0.0050.0100.020 水不溶物含量≤0.0050.0100.040 粒度(φ0.85～2.80mm)≥909090909090注：结晶状尿素不控制粒度指标。4试验方法 4.1总氮含量的测定按照GB/T2441的规定进行。 4.2缩二脲含量的测定按照GB/T2443的规定进行。 4.3水分的测定按照GB/T2444的规定进行。 4.4铁含量的测定按照GB/T2445的规定进行。 4.5碱度的测定按照GB/T2446的规定进行。 4.6硫酸盐含量的测定按照GB/T13256的规定进行。 4.7水不溶物含量的测定按照GB/T2447的规定进行。 4.8粒度的测定按照GB/T2448的规定进行。 5检验规则

影响反相高效液相色谱分离的因素

实验二影响反相高效液相色谱分离的因素一、实验目的 1. 了解高效液相色谱仪器结构； 2. 熟悉溶质结构、溶剂组成和固定相对溶质保留值的影响； 3. 了解影响反相高效液相色谱分离的因素。二、实验原理 1. 反相色谱保留机制：疏溶剂理论溶质的疏水性、流动相的极性（表面张力）和固定相的烷基链长影响溶质的保留。 2. 影响溶质分离的因素 n ：柱长、柱效 α：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等 k ：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等三、实验条件色谱柱：C18（150 mm×4.6mm ；250 mm×4.6mm ）流动相：甲醇-水（100，95/5，90/10）；流速：1.0（0.8，0.6，）mL·min -1 检测：UV 254 nm 样品：苯、萘、蒽四、操作步骤 1. 流动相组成对分离的影响在C18（150 mm×4.6mm ）和1.0 mL·min -1流速下，依次更换流动相，在每个体系中，均注入 2. 流动相流速对分离的影响在C18（150 mm×4.6mm ）和甲醇-水（90/10）下，依次更换流动相流速，在每个体系中，均 ??? ??+??? ? ??-= k k ααR ,,11n 4 11212

注入5 μL苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的n、k和R。 3. 柱长对分离的影响更换色谱柱，在甲醇-水（90/10，v=1.0 mL·min-1）体系中，注入5 μL苯-甲苯-萘混合样品，、α和R。记录色谱图，计算对应的k 五、数据处理 1.根据操作步骤1，绘制lgk～CH3OH％曲线。 2.根据操作步骤1、2和3，说明流动相组成、流速和柱长对k和R的影响。六、思考题 1.根据本实验的主要结论，指出下列各组物质在反相色谱中的洗脱顺序。（1）苯、苯酚和萘；（2）苯酚、邻甲酚和2,4-二甲酚；（3）正丁醇、仲丁醇和叔丁醇 2. 在反相柱上欲分离三个相邻的组分，初试未达到完全分离。如何实现完全分离？

反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸

分析化学实验报告实验名称：反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸专业：化学教育班级：11化学班姓名：指导教师：郭老师日期：2013.9.7

一、实验目的 1、学习高效液相色谱仪的操作。 2、了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。一、实验原理苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶，具有苯或甲醛的臭味。熔点122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15/4℃）。在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂。在酸性条件下，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，但对产酸菌作用较弱。抑菌的最适pH值为2.5～4.0，一般以低于pH值4.5～5.0为宜。在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，最大使用量不得超过2.0g/kg；在果酱(不包括罐头)、果汁(味)型饮料、酱油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在软糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低盐酱菜、酱类、蜜饯，最大使用量0.5g/kg；在碳酸饮料中最大使用量0.2g/kg。用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分（如：柠檬酸（钠）、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰面积A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的苯甲酸含量。三、仪器和试剂 1、Agilent 1220高效液相色谱仪。 2、色谱柱：Kromasil C18，5μ 150×4.6mm。 3、流动相：75%甲醇（色谱纯）+25%PH=3.3的磷酸缓冲溶液（过三次）。 4、苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用过三次的蒸馏水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀释至刻度。标样浓度217μg·mL-1。 4、测饮料试液：雪碧四、实验内容

尿素合成中缩二脲含量的测量及控制

第一章尿素 1.1 尿素简介尿素是人工合成的第一个有机物，是一种高浓度氮肥，属中性速效肥料，也可用了生产多种复合肥料。在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。畜牧业可用作反刍动物的饲料。但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5％。缩二脲含量超过1％时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。尿素广泛存在于自然界中，如新鲜人粪中含尿素0.4％。尿素产量约占我国目前氮肥总产量的40％，是仅次于碳铵的主要氮肥品种之一。尿素作为氮肥始于20世纪初。20世纪50年代以后，由于尿素含氮量高(45％～46％)，用途广泛和工业流程的不断改进，世界各国发展很快。我国从20世纪60年代开始建立中型尿素厂。1986～1992年，我国尿素产量均在900万吨以上。目前占氮肥总产量的40％。尿素分子式是CO(NH2)2，因为在人尿中含有这种物质，所以取名尿素[1]。尿素含氮(N)46％，是固体氮肥中含氮量最高的。工业上用液氨和二氧化碳为原料，在高温高压条件下直接合成尿素，化学反应如下： 2NH3+CO2→NH2COONH4→CO(NH2)2+N2O 尿素易溶于水，在20℃时100毫升水中可溶解105克，水溶液呈中性反应。尿素产品有两种。结晶尿素呈白色针状或棱柱状晶形，吸湿性强。粒状尿素为粒径1～2毫米的半透明粒子，外观光洁，吸湿性有明显改善。20℃时临界吸湿点为相对湿度80％，但30℃时，临界吸湿点降至72.5％，故尿素要避免在盛夏潮湿气候下敞开存放。目前在尿素生产中加入石蜡等疏水物质，其吸湿性大大下降。尿素是生理中性肥料，在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5％。缩二脲含量超过1％时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。

反相高效液相色谱法

反相高效液相色谱法鬼针草为菊科植物鬼针草属多种植物的全草，药材资源丰富，广泛分布于热带及温带地区，遍布全国各地，极易采集。根据文献报道，鬼针草属多种植物含有槲皮素成分［1］；槲皮素具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、镇痛、抗血小板聚集、扩张冠状动脉等作用［2～4］。《中国药典》尚未收载鬼针草药材的质量标准。《贵州中药材标准》收载三叶鬼针草BidenspoilsaL.、鬼针草BidensbipinataLinn.的干燥全草，《湖南中药材标准》收载三叶鬼针草BidenspoilsaL.的干燥地上部分，《甘肃中药材标准》1995年收载鬼针草BidensbipinataLinn.，《广西中药材标准》1990年收载三叶鬼针草BidenspoilsaL.、白花鬼针草BidenspoilsaL.var.radiataSch.-Bip. 的干燥全草，河南中药材标准1991年收载三叶鬼针草BidenspoilsaL.、鬼针草BidensbipinataLinn.、金盏银盘 Bidensbiternata(Lour.)Merr.EtSherff.的干燥全草，《上海中药材标准》收载鬼针草BidensbipinataLinn.（婆婆针）的干燥地上部分［5］。从国内地方标准收载情况能够看出全国各地均有广泛的应用，入药部位为全草或地上部分，本实验拟采用RP-HPLC法建立鬼针草属药材中槲皮素的含量测定方法并比较鬼针草不同药用部位和不同种中槲皮素的含量，为该类药材的传统入药部位是否准确和质量评价提供参考依据。 1仪器与材料美国waters2695高效液相色谱仪，VWD检测器；鬼针草采自云南红河州、广西，经刘圆副教授和戴斌教授鉴定为菊科鬼针草属植物狼杷草BidenstriparticaLinn.，白花鬼针草 BidenspilosaL.var.ratiataSch-Bip.，婆婆针BidensbipinataLinn.，三叶鬼针草BidenspilosaLinn.的干燥全草；槲皮素（批号081-9304，中国药品生物制品检定所，含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其余试剂均为分析纯。

反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂

反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂建立了同时检测化妆品中24种防腐剂含量的反相高效液相色谱法（RP2HPLC）。采用KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH=4.26）为流动相，梯度洗脱。样品经甲醇超声提取，然后采用RP2HPLC2二极管阵列检测法测定，对样品前处理和色谱条件进行研究和优化。 1引言化妆品中的防腐剂是为了使化妆品在生产、使用和保存过程中免受微生物污染的一类化妆品添加剂。但大多数防腐剂对人的皮肤会产生不同程度的刺激。因此，化妆品中防腐剂的用量必须以安全性作为前提。我国《化妆品卫生规范》对化妆品中防腐剂的使用浓度和范围做了相关的规定。目前，国内外对化妆品中防腐剂的测定一般多采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱质谱法、胶束电动色谱法、毛细管电泳法和伏安法等，而同时测定的防腐剂一般仅为4～8种，最多可同时测定18种，采用的方法均为气相色谱-质谱法。本实验研究了化妆品中的24种常用防腐剂的样品前处理方法和HPLC分离条件，建立了化妆品中24种常用防腐剂同时检测的HPLC法。结果表明，本方法简便、快速、准确，应用于实际化妆品中防腐剂的测定，结果满意。 2实验部分2.1仪器与试剂高效液相色谱仪（美国Agilent1100系列），由四元低压泵、柱温箱、二极管阵列检测器及自动进样器组成；KQ-600型超声波清洗仪器（昆山市超声仪器有限公司）。对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、水杨酸、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、苯甲醇、苯氧基乙醇、4-氯-3-甲苯酚、三氯生及三氯卡班（Sigma公司）；苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、苯甲酸苯酯及溴硝丙醇（AcrosOrgnics公司）；2，4-二氯-3，5-二甲酚、对羟基苯甲酸异丙酯、2-苯酚、4-氯-3，5-二甲酚、对羟基苯甲酸异丁酯及2-苄基-4-氯酚（东京化成工业株式会社）；苯甲酸、山梨酸（国家标准物质中心）。乙腈为色谱纯，甲醇为优级纯；无水乙醇、四氢呋喃等试剂均为国产分析纯；Millipore超纯水。 2.2标准品混合溶液和供试品溶液的制备分别准确称取一定量的24种防腐剂标准品，用甲醇溶液定容，配制成2g/L的标准储备液。分别移取一定体积的上述标准储备液至100mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成混合标准储备液。准确称取化妆品0.2g（精确到0.001g）于50mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，超声提取30min，取部分溶液放入离心管中，在离心机上以5000r/min高速离心10min后，取上清液经0.22μm滤膜过滤，滤液供RP-HPLC检测。 2.3色谱条件色谱柱：伊利特KromasilC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A.甲醇，B.0.025mol/LNaH2PO4溶液，pH4.26。线性梯度洗脱条件见表1。流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：程序可变波长扫描；进样量：10μL。 3结果与讨论3.1流动相的选择3.1.1缓冲溶液pH的选择在24种防腐剂中，受pH影响的只有苯甲酸、山梨酸和水杨酸。因此，着重考察了不同pH值（2.5～5.5）对以上3种酸分离情况的影响。发现在pH4.26时，苯甲酸、山梨酸和水杨酸能与溴硝丙醇、苯甲醇、苯氧基乙醇和对羟基苯甲酸甲酯达到很好的分离，峰形良好。 3.1.2NaH2PO4浓度的选择在考察了0.01、0.025和0.05mol/LNaH2PO4溶液对分离的影响后，发现0.025mol/LNaH2PO4可达到较好的分离，且峰形良好。 3.2检测波长的选择通过全波长扫描可得到24种物质各自的吸收图谱。综合各物质在不同波长下的响应值和不同波长对基线的影响，最终确定采用程序可变波长进行扫描，即根据不同组分的出峰顺序，在不同时间段，分别用各组分的最佳吸收波长进行检测，从而提高检测的灵敏度，达到最佳的扫描效果。

尿素软膏中尿素含量的测定

尿素软膏中尿素含量的测定首都医药1999年第2期第6卷药检技术作者：姜厚德单位：安徽省金寨县青山镇卫生院(237331) 关键词：尿素；非水滴定；含量测定摘要用非水滴定法测定尿素软膏中尿素含量，并用B.P法作比较，二者测定结果较接近，用于测定自制尿素软膏的尿素含量也全部合格。此法关键是用醋酐增强了尿素的碱性而使滴定终点突跃明显；加入苯溶解凡士林，排除了在测定过程中的干扰。尿素(Urea)为脱水药，作用与山梨醇相似，外用可抗菌、止痒及软化角质。尿素软膏为皮肤科常用制剂。英国药典(BP)和美国药典(USP)对尿素的制剂和原料的含量测定均采用凯氏定氮法，当测定软膏时，常因基质的突然沸腾而导致失败。笔者采用非水滴定法测定尿素软膏中尿素的含量，取得较好效果。 1实验依据由于尿素是极弱的碱(Kb＝1.5×10-14)，在水和冰醋酸中都不能进行滴定，为增强滴定突跃，故采用增强尿素的碱性以便直接滴定。 2试药和仪器尿素、高氯酸、盐酸、醋酐均为AR；25型酸度计(上海雷磁仪器厂)，S648型电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂)。 3方法和结果 3.1通过多次筛选和实验，取能实现明显滴定终点突跃的醋酐-苯(1∶1v/v)为溶媒。 3.2准确称取干燥至恒重的尿素5份，用电位滴定法，甘汞电极和玻璃电极分别为参比电极和指示电极，加结晶紫指示液3滴，用0.1mol HClO4液滴定，经酸度计测量加入不同体积时所对应的电位值，画表求得△E/△V的最大值为400mv，5份供试品的终点颜色均为刚转黄色。

3.3精密称取15%尿素软膏0.5g，加入醋酐-苯10ml，置水浴上加热并振摇使溶解，放冷，加入结晶紫指示液3滴，用0.1mol HClO4液滴定至恰显黄色，并将结果用空白校正，即得(每1mol/ml hClO4液和0.006006g的CH4NO相当)。 3.4精密称取干燥至恒重的尿素8份，各用4份分别以B.P法和本法测定，平均含量分别为98.40%和98.47%，比较接近一致。 3.5回收率测定：精密称取干燥至恒重的尿素约75mg，加入凡士林0.5g，按本法进行，以B.P法测得的含量98.4%为标准，计算称取量中含尿素的量。计算结果平均回收率为100.03%。再用本法对本院制剂室自制的15%尿素软膏进行含量测定，结果全部合格。 4讨论 4.1本法为利于溶解凡士林及作为惰性溶媒，故加入苯。 4.2加入醋酐旨在提高尿素的碱性，因为醋酐含乙酰阳离子〔(CH3CO)3＋O〕，比醋酸含质子〔CH3COOH2＋〕的酸性更强。 4.3非水滴定法简便易行、快速准确，适合医院制剂室作为中间品质量控制和含量测定的方法。

尿素检测流程

实验室分析方法名称：尿素—尿素的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定尿素中尿素的含量。本方法适用于尿素。方法原理：供试品照氮测定法测定，用盐酸滴定液滴定，根据滴定液使用量，计算尿素的含量。试剂： 1. 盐酸滴定液(0.2mol/L) 2. 3%硫酸铜溶液 3. 硫酸 4. 20%氢氧化钠溶液 5. 锌粒 6. 4%硼酸溶液 7. 甲基红指示液 8. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液 9. 基准无水碳酸钠仪器设备：试样制备： 1. 盐酸滴定液(0.2mol/L) 配制：取盐酸18.0mL，加水适量使成1000mL，摇匀，得0.2mol/L盐酸滴定液。标定：取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.3g，精密称定，加水50mL使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL盐酸滴定液（0.2mol/L）相当于10.60mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度。 2.甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4mL使溶解，再加水稀释至200mL。 3. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀。操作步骤：精密称取供试品约0.15g，置凯氏烧瓶中，加水25mL、3%硫酸铜溶液2mL与硫酸8mL，缓缓加热至溶液呈澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷，加水100mL，摇匀，沿瓶壁缓缓加20%氢氧化钠溶液75mL，自成一液层，加锌粒0.2g，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接，并将冷凝管的末端伸入盛有4%硼酸溶液50mL的500mL锥形瓶的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，俟氨馏尽，停止蒸馏，馏出液中加甲基红指示液数滴，用盐酸滴定液(0.2mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL盐酸滴定液(0.2mol/L)相当于6.006mg的CH4N2O。

尿素的标准

尿素的标准 1 主题内容与适用范围本标准规定了尿素的技术要求、试验方法、检验规则以及标志、包装、运输和贮存。本标准适用于由氨和二氧化碳合成制得的尿素。其主要用途为农业肥料、塑料、树脂、涂料、医药等工业部门的原料。分子式：CO(NH2)2 相对分子质量：60.055(根据1987年国际相对原子质量表) 2 引用标准 GB/T 2441 尿素总氮含量的测定蒸馏后滴定法 GB/T 2443 尿素中缩二脲含量的测定分光光度法 GB/T 2444 尿素中水分的测定卡尔·费休法 GB/T 2445 工业用尿素铁含量的测定邻菲 GB/T 2446 工业用尿素碱度的测定容量法 GB/T 2447 工业用尿素水不溶物含量的测定重量法 GB/T 2448 尿素粒度的测定筛分法 GB 8569 固体化学肥料包装 GB/T 13256 工业用尿素硫酸盐含量的测定目视比浊法 3 技术要求 3.1 外观：颗粒或结晶。 3.2 尿素应符合表1的要求：表 1 尿素技术指标％指标名称: 工业用农业用优等品一等品合格品优等品一等品合格品总氮(N)含量(以干基计) ≥46.3 46.3 46.3 46.3 46.3 46.0 缩二脲含量≤0.5 0.9 1.0 0.9 1.0 1.5 水分(H2O)含量≤0.3 0.5 0.7 0.5 0.5 1.0 铁含量(以Fe计) ≤0.0005 0.0005 0.0010 碱度(以NH3计) ≤0.01 0.02 0.03 硫酸盐含量(以SO4-2计) ≤0.005 0.010 0.020 水不溶物含量≤0.005 0.010 0.040 粒度(φ0.85～2.80mm) ≥90 90 90 90 90 90 注：结晶状尿素不控制粒度指标。 4 试验方法 4.1 总氮含量的测定按照GB/T 2441的规定进行。 4.2 缩二脲含量的测定按照GB/T 2443的规定进行。 4.3 水分的测定按照GB/T 2444的规定进行。 4.4 铁含量的测定按照GB/T 2445的规定进行。 4.5 碱度的测定按照GB/T 2446的规定进行。 4.6 硫酸盐含量的测定按照GB/T 13256的规定进行。 4.7 水不溶物含量的测定按照GB/T 2447的规定进行。 4.8 粒度的测定按照GB/T 2448的规定进行。 5 检验规则 5.1 尿素应由生产厂的质量检验部门进行检验，生产厂应保证每批出厂的尿素都符合本标准要求，每批出厂的尿素都应附有一定格式的质量证明书，证明书包括下列内容：生产

实验十二反相高效液相色谱法测定尼泊金酯

11 实验六反相高效液相色谱内标定量法测定尼泊金酯预习提示 1. 液相色谱仪的基本结构及操作技术 2. 什么是反相液相色谱，反相高效液相色谱的分离特点是什么。 3. 相对校正因子的意义及测定方法 4. 色谱分析内标定量法的原理及操作要点。一、目的要求 1. 熟悉高效液相色谱仪器基本结构及操作技术； 2. 掌握HPLC 保留值定性方法和内标定量方法。（了解定制报告编辑方法）。二、基本原理 1. 高效液相色谱是以液体为流动相的色谱。其分离原理是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。正相色谱体系是固定相的极性大于流动相的极性，反之亦然。尼泊金酯（对羟基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均属于强极性化合物，可用反相HPLC 进行分析，选用非极性的C 18烷基键合固定相，甲醇水溶液作流动相。 2. 色谱保留值法定性的依据在一定色谱条件下，每一种物质都有一个确定的保留值和它相对应。 3. 色谱定量依据 A m i i ∝ A f m i i i ' = 绝对校正因子 A m f i i i = ' 不易测定（相对）校正因子 A A m m A m A m f f f i s s i s s i i s i i ?== = '' 4. 对于试样中某一种或几种组分定量测定时可用内标定量法。内标法要领：定量试样m 试样中加入定量内标物m s ，LC 分析后进行相对定量计算。内标法定量计算公式： )/(%ml ug A A f f V m c is i is i s is i ? ? = 内标物要求：试样中不存在的纯物质；加入量、理化性质、峰位置均与被测组分接近。三、仪器、试剂

尿素中氮的测定

序号 1 2 3 尿素的总质量氢氧化钠初读数氢氧化钠末读数 V(氢氧化钠) N的含量相对误差 S 计算T 查表后的T (置信界限为95%) N的含量尿素中氮的测定一、实验目的 1．学会用甲醛法测定氮含量，掌握简洁地定的原理。 2．学会铵根离子的强化，掌握是系统消化系统。 3．掌握容量瓶、移液管的正确操作。 4．进一步熟悉分析天平的使用。二、实验原理尿素是有机碱，不能被强酸直接滴定，需要先消化。尿素的消化尿素是有机碱。Kb=1.3* ,不满足弱碱被直接滴定的条件，可用浓硫酸将其转化为l硫酸铵。尿素经浓硫酸消化后转化为硫酸铵，过量的硫酸依甲基红为指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定至溶液从红色到黄色。铵根是弱酸，不能被强碱直接滴定，要把弱酸强化弱酸的强化铵根是一个弱酸可用甲醛将其转化，一反应式见书上，由于生成的是弱碱，化学计量点时溶液的PH为8.7，应选用酚酞为指示剂，溶液中有两种指示剂，在滴定前溶液为红色，滴入氢氧化钠溶液后，随着溶液氢离子的减少，颜色的变化顺序依次为红-橙（第一次）——黄——金黄色（第二次），第一次出现金黄时未到终点，此时是指示剂甲基红的颜色变化，待过纯黄后，再出现第二次金黄色时，已到终点，此时是指示剂酚酞的颜色变化。铵盐与甲醛的反映在室温中进行的较慢，加甲醛后，需放置几分钟，使反应进行完全。主要仪器：分析天平。250ml烧瓶三个，50ml滴定管，称量瓶，干燥器，量筒，250ml容量瓶主要试剂：NaoH溶液，酚酞指示剂，甲醛溶液，尿素试样

实验步骤：准确称量尿素试样0.5~0.6g于100ml烧杯中，加入6ml 浓硫酸，盖上表面皿。在通风处中缓缓加热，当有密集的CO2溢出时，移走煤气灯，直至无二氧化碳气泡冒出时，用大火加热至冒出的浓白烟又变稀时再加热2min.，在通风厨中冷却。吹洗表面皿和杯壁，加30ml纯水稀释，稍冷后完全转移至250ml 容量瓶中，稀释至标线，摇匀。准确移取25.00ml试剂三份，分别加3滴甲基红指示剂，先用2mol/l,后用0.1mol/l的NaoH 溶液中和过剩的硫酸至纯黄。取30ml的甲醛溶液，以酚酞为指示剂，用0.1mol/l的氢氧化钠溶液中和(甲醛与铵盐反应后生成的含H 化合物)至微红色，在中和好的消化液中，加入10ml甲醛溶液，充分摇动，放置五分钟。加入五滴1%的酚酞指示剂，溶液由红色至金黄色，至纯黄，最后到金黄色即为终点。思考题：中和硫酸过程中氢氧化钠的两是否要准确控制？若不足或过量时对实验结果由和影响？要准确控制，不足时氢氧化钠消耗偏大，实测出单的含量偏高，反之，过量则偏低。一、实验目的 1. 学习尿素试样测定前的消化方法。 2. 学习以甲醛强化间接法测定尿素中的氮含量的原理和方法。二、实验原理尿素CO(NH２)２经浓硫酸消化后转化为(NH４)２SO４，过量的H２SO４以甲基红作指示剂，

尿素中缩二脲含量测定结果的不确定度分析

尿素中缩二脲含量测定结果的不确定度分析 1、 1、概述： 1.1测量方法：依据GB/T2441.2-2001《尿素测定方法缩二脲含量的测定》。 1.2测量仪器：721分光光度计。 1.3测量对象：尿素成品中缩二脲含量。 1.4测定过程：使用分光光度计测定按GB/T2441.2-2001配制的尿素样品溶液的吸光度，依据标准曲线计算，从而确定尿素样品中缩二脲的含量。 1.5评定结果的使用：适用上述条件所测得的尿素中缩二脲含量的结果。 2、数学模型依据GB/T2441.2-2001建立数学模型： 1010()/10:%; :w C C V m w C C V m L m g =-尿素样品中缩二脲的重量百分数；：标准曲线计算出尿素样品溶液中缩二脲质量浓度g/L ；：标准曲线计算出空白溶液中缩二脲质量浓度g/L ；：定容体积称取尿素样品的质量。 3、引入不确定度的几个方面分析标准曲线引入的不确定度1u ；天平称量样品引入的不确定度2u ；定容体积引入的不确定度3u ；吸光值引入的不确定度4u 。为方便计算，各分量均采用相对不确定度分析评定。 3．1标准曲线引入的不确定度1u 用缩二脲标准物质配制一组标准溶液，计算标准曲线： 0.72190.02A C =+ ，相关系数 0.9997r =。标准溶液吸光度的测量数据如下表：（略）根据CNAL 的《化学分析中不确定度评估指南》残余标准偏差按公式s = 0.003s = 0.04c u == 10()C C - 的不确定度100.06c c u -== 3．2 天平称量样品引入的不确定度2u 称量样品使用万分之一数字电子天平的不确度来源有：重复性、可读性、天平的灵敏度和线性产生的不确定度分量。 20.13u mg ==

反相高效液相色谱中缓冲体系的PH选择

反相高效液相色谱中缓冲体系的PH选择在反相高效液相色谱分析中，选择正确的缓冲液PH值，对可离解的化合物分析的重现性十分重要，不恰当的PH值可能导致不对称峰，宽峰，分裂峰或肩峰，而尖锐的，对称的峰是定量分析中获得低的检测限以，两次分析之间较低的相对标准偏差（RSD）和保留时间的高重现性的前提。我们将讨论在使用缓冲液时如何选择缓冲液的PH值，以及如何选择正确的缓冲体系。什么时候需要缓冲溶液？在反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5－7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从HH公式：PH＝Pka＋log（[A-]/[A]）得知，溶液PH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在PH值小于9时都被质子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的PH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，从表1 可值，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中，PH＝3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。为离子对试剂选择缓冲液为应用离子对试剂的方法选择缓冲液的过程是相似的，离子对试剂例如四丁基铵的盐，十四烷基磺酸钠等，在流动相中可与化合物中可离解的官能团配对，在缓冲液中以离子形式存在的化合物就需要应用离子对试剂。应用缓冲液PH值来调节方法选择性如前面提到的，氨基化合物的保留随PH的减小而降低，这个特性可以用来调节方法的选择性，如果两个化合物共流出，一个含有氨基，适当改变PH值就可以用来分离这一物质对。由于可离解化合物的选择性依靠PH值，所以变化PH值也可以用来鉴别未知化合物的官能团，如果PH值变小，出峰便快，则化合物中可能存在氨基，当PH变大,化合物出峰很快，或流出在死时间处，化合物可能是一种羧酸，因为羧基离子化后流出大大快于比质子化的中性化合物。总结正确选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰，捡出限，以及获得稳定的保留时间十分重要，如果你知道化合物官能团信息和化合物的Pka值这一过程将十分简单。

血清尿素的测定标准操作规程

血清尿素的测定标准操作规程【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。是研究药物肾毒性的重要指标之一。【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。根据颜色深浅确定尿素含量的多少。【试剂】 (1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。 (2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。 (3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。 (4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml. 【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。比色读取标准管及测定管的吸光度。【计算】【正常参考值】 2.86~8.20mmol/L 尿素