LB培养基配方
LB培养基
LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。
液态LB培养基固态LB培养基
液态培养基
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至
1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.
LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法
在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化钠(NaCl) 10g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)
固态培养基
LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。
LB固体培养基倒板
1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制 LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。 酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。 胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。 酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基配方(每升) 酵母提取物 5g 胰化蛋白胨 10g 氯化钠 10g NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。 LB固体培养基 LB培养基 1L
琼脂粉 15g NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。 有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。 LB培养基用途： 用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。 LB培养基使用原理： 蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。 LB培养基配制方法 配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH 至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。 1.LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板1。配制：100mlLB 培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。配400ml 的话成分按比例减少就行了，pH还是要按规定的。
lb培养基配方与tb培养基配方
lb培养基配方与tb培养基配方 LB培养基和TB培养基这两种培养基名字有点像，它们之间的区别在哪呢?首先是用途上，LB经常用来预培养菌种，而TB培养基则用于慢病毒载体等多种实验中，另外，两者的配方也是大有不同的。一起了解一下吧。 TB培养基的配方 去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g 酵母提取物24 g 甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方 10g NaCl 10g 蛋白胨5g酵母粉加去离子水至1L 调PH 7.0-7.2 分装灭菌即可用之 配方区别： TB培养基，Terrific肉汤(Terrific Broth，TB) 去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g， 酵母提取物24 g， 甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方如下： 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
培养基配方
一、LB培养基： Yeast extract 5 g/L Tryptone 10g/L Nacl 10g/L PH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。 二、YEB培养基: Yeast extract1 g/L Peptone(或Tryptone) 5 g/L Beef extract 5 g/L Sucrose 5 g/L MgSO4 2 mmol/L PH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。 三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L)： ① N6大量母液1：20×大量元素(1L)50ml KNO 3 56.6g (NH 4) 2 SO 4 9.26g KH 2PO 4 8g ②N6大量母液2：40×大量元素(500ml) 25ml CaCl 2·2H 2 O 3.32g ③N6大量母液3：40×大量元素(500ml) 25ml MgSO 4?7H 2 O 3.7g ④B5微量元素I：100×微量元素（1L） 10ml
溶液A： MnSO 4?H 2 O 781mg ZnSO 4?7H 2 O 200mg 溶于400ml无菌水溶液B： H 3BO 3 300mg KI 75mg 溶于400ml无菌水 然后缓慢将溶液A和溶液B混合，定容至1L ⑤B5微量元素II：1000×微量元素（500ml） 1ml Na 2MoO 4 ·2H 2 O 125mg CuSO 4·5H 2 O 12.5mg CoCl 2·6H 2 O 12.5mg ⑥B5维生素I：100×维生素（500ml） 10ml 盐酸硫胺素 500mg 盐酸吡哆醇 50mg 烟酸 50mg ⑦B5维生素II：100×维生素（500ml）10ml 甘氨酸 100mg ⑧200×铁盐(500ml) 5ml Na 2 -EDTA 3730mg FeSO 4·7H 2 O 2780mg ⑨ 2,4 D：100×2,4 D10ml 200mg 2,4 D，先溶于1ml 无水乙醇中，再定容到1L。
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
LB培养基中所用抗生素终浓度
抗生素的贮液和工作液浓度 ①以水为溶剂的抗生素贮存液应用 0.22 μm滤器过滤除菌； ②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌； ③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。 注意： 镁离子是四环素的拮抗剂。对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。 下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度 氨苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒） 羧苄青霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml（严紧型质粒）60 μg/ml（松弛型质粒） 氯霉素贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml（严紧型质粒）170 μg/ml（松弛型质粒） 卡那霉素贮液浓度10 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒） 链霉素贮液浓度50 mg/ml溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒） 四环素贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml（严紧型质粒）50 μg/ml（松弛型质粒） 质粒类型： DNA construct
Plasmids pUC vectors pBluescript? vectors pGEM? vectors pTZ vectorsOrigin of Replication Copy number Classification pMB1* ColE1 pMB1* pMB1*500–700 300–500 300–400 >1000high copy high copy high copy high copy pBR322 and derivatives pMB1* pACYC and derivativesp15A pSC101 and derivatives pSC101 Cosmids SuperCos pWE15pMB1*
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
培养基的制备
培养基的制备 一、配制原则和种类 （一）培养基配制原则 １、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。 ２、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。 （二）培养基的种类 １、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。 （１）天然培养基天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不恒定天然有机物配制而成的培养基，如各种农副产品及其下脚料──小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等，以及动植物组织的浸出液──牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基，这种培养基来源广，成本低，营养丰富，适合于在生产上大规模培养菌类使用，但这些天然有机物质因产地、品种、生长期的不同，化学成分不能宣。每批成分也不稳定，不宜用来做精细的科学实验。以分离驯化食用菌培养基（２）半合成培养基为了促进食用菌菌丝的生长发育，常在天然培养基中添加适量的无机盐类，或在合成培养基中添加适量的某些天然有机物，就成为半合成培养基。这类培养基种类繁多，应用广泛，也是生长菌种和实际栽培最常用的培养基。 （３）合成培养基是指采用化学成分已知的有机物（碳水化合物、含氮化合物、有机酸类）或无机物配制而成的培养基。这类培养基组成和含量明确，价格较贵，一般用于在实验室范围内做有关营养、代谢、菌种鉴定等有关于食用菌的生理生化研究。 ２、根据培养基制成后的物理状态，可将培养基分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。 （１）液体培养基根据食用菌所需的营养物质，扫一定比例配成营养液，叫液体培养基。液体培养基可进行营养源的筛选实验，以及生理生化方面如酶活力等研究，应用液体培养基生产的菌种也可在生产中进行使用。 （２）固化培养基将各种营养成份按比例配制成营养液后，加入适量固化剂，如琼脂，即可配成固化培养基。利用这种斜面试管可保藏及扩大菌种，同时亦可制成各种平皿固化培养基分离菌种。 （３）固体培养基利用各种富含纤维素和木质素的农林废弃物如木屑、棉籽壳、秸秆、玉米蕊等作为主要原料，再加入适量的米糠或麸皮和无机盐类制成固体培养基。该培养基可作为二、三级菌种生产用的培养基，也可以用它制成发酵草粉保藏菌种用的培养基。 二、一级种培养基 一级种又称母种，其培养基一般用试管作为容器，所以又称试管斜面培养基，这类培养
lb培养基的配置实验方案
实验LB培养基的配置 一、实验目的 明确培养基配置原理 通过对LB培养基的配置，掌握配置培养的一般方法 二、实验原理 LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 LB培养基的配方如下： 酵母提取物5g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15～20g 水1000mL pH 7.4～7.6 三、实验设备 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，
麻绳，纱布等。 四、实验试剂 酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH，1mol/L HCl； 五、操作步骤 1．称量 按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 2．溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3．调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH 偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl 进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
常用培养基的配制
常用培养基的配制 （一）营养琼脂培养基 【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。 【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基 【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。 （三）半固体培养基 【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。 （四）营养肉汤培养基 【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。 （五）葡萄糖蛋白胨水培养基 【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。 【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。 （六）伊红美蓝培养基（EMB培养基）
培养基的配制方法
实验一培养基的配制 生科三班李林40608143 2008.9.16 周二上午 一.实验目的： 1.明确配制微生物培养基的原理； 2.掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤； 3.掌握是湿热灭菌法的原理和操作。 二.实验原理： 膏蛋白胨培养基是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经过蛋白酶水解后，中间产物，含有胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，再加入的NaCl为细菌所需的无机盐，加入的自来水可提供微量元素。 配置好的培养基用湿热灭菌法进行灭菌。 三.材料和仪器： 1.试剂：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，1mol/L NaOH,1mol/L HCl 2.器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，沙漏，试管，玻棒等 3.其他：PH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，沙绳，灭菌锅等。 四.实验步骤： 1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白胨3g，氯化钠 1.5g，琼脂条 4.5g,水 300mL,PH7.2~7.4。 2.称取药品：按培养基配方及配量分别称取各药品，取少量水于烧杯中，将各 培养基成分（除琼脂）逐一加入水中待溶。 3.加热溶解：将搪瓷杯放到电热炉上，用文火加热，病不断搅拌，促使各药品 快速溶解，然后补充水分至所需培养基的量。 4.调节PH:初配好的牛肉膏蛋白胨，培养液是微酸性的，故需用1mol/L NaOH 调PH7.2~7.4。 5.加琼脂：向调好的培养基中加入琼脂条。 6.加棉塞：用8层纱布纸杯成通气塞，灭菌前将方形纱布盖在瓶口，将其中间 部位用手指塞入瓶口内，再将四角折叠成塞子状后加纸套包扎好，然后灭菌。 7.包扎：在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放 中防止尘埃等污染。 8.灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于121℃灭菌20min. 五.实验结果： 按照实验方法配制的培养基透明但有些发黄，说明说有物质均完全溶解，基本符合实验要求，颜色有些发黄可能是因为加入牛肉膏，也可能是因为加入牛肉膏的时候所用火温较高，使牛肉膏粘底了，稍有烧糊或烧焦了，致使培养基较黄。一周以后观察, 配制的无菌牛肉膏蛋白胨固体培养基中,无菌落生成,说明配制的培养基符合要求. 六.思考题：配制牛肉膏蛋白胨斜面培养基有哪些操作步骤，哪几步易出差错?如何防止 答：配方及配量，称取药品，加热溶解，调PH，加琼脂，加棉塞，包扎，灭菌。易出差错的步骤： （1）称药品的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴，
LB培养液的配制
1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。 2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。 三、灭菌和消毒 1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。 3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。 4．比较消毒和灭菌： 5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落了。
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
常用培养基配制
常用培养基
参考文献 1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用储存液
参考文献 1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液 10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS) /升终1 X浓度 NaCl 80.0 g 137 mM KCl 2.0 g 2.7 mM Na2HPO414.4 g 100 mM KH2PO4 2.7 g 2 mM H2O 至800 ml HCl 至pH 7.4 H2O 至1升 20X SSC /升终1 X浓度 NaCl 175.3 g 150 mM Na3citrate x H2O 88.2 g 15 mM H2O 至800 ml 1M HCl调节pH值至7.0
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制 培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。 一、组成培养基的五类成分 目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。 1.无机营养物 无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源 培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。 3.维生素 在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。 4.有机附加物 包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。 5.生长调节物质 常用的生长调节物质大致包括以下三类： (1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 (2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
LB培养基
LB培养基：10 g牛肉膏蛋白胨，5 g酵母浸膏，2 g氯化钠(NaCl)，0.1 g 葡萄糖(C6H12O6)，5 g乳酸钠(C3H5NaO3)溶于1 L水，自然pH值；固体培养基中加入2.5%的琼脂。 取制得的土壤样品用于分离筛选重金属抗性菌株，称取10 g晒干的土壤样品于150 ml已灭菌的锥形瓶中，加入10 ml灭菌培养基，于30 ℃培养箱中培养4 d，在火焰旁放入装有100mL无菌水的锥形瓶中，震荡10min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成稀释度为10-1的土壤悬液。 另取6支装有9ml无菌水试管，用特种铅笔编写10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，放在试管架上。让制好的10-1土壤悬液静止0.5min，取1支无菌移液管，从移液管包装纸上半段（近吸管口）撕口，将包装纸分成上下两段，去上段包装纸，左手持锥形瓶底，以右手掌及小指、无名指夹住锥形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞（棉塞夹在手上，不得放在桌面上），去下段包装纸，将移液管吸液端伸进锥形瓶内，吸取1ml土壤悬液（常用嘴巴吸取，也可用定量移液器或自动移液器吸取），右手将棉塞插回锥形瓶上，左手放下锥形瓶，换持编号为10-2的无菌水试管，在火焰旁拔出棉塞（试管塞），将移液管伸进无菌水试管内，放入土壤悬液，并在试管内反复吹吸3次，使之充分混匀，制成10-2土壤稀释液，取出移液管，插回棉塞（试管盖）。接着换一支无菌移液管，按照前面的方法从编号为10-2的试管中吸取1mL稀释液，加入编号为10-3的无菌水试管中，混匀后制成10-3土壤稀释液。继续上述操作，一次制成10-4、10-5、10-6土壤稀释液。 本次实验共取样6份，随机抽取两份土样，按照上述方法制备土壤稀释液Ⅰ组和Ⅱ组，待下面实验备用。 用移液枪从第Ⅰ组和第Ⅱ组的10-4、10-5和10-6稀释液中分别取0.1 ml 接种于含有重金属的LB固体培养基上(0，0.005,0.01,0.02,0.05,0.1g/L)，编号分别为A、B、C、D、E、F，轻轻转动平板，将菌液用三角棒涂布于培养基上，将平板倒置于30℃培养箱中培养5 d，观察菌落的形态，采用常规平板划线法分离纯化，并用相机拍照。重金属浓度逐级加大为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0g/L)培养，选取抗性最高的菌株。 扩大培养 将活化后的斜面菌种用5ml无菌水洗脱于装有200mlLB液体培养基的锥形瓶中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）预培养24h。 胁迫培养 配制LB液体培养基，分别添加PbCl2（A.R），CdCl2（A.R），, HgI2（A.R），，使Pb2+、Cr6+、Hg2+、浓度梯度为0、5、10、20、40、80和100mg.L-1 (以纯Pb2+、Cr6+和Hg2+计)，另以不含任何重金属离子的LB液体培养基作对照，将预培养的菌液按10%的接种量分别接种于上述培养基中，置于摇床（180r/min）上恒温（35℃）摇瓶培养。 生长曲线测定 培养过程中每隔2h用紫外光栅分光光度计，于600 nm 波长测其光密度，绘制不同微生物在不同浓度重金属胁迫后的生长曲线。
LB培养基配方
LB培养基配方 2007年03月22日下午07:49 成分表(1L溶液中)： Tryptone(胰蛋白胨)：10g, Y east Extract(酵母提取物)：5g, NaCl(氯化钠)：10g 若配置固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)。 LB培养基 液态培养基 根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在 15psi高压下蒸汽灭菌20min. LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础. LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并
实验五 培养基的配制
实验五培养基的配制 （基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。 牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～ 2.0g，pH 7.2～7.6 三、实验用具 高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl 四、实验步骤 1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。 2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。 3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。 4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。 5、加塞用棉花制作塞 6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。 7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。 8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。 9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置 10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。 六、注意事项 1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。 七、思考题 高压蒸汽灭菌器如何使用？
LB培养基
LB培养基 LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。 液态培养基 根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去 液态LB培养基 离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g LB Medium (LB 培养基) Yeast extact (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 10g NaCl 10g Agar (琼脂) 1-2% Distilled water (蒸馏水) 1000ml pH 7.0 适用范围：大肠埃希氏菌（大肠杆菌） 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min. LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的
无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础. LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 10g/L 另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗 固态LB培养基 生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。 扩展阅读： 1 https://www.360docs.net/doc/f014971773.html,/ 开放分类：
实验五 培养基的配制
实用文档 . 实验五培养基的配制（基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。 牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～ 2.0g，pH 7.2～7.6 三、实验用具 高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl 四、实验步骤 1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。 2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。 3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。 4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。 5、加塞用棉花制作塞 6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。 7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。 8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。 9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置 10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。 六、注意事项 1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。 七、思考题 高压蒸汽灭菌器如何使用？