生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法
每个样做3个平行，置37水浴30分钟，各管加2，4-二硝基苯肼液0.5mL，混匀，再在37℃水浴中放置20mL，各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL，混匀，10分钟后，从水浴箱中取出，以蒸馏水调“零”点，用520nm波长比色，读取各管之吸光值，各管之吸光值均减去空白的吸光值，然后以吸光值为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标。绘制成标准曲线。为了方便，可列出各光度相当于转氨酶单位表。
对照及样品各做3个平行，充分摇匀，静置10分钟后，用520nm波长比色，以蒸馏水调节零点，读取吸光值，用样品减去对照吸光值，求得样品的谷丙转氨酶活力。
谷丙转氨酶活性单位：
37℃， pH7.4，每小时每毫升血清催化生成1μmol 丙酮酸为1个单位。例：0.1ml 血清每小时催化生成0.1μmol丙酮酸, 即相当于GPT 100U / 100ml 血清。
注意：
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中
保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过
500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无
作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸
价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，
会影响测定效果。
5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
6.丙酮酸标准液的浓度要求十分精确。由于丙酮酸开封后易
变质为多聚丙酮酸，而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不
易察觉。建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。
7.每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有
超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本
可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管
优点：尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确.故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法.1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理, 缺点：由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足,反应速度只能达到最大速度的65%;显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只及反应液中酮酸浓度的一半;保温30min的酶促反应后,新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控制的竞争显色的几率问题,如此等等,使赖氏法的重现性较差,在测量精度上仍与连续监测法相差甚大.
* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm
的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
* 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1
个活性单位，即1IU=1umol/min。
* King法单位定义是：每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生
成1μmol丙酮酸称为一个单位。
* Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作用
30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
二、尿素氮（BUN）（二乙酰一肟法尿素测定）
（一）仪器设备：水浴锅、紫外分光光度计、10mL试管
（二）试剂：
1、尿素氮试剂：蒸馏水100mL，浓硫酸44mL，85%磷酸66mL，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg，
硫酸镉（3CdSO4·8H2O）2g，溶解后稀释至1000mL。
2、20g/L二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g，加入蒸馏水溶解，定容至
1000mL。
3、尿素氮标准贮存液（357mmol/L）：称取尿素1.072g溶解于蒸馏水中定容至
1000mL，至于棕色瓶中贮存。
4、尿素氮标准应用液（17.85mmol/L）：取贮存液5mL，加蒸馏水定容至100mL。（三）操作步骤
按下面表格的试剂配比操作：
按上述表的配方每个样做3个平行样，混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。
尿素（mg%）=测定管吸光度/标准管吸光度×17.85(mg/ml)
? 1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。本实验是先将血清用生理
水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”
? 2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象
（小于5%/h）。
? 3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但
应控制好实验条件。
? 4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
? 5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水
以1:50稀释。如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。
?3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个氮原子，因此1mmol/L尿
素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
?
尿素氮mg% = 测定管/标准管×0.002×100/0.1×5
= 测定管/标准管×10
【参考范围】
5-20 mg/dl
三、肌酐（Cr）
四、血糖（Glu）（邻甲苯胺法）
血糖是指血液中的葡萄糖，葡萄糖与冰醋酸、邻甲苯胺共热时，葡萄糖先
脱水转化为羟甲基糠醛，再与邻甲苯胺缩合为蓝绿色的薛夫碱，其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。可用比色法进行定量测定。
1、仪器：紫外分光光度计、水浴锅
2、试剂：
（1）葡萄糖标准母液（10mg/ml，用饱和苯甲酸溶液配制）
（2）邻甲苯胺溶液：
2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸
定容至1升。
3、操作步骤：
（1）配置不同浓度葡萄糖标准溶液：取5支10ml容量瓶，标号，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用饱和苯甲酸稀释至10ml，混匀
（则上述溶液100ml葡萄糖含量为25，50，100，200，300mg ）；
（2）分别精密吸取不同浓度葡萄糖标准溶液于试管中，设平行管，空白管加
0.1mL蒸馏水，各管加入邻甲苯胺试剂5.0mL，混匀后，置沸水中15分
钟，立即移入冷水浴中冷却；
（3）以空白号管调零，于紫外分光光度计波长630nm 处测吸光值，以各管的吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线，得出线性方程。
（4）测试样品：取全血0.1mL，设平行样，按上述方法测出其A630nm吸光值，通过线性方程求出其血糖含量。
注意事项：
1. 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，血液中其他还原性物质基本上无影响。
2. 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度、冰醋酸浓度、加热时间有关。此法显色稳定，24小时内无变化。如将加热时间缩短，生成颜色容易消褪。
3. 轻度溶血的血清对结果无明显影响。根据推导，血清中含血红蛋白450毫克/100毫升时，可使测定结果降低约10%。
4.高脂血的标本最后显色有时会出现浑浊，影响测定结果。可先制备血滤液后再行测定。
五、血清白蛋白（Alb）（溴甲酚绿法BCG）
原理：血清白蛋白在PH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630纳米处有光吸收峰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清白蛋白含量。
试剂：
1. 溴甲酚绿（BCG）贮存液：取BCG 419mg，用10ml 0.1mol/L NaOH溶解，
加NaN3 100mg ，定容至1000mL。贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。
2. 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）：分别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。
3. 30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。
4. BCG应用液：BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2)750ml，30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替）混合而成。
5.标准蛋白溶液（10mg/ml)：称取白蛋白1.00g，用生理盐水。
实验操作：
1.白蛋白标准曲线绘制
(1) 稀释白蛋白标准液：分别精密量取白蛋白标准液0.10 mL，0.20 mL，0.40 mL，0.60 mL于试管中，再在每个管中依次加入蒸馏水0.9 mL，0.8 mL，0.6 mL，0.4 mL，混匀，得到稀释后白蛋白标准液含量分别为1.0 mg/ml，2.0 mg/ml，4.0 mg/ml，6.0 mg/ml。
(2) 分别精密量取每个不同浓度稀释白蛋白标准液0.2mL于试管中，空白管加入生理盐水0.2mL，设平行样，再在每个管中加入BCG应用液5.0mL，混匀后以空白管调零，立即于紫外分光光度计测吸光值，吸收波长为620mn，绘制标准曲线，得出线性方程。
(3) 样品血清白蛋白测定：用生理盐水按1：10的比例稀释血清，取稀释后的血
清0.2ml按上述方法测出其吸光值，求得其白蛋白含量。
注意事项
1．BCG是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（显黄色）～5.4（显蓝绿色），
因此控制反应液的PH是本法测定的关键。
?2．配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸椽酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥珀酸缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。
?3．试剂中的Brij-35也可用其他表面活性剂代替，如吐温20或吐温80，终浓度为2ml，灵敏度和线性范围不变。
?4．当白蛋白标准与BCG结合后，溶液光径1，在630处测定的吸光度应为0.811±0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。
?5．蛋白质标准液是一个复杂的问题，实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白稍慢。由于30S内呈色对白蛋白特异，故BCG 与血清混合后，在30S内读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清作标准。
?1．本法操作简便、快速、胆红素、溶血和中度脂血无干扰，既可手工操作，也能自动化分析，是目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。
?2．本法线性范围10-60g/L，RCV＜4%。但该法与溴甲酚紫法比较，对血清白蛋白特异性稍差。
六、血清总蛋白（TP）（双缩脲法）
原理：血清中蛋白质分子的肽键与双缩脲试剂中的Cu++ 结合形成紫色化合物；
其色度与总蛋白的浓度成正比，在546波长下进行比色测定。实际上凡是分子内含有两个氨基甲酰基（-CONH2）的化合物，不论直接相连或是通过一个氮或碳原子间接连接，均能与双缩脲试剂发生反应。蛋白质分子内含有许多肽键（-CONH2 ），因此可用双缩脲法作比色测定。但应注意的是不仅仅是（-CONH2），凡含-CSNH2、-C（NH）NH2 或-CH2NH2 等基团而
具有累似结构的化合物对双缩脲试验亦呈阳性，所以本反应并非为蛋白质所特有。但在体液中，除蛋白质外实际上不存在可与双缩脲试剂显色的物质。各种血浆蛋白质，包括病理的和正常的，呈色的程度基本相同，因此在血浆蛋白的比色测定中，双缩脲反应是比较理想的方法。
仪器：紫外分光光度计、水浴锅、电子天平、
试剂：
（1）10%氢氧化钠溶液：称取10.00g氢氧化钠，用蒸馏水溶解，冷却至室温后，定容至1L，备用。
（2）双缩脲试剂：取1.50g硫酸铜和6.0g酒石酸钾钠，用500mL水溶解，在搅拌下加入300mL10％氢氧化钠溶液，1.0g碘化钾；用水稀释到
1000mL，避光保存。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色或暗红色
沉淀出现，则需重新配制。
（3）标准蛋白溶液：10mg/mL牛血清白蛋白溶液或相同浓度的酪蛋白溶液（酪蛋白用0.05moL/L氢氧化钠溶液配制）。作为标准用的蛋白质要预
先用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，根据其纯度称量，配制成标准溶
液。
（4）待测蛋白质溶液：待测血清按1:10倍数稀释，待用。（注意样品浓度不要超过10mg/ml）
操作方法：
（1）标准曲线的测定：精密吸取0 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，
1.0mL的标准蛋白质溶液于试管中，分别依次加入蒸馏水 1.0mL，
0.8mL，0.6mL，0.4mL，0.2mL，0mL，设平行样，然后加入4mL双缩
脲试剂。充分摇匀后，37℃水浴10min，以空白管调零点，在540nm波
长处测定吸光值。以蛋白质的含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标
准曲线。
（2）样品的测定：用上述同样的方法，测定稀释的待测血清的蛋白质浓度。
注意：
1.样品中总蛋白含量超过100.0g/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
2.试剂浑浊变色不能用。
3.试剂使用后立即盖紧瓶盖。
1、白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1，通过计算其比值可以判定肝脏的功能情况；
2、总蛋白升高：脱水，皮肤大面积烧伤、发烧、腹泻、呕吐。
3、总蛋白降低：大量输液将机体血浆稀释，某些水肿性疾病，长期营养不良和消耗性疾病。
4、球蛋白大量降低：机体免疫功能降低。
七、总胆固醇（TCH）
八、甘油三酯（TG）
九、酪氨酸多巴氧化酶活性测定（多巴色素法）
1、仪器设备：紫外分光光度计，离心机，秒表
2、试剂：
（1）0.10mol/L磷酸缓冲液（pH6.0）:50mL0.20mol/L Na2HPO4与22mL0.1mol/L HCl混合，稀释至200mL。
（2）0.010mol/L多巴溶液：称取0.195g多巴，用pH6.0磷酸缓冲液溶解并定容至100mL。
3、实验方法：
取0.1mL待测液于试管中，加入2.9mL pH6.0缓冲液，再加入2mL多巴溶液，立即摇匀于480nm波长下测吸光值，开始6min内每分钟读一次数，以后各2min读一次数，直至吸光度变化不大为止。以吸光度对时间作图，从直线斜率求出酶活性。设平行样，同样方法测0.2mL和0.3mL待测液的吸光值，求出酶活力。
试样中酶活力计算公式：
α=k/εV×106
α——待测样品的酶活性；
k——吸光值对时间作出的直线斜率；
ε——多巴溶液的摩尔吸收系数，L/g.cm；
V——待测样品的体积，mL。
十、SOD的测定方法
1、试剂的配制
（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：
A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g,用蒸馏水溶解并定容至1000mL；
B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g，用蒸馏水溶解并定容至1000mL；
0.05mol/L PBS(pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75mL，B母液(NaH2PO4) 21.25mL，用蒸馏水定容至1000mL。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液(Met)：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100mL。（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100mL，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
2、酶活性测定
（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162mL，EDTA-Na2溶液0.6mL，磷酸缓冲液5.4mL，NBT溶液6mL，核黄素溶液6mL,混合后摇匀；
（2）分别取3ml反应混合液和30μL酶液于试管中
（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；
同时做两支对照管，其中1支试管取3mL反应混合液加入30μL PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。（4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测A560(出现颜色即可测定)。
（5）酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在最大管的一半左右才合适，否则要调整酶量）为1个酶活单位（U）。SOD总活性＝ [( A ck-A E )×V]/（1/2A ck×V t）
式中——A ck为照光对照管的吸光度；
A E为样品管的吸光度；
V为样品液总体积（ml,1.6ml，加入PBS的体积)；
V t为待测样（ml，30ul）
十一、CAT（过氧化氢酶）的测定方法
1、试剂配制：
0.15mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）：取A母液(Na2HPO4) 457.5 ml 和B母液(NaH2PO4) 292.5 ml混合后用蒸馏水定容至1000ml。
2、酶活测定
（1）反应液配制：取200ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.309ml 30%的H2O2（原液）摇匀即可。
（2）样品测定：以PBS为对照调零，取3ml反应液加入0.1ml（可视情况调整）样品液，立即测定A240（紫外），1min测一次，连续4min。
（3）酶活性计算：以每min OD值减少0.01为1个酶活性单位（u）。
CAT（u/mL·min）= ΔA240 /（Vs×0.01×t）
式中——ΔA240：为反应时间内吸光度的变化；
T：为反应时间(min)；
Vs：为测定时样品液体积（ml）。
十二、MDA的测定方法
1、试剂配制：
（1）5%TCA（三氯乙酸）：5.0gTCA用蒸馏水定容至1000ml；
Cm·mol/L（2）0.5%TBA（2-硫代巴比妥酸）：2.5g用TCA定容至500ml。（避光）2、操作方法：
取待测样2mL和3ml0.5%TBA混合后在沸水浴煮沸15min，然后迅速冷却，4500r/min离心10min，用蒸馏水为空白调零，分别测定上清液在450nm、532nm 和600nm处的吸光值。
3、计算组织中MDA含量：
MDA浓度C (μmol/L)=6.452(OD532-OD600)-0.559D450
十三、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定方法
原理
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH 减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。
1、试剂和仪器
仪器：可见光分光光度计、低温高速离心机、恒温水浴锅、微量加样器
试剂：
（1）叠氮钠磷酸缓冲液 pH7.0：分别称取NaN316.25mg，EDTA-Na27.44mg，Na2HPO4 1.732g，NaH2PO41.076g，加入蒸馏水溶解至100mL，用少量HCL、NaOH 调pH7.0，4℃保存。
（2）1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液：称取GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1-2天。
（3）1.25-1.5mmol/L H2O2溶液：取30％H2O2 0.15mL-0.17mL，用双蒸水稀释
至100mL，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。
（4）偏磷酸沉淀液：称取16.7gHPO3（先用蒸馏水溶解），0.5gEDTA，280gNaCl 加蒸馏水溶解至1000mL，用普通滤纸过滤，室温保存。
（5）0.32mol/LNa2HPO4溶液：称取22.7gNa2HPO4加蒸馏水至500mL，室温保存。
（6）DTNB显色液：称取40.0mgDTNB，1.000g柠檬酸三钠加蒸馏水溶解至100mL，4℃避光保存1个月。
2、实验步骤
1.3.6.
2.
3.1 样品制备
溶血液：取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，使之全部溶血1:100待测，4h内测定酶活力。若当天来不及测定，将肝素抗凝全血置-20℃冻存，3d 内测定，若4℃存放，28h内必须测完。测前取出样品室温自然解冻。
组织上清液：动物禁食过夜，处死后，立即取出所需脏器，放入冷生理盐水中洗去浮血，剔除脂肪及结缔组织，滤纸吸干后，在冰浴上剪成碎块，称取适量组织，加冷0.2M磷酸缓冲液，以20000r/min匀浆10s，间歇30s，反复3次制成5%组织匀浆，操作在冰浴中进行，匀浆以12500×g离心10min（低温高速离心机），以沉淀为破碎的细胞、细胞碎片、核及线粒体，上清液用以测胞液中的酶活力，最好当天测，否则加20％（v/v）甘油分装于塑料管，放置-20－-80℃，可保存数周，而酶活力不减。
（1）样品测定：将组织上清液按1:20稀释（若溶血液按1:100稀释）。按样品管、非酶管分别对应加入1.0mmol/L GSH溶液各0.4mL，稀释样品0.4mL和0mL，蒸馏水0mL和0.4mL，混匀置于37℃水浴预温5min。然后各加入H2O20.2mL，37℃水浴准确反应3min，取出各加入偏磷酸沉淀液4mL，混匀于3000r/min离
心10min。各取出上清液2mL（非酶管加热使酶失活），加入0.32mol/LNa2HPO4各2.5mL及DTNB显色液各0.5mL，显色反应1min后于412nm波长（1cm光径）测OD值，5min之内读数准确。另外空白管和标准管分别对应加入蒸馏水0.4mL 和0mL，20μmol/L GSHR标准液0mL和0.4mL,偏磷酸沉淀液各1.6mL，0.32mol/L Na2HPO4各2.5mL，DTNB显色液各0.5mL反应，同样条件测OD值。
显色反应1min后于423nm波长（1cm光径），读OD值，5min之内读数准确。
注：样品为组织上清液时，非酶管改为加热使酶失活的组织上清液。溶血液稀释100倍取0.1~0.4mL，组织上清液按1:20稀释，取稀释液0.4mL。
（2）计算
规定为毫克蛋白质，每分钟扣除非酶反应的作用，是反应体系中GSH浓度降低1μmol/L为一个活力单位。
组织上清液GSH-Px酶活力=[（OD非酶-OD酶）/（OD标准-OD空白）×c×n/t/m
C——标准管浓度，20μmol/L；
N——样品稀释倍数；t——反应时间m——取样量的蛋白含量
全自动生化分析仪操作技巧规章
BS-400全自动生化分析仪标准操作规程 一、BS-400全自动生化分析仪标准操作规程（开/关机程序） 1 开机 1.1 依次打开分析部主电源、分析部电源、操作部显示器电源、操作部主机电源、打印机电 源； 1.2 开启操作部主机后会自动启动操作软件，在对话框中输入用户名与密码； 1.2.1若只关闭分析部电源保持试剂盘制冷，则要依次打开分析部电源、操作部显示器电 源、操作部主机电源、打印机电源； 1.2.2若使用仪器睡眠功能，则只需在对话框中输入用户名与密码，重新登陆； 2 分析前准备 2.1 观察各压力表是否在绿色标线之内； 2.2 检查蒸馏水、去离子水是否足够、废液管道有否堵塞，废液桶是否清空； 2.3 检查高浓度清洗罐是否有足够高浓度清洗液； 2.4 确认试剂盘的D1号位置已放置碱清洗液，D2号位置已放置酸清洗液，W号位 置已放置蒸馏水、去离子水。 2.5 确认样本盘的U号位置已放置尿液稀释液（ISE专用稀释液），D1位置已放置ISE 清洗液（如选配有ISE模块），D2位置已放置酸清洗液，D3位置已放置碱清洗 液，W位置已放置足够的蒸馏水、去离子水。 2.6 对于选配ISE模块的仪器，确认ISE试剂包已安装且试剂存量充足。 2.7 检查样本注射器和试剂注射器是否漏液以及是否有气泡。 2.8 检查样本针，确认无污物，无弯折。如有污物，清洗样本针。如有弯折，更换样本针。 2.9 检查试剂针，确认无污物，无弯折。如有污物，清洗样本针。如有弯折，更换样本针。 2.10检查样本搅拌杆与试剂搅拌杆，确认搅拌杆表面无污物，杆无弯折。如有污物，清洗搅拌 杆。 3 关机 3.1 仪器处于“空闲”状态时，可以点击关机按提示选择“退出”或“紧急退出”进行关机 操作。依次关闭打印机电源，操作部主机电源，操作部显示器电源，分析部电源，分析 部主电源。此时需要取走试剂仓内试剂冰箱保存。 3.2 如保留试剂制冷功能，则不需要关闭分析部主电源。 3.3 如需切换不同操作者，仪器处于“空闲”状态时，可点击关机后选择注销后重齐以新用 户登陆。 3.4 如需进行休眠功能，仪器处于“空闲”状态时，可点击关机后选择休眠，仪器进行休眠 状态。 3.5 清理取走样本盘所有标本。 二、BS-400全自动生化分析仪标准操作规程分析参数设置程序 1 点击主界面下参数二项目设置按钮，进行必须参数设置; 1.1 |项目设置;；
迈瑞BSBS全自动生化分析仪操作
BS-330/BS-350全自动生化分析仪标准作业程序 1 开机前检查 1 检查电源，确认电源有电并且能够提供正确的电压。 2 检查分析部、操作部和输出部的通讯线和电源线，确认已连接且没有松动。 3 检查打印纸是否足够。 4 确认试剂盘的39号位置已放置足够的强化清洗液，40号位置已放置足够的蒸馏水。如果选配了 ISE模块，检查37号位置是否放置了ISE清洗液，38号位置放置了尿液稀释液。 5 检查去离子水的连接、废液的连接、注射器的连接是否漏液。 6 检查加样针是否弯曲、有污物、挂液。 7 检查搅拌看杆是否弯曲、有污物。 8 检查去离子水桶是否有足够的去离子水。 9 检查废液桶是否清空。 2 开机 系统通上电后，按下列顺序依次打开电源：分析部主电源、分析部电源、操作部显示器电源、操作部主机电源、打印机电源。 3 启动控制软件 登陆Windows操作系统后，双击桌面上操作软件的快捷图标，或从【开始】处选择操作软件程序，启动操作软件。 ?注意：开机后观察加样针的清洗水流、水量是否正常，搅拌杆的旋转、清洗水量是否正常。 4 设置参数 申请测试前，必须至少设置完成下列参数： √点击“设置”→“系统设置”，设置系统参数。 √点击“设置”→“医院设置”，设置医院和医生信息。 √点击“定标”→“定标液设置”，设置定标液信息。 √点击“参数”→“项目设置”，设置项目参数、参考范围、定标规则、质控规则。 √点击“试剂，”设置试剂信息。 √点击“设置”→“交叉污染”，设置交叉污染信息。
√点击“设置”→“打印设置”，设置打印信息。 5 放置试剂 在试剂盘上设定的试剂位放置相应的试剂，并打开试剂瓶盖。 6 试剂空白 需要时，进行试剂空白测试。 点击“定标”→“定标申请”，申请试剂空白。 点击“开始测试”，运行试剂空白。 点击“定标”→“结果查看”，查看试剂空白结果。 7 定标 需要时，进行定标测试。 ?注意：改变试剂盒批号、更改测试参数、更换光源及其它原因等导致测定条件改变，需要新定标。 点击“定标”→“定标申请”，申请定标。 点击“开始测试”，运行定标测试。 点击“定标”→“结果查看”，查看定标结果。 8 质控 点击“质控申请”，申请质控。 申请质控后，在样本盘上设定的位置放置相应的质控液。 点击“开始测试”，运行质控测试。 点击“质控”→“实时质控”/“日内质控”/“日间质控”，查看质控结果。 9 样本分析 点击“样本申请”，申请样本测试。 ?注意：急诊申请的操作与普通样本的操作基本相同，不同这处在于申请时选中“急诊”。 申请样本后，在样本盘上设定的位置放置相应的样本。 点击“开始测试”，运行样本测试。 点击“历史结果”或“当前结果”，查看样本测试结果。 10 编辑样本结果 需要时，编辑样本结果。
6种方法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量 [ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2006-12-25| 字体： [大 中 小] 一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh 2ch 2cooh+3h 2so 4——2co 2+3so 2+4h 2o+nh 3 (1) 2nh 3+h 2so 4——(nh 4)2so 4 (2) (nh 4)2so 4+2naoh ——2h 2o+na 2so 4+2nh 3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret 法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材
生化申请报告单
*****卫生院生化申请报告单 姓名：性别：年龄：科别：床号：诊断：采样日期：年月日标本：申请医师：检验者： 报告日期：年月日 *****卫生院生化申请报告单姓名：性别：年龄：科别：床号：诊断：采样日期：年月日标本：申请医师：检验者： 报告日期：年月日 *****卫生院生化申请报告单姓名：性别：年龄：科别：床号：诊断：采样日期：年月日标本：申请医师：检验者： 报告日期：年月日 项目结果参考值HBsAg ___— B R T 5.1~17.4umoL/L B R D 1.7~6.8umoL/L A L T 0~40 U T T T 0~6 U T G 0.56~1.71mmoL/L T C H 3.9~6.5mmoL/L B U N 1.79~6.79mmoL/L C r 44~124UmoL/L B S 3.9~6.1mmoL/L 项目结果参考值HBsAg ___— B R T 5.1~17.4umoL/L B R D 1.7~6.8umoL/L A L T 0~40 U T T T 0~6 U T G 0.56~1.71mmoL/L T C H 3.9~6.5mmoL/L B U N 1.79~6.79mmoL/L C r 44~124UmoL/L B S 3.9~6.1mmoL/L 项目结果参考值HBsAg ___— B R T 5.1~17.4umoL/L B R D 1.7~6.8umoL/L A L T 0~40 U T T T 0~6 U T G 0.56~1.71mmoL/L T C H 3.9~6.5mmoL/L B U N 1.79~6.79mmoL/L C r 44~124UmoL/L B S 3.9~6.1mmoL/L
全自动生化分析仪的原理、构成及使用
全自动生化分析仪的原理、构成及使用 全自动生化分析仪的原理、构成及使用 一、全自动生化分析仪的功能及特点 全自动生化分析仪是将生化分析中的取样、加试剂、混合、保温、比色、结果计算、书写报告等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成。它可进行定时法、连续监测法等各种反应类型的分析测定。除了一般的生化项目测定外，有的还可进行激素、免疫球蛋白、血药浓度等特殊化合物的测定以及酶免疫、荧光免疫等分析方法的应用。它具有快速、简便、灵敏、准确、标准化、微量等特点。 二、全自动生化分析仪的分类 全自动生化分析仪有多种分类方法，最常用的是按其反应装置的结构进行分类。按此法可将全自动生化分析仪分为流动式和分立式两大类。所谓流动式全自动生化分析仪是指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。这是第一代全自动生化分析仪。过去说得多少通道的生化分析仪指的就是这一类。存在较严重的交叉污染，结果不太准确，现已淘汰。 分立式全自动生化分析仪与流动式的主要差别是每个待测样品与试剂混合间的化学反应都是分别在各自的反应皿中完成的，不易出现较差污染，结果可靠。 三、全自动生化分析仪的构成 因为全自动生化分析仪是模仿手工操作的过程，所以无论哪一类的全自动生化分析仪，其结构组成均与手工操作的一些器械设备相似，一般可有以下几个部分组成： 1、样品器：放置待测样本、标准品、质控液、空白液和对照液等。 2、取样装置：包括稀释器、取样探针和输送样品和试剂的管道等。 3、反应池或反应管道：一般起比色皿（管）的作用。 4、保温器：为化学反应提供恒定的温度。 5、检测器：如比色计、分光光度计、荧光分光光度计、火焰光度计、电化学测定仪等。不同仪器配置不同。 6、微处理器：是分析仪的电脑部分，又叫程序控制器。控制仪器所有的动作和功能，使用者可通过键盘与仪器“对话”，同时电脑还能接受从各部件反馈来的信号，并作出相应的反应，对异常情况发出一定的指示信号。分析软件和分析结果一般贮存在磁盘中，可共查询。 7、打印机：可绘制反应动态曲线和打印检验报告单等。 8、功能监测器：显示屏就是其中一部分，可查看反应状态、人机“对话”的情况、当前仪器工作状态、分析结果等。 四、流动式全自动生化分析仪 流动式全自动生化分析仪又可分为空气分段系统和非分段系统。前者是流动式分析仪中最典型的一种。 （一）空气分段系统 这种分析仪的特点是通过比例定量泵挤压弹性样品管、空气管和试剂管（通称“泵管”），将样品依次连续地吸入并沿样品管输送，另一方面由空气管吸入的气泡将由同样原理吸入并在试剂管道中连续流动的试剂分成均匀的节段，样品流和试剂流在连续向前流动的过程中相遇、混合、透吸（必要时）、保温、反应及被测定。整个分析过程是液流在管道中连续流动的过程中完成的。 （二）非分段系统 非分段系统是靠试剂空白或缓冲液来间隔每个样品的反应液，这样，在管道中连续流动的液体不被分段。非分段系统可再分为流动注入系统和间隙系统。 1、流动注入系统：该系统的组成与空气分段系统相似，但某些结构和工作原理有所不同，空气分段系统是利用气泡分段来防止管道中各反应液在流动过程中的交叉污染，而流动注入系统则是通过将样品依次注入连续流动的试剂流管道中来达到防止交叉污染的目的的。
食品中蛋白质的测定方法
食品中蛋白质的测定方法 蛋白质的测定方法分为两大类：一类是利用蛋白质的共性，即含氮量，肽链和折射率测定蛋白质含量，另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量。但是食品种类很多，食品中蛋白质含量又不同，特别是其他成分，如碳水化合物，脂肪和维生素的干扰成分很多，因此蛋白质的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏，用标准酸 液吸收，用标准酸或碱液滴定，由样品中含氮量计算出蛋白质的含量。由于食品中蛋白质含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它们的基本原理都是一样的。 一凯氏定氮法 我们在检验食品中蛋白质时，往往只限于测定总氮量，然后乘以蛋白质核算系数，得到蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗蛋白质。 (一) 、常量凯氏定氮法 衡量食品的营养成分时，要测定蛋白质含量，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，在食品分析中，通常用食品的总氮量表示，蛋白质是食品含氮物质的主要形式，每一蛋白质都有其恒定的含氮量，用实验方法求得某样品中的含氮量后，通过一定的换算系数。即可计算该样品的蛋白质含量。 一般食品蛋白质含氮量为l6 ％，即1份氮素相当于6.25 分蛋白质,以此为换算系数6.25 ，不同类的食物其蛋白质的换算系数不同. 如玉米、高梁、荞麦, 肉与肉制品取6.25 ，大米取 5.95 、小麦粉取 5.7, 乳制品取 6.38 、大豆及其制品取5.17 ，动物胶 5.55 。 测定原理： 食品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素以氨的形式与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收形成硼酸铵，再用盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，根据盐酸消耗量计算出总氮量，再乘以一定的数值即为蛋白质含量，其化学反应式如下。 ⑴消化反应：有机物(含C、N、H、0、P、S等元素)+H2S04 -T(NH4)2SO4+CO0 +S02f +S03+H3PO4+C02 (2) 蒸馏反应：(NH4)2SO4+2NAOH—2NH3T +2H2O+NA2SO4 2NH3+4H3B04 (NH4)2B4O7+5H2O (3) 滴定反应：(NH4)2B4O7+2HCH+5H2O T2NH4CH+4H3BC或(NH4)2B407+H2S04+5H20- (NH4)9SO4+4H2BO2 试剂与仪器： 1、硫酸钾； 2、硫酸铜；
关于生物化学读书报告
读书报告（学习心得体会） 生物化学与分子生物学既是生命科学的基础，又是生命科学的前沿。这门课程给我印象最深 的不仅是它大量的专业名词，还有它也是这学期所有课程里最厚最重的一本书了。在第一堂课中，我们在老师带领下对这门的学习有了初步的认识，知道它的功能作用，了解它的学习领域。 生物化学与分子生物学在分子水平探讨生命的本质，即研究生物体的分子结构与功能、物质 代谢与调节。生物化学与分子生物学是目前自然科学中进展最迅速、最具活力的前沿领域。它是 在分子水平上研究生物体的组成与结构、代谢及其调控的一门科学，它是一门具有先进性、科学 性和系统性的学科，并以众多相关学科为基础。由于其在生物等学科的重要性而使内容逐渐增多，且发展速度快，新知识、新进展不断涌现，有大量需要记忆和思考的内容，因此学好它不是一件 容易的事情。 最开始的我确实觉得无从下手，面对书上大量的知识点很是迷茫，我开始有慢慢的很认真的 看课本上的内容，逐字逐句的理解、体会和记忆。但学习效率很慢，而且学习得效果也很不令人 满意。书上的内容太多，太杂，即使我有讲整个的内容都看里一遍，也无法讲他们转变为我自己 脑中的知识，最明显的就是表现在做题上，完全就是觉得所考的题和所学的知识无法联系在一起，可能问题便在于没有理解到知识内容，思考太少，知识也很浅。 学习不怕没问题，怕的就是没有问题。学会解决问题，也是自己能 力的一种提高。我有将自己的问题与高年级的师兄师姐进行交流，他们也有耐心得一起寻找 解决的方法，并且还告诉我他们的一些学习方法和心得体会，让我受益匪浅。同时我自己也通过 互联网和图书馆，去找一些资料，以便自己深入的理解学习得内容。上课前一定要提前预习，这 个是很有必要的。在课堂上，认真听讲是最为关键的，虽然不能完全听懂，但我有努力跟上老师 的上课节奏，跟着老师的思路走，课后通过老师的课件和上课所做的笔记，再进行二次学习，及 时学习，及时复习，不拖延。以下是一下学习得方法，我觉得还挺值得借鉴的 1．抓住主线，由表及里，循序渐进 根据研究内容，生物化学可分为以下几部分：①重要生物分子的结构和功能：着重介绍蛋白质、核酸、酶、维生素、激素和抗生素等的组成、结构与功能。重点掌握生物分子具有哪些基本 的结构，哪些重要的理化性质，以及结构与功能之间有什么关系等问题，同时要随时将它们进行 比较。这样既便于理解，也有利于记忆。②物质代谢及其调节：主要介绍糖代谢、脂类代谢、能 量代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢、以及各种物质代谢的联系和调节规律。此部分内容是传统生 物化学的核心内容。学习这部分内容时，应注重学习各种物质代谢的基本途径，特别是糖代谢途 径（糖酵解、三羧酸循环途径、糖异生途径等）；脂肪酸分解与合成和酮体代谢途径；氨基酸的 脱氨基及氨的代谢；能量生成方式等；各代谢途径的关键酶及生理意义；各代谢途径的主要调节 环节及相互联系等问题。③分子生物学基础：重点介绍了 dna复制， dna转录和翻译。学习这部分内容时，应重点学习复 制、转录和翻译的基本过程，并从必要条件、所需酶及特点等方面对三个过程进行比较。在 理顺本课程的基本框架后，就应全面、系统、准确地掌握教材的基本内容，并且找出共性，抓住 规律，学会抓住线条、围绕主线向外扩展和上下联系的方法。
生化检查报告单模板
医院生化检验报告单 姓名：病历号：病床号：标本号：送检医师: 性 另U：科另另：门诊样本种类：血清临床诊断：备注：项目--- 结果单位参考值 1 谷丙转氮酶ALT 40 U/L 2 谷草转氨酶AST 22 U/L 3 谷草/谷草AST/ALT 0.96 4 谷酰转肽酶GGT 13 U/L 5 碱性磷酸酶ALP 59 U/L 6 胆碱酯酶CHE 6110 U/L 7 总胆汁酸TBA 3.5 umol/L 8 总蛋白TP 66.7 g/L 9 白蛋白ALB 45.0 g/L 10 球蛋白GLOB 21.70 g/L 11 白球比A/G 2.07 12 总胆红素TBIL 10.9 卩mol/L 13 直接胆红素DBIL 3.8 umol/L 14 间接胆红素IB 7.10 报告日期：送检日期:检验者：周惠娟声明：此报告只对本样本负责! 医院生化检验报告单 姓性 名： 另U： 病历号：病床号： 病区： 样本种类：血清 送检医师： 标本号：科另另：门诊备注：项目结果单位参考值 1 谷丙转氨酶ALT 40 U/L 2 谷草转氨酶AST 22 U/L 3 谷草/谷草AST/ALT 0.96 4 谷酰转肽酶GGT 13 U/L 5 碱性磷酸酶ALP 59 U/L 6 胆碱酯酶CHE 6110 U/L 7 总胆汁酸TBA 3.5 umol/L 8 总蛋白TP 66.7 g/L 9 白蛋白ALB 45.0 g/L 10 球蛋白GLOB 21.70 g/L 11 白球比A/G 2.07 12 总胆红素TBIL 10.9 卩mol/L 13 直接胆红素DBIL 3.8 umol/L 14 间接胆红素IB 7.10 报告日期：送检日期:检验者：周惠娟声明：此报告只对本样本负责！ 医院生化检验报告单 姓性 名： 另U： 病历号：病床号： 样本种类：血清 标本号：送检医师： 备注：科另另：门诊病区： 项目结果单位参考值 1 谷丙转氨酶ALT 40 U/L 2 谷草转氨酶AST 22 U/L 3 谷草/谷草AST/ALT 0.96 4 谷酰转肽酶GGT 13 U/L 5 碱性磷酸酶ALP 59 U/L 6 胆碱酯酶CHE 6110 U/L 7 总胆汁酸TBA 3.5 umol/L 8 总蛋白TP 66.7 g/L 9 白蛋白ALB 45.0 g/L
蛋白质含量测定方法及其比较资料2
蛋白质含量测定法（一） 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 五种蛋白质测定方法比较
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。 考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1) 2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（Biuret法） （一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材
蛋白质含量测定方法汇总
实验七蛋白质含量测定 测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。 一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。 该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。
[操作步骤] 1．标准曲线的绘制： 按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定： 取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量
CS全自动生化分析仪操作规程精编版
C S全自动生化分析仪 操作规程 公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-9018）
CS-1300全自动生化分析仪操作规程 一、开机程序 1.1开机前检查 ①加样系统 探针（样品针、试剂针），搅拌棒是否沾有水滴，脏污，是否弯曲，堵塞；反应槽以及各清洗槽是否脏污或堵塞。如有以上情况发生，请参照“维护指南”进行。 ②清洗液 测试前先检查清洗液，不足时添加，具体位置如下： 清洗液位置清洗液种类 W1……………………………CS-碱性清洗液 ★W2……………………………CS-ISE清洗液 ★W3……………………………CS-酸性清洗液 清洗液盒………………………CS-碱性清洗液 45号位置………………………CS-抗菌无磷清洗液 ★此清洗液为选用 注：以上所有清洗液请使用迪瑞原厂清洗液
③废液桶 应保证废液桶有足够的空间盛装废液，当桶满时，及时倒掉并清理。 ④打印机 检查打印机是否正确地安装，打印纸是否充足。 ⑤仪器台面 检查仪器台面是否清洁，有无杂物。 ⑥供电电源 检查UPS电源开关应处再打开（ON）状态。 ⑦供水 打开自来水阀门，接通纯水机的电源，保证春水装置清洁，纯水机能正常给仪器供水且供水管路连接正确。 注：CS系列全自动生化分析仪耗水量最大为40L/h（CS-800为60L/h）,要求纯水导电率小于1us/cm。 ⑧连接 分析仪与计算机主机间用通讯电缆正确地连接。 1.2开机 ①打开仪器右侧下方空开（总电源开关）。
注：为保证试剂仓和样样品圈的冷藏作用，存放试剂时，总电源开关处于打球开状态。 ②打开仪器右侧上方的电源开关（分析部电源）。 ③打开电脑，进入“CS全自动生化仪”操作软件，仪器进入待机状态后，方可进行下一步操作。 1.3开机后试剂准备 ①在软件主界面上点击“试剂信息”键，查看各试剂的剩余量。 ②更换试剂：结合当日预计测定量及时更换试剂（不同批号的试剂不能混合使用），试剂位置按屏幕显示放置，注意试剂瓶内不能有气泡。 ③试剂水平扫描：仪器可进行“自动扫描试剂水平”和“手工扫描试剂水平”两种试剂水平扫描模式。 自动扫描试剂水平：更换试剂完成后，如果“试剂信息”窗体下的“自动扫描试剂水平”单选框被选。那么仪器在盖好试剂盘盖后将自动进行试剂水平的扫描； 手工扫描试剂水平：更换试剂完成后，点击“试剂信息”窗体下的“手工扫描试剂水平”键，此时仪器进行试剂水平扫描，扫描完成后方可进行测试。 二、常规操作程序 2.1单个样本登记 在主界面点击“样本登记”选项，输入以下相应内容：
蛋白质测定方法之双缩脲法(Biuret法)
一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1.试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml 的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。 （2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材： 可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。 （三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。 2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。 三、Folin—酚试剂法（Lowry法） （一）实验原理
全自动生化仪使用说明书.doc
便携式生化检测仪 340 使用说明书便携式生化检测仪
【产品名称】便携式生化检测仪 【型号】340 【产品性能】 便携式生化检测仪(以下简称POC)。 POC专用于检测本公司体外诊断试剂盒“同型半胱氨酸检测试剂盒”，用于定量检测临床血清或血浆样本中同型半胱氨酸（HCY）。 POC是集样本处理、检测及分析报告一体化的便携式生化检测仪，无需外置电脑和安装软件。一次检测一份样本，约15分钟内完成检测并报告定量检测结果，具有机体小巧、携带及安装简便，操作简单快捷的特点。 POC控制过程：将含有检测试剂及样本的专用检测管放入测试盒内后，通过触摸屏控制，读取RFID 卡上的参数，自动完成搅拌、孵育、检测；自动计算样品中被检物的浓度并报告检测结果。 产品主要性能参数如下： 重量：3.5kg 外形尺寸：260×145×140cm 检测波长：340nm 自动控温：37℃ 电源：由电源适配器将电网电源AC100-240V，50/60Hz转换为DC12V电流4.0 A。 额定功率：30VA 工作温度：15℃～30℃ 相对湿度：40％～85％ 大气压力：86.0 kPa～106.0 kPa 储存：经包装后的POC应存储在0℃～40℃，相对湿度不超过85%，无腐蚀性气体和通风良好的环境内。 运输：运输过程中应防止受到剧烈冲击、雨淋和曝晒。 【适用范围】 本仪器仅与本公司生化检测试剂盒“同型半胱氨酸检测试剂盒”配套使用，用于定量检测临床血清或血浆样本中生化成分检测。 【禁忌症】 无。 【主要结构】 由主机和电源适配器组成，仪器外观见图1，接口见图2。
图２仪器背面接口 【注意事项、警示以及提示性内容】 1.严禁非授权维修人员自行拆开机体。 2.禁止使用非专用管，以免损坏仪器。 3.检测操作时，放入检测管以前，确认管盖盖严，拭净管体外残留液体。 4.当系统工作时，切勿接触系统上的运动部件。 5.不可手动开检测盖。 6.使用触摸屏，只能用手指接触，禁止使用笔或尖锐物体接触。 7.必须使用专用的试剂盒，使用前确认试剂盒的适用性。 8.必须使用专用的试剂盒专用RFID卡，否则无法检测。 9.必须在有效期内使用试剂盒和RFID卡。 10.使用试剂、样本应严格按照相关管理规范执行。 11.剩余试剂、样本及废弃物的处理严格执行国家有关医疗废弃物处理规范执行。 12使用过的仪器进行运输、维修或储存前，应用75%的酒精对检测盒及仪器表面仔细清洁消毒，以防止污染及可能的生物风险。 【图形、符号、缩写的解释】 图形、符号、缩写名称解释 警告指本部位存在一定的危险，操作时应小心。 参考说明书参考说明书 怕晒表明运输包装件不能直接照晒 怕雨表明包装件怕雨淋 禁止翻滚表明不能翻滚运输包装
蛋白质定量检测方法
Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ） Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds. Reference Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254. 考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量 原理 1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH4)2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。 操作 一、标准方法 取含10～100μg蛋白质溶液于小试管中，用双蒸水或缓冲液调体积到0.1mL，然后加入5mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值。以0.1mL 双蒸水或缓冲液及5mL蛋白试剂作为空白对照。 二、微量蛋白分析法 取含1～10μg蛋白质溶液，用双蒸水调体积到0.8mL，加0.2mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值，以0.8mL双蒸水及0.2mL蛋白试剂作为空白对照。用不同浓度的蛋白质溶液作标准曲线，以蛋白质浓度为横坐
贝克曼dxc600全自动生化分析仪操作规程
1．目的：规范贝克曼DXC600操作 2．适用范围：贝克曼DXC600检测过程 3．支持性文件：《全国临床检验操作规程》(第三版)、《临床检验操作规程编写要求》（WS/T227-2002） 4．操作规程： Ⅰ仪器开机程序 1．开机运行 开机检查MC部分试剂量是否充足，真空压力，水压，空气压力是否处在正常范围。 注意事项：日程维护保养（详见贝克曼保养手册） 例：每日保养工作：开机前用70%酒精擦洗试剂针和搅拌针。 2．安装试剂 a．首先检查试剂状态。在主菜单选定Rgts/Cal。 b．安装试剂 从主菜单选择Rgts/Cal，显示试剂状态屏幕 ↓ 点击试剂名称旁的Pos(1,2,3……)，选定试剂放置的位置 ↓ 按F1 Load键，打开试剂舱闸门 ↓ 放入试剂，扫描试剂条码，关闭试剂舱闸门 ↓ 仪器自动检测试剂液面、较准日期等，并显示相应信息。 注意事项： a．AST、ALT、CK试剂需预处理：步骤将C孔试剂全部加打入A孔然后充分混匀。b．TBIL试剂需预处理：将C孔试剂吸取200微升到B孔然后充分混匀。 Ⅱ样品前运行程序 1．清除昨天的测试结果：
选Sample ↓ 选Clear F7 ↓ 输入昨天的日/月/年 ↓ 确定，即清除样品结果 2．冲洗仪器管道： 选Utils ↓ 选Prime F1 ↓ Prime all，清洗5次 Ⅲ仪器校准程序 定标： 选择Rgts/Cal，显示试剂状态屏幕 ↓ 点击试剂名称旁的Pos(1,2,3……)，选择需要定标的项目 ↓ 按F7 Assign，选择定标液的类型，并输入试剂架号及位置 ↓ Cancel退出保存，放入定标液架，RUN。 注意事项： a．注有“＊”的试剂都需要定标 b．K、Na、Cl、Ca离子项目每隔24小时需要定标一次。 C．贝克曼原装试剂校准周期严格参照贝克曼试剂说明书规定。 *如有项目校准失败必须查找分析原因并要快速解决问题* Ⅳ生化室内质控 取贝克曼高低两个浓度水平质控品，室温放置10-20分钟，摇匀后进行测定，随后将质控值输入质控分析软件进行质控分析。要质控在控后才能开机检测病人标本。 每天做二次质控，开机运行后做一次，中午仪器运行时再做一次。 注意事项： 如有项目失控首先要根该项目的失控类型判断是系统误差还是随机误差引起的，再查找失控原因，解决问题，最后必需重做质控在控后才能做该项目。 Ⅴ样本运行程序
全自动生化分析仪7600操作规程
全自动生化分析仪7600标准化操作程序文件 单位：山东省平度市人民医院 部门：检验科生化室 文件编号： SHJW20110310 版本：第二版 批准实施日期： 2011年03月10日 有效期：一年 复审计划：每年进行复审,测定系统发生变化时需进行修订编写者：张关磊 审批者：张建军 保管者：张建军 修订记录：
全自动生化分析仪7600标准化操作规程1、操作流程 开机检查→打开电源→水源→仪器状态确认→试剂准备→校验与质控测定→一般样品测定→复查样品测定→急查样品测定→仪器状态测定→结束操作→关闭电源、水源→关机检查。 2、基本使用流程 2．1开机检查 接通电源前需进行开始工作检查，如加样机构、试剂分注机构、反应容器清洗机构、各种清洗液量的检查。操作部检查、轨道的检查。样品针、试剂针有无脏物附着、是否弯曲。反应容器清洗喷嘴和试剂吸量器是否有漏气和气泡等。 2．2打开水源、电源 此法只对不使用定时器的仪器说明。 (1)打开水源开关和纯水机电源，水压要求0.5-3.5Kgf/cm2，电传导率为1us/cm以下。 (2)打开样品供给部左侧的电源开关（绿色按钮），为了使试剂藏库工作，分电盘的开关通常是开着的。仪器显示初始画面并自动进行初期动作。所有指定准备工作进行完呈待机状态。2．3仪器状态确认 （1）报警确认： 仪器发生报警时，触摸“报警”（Alarm）键，显示报警窗口，显示详细说明和处理方法，按处理方法进行处理。 （2）流路内气泡的确认： 若发现流路内有气泡，则触摸实用工作键(Utility)键、维护(Maintenance)键，显示维护保养画面。触摸维护“排气”后，按“实行”(Select)键。 （3）吸光度的确认： 检查吸光度值，确认检查值在允许范围内。 A.触摸“Maintenance”键，维护画面打开。 B.触摸“Maintenance”键，“光度计检查”键后，按“实行”(Select)键。 （4）反应槽温度的确认： A.触摸主菜单的观察(System Overview)键，观察窗口打开。确认温度分别在37±0.1摄氏度。
常见蛋白质测定方法的总结与比较
分析化学 结课作业 常见蛋白质测定方法的总结与比较 材料科学与技术学院 林化13-1班 刘旺衢 130534106
常见蛋白质测定方法的总结与比较 刘旺衢 （北京林业大学材料科学与技术学院林化13-1班 130534106，10083） 蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关,是对人类最重要的物质之一。准确精密的测定蛋白质，关乎人类的生产、生活、生存。目前测定蛋白质含量的方法有多种,如凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法、酚试剂法等几种方法,下面本文将总结比较这五种蛋白质的测定方法。 一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数计算蛋白质含量，即含氮量*6.25=蛋白含量。 凯氏定氮法具有灵敏度高, 样品用量少，最低可检出0.05mg氮；精密度、准确度高,平行误差一般小于0.5%；应用范围广,适用于一切形态的食品与生物样品；仪器装置简单,试剂廉价的优点。 但也存在操作比较繁琐费时,特别是蒸馏定氮过程的效率低,不利于大批样品的测定；定氮的结果既包括有机氮,也包括无机氮,有机氮中除蛋白氮外,还包括非蛋白氮,测定的结果只能是粗蛋白质的含量；在蛋白质氨基酸构成有差异的
生物化学实验报告
实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作