常见细胞株
104C1 转化的豚鼠胎体细胞
143TK 人胸腺激酶缺陷性细胞系
1590 人乳腺癌细胞系
16HBE 人支气管上皮细胞
208F 大鼠成纤维细胞
22RV1 人前列腺癌细胞
293 人胚肾细胞
293A 人胚肾细胞系
293AV 人胚肾细胞-用于腺病毒包装
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞293EE 转化人胚肾293细胞
293ET ET转化人胚肾293细胞
293FT 人胚肾细胞-用于慢病毒包装
A2780细胞[人卵巢癌细胞] 293KB KB转化人胚肾293细胞
293T SV40转化的人胚肾上皮细胞
293TN 人胚肾细胞--用于慢病毒包装
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞2B4 人前列腺癌细胞
2BS 人胚肺成纤维样细胞
2V6.11 人胚肾细胞
311 果蝇胚胎细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞35.1 杂交瘤细胞抗CD2
3AO 人卵巢癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞3T3 小鼠胚胎瘤成纤维细胞
3T3-E1 鼠胚成骨细胞
3T3-L1 小鼠脂肪细胞
3T3-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞
3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞4179 长尾绿猴胚胎细胞
4647 长尾绿猴肾细胞
4T1 小鼠乳腺癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞5637 人膀胱癌细胞
6T-CEM 人T细胞白血病细胞
769-P 人肾癌细胞系
786-O 人肾透明细胞腺癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞7WCY1.0 人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)
7WD10 人APP基因转染细胞株(CHO))
7WML6.0 人APP-PS1(M146L)双基因转染细胞株(CHO)
7WPS1 人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)
801-D 人巨细胞性肺癌细胞
810-D 人巨细胞性肺癌细胞
95-C 人低转移肺癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞95-D 人高转移肺癌细胞
973 人肺腺癌细胞
9L 小鼠胶质瘤细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞9L-B 人前列腺癌细胞
9L-E 人前列腺癌细胞
A cc-3 人涎腺腺样囊性癌细胞
A172 人胶质母细胞瘤细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞A2 人腺样囊性癌细胞
A-204 人横纹肌肉瘤
A2780 人卵巢癌细胞
A3 人T淋巴细胞白血病细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞A-375 人恶性黑色素瘤细胞
A375.S2 人黑色素瘤细胞
A-431 人表皮癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞A498 人肾癌细胞
A549 人肺腺癌细胞
A549/DDP A549耐药细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞A673 人横纹肌癌细胞
A7d 野生型人C-KIT受体细胞株
A7r5 大鼠胸大动脉平滑肌细胞
A875 人黑色素瘤细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞A9 小鼠皮下结缔组织细胞
AAV-293 人胚肾细胞
Acc-2 人涎腺腺样囊性癌细胞
Acc-3 人涎腺腺样囊性癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞ACC-M 人唾液腺性肺癌高转移细胞ACHN 人肾癌细胞系
AE-1 杂交瘤细胞抗AChE
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞AE-2 杂交瘤细胞抗AChE
AGS 人胃腺癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞AL7P/HL-60R 原髓细胞白血病细胞ALAV 人前列腺癌细胞
AM 人腺样囊性癌细胞(高转移)
AMS3(SCF3) 人干细胞因子单克隆抗体细胞株
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞AN3 CA 人子宫内膜腺癌细胞
AnA-1 小鼠巨噬细胞
Anglne 人卵巢癌细胞系
APP-PS1 人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)
APRE-19 人视网膜上皮细胞
AR42J 大鼠胰腺外分泌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞AsPC-1 人转移胰腺腺癌细胞
AtT-20 小鼠垂体瘤
AZ-521 人胃癌细胞
B16 小鼠黑色素瘤细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞B16BL6 小鼠黑色素瘤细胞
B16-F1 鼠黑色素瘤细胞系
B16F1 小鼠黑色素瘤细胞
B16F10 小鼠黑色素瘤高转移细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞B16-Fo 鼠黑色素瘤细胞系
B6YH4 杂交瘤细胞支原体阳性
B82 鼠细胞系
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞B95-8 绒猴EBV转化的白细胞BA/F3 小鼠原B细胞(B类)
BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纤维细胞
BALL-1 人B淋巴细胞急性白血病细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞BB7.2 小鼠杂交瘤B淋巴细胞BC-1 人lymphoma B 淋巴细胞
Bcap-37 人乳腺癌细胞
A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞BE(2)C 人神经母细胞瘤细胞BEAS-2B 人正常肺上皮细胞
常用细胞系所用培养液参考
常用细胞系所用培养液参考，其它详细参见ATCC细胞库(https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,) 细胞系名称细胞类型物种来源组织培养液与血清 293成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10% 马血清 3T6成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS A549上皮样 人 肺癌 F-12K, 10% FBS A9成纤维细胞 小鼠 结缔组织 DMEM, 10% FBS AtT-20上皮样 小鼠 垂体肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS BALB/3T3成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% FBS BHK-21成纤维细胞 仓鼠 肾 DMEM, 10% FBS or MEM, 10% FBS and NEAA BHL-100上皮样 人 乳腺 McCoy'5A, 10% FBS BT成纤维细胞 牛 鼻甲细胞 MEM, 10% FBS and NEAA Caco-2上皮样 人 结肠腺瘤 MEM, 20% FBS and NEAA Chang上皮样 人 肝 BME, 10% 牛血清 CHO-K1上皮样 仓鼠 卵巢 F-12, 10% FBS Clone 9上皮样 大鼠 肝 F-12K, 10% FBS Clone M-3上皮样 小鼠 黑色素瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS COS-1成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS COS-3成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS COS-7成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% FBS CRFK上皮样 猫 肾 MEM, 10% FBS and NEAA CV-1成纤维细胞 猴 肾 MEM, 10% FBS D-17上皮样 犬 骨肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA Daudi淋巴样 人 淋巴瘤患者外周血 RPMI-1640, 10% FBS GH1上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS GH3上皮样 大鼠 垂体瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS H9淋巴样 人 T-细胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% FBS HaK上皮样 人 肾 BME, 10% 牛血清 HCT-15上皮样 人 结肠腺癌 RPMI-1640, 10% FBS HeLa上皮样 人 宫颈癌 MEM, 10% FBS and NEAA (in suspension, S-MEM) HEp-2上皮样 人 喉癌 MEM, 10% FBS HL-60淋巴样 人 早幼粒细胞白血病 RPMI-1640, 20% FBS HT-1080上皮样 人 纤维肉瘤 MEM, 10% HI FBS and NEAA HT-29上皮样 人 结肠腺癌 McCoy's 5A, 10% FBS HUVEC上皮样 人 脐带 F-12K, 10% FBS 肝素100 ug ml I-10上皮样 小鼠 睾丸肿瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS IM-9淋巴样 人 骨髓瘤患者骨髓 RPMI-1640, 10% FBS JEG-2上皮样 人 绒毛膜癌 MEM, 10% FBS Jensen成纤维细胞 大鼠 肉瘤 McCoy's 5A, 5% FBS Jurkat淋巴样 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% FBS
实验室常用菌株及特性
一、实验室常见菌株简介 Xl1-Blue菌株 基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F?[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。 特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。 用途：分子克隆和质粒提取。 BL21(DE3)菌株 基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。 特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达。 BL21(DE3)ply菌株 基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cm R)。 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达 DH5α菌株 基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ– 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC 载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 JM109菌株 基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F? traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。 特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑 筛选。 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 DH10B菌株 基因型： F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ- The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。 host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322
实验室常用细胞株
ATCC? Number: CRL-2865? Price: $329.00 Designations: T47D-KBluc Depositors: VS Wilson Biosafety Level: 1 Shipped: frozen Medium & Serum: See Propagation Growth Properties: adherent Organism: Hom o sapi ens (human) Morpholog y: epithelial Source: Organ: mammar y gland; breas t Tissue: duct Disease: ductal carcinoma Derived from metastatic site: pleural effusion Cell T y p e: epithelialtransfected with reporter plas mid Permits/F orms: In addition to the MTA menti oned above, other ATCC and/or regulatory per mits may be required for the transfer of this ATCC material. Any one purchasing ATCC material is ultimatel y r esponsible for obtaining the permits. Please click here for information regarding the s pecific requirements for shipment to your loc ation. Reverse Transcript: N Age: 54 years adult HeLa Mar kers: N
常见细胞株中文名称及缩写
人类组织正常及永生化细胞 英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞 动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞
实验室细胞株管理规定
细胞株管理规定 一、什么是细胞株？ 原代代培养物经第一次传代培养后的细胞，常被称为细胞系（cell line）。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系有一定差异的细胞系，常被称为该细胞系的亚系（subline）。 从一个经过鉴定的细胞系采用选择法或单细胞克隆进一步所得到的细胞群，常被称细胞株（cell strain）。由原细胞株进一步分离培养出的与原株性状不同的细胞群，又被称为亚株（substrain）。 二、细胞株管理规定 对已建立和经过鉴定的细胞株要进行严格管理，规定如下： 1.制度管理规定 A.细胞株应有专人负责保管，并由实验室负责人监督检查。更换保管人时应提 前做好工作交接，确保使用安全。 B.建立细胞株使用登记制度，记录细胞株的编号、名称、来源、冻存数量及日 期、取用数量及日期、剩余数量及保存方法。 C.细胞株长期保存应放置于液氮罐中，短时保存或过渡保存可置于-80℃冰箱 中。 D.保存的细胞株应定期复活、保种，即每半年对没有复苏过的细胞株进行维护， 复苏、培养和保存，并详细记录细胞株状态，如形态、生长速度、抗体分泌情况等。 E.细胞株不得外借，不得随便带出实验室。 F.细胞株的使用、保存、转移和销毁应符合相关部门的有关规定。 2．使用流程规定 A.如有新细胞株进入实验室，需告知实验室负责人并进行冻存保种； B.实验室人员需复苏细胞时，需提前向实验室负责人申请，经批准后方可复苏； C.设存取记录表，实验人员存取细胞时做好记录并把细胞复苏情况反馈至实验
室负责人，实验室负责人需监督实验人员做好细胞株使用记录情况； D.若复苏细胞人员复苏同一株细胞株两次均未成活，需通知负责人进行检查和 复苏，如贮存细胞确实出现问题，则及时清理。 三、细胞保存 A.冻存条件：90%FBS+10%DMSO，4℃冰箱预冷； B.冻存方法： 4 ℃（30-40min）→-20 ℃（1-2h）→-80 ℃（过夜/24 h以上，可短时保存 1-3个月）→液氮（永久保存； C.填写冻存记录表 四、细胞复苏 A.水浴锅37℃预热 B.从细胞冻存管理表中查找并记录所需细胞在液氮罐中的位置。 C.液氮罐中快速取出细胞，迅速放入水浴锅中融化，并持续晃动，避免因受热 不均产生冰晶，损伤细胞，融化时间为1～2min； D.将细胞悬液移至离心管中，加入10倍体积的细胞培养液，混匀； E.1200rpm/min，离心5min F.弃去上清液，加入新的培养液重悬，移至细胞培养瓶中，显微镜下观察细胞 形态，37℃培养箱培养。 G.次日，更换培养液继续培养，待其铺满培养瓶面积80%及以上，可尽心传代。 四、液氮罐的使用 A.开启液氮罐时，戴好防冻棉手套，防止冻伤； B.提前确定细胞保存位置，避免提篮在外停留时间过长； C.填写复苏记录表，负责人做好整理保藏记录，禁止短期内使用同一株细胞的 多管细胞，复苏后使用细胞的同时需补充细胞株库存，写明细胞名称、冻存时间、冻存人等细节。 五、附件 1.细胞冻存记录表 以50L液氮罐所配的6个提篮，每个提篮6层抽屉柜，每个抽屉柜5*5个冻存管。
细胞培养的常用术语及解释
细胞培养的常用术语及解释体外培养(in virto)：原意为在试管中，现常与组织培养一词通用，译为体外培养。 组织培养(tissue culture)：维持组织在体外生长、与泛指体外培养。 器官培养(organ culture)：在体外维持器官、器官的部分或器官的原基生存和生长的方法。 * 细胞培养(cell culture)：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长称为细胞培养，在细胞培养中，细胞不再形成组织。 细胞融合(cell fusion)：两个独立的细胞融合成一个细胞。可用聚乙二醇（PEG）或仙台病毒诱发。 * 细胞杂交(cell hybridization)：两个或多个不同的细胞融合。导致一个含核体（aynkaryon）的形成。 体外培养转化(in vitro transformation)：细胞在体外培养中发生与原细胞遗传性状不同的变化，但不一定具有致癌性。 单倍体(haploid)：正常细胞染色体基本数（每一染色体只有一种）。 整倍体(euploid)：具有两个以上单倍体数目的细胞。 非整倍体(aneuploid)：细胞核内染色体数为单倍染色体数的非整倍数时，称非整倍体。 二倍体(diploid)：具有两套染色单体数目的细胞（2n） * 原代培养(primary culure)：从体内取出细胞或组织的第一次培养。 再培养(subculture)：同传代。 * 传代(passage)：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到
另一个培养瓶即称为传代或传代培养。也称再培养。 单层培养(monolayer culture)：培养细胞在底物上长成单层。 悬浮培养(suspension culture)：细胞在培养液中呈悬浮状态生长。 * 贴壁依赖性(anchorage-dependent)：为细胞需贴附于底物或支持物上才能生长的性质。 贴壁依赖性细胞(anchorage dependent cell)：由它们繁衍出来的细胞（或培养物）只有贴附于不起化学作用的物体（如玻璃或塑料等无活物体）的表面时，才能生长，生存或维持其功能。 无贴壁性(anchorage-independent)：不依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。 汇合(confluent)：细胞相互连接成片占据所有底物面积。 近汇合(sub-confluent)：细胞在底物上生长接近，但尚未完全汇合。 超汇合(super confluent)：单层培养细胞附在底物上生长，汇合后发展成多层状态。 接触抑制(contact inhibition)：细胞汇合相互接触后失去运动的现象。 密度抑制(density inhibition)：细胞数量到一定数量后引起抑制增殖的现象。 群体密度(population density)：培养底物单位面积上单层细胞数目。 饱和密度（saturation density）：在特殊培养条件下，每平方厘米（单层培养）或每毫升细胞悬浮液内可达到的最大细胞数。
细胞培养中常见的问题
细胞培养中常见的问题 2006-11-23 15:53 细胞中的颗粒到底是怎么回事？ 我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊! 我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么 是黑色的小碎片。我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。但是，是什么东西不清楚。 的确很常见 在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。 以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？ 我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。 我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长 我培养的细胞也有出现这中情况。但是并不影响细胞生长。应该不是支原体污染 最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了 细胞培养的细菌污染 我们新建的细胞室。每周都会做清洁，用0。2%新洁尔灭消毒，照紫外。实验前也会照至少30分钟。培养基中加青霉素，链霉素。可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。我养的是哺乳动物细胞，不知各位有什么好的方法避免污染！谢谢！ 很可能是超净台无效了，，或者培养基？其实严格操作箱污染都难 我们是新的超净台，不可能失效。而且用同一瓶培养基，一瓶传两瓶，原始的一
体外培养细胞的种类和命名
体外培养细胞的种类和命名 体外培养细胞的名称，随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。最早采用的名称为细胞株（Cell strain），以后又出现细胞系（Cell Line）一词，两者曾一度混用致概念不明确，导致文献中也很混乱。我国也曾有类似情况，在我国尚未制定出统一名词前，本书用的名词基本参考Schaeffer，W.I.（1979）和国内有关会议、以及国内外杂志常用名词为准。 （一）初代培养 初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。一旦已进行传代培养（Subculture）的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。 （二）细胞系 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性；有的不仅有永生性，异体接种也有致瘤性，说明已恶性化。这两种不同性质的无限细胞系，在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。为概念上的明确，本书中对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。而对那些只具永生性而无恶性的细胞系，则用无限细胞系或转化细胞系即可。当前流传的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。 由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系（Subline）。 （三）克隆细胞株 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株（Substrain） （四）二倍体细胞 细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞培养。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。但随供体年龄和组织细胞的不同，二倍体细胞的寿命长短各异。人胚肺成纤维细胞可传50代土10代，人胚肾只有8～10代，人胚神经胶质细胞15～30代；如从老龄个体取可传50则细胞生存期更短。由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种（Stook Cells），用时再进行繁殖，用后再继续冻存，可供长期使用或延缓细胞的衰老。 （五）遗传缺陷细胞 从有先天遗传缺陷者取材（主要为成纤维细胞）培养的细胞，或用人工方法诱发突变的细胞，都属遗传缺欠细胞。这类细胞可能具有二倍体核型，也可呈异倍体。 （六）肿瘤细胞系或株 这是现有细胞系中最多的一类，我国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体
细胞培养常见问题及其解决
细胞培养常见问题及其解决 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，其中美国MP Biomedicals公司提供了最全的培养基系列，例如BME DMEM F10/F12 MEM RPMI1640（液态/粉末）。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。 7.Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles 液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。MP Biomedicals 公司具有众多的平衡液，
常见细胞株中文名称及缩写
. 人类组织正常及永生化细胞 英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类） AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞 HFF人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞 动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类）7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞
细胞培养常用培养基
细胞培养常用培养基 高博，苏州大学医学部药学院药理学系 1、ＲPMI-１6４0Medium RPMI－1６40广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像Ｋ-5６２、ＨL-60、Juｒkat、Daudi、IＭ－9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、ＭinｉmuｍEssentiａl Medｉｕｍ(MEM) 也称最低必需培养基，它仅含有1２种必需氨基酸、谷氨酰胺和８种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEＭ-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MＥＭ来培养。 3、DMEM-高糖（标准型） 是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养，更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 4、DMEM-低糖（标准型） 是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 ５、DMEM／F12 DＭＥM／F12培养基适于克隆密度的培养。F1２培养基成分复杂,含有多种微量元素，和DMEＭ以1：1结合，称为DMEM／F12培养基（ＤME／F1２medium)，作为开发无血清配方的基础,以利用F１2含有较丰富的成分和DMEM 含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F1２（１:1）
细胞株和细胞系的区别
细胞株和细胞系的区别 摘要“细胞株”和“细胞系”是动物细胞工程中常用的两个名词，但由于概念不清，使用混乱，为中学生物教学带来不必要的困惑。本文拟就这两个名词的历史渊源和现实应用进行讨论。 关键词细胞株细胞系 1 名词的由来： 细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela 系称为“株”。1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长期混用。即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦十分严重。 2 名词使用的现实情况 2．1 中学教材定义在人教版高中生物（选修）全一册第70页中，细胞株被定义为经原代培养的组织细胞，培养到第10代左右，度过第一次死亡危机后的细胞群，这种细胞的遗传物质没有发生改变；细胞系则被定义为可以度过第二次死亡危机，传代培养到40~50代的细胞，这部分细胞的遗传物质发生了部分改变并且细胞带有癌变的特点，这种细胞在适宜条件下无限传代。 2．2 文献定义由新鲜组织制成的细胞培养物称原代细胞，这种细胞经首次传代成功后的细胞称做细胞系，可泛指一般可能传代的细胞，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成，这种细胞世系含有多种细胞类型。若用胰蛋白酶等将原代细胞消解分散后，再培养一代，称次代培养。如果不能继续传代或传代有限，可称为“有限细胞系（finite cell line）”或“已建立的细胞
常用的五种动物细胞培养方式
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
分子生物学实验室常用仪器设备简介(精)
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介 实验室主要仪器，设备的简介及使用方法 微量移液器 微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。移液器常见的四种规格分别是： 0.5～10μl(读数窗显示0.5～10.0,每转1档为0.1μl); 10～100μl(读数窗显示10.0～100, 每转1档为1μl); 20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl); 100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl). 量液的操作步骤： 1．将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头） 2．将微量移液器按钮轻轻压至第一停点； 3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；4．缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少； 5．等一秒钟后将吸嘴提离液面 6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。 量液操作注意问题： 1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。 4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。 5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。 低温台式高速离心机 离心机的分类 低速：每分钟几千转 高速：每分钟1 ~ 3万转 超速：每分钟3万转以上 离心机的功能：分离，纯化 低速：细胞等大分子 高速：DNA，蛋白等 超速: 病毒，蛋白等，根据用途又可分为分析超速离心机和制备超速离心机。 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术 本实验室所用离心机为台式高速离心机（IBM），配有角式转头：24×1.5ml；极限转速20000rpm 台式高速离心机使用步骤 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
常用细胞库
中国典型培养物保藏中心(也称武汉大学保藏中心)CCTCC https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/cctcc/ https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/ 中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/ 要国产的，请查一查国内的细胞库 武汉细胞库 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/fzlbc/cell.doc 上海细胞库 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/xibao/catalogue.html 昆明细胞库 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/CELL.HTM 协和医科大学基础医学细胞中心 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/pumc/jiaoxue_hj/zhongdian_sys.htm 成都基因治疗肿瘤药物工程技术研究中心细胞及载体服务 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/cell_catalog.asp 湖南远泰生物技术有限公司生物资源库 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/Source.asp 上海午立生物技术有限公司细胞株 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/cpjs-4.htm 中国医学科学院基础医学研究所细胞中心保藏细胞目录 https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/1652-1.doc 要进口的，请查美国和欧洲细胞库： ATCC（细胞株及胚胎干细胞库） 1）下载细胞库目录：https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/pdf/tcl.pdf 2）查询细胞株：https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/SearchCatalogs/CellBiology.cfm 2）胚胎干细胞库：https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/products/cells.cfm CABRI https://www.360docs.net/doc/f96722859.html,/HyperCat/cells/all.htm
各类鼻咽癌细胞株特性及来源
各类鼻咽癌细胞株特性及来源 CNE1为鼻咽高分化鳞状细胞癌细胞系;CNE2、HNE1、HNE2、HNE3、HONE1为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系;5一8F为鼻咽低分化鳞状细胞癌,细胞系SUNE一1亚株,具有高转移、高成瘤能力;6- 10B为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系SUNE-1亚株,具有高成瘤潜能,不转移特性。C666-1为长期携带EB病毒基因的低分化鼻咽癌细胞株;HK-1为携带EB病毒基因的高分化鼻咽癌细胞株. NP69为永生化鼻咽上皮细胞系,于1XKsFM(keratinoeyte serum-free medium，KSFM)培养基中,37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养,呈现鳞状上皮样、贴壁生长,具有正常鼻咽上皮的特性。 CNE11 癌组织来源 病人王某某，女, 58 岁，, 籍贯吉林省,，中国医学科学院日坛医院住院号：2382248.1975年8月13日患者因头痛耳鸣、鼻衄等症状来院就诊。临床检查鼻咽部有菜花样肿物, 肿瘤已侵犯颅底和颅神经( Ⅲ, Ⅳ, ⅨⅫ) , 双颈淋巴结转移, 诊断为鼻咽癌。X光诊断为鼻咽后壁软组织肿物符合鼻咽癌, 颅底象见左侧翼状突外板可疑骨质破坏,鼻咽部肿物作活检, 病理 诊断为高分化鳞癌。 培养过程 在第12代时(培养后的6个月)，在上皮样细胞培养中发现有少量梭形细胞。在有的培养瓶中, 梭形细胞逐渐增加。在接种少量细胞的培养瓶中,有的全为上皮样细胞, 有的全为梭形细胞。选择全为上皮样的细胞传代, 称CNE细胞株；全为梭形的细胞传代, 称CNF细胞株。CNE 细胞株容易形成空泡，不传代的老细胞, 在显微镜下可见到有些细胞的胞浆突出, 然后脱落成死细胞, 还有多核巨细胞。在这二株细胞,特别是CNF细胞的单层或多层细胞上有很多圆形细胞, 核大,浆少。在培养液中也有大量圆的脱落细胞。将培养液中的悬浮细胞接种于培养瓶,细胞仍能贴瓶, 生长出原来的上皮样细胞或梭形细胞。将CNE , CNF细胞和这二株细胞的脱落细胞培养成单层后, 不传代, 每周换液二次, 继续培养7 个月,未能得到类淋巴母细胞株，在培养过程中未见到肿瘤组织培养中常见到的成纤维细胞生长。 特性 CNE-22 组织来源和培养方法
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识 培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。 二、血清 细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些 痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清
实验室常用细胞表征及处理方法(实战版)
实验室常用细胞表征及处理方法 一、细胞培养 1.1细胞培养基配方 普通细胞所需要的培养基配方主要为：购买的培养基+10 %血清（小牛或者胎牛）+1%双抗。（常用的双抗及胰酶建议直接购买） 1.2细胞传代 1.2.1洗涤：将培养瓶内的旧培养液吸出，加入2~3ml PBS缓冲液洗涤2-3次，摇晃使其均匀铺满整个平面，清洗细胞，随后吸弃PBS液以除去残留的血清和死细胞。 1.2.2消化：加入适量（盖满细胞层表面即可，25cm2的培养瓶加入0.5-0.6mL 即可，75 cm2加入1.0mL）的0.25%胰蛋白酶液，轻轻摇晃，普通细胞一般需要60s左右，特别难以消化的细胞可以放在37℃孵箱孵育适当的时间，如Hela细胞大约需要30s-40s，翻转培养瓶。然后在倒置相差显微镜下观察细胞消化情况,待细胞开始收缩成圆形、细胞间的连接明显消失，细胞间出现明显的空隙，即可终止消化（若细胞成片收缩，倒去消化液）。若存在细胞团，可以轻轻拍打培养瓶侧壁，尽量消化完全，不然传代后会出现较多的细胞团，再次消化会非常困难。 1.2.3终止消化：在培养瓶中加入1-3ml培养液（胰酶遇血清会终止其活性）以终止消化。用吸管反复吹打洗瓶壁上的细胞，边角部分特别注意多次吹打。可在倒置相差显微镜下观察细胞吹打的程度，（轻轻摇动培养瓶，观察细胞是否完全脱壁），最后形成单细胞悬浮液。 将单细胞悬液移入15ml离心管内,离心1000r×5min,弃去上清液,加入5ml 培养基进行吹打重悬（也可不用离心，直接把单细胞悬液分装于新的培养瓶里，补加适量培养基）。小培养瓶需5ml左右培养基，直径60mm培养皿5-7ml，以上均应视细胞的数目而定，细胞多，可适当加多些培养基）。 1.2.4.传代：取上述步骤所得单细胞悬液，进行细胞悬液计数，然后按所需密度接种到其它培养瓶中。标注上代数、日期及操作人。 注：本实验所需的PBS液、DMEM细胞培养液及0.25%胰蛋白酶液均需37℃预热处理。